猫杯状病毒实时荧光定量逆转录PCR检测方法的建立

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作者 李静怡 熊雷 +4 位作者 黄莉璎 刘晓鹏 杨盛奋 金京勋 王弋 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第12期64-72,共9页

为了建立可快速检测猫杯状病毒(FCV)的方法,本试验采用肽核酸(PNA)设计分子信标荧光探针,优化反应体系和条件,建立了FCV实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)检测方法,对该方法的敏感性、特异性和重复性进行验证,并进行临床样本检测。结果显... 为了建立可快速检测猫杯状病毒(FCV)的方法,本试验采用肽核酸(PNA)设计分子信标荧光探针,优化反应体系和条件,建立了FCV实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)检测方法,对该方法的敏感性、特异性和重复性进行验证,并进行临床样本检测。结果显示,建立的RT-qPCR检测FCV参考株具有良好的线性关系(R^(2)=0.9995),最低检测限为1×10^(2)TCID_(50)/mL,对其他相关病毒无有效响应,组内变异系数和组间变异系数均小于1%。应用该方法检测33份临床样本,阳性率为51.5%。由此可见,本试验建立的RT-qPCR敏感性、特异性和重复性均良好,可为FCV的早期快速诊断和疫病防控等提供检测手段。 展开更多

关键词 猫杯状病毒(FCV) 肽核酸(PNA) 分子信标荧光探针 实时荧光定量逆转录pcr(RT-qpcr) 开放阅读框(ORF)

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直接从家禽排泄物中检测和定量空肠弯曲杆菌的逆转录定量PCR方法研究

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作者 Bui X T 张锦秀 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第2期186-186,共1页

弯曲杆菌属是导致人类细菌性腹泻的主要原因,亟需一种快速而可靠地检测和定量该病原的方法。本研究建立了运用逆转录荧光定量PCR直接从鸡粪便中检测和定量空肠弯曲杆菌的方法,并将其与另一种基于DNA的荧光定量PCR方法和细菌培养方法进... 弯曲杆菌属是导致人类细菌性腹泻的主要原因,亟需一种快速而可靠地检测和定量该病原的方法。本研究建立了运用逆转录荧光定量PCR直接从鸡粪便中检测和定量空肠弯曲杆菌的方法,并将其与另一种基于DNA的荧光定量PCR方法和细菌培养方法进行比较。运用细菌培养和逆转录荧光定量PCR方法,可在5d后从人工或天然污染的粪便样品中检测到空肠弯曲杆菌。在使用细菌培养方法无法计数细胞时,逆转录荧光定量PCR亦无法检测到阳性扩增信号,而运用基于DNA的荧光定量PCR方法可以检测到死亡的或无法培养的弯曲杆菌细胞,即使在经过20d保存处理后所有被检测样品仍是阳性。这种直接从鸡粪便样品中检测和定量空肠弯曲杆菌的方法在检测环境弯曲杆菌中的应用还有待进一步研究。 展开更多

关键词 空肠弯曲杆菌 逆转录荧光定量pcr MRNA 鸡粪便 弯曲杆菌残留

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基于逆转录与实时荧光定量PCR的基因工程原创试题命制

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作者 廖乐祥 《生物学教学》 2025年第10期70-72,共3页

基因工程试题的情境常围绕现实问题展开,注重核心素养的考查。从科学文献、大学教材等获取合适的素材,编制符合高考风格的基因工程试题,做到新颖、真实、科学、恰当。设问有清晰的层次和严谨的逻辑,指向核心素养的不同水平。这样典型模... 基因工程试题的情境常围绕现实问题展开,注重核心素养的考查。从科学文献、大学教材等获取合适的素材,编制符合高考风格的基因工程试题,做到新颖、真实、科学、恰当。设问有清晰的层次和严谨的逻辑,指向核心素养的不同水平。这样典型模拟题的创作,有利于生物学教学工作的检测、诊断、调控和评价。 展开更多

关键词 试题命制 基因工程 逆转录pcr 实时荧光定量pcr

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牛结核病荧光定量PCR快速检测方法的建立及初步应用 被引量：6

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作者 亓文宝 罗满林 +4 位作者 周荣 白培胜 贺东生 刘镇明 黄毓茂 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期883-886,共4页

目的建立牛结核病荧光定量PCR快速检测方法。方法根据分枝杆菌的插入序列IS1081设计引物和探针,优化反应条件,建立标准曲线,进行特异性、敏感性、重复性实验,并用所建立的方法对临床样品进行检测。结果该方法的敏感性达到了10个拷贝,且... 目的建立牛结核病荧光定量PCR快速检测方法。方法根据分枝杆菌的插入序列IS1081设计引物和探针,优化反应条件,建立标准曲线,进行特异性、敏感性、重复性实验,并用所建立的方法对临床样品进行检测。结果该方法的敏感性达到了10个拷贝,且特异性高,重复性好。对30份PPD试验和巢式PCR检测都为阳性的临床样本进行荧光定量PCR检测的结果全部为阳性;而对PPD检测阳性,巢式PCR检测为阴性的15份临床样本进行检测时,2份为阳性;在对2份PPD检测阴性而巢式PCR检测阳性的临床样本的检测结果也为阳性。结论成功建立了牛结核病荧光定量PCR快速检测方法,对临床样品的快速检测和牛结核病的早期诊断具有重要意义。 展开更多

关键词 牛结核病 荧光定量pcr 快速检测 巢式pcr PPD

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多重巢式和定量PCR联合应用提高SARS病毒检测率

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作者 赵瑞华 施静艺 +5 位作者 郑焕英 郑夔 顾柏炜 宋怀东 章国卫 陈赛娟 《上海第二医科大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第5期467-470,482,共5页

目的寻求一种可靠、可行的对急性严重呼吸道综合征病毒的早期诊断方法。方法应用多重巢式PCR联合荧光实时定量方法,对广州地区91份确诊和疑似病例标本、25份健康志愿者标本同时进行检测。结果25份健康志愿者标本经两种方法检测均为阴性... 目的寻求一种可靠、可行的对急性严重呼吸道综合征病毒的早期诊断方法。方法应用多重巢式PCR联合荧光实时定量方法,对广州地区91份确诊和疑似病例标本、25份健康志愿者标本同时进行检测。结果25份健康志愿者标本经两种方法检测均为阴性。91份确诊和疑似病例标本经多重巢式PCR方法检测,阳性标本数53例,总阳性检测率58.24%;荧光实时定量PCR检测阳性标本数68例,阳性检出率74.73%;两种方法联合,阳性标本数76例,阳性检出率83.52%。结论多重巢式PCR联合荧光实时定量方法可进一步提高SARS病毒的阳性检出率,也为今后应对可能发生的其它突发性传染病病毒的检测提供分子诊断基础。 展开更多

关键词 急性严重呼吸道综合征病毒 多重巢式pcr 荧光实时定量pcr 诊断

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利用ELISA与qRT-PCR技术检测番木瓜PRSV病毒的方法研究 被引量：2

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作者 谢秀菊 夏启玉 +7 位作者 霍姗姗 杜晓希 麦贤俊 张雨良 郭安平 李峰 孔祥义 赵辉 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2024年第12期2534-2541,共8页

番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)是番木瓜生产上最严重的病害之一,其发病率高,传播快,危害重。为及时发现感染PRSV的番木瓜植株,本研究建立了分别利用酶联免疫吸附测定(ELISA)技术和荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)技术检测番... 番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)是番木瓜生产上最严重的病害之一,其发病率高,传播快,危害重。为及时发现感染PRSV的番木瓜植株,本研究建立了分别利用酶联免疫吸附测定(ELISA)技术和荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)技术检测番木瓜植株感染PRSV的方法,利用这2种方法检测多株转基因番木瓜与非转基因番木瓜的PRSV含量,并对结果进行比较分析。结果表明:利用PRSV多肽抗原作为标准品制备的抗体建立的标准曲线拟合度较好,可用于ELISA法检测PRSV;qRT-PCR法中选择的内参基因Cpa03g018830在番木瓜的不同生长阶段均稳定表达,可作为PRSV含量测定的内参基因;ELISA法和qRT-PCR法对多株转基因和非转基因番木瓜植株中PRSV含量的检测结果基本一致,表明这2种方法均可用于番木瓜植株中PRSV含量的检测。利用这2种检测手段,可及时发现并铲除感染了PRSV的番木瓜植株,有效预防与控制PRSV传播。 展开更多

关键词 番木瓜环斑病毒 酶联免疫吸附 荧光定量逆转录pcr

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三种PCR方法检测柑橘黄龙病菌的效果比较 被引量：13

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作者 程保平 彭埃天 +2 位作者 宋晓兵 凌金锋 陈霞 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期106-110,共5页

为了比较常规PCR、巢式PCR和实时荧光定量PCR方法在大田检测中对柑橘黄龙病(Huanglongbing,HLB)的检测效果,首先比较了3种检测方法对柑橘黄龙病菌检测的灵敏度,结果发现:3种检测方法的灵敏度依次为常规PCR<巢式PCR<实时荧光定量PC... 为了比较常规PCR、巢式PCR和实时荧光定量PCR方法在大田检测中对柑橘黄龙病(Huanglongbing,HLB)的检测效果,首先比较了3种检测方法对柑橘黄龙病菌检测的灵敏度,结果发现:3种检测方法的灵敏度依次为常规PCR<巢式PCR<实时荧光定量PCR。运用3种检测方法对广东5个柑橘品种上的189个黄龙病疑似病样进行检测,结果发现:黄龙病检出率依次为常规PCR<巢式PCR<实时荧光定量PCR。研究表明:常规PCR适合以较低成本大规模检测黄龙病;实时荧光定量PCR具有最大的检测灵敏度;巢式PCR检测技术同时具有前两者的一些优点,但操作较复杂,适合技术熟练的研究者使用。 展开更多

关键词 柑橘黄龙 病常规pcr 巢式pcr 实时荧光定量pcr 比较研究

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含尼帕病毒N基因和L基因的假病毒构建及其应用

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作者 崔超杰 张慧 +7 位作者 刘春菊 魏荣 张永强 崔进 戈胜强 李金明 蔡玉梅 王志亮 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第7期56-62,共7页

尼帕病毒(NiV)作为高致死率的人兽共患病病原,受到世界各国广泛关注。为了获得快速灵敏的检测方法和安全稳定的阳性标准品,本试验将NiV N和L基因同时插入假病毒转移质粒PLJM-GFP中,与包装质粒共转染人胚胎肾(HEK293T)细胞,收集并浓缩病... 尼帕病毒(NiV)作为高致死率的人兽共患病病原,受到世界各国广泛关注。为了获得快速灵敏的检测方法和安全稳定的阳性标准品,本试验将NiV N和L基因同时插入假病毒转移质粒PLJM-GFP中,与包装质粒共转染人胚胎肾(HEK293T)细胞,收集并浓缩病毒液,测定转染后48和72 h收集的假病毒滴度,于透射电子显微镜下观察假病毒形态,并进行PCR扩增和测序鉴定。以世界动物卫生组织推荐的NiV检测引物对包装的假病毒进行验证,应用实时荧光定量PCR(q PCR)技术对不同标准和文献中的4对NiV检测引物进行特异性和敏感性分析,并对构建的NiV假病毒进行均一性试验、短期稳定性试验和抗RNase A降解试验。结果显示,转染后48和72 h收集的假病毒滴度分别可达2.72×10^(5)和3.47×10^(4)IU/m L,电子显微镜下假病毒呈圆形、有囊膜的颗粒。测序结果显示,NiV假病毒核酸中成功插入N和L基因片段;4对NiV检测引物特异性良好,均可用于NiV检测,其中,在研国家标准检测方法中引物的灵敏性更高,病毒的检测下限为10^(0)IU/m L;NiV假病毒均一性良好,可在4℃条件下稳定保存至少7 d,且能够抵抗一定量的RNase A降解。本试验成功包装含有NiV N基因和L基因的假病毒,并对其进行初步应用和稳定性研究,为尼帕病毒性脑炎的防控提供物质储备。 展开更多

关键词 尼帕病毒(NiV) 假病毒构建 实时荧光定量逆转录pcr(qRT-pcr) 敏感性试验

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PCR方法检测食品中沙门氏菌研究进展 被引量：16

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作者 汪月霞 赵会杰 赵一丹 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第24期11435-11436,11445,共3页

对目前出现的一些具有代表性的食品中沙门氏菌的PCR检测方法做一综述,由此可以得出,目前开发出的检测食品中沙门氏菌的PCR方法正逐渐以多种PCR方法相结合、多重PCR技术以及食品样品预处理方法等为主,以开发出更快速、灵敏、简便、实时... 对目前出现的一些具有代表性的食品中沙门氏菌的PCR检测方法做一综述,由此可以得出,目前开发出的检测食品中沙门氏菌的PCR方法正逐渐以多种PCR方法相结合、多重PCR技术以及食品样品预处理方法等为主,以开发出更快速、灵敏、简便、实时、低廉的食源性沙门氏菌PCR检测方法。 展开更多

关键词 沙门氏菌 多重逆转录pcr 毛细管pcr 荧光定量pcr DNA环介导的恒温扩增法

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FISH联合multiplex RT-PCR检测MLL基因重排的价值探讨 被引量：2

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作者 何易 李旭东 +4 位作者 王东宁 肖若芝 王文文 胡元 林东军 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1388-1391,共4页

目的:采用荧光原位杂交(FISH)与逆转录多重巢式聚合酶链反应(multiplex RT-PCR)技术检测急性白血病中MLL基因重排的情况,分析两者联合应用的诊断价值。方法:对2008年1月～2011年5月在我院诊断为急性白血病的201例患者采用MLL双色断裂分... 目的:采用荧光原位杂交(FISH)与逆转录多重巢式聚合酶链反应(multiplex RT-PCR)技术检测急性白血病中MLL基因重排的情况,分析两者联合应用的诊断价值。方法:对2008年1月～2011年5月在我院诊断为急性白血病的201例患者采用MLL双色断裂分离重排探针进行FISH检测,同时用multiplex RT-PCR技术检测11种较常见的MLL融合基因,观察MLL基因异常的检出率。所有患者均进行常规染色体核型分析(CCA),观察11q23重排率作为对照。结果:共有19例患者出现11q23/MLL基因重排,在急性髓细胞白血病(AML)中的检出13例(10.2%),急性淋巴细胞白血病(ALL)的检出6例(8.2%)。FISH联合multiplex RT-PCR对MLL基因重排的检出率为9.45%,CCA对11q23异常的检出率为5.47%。5例正常核型的患者和3例未涉及11号染色体异常的患者中FISH检出了1例MLL倒位和3例扩增信号,multiplex RT-PCR检出了7例dup MLL(11q23)重排。结论:FISH联合multiplex RT-PCR能提高MLL基因重排检出率。 展开更多

关键词 荧光原位杂交 基因 MLL 细胞遗传学 逆转录多重巢式pcr

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整合素α_1在增生性瘢痕组织中表达的定量研究

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作者 马进 范志宏 《上海第二医科大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第4期371-373,377,共4页

目的研究增生性瘢痕组织内整合素α1表达水平及其意义。方法应用荧光定量PCR和巢式PCR技术检测10例增生性瘢痕组织中整合素α1的表达,并以10例正常皮肤组织作为对照。结果样品与内参照物基因组拷贝数的比值(α1Integrin/GAPDH×100... 目的研究增生性瘢痕组织内整合素α1表达水平及其意义。方法应用荧光定量PCR和巢式PCR技术检测10例增生性瘢痕组织中整合素α1的表达,并以10例正常皮肤组织作为对照。结果样品与内参照物基因组拷贝数的比值(α1Integrin/GAPDH×100%),增生性瘢痕组为(394.96±27.05)%,正常皮肤组为(20.40±4.88)%,两组差异显著(P<0.01)。结论应用荧光定量和巢式PCR方法可对细胞内整合素进行较准确的测定,方法简便且敏感。增生性瘢痕组织中整合素α1的高表达可能是瘢痕增生的重要因素。 展开更多

关键词 增生性瘢痕 整合素 荧光定量pcr 巢式pcr

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不同PCR方法检测牛卵形巴贝斯虫的比较分析

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作者 田万年 薛书江 +1 位作者 贾立军 张守发 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2018年第12期39-41,共3页

对普通PCR、巢式PCR和荧光定量PCR检测结果进行比较,筛选适合卵形巴贝斯虫的检测方法。结果显示,巢式PCR最小检出率为10 copies/μL,比普通PCR灵敏度分别高100倍。运用3种方法对86份血液样本进行检测,结果发现荧光定量PCR检出率最高,为4... 对普通PCR、巢式PCR和荧光定量PCR检测结果进行比较,筛选适合卵形巴贝斯虫的检测方法。结果显示,巢式PCR最小检出率为10 copies/μL,比普通PCR灵敏度分别高100倍。运用3种方法对86份血液样本进行检测,结果发现荧光定量PCR检出率最高,为41.68%,明显高于巢式PCR 37.20%和普通PCR 32.56%。结果表明,3种PCR方法均可用于检测牛卵形巴贝斯虫,荧光定量PCR优于其他两种方法。 展开更多

关键词 卵形巴贝斯虫 普通pcr 巢式pcr 荧光定量pcr 比较分析

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蓝光调控生物膜关键基因提高大肠杆菌耐酸性 被引量：2

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作者 吴建菊 冯守帅 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第15期1-7,共7页

发酵过程中的酸胁迫限制了工业微生物的发展,精细调控生物膜形成是提升大肠杆菌耐酸性的有效策略。研究基于EL222蓝光诱导蛋白开发了具有8.6倍调控效率的双质粒调控系统,用于调节生物膜形成关键因子CsgD和二鸟苷酸环化酶M(diguanylate c... 发酵过程中的酸胁迫限制了工业微生物的发展,精细调控生物膜形成是提升大肠杆菌耐酸性的有效策略。研究基于EL222蓝光诱导蛋白开发了具有8.6倍调控效率的双质粒调控系统,用于调节生物膜形成关键因子CsgD和二鸟苷酸环化酶M(diguanylate cyclase,DgcM)的表达。结果表明,在pH 5.0和15 mW/cm^(2)蓝光照射条件下,CsgD和DgcM过表达菌株耐酸性分别提高了22.3%和16.4%,生物膜含量分别增加了2.7倍和3.4倍。生物膜组成分析显示,酸性环境下多糖和蛋白质的增加以及可溶性微生物代谢产物的减少促进了细菌聚集,有助于形成更稳定的生物膜结构。实时荧光定量逆转录PCR结果证实生物膜形成相关基因转录水平显著提升。本研究构建的蓝光调控系统通过调控生物膜形成关键基因成功提高了大肠杆菌的耐酸性,这将为微生物的有机酸发酵提供参考和借鉴。 展开更多

关键词 大肠杆菌 蓝光调控 生物膜 耐酸性 实时荧光定量逆转录pcr(RT-qpcr)

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贵州遵义地区山羊Borna病毒P24基因片段的检测 被引量：7

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作者 王长明 徐平 +1 位作者 葛均江 郭振元 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期149-151,共3页

目的探讨贵州遵义及周边地区山羊博尔纳病病毒(BDV)感染状况。方法采用荧光定量套式逆转录酶聚合酶链反应(FQ-nRT-PCR)检测了300只山羊外周血单个核细胞(PBMC)中BDVP24基因片段。对阳性产物进行基因序列测定,氨基酸顺序,及同源性分析。... 目的探讨贵州遵义及周边地区山羊博尔纳病病毒(BDV)感染状况。方法采用荧光定量套式逆转录酶聚合酶链反应(FQ-nRT-PCR)检测了300只山羊外周血单个核细胞(PBMC)中BDVP24基因片段。对阳性产物进行基因序列测定,氨基酸顺序,及同源性分析。结果300只山羊PBMC中2只检出BDVP24基因阳性片段。山羊BDVP24基因片段阳性率为0.67(。BDVP24基因片段测序结果与GenBank提供的strainV毒株比较同源性为96.51%,有3个位点出现一致性沉寂突变,与BDV/MDCK毒株比较同源性为96.51%,有3个位点出现一致性沉寂突变,与C6BV毒株比较同源性为96.51%,有3个位点出现一致性沉寂突变,但所编码的氨基酸没有改变。结论贵州遵义及周边部分地区山羊存在BDV自然感染。 展开更多

关键词 博尔纳病病毒 巢式逆转录荧光定量pcr BDV P24基因 山羊

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博尔纳病毒在宁夏的人和动物感染的检测 被引量：3

15

作者 刘建 马彦 +2 位作者 张颖 王振海 谢鹏 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期389-393,共5页

目的对临床VE患者以及其本人接触动物的检测,探讨BDV在宁夏地区的感染状况及感染机制,并分析BDV核酸和转化后的氨基酸序列,构建病毒种系发生的来源。方法应用巢式逆转录酶聚合酶链反应结合荧光定量PCR检测患者及其接触的动物的外周血单... 目的对临床VE患者以及其本人接触动物的检测,探讨BDV在宁夏地区的感染状况及感染机制,并分析BDV核酸和转化后的氨基酸序列,构建病毒种系发生的来源。方法应用巢式逆转录酶聚合酶链反应结合荧光定量PCR检测患者及其接触的动物的外周血单核细胞的p24和p40基因片段。对检测阳性标本进行连接测序,应用MEGA和DnaSP4.0软件对测序结果同国外的标准株HE80、H1766、strainV等进行核酸和氨基酸序列对比分析,并构建病毒基因的系统发生树。结果在60例VE患者及其接触的710绵羊中,PCR检测发现有3例阳性,阳性检出率5%;9头绵羊阳性,阳性检出率为1.27%。基因聚合分析显示人和动物BDV的核酸序列和编码氨基酸序列与德国马源性的HE80株同源性高达100%,重构基因系统发生树可见宁夏VE患者和牛羊BDV核苷酸序列与国外的标准株形成宁夏-德国-日本的混合支系,同时宁夏绵羊BDV序列也形成了一个独立的支系。结论宁夏地区人和牛羊存在BDV的自然感染,并且人的感染存在动物源性,其传染途径很可能是呼吸道的传播可能引起脑炎的非特异性的临床症状,病毒在种系发生中与德国马源性HE80株有极高的同源性,病毒可能由国外引入本土,不排除病毒株变异的可能,人和绵羊之间存在相互传染的可能。 展开更多

关键词 博尔纳病毒 感染 巢式逆转录实时荧光定量pcr

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2016～2017年中国沿海省市虾类偷死野田村病毒(CMNV)分子流行病学调查 被引量：12

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作者 李小平 万晓媛 +6 位作者 张庆利 黄倢 董宣 王秀华 邱亮 宋增磊 程东远 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2019年第2期65-73,共9页

偷死野田村病毒(CMNV)引起的病毒性偷死病(VCMD)使中国对虾养殖业遭受了严重的经济损失,为查明CMNV及其变异株的分子流行病学特征,本研究采用逆转录套式PCR (RT-nPCR)、逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)和TaqMan实时荧光定量PCR(TaqMan RT... 偷死野田村病毒(CMNV)引起的病毒性偷死病(VCMD)使中国对虾养殖业遭受了严重的经济损失,为查明CMNV及其变异株的分子流行病学特征,本研究采用逆转录套式PCR (RT-nPCR)、逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)和TaqMan实时荧光定量PCR(TaqMan RT-qPCR) 3种方法,对2016～2017年中国沿海省市CMNV及一种新型野田村病毒——行动障碍野田村病毒(MDNV)的流行、分布和变异情况进行了分析。结果显示,养殖凡纳滨对虾、中国明对虾、日本囊对虾、斑节对虾和罗氏沼虾等种类中均可检测到CMNV阳性;在河北、山东、浙江、福建、广东和海南等省市采集的患病对虾中均存在CMNV。基于RT-nPCR、RT-LAMP和TaqMan RT-qPCR的检测结果显示,2016和2017年样品中CMNV的阳性检出率依次分别为11.8%和7.8%,6.7%和3.9%,17.7%和12.4%;基于上述3种方法检测结果计算得出,2016和2017年样品中CMNV的阳性检出率分别为26.8%和16.3%;基于RT-LAMP的分析显示,2016年样品中MDNV的阳性检出率为9.4%。本研究表明,中国沿海省市养殖虾类中VCMD的流行和危害仍不容忽视,RNA依赖的RNA聚合酶基因不断变异导致前期基于该基因开发的CMNV检测方法可靠性下降,检出假阴性风险升高;同时,发病对虾中出现了新的野田村病毒株系且具有较高的流行率,其传播危害风险值得高度关注。 展开更多

关键词 偷死野田村病毒 分子流行病学调查 逆转录套式pcr 逆转录环介导等温扩增 TaqMan实时荧光定量RT-pcr 行动障碍野田村病毒

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清远麻鸡H-FABP和A-FABP基因mRNA的差异表达研究 被引量：7

17

作者 屠云洁 苏一军 +2 位作者 王克华 张学余 李国辉 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2010年第4期53-58,共6页

【目的】分析心脏脂肪酸结合蛋白(H-FABP)和脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(A-FABP)基因mRNA在不同日龄清远麻鸡不同组织中的差异表达量,为进一步阐明H-FABP、A-FABP在鸡IMF含量和腹脂沉积中的作用机制奠定基础。【方法】依据鸡H-FABP和A-FAB... 【目的】分析心脏脂肪酸结合蛋白(H-FABP)和脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(A-FABP)基因mRNA在不同日龄清远麻鸡不同组织中的差异表达量,为进一步阐明H-FABP、A-FABP在鸡IMF含量和腹脂沉积中的作用机制奠定基础。【方法】依据鸡H-FABP和A-FABP基因及参照基因GAPDH序列设计引物,以鸡心肌、胸肌、腿肌、肝脏和腹脂mRNA逆转录合成的cDNA为模版,应用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR,检测56和120日龄清远麻鸡A-FABP、H-FABP基因mRNA的差异表达量。【结果】H-FABP、A-FABP和GAPDH的基因融解曲线均为单峰,无杂峰及二聚体,定量准确。120 d时清远麻鸡的胸肌和腿肌的肌内脂肪(IMF)含量显著高于56 d;H-FABP基因mRNA 120 d时在心肌、胸肌和腿肌的差异表达量显著高于56 d,且同一日龄时在心肌的差异表达量显著高于胸肌和腿肌(P<0.05)。120 d时清远麻鸡A-FABP基因mRNA在腹脂和肝脏的差异表达量显著高于56 d;同一日龄时,A-FABP基因mRNA在腹脂的差异表达量显著高于肝脏,A-FABP基因在心肌、胸肌和腿肌中不表达。相关分析表明,H-FABP基因mRNA差异表达量与胸肌、腿肌IMF含量分别呈显著和极显著正相关,A-FABP基因mRNA差异表达量与腹脂率呈极显著负相关。【结论】H-FABP基因主要在鸡肌肉组织的肌内脂肪中表达,而且在心肌中高度表达,与IMF含量呈显著或极显著的正相关,其是IMF含量的下调基因;A-FABP基因主要在腹脂与肝脏中表达,且在腹脂中高度表达,与腹脂率呈极显著负相关,是脂肪细胞的上调基因,且为正调控。 展开更多

关键词 清远麻鸡 荧光定量逆转录pcr A—FABP基因 H—FABP基因 差异表达

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雏鹅冷应激反应中HPA、HPT轴应激激素相关基因表达调控规律 被引量：1

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作者 屠云洁 苏一军 +1 位作者 张学余 李国辉 《家畜生态学报》 2011年第5期14-20,共7页

以7日龄皖西白鹅为试验对象,研究于（12±1）℃条件下进行急性冷应激处理时对HPA、HPT轴的影响。利用荧光定量逆转录PCR（FQ-RT-PCR）技术动态研究冷应激反应中应激激素相关基因TRH、TSH、CRH、ACTH基因mRNA的变化规律。研究结果表... 以7日龄皖西白鹅为试验对象,研究于（12±1）℃条件下进行急性冷应激处理时对HPA、HPT轴的影响。利用荧光定量逆转录PCR（FQ-RT-PCR）技术动态研究冷应激反应中应激激素相关基因TRH、TSH、CRH、ACTH基因mRNA的变化规律。研究结果表明,下丘脑TRH基因mRNA转录量在冷应激0.5 h3、h、6 h9、h1、8 h与应激结束后1 h6、h和12 h显著升高,其他时间内均下降到室温时的转录水平。垂体TSH基因mRNA转录量在冷应激1.5 h到12 h期间显著升高,应激12 h时转录水平达到最高点,而其他应激时间均降低到应激前的水平,应激结束后1 h到6 h期间垂体TSH基因mRNA转录水平也被显著升高,冷处理结束后9~24 h已恢复到应激前的正常水平。下丘脑CRH基因mRNA转录量在冷应激3h、9 h1、8 h时与应激结束后0.5 h、1 h和9 h显著升高,其他时间点降到应激前的正常水平。肾上腺ACTH基因mRNA转录水平在冷应激1.5~9 h、18 h时显著升高,其他时间点均迅速下降到应激前水平;冷处理结束后0.5 h和3 h,由于又突然受到热的室温应激,ACTH基因mRNA转录量又显著升高,其他时间点降到应激前的正常水平。下丘脑TRH基因mRNA表达呈现波动性变化趋势,但表达量均不超过1.5,说明下丘脑TRH基因是负调控的。下丘脑CRH、垂体TSH和肾上腺ACTH基因mRNA的表达量分别在2.27~7.76、1.75~6.17、5.5~14.83范围内,总体呈上升趋势,说明TSH、CRH和ACTH基因均是冷应激反应时的正调控基因。 展开更多

关键词 冷应激 基因表达 荧光定量逆转录pcr技术 HPA轴 HPT轴

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