二甲基乙二酰基甘氨酸对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞增殖和分化的影响

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作者 周亮亮 翁土军 +5 位作者 钱隆 聂振国 何莹 张春丽 王自强 李利 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期262-269,共8页

目的 :探讨低氧模拟剂二甲基乙二酰基甘氨酸(dimethyloxalylglycine,DMOG)对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)的增殖、成骨分化及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法:将MC3T3-E1细胞接种到... 目的 :探讨低氧模拟剂二甲基乙二酰基甘氨酸(dimethyloxalylglycine,DMOG)对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)的增殖、成骨分化及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法:将MC3T3-E1细胞接种到培养板24h后,实验组培养基中分别加入50μM(50μM组)和200μM(200μM组)的DMOG,对照组加入完全培养液。分别于培养1、3、5d时采用MTT法检测MC3T3-E1细胞增殖情况,5、10d行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色及ALP活性检测成骨细胞分化,21d用茜素红染色检测MC3T3-E1细胞钙结节的形成并进行定量分析,采用ELISA法检测MC3T3-E1培养3d情况时上清液中的VEGF蛋白含量,并用实时荧光定量PCR法检测MC3T3-E1细胞VEGF mRNA的相对表达量。结果:培养1d时对照组、50μM组和200μM组的MC3T3-E1的光密度(optical density,OD)值分别为0.041±0.009、0.074±0.019、0.086±0.044,3d时分别为0.123±0.027、0.148±0.020、0.224±0.061,5d时分别为0.297±0.044、0.325±0.084、0.354±0.038,1d、3d时50μM组和200μM组与同时间点对照组比较均有显著性差异(P<0.05),3d时50μM组与200μM组有显著性差异(P<0.05)。培养5d和10d时对照组ALP染色颜色较深,50μM组颜色中等,200μM组颜色较浅;5d时对照组ALP活性为1.943±0.072,50μM组为1.632±0.051,200μM组为1.319±0.065;10d时对照组ALP活性为3.734±0.067,50μM组为3.381±0.070,200μM组为2.831±0.086。三组间同时间点比较均有统计学差异(P<0.05),同组10d时与5d时比较均有统计学差异(P<0.05)。茜素红染色200μM组可见少量红色结节,50μM组可见中等量红色结节,对照组可见大量红色结节;对照组茜素红含量(μg/ml)为56.178±7.940,50μM组为41.922±2.438,200μM组为31.929±1.922,三组间比较均有统计学差异(P<0.05)。培养3d时对照组细胞培养上清液中VEGF蛋白含量(ng/孔)为9.063±0.603,50μM组为12.123±0.870,200μM组为15.540±0.581,三组间比较均有统计学差异(P<0.05);50μM组VEGF mRNA表达量为对照组的1.792±0.067,200μM组为对照组的3.963±0.092,三组间比较均有统计学差异(P<0.05)。结论 :低氧模拟剂DMOG可促进MC3T3-E1细胞增殖和VEGF表达,抑制其成骨分化。 展开更多

关键词 二甲基乙二酰基甘氨酸 小鼠胚胎成骨细胞前体细胞 碱性磷酸酶 血管内皮生长因子 成骨分化

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小鼠胚胎成骨细胞前体细胞对高加速度力学微环境的生物力学响应

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作者 王鑫 杨文凯 +1 位作者 冯才懿 张春秋 《医用生物力学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第S01期71-71,共1页

目的航天器的升空与返回、超高速战斗机的起降以及航空航天领域的科学探索,使人类处于高加速度(高G)的力学微环境下。因此,作为承载器官,骨细胞在高G力学微环境下的生物力学响应亟需研究。方法采用小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)... 目的航天器的升空与返回、超高速战斗机的起降以及航空航天领域的科学探索,使人类处于高加速度(高G)的力学微环境下。因此,作为承载器官,骨细胞在高G力学微环境下的生物力学响应亟需研究。方法采用小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)为模型,对细胞施加连续3 d,每天30 min的高G力学微环境(对照组和1、5、10、20、40、100 G组)。 展开更多

关键词 成骨细胞 高加速度 生物力学响应 前体细胞 小鼠胚胎 力学微环境 科学探索

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金枪鱼鱼骨活性钙对鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)活力和凋亡作用 被引量：3

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作者 耿灵鑫 钱琴莲 +10 位作者 申慧婷 杨铭媛 王小凤 芦晨阳 周君 李晔 苏秀榕 李妍妍 陈义芳 王求娟 袁剑 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期311-314,319,共5页

目的:以金枪鱼骨为原料,制备柠檬酸-苹果酸钙剂(CMC),研究其对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)的细胞活力、凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:在小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)培养液中,分别加入高浓度(1μg/m L)CMC和低浓度... 目的:以金枪鱼骨为原料,制备柠檬酸-苹果酸钙剂(CMC),研究其对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)的细胞活力、凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:在小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)培养液中,分别加入高浓度(1μg/m L)CMC和低浓度(0.1μg/m L)CMC,利用MTT法检测对MC3T3-E1细胞活力的影响,流式细胞仪检测血清饥饿诱导的细胞凋亡。结果:高浓度和低浓度的钙对MC3T3-E1细胞活力均有显著的促进作用,24 h的高钙组的细胞增长率(9.67%)优于低钙组(8.95%);36 h和48 h后低钙组的增长率分别为14.96%和20.33%,明显优于36 h和48 h作用后的高钙组(6.23%和1.73%),两组细胞凋亡率与空白组比较差异较小,且均显著低于对照组(p<0.01)。结论:CMC高钙组和CMC低钙组在一定浓度范围内,能促进MC3T3-E1细胞活力显著增强,并且改善血清饥饿诱导的成骨前体细胞凋亡。 展开更多

关键词 金枪鱼鱼骨 鼠胚胎成骨细胞前体细胞 活性钙 细胞活力和凋亡

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小鼠胚胎干细胞体外分化为神经前体细胞的研究 被引量：8

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作者 吴旋 黎海蒂 +2 位作者 李树浓 徐海伟 徐令 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第11期1260-1263,共4页

目的　探索小鼠胚胎干细胞 (Embryonicstemcell ,EScell)体外分化为神经前体细胞 (Neuralprecursorcells ,NPC)的无血清培养条件 ,比较人胚胎成纤维细胞 (Humanembryonicfibroblasts ,HEF)与小鼠胚胎成纤维细胞 (Mouseembryonicfibrobla... 目的　探索小鼠胚胎干细胞 (Embryonicstemcell ,EScell)体外分化为神经前体细胞 (Neuralprecursorcells ,NPC)的无血清培养条件 ,比较人胚胎成纤维细胞 (Humanembryonicfibroblasts ,HEF)与小鼠胚胎成纤维细胞 (Mouseembryonicfibroblasts ,MEF)对小鼠ES细胞生长的作用。方法　在MEF或HEF饲养层上培养ES细胞 ,培养液中含白血病抑制因子。采用无血清方法培养NPC ,免疫组化方法检测巢蛋白 (Nestin) ,用硝基四氮唑蓝 /5 溴 4 氯 3 吲哚基磷酸 (NBT/BCIP)显色检测碱性磷酸酶。结果　无血清培养可以获得 86 %的NPC。HEF与MEF一样能维持ES未分化状态。结论　无血清培养方法有利于ES细胞向NPC分化 ,HEF可用于小鼠ES细胞的培养 ,而且比MEF优越。 展开更多

关键词 胚胎干细胞 神经前体细胞 无血清培养 人胚胎成纤维细胞 小鼠

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纤维连接蛋白在小鼠胚胎干细胞诱导为神经前体细胞中的作用 被引量：5

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作者 徐海伟 吴旋 +3 位作者 黎海蒂 范晓棠 曹娟 唐军 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期197-200,共4页

目的　观察采用ITSF和N2 无血清培养基诱导小鼠胚胎干细胞为神经前体细胞的作用及纤维连接蛋白对神经诱导的影响。方法　小鼠胚胎干细胞的培养和无血清诱导为神经前体细胞 ,NBT BCIP染色 ,Nestin免疫组化染色。结果　细菌培养皿法或悬... 目的　观察采用ITSF和N2 无血清培养基诱导小鼠胚胎干细胞为神经前体细胞的作用及纤维连接蛋白对神经诱导的影响。方法　小鼠胚胎干细胞的培养和无血清诱导为神经前体细胞 ,NBT BCIP染色 ,Nestin免疫组化染色。结果　细菌培养皿法或悬滴法培养胚体、ITSF或N2 无血清培养基均能将小鼠胚胎干细胞诱导为神经前体细胞。纤维连接蛋白预处理培养皿表面 ,对胚体的贴壁情况影响不大 ,但能使无血清培养后存活的细胞增多。结论　小鼠胚胎干细胞在ITSF和N2 培养基均能分化为神经前体细胞 ,在N2 展开更多

关键词 胚胎干细胞 神经前体细胞 细胞分化 纤维连接蛋白 小鼠

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前成骨细胞迁移相关Lnc-PMIF通过调控HuR参与失重性骨质流失新机制

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作者 茹康 孙晋鲁 +3 位作者 张玲 赵龙 王昱霖 骞爱荣 《医用生物力学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第S01期327-327,共1页

目的以“迁移相关的长链非编码RNA-PMIF”(Long non-coding RNA postulated migration inhibitory factor,Lnc-PMIF)为切入点,研究lnc PMIF在模拟失重条件抑制成骨前体细胞迁移与骨形成中的作用及机制。方法在细胞水平上采用随机回转(ra... 目的以“迁移相关的长链非编码RNA-PMIF”(Long non-coding RNA postulated migration inhibitory factor,Lnc-PMIF)为切入点,研究lnc PMIF在模拟失重条件抑制成骨前体细胞迁移与骨形成中的作用及机制。方法在细胞水平上采用随机回转(random positioning machine,RPM)模拟失重条件,以LncPMIF高低表达的MC3T3-E1成骨细胞系为研究对象,测定细胞迁移能力及相关基因表达水平。在动物水平以C57BL/6小鼠为研究对象,采用后肢去负荷(Hindlimb Unloading,HLU)方法建立力学去负荷的小鼠模型,并通过靶向递送LncPMIF-si RNA,研究其对失重诱导的小鼠骨质流失的治疗效果。结果(1)模拟失重条件下,LncPMIF的表达与成骨前体细胞迁移和骨形成负相关;(2)LncPMIF通过调控人抗原R(Human antigen R,HuR)蛋白影响成骨前体细胞迁移参与失重性骨质流失;(3)沉默lnc PMIF表达可通过促进成骨前体细胞迁移抵抗失重性骨质流失。结论LncPMIF对模拟失重条件敏感,模拟失重条件下,LncPMIF通过影响Hu R的表达进而抑制成骨前体细胞迁移;递送Lnc-PMIF-siRNA可改善模拟失重引起的成骨前体细胞迁移抑制和失重性骨质流失。 展开更多

关键词 骨质流失 模拟失重 C57BL/6小鼠 PMI 成骨前体细胞

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Olig2对胚胎干细胞向神经前体细胞分化过程中Nestin蛋白表达的影响 被引量：3

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作者 罗梦娇 王贝 +6 位作者 郭瑞 曲学彬 王会平 张强 董富兴 任传路 姚瑞芹 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期91-94,共4页

目的:探讨碱性螺旋-环-螺旋家族的少突胶质细胞转录因子2(Olig2)对小鼠胚胎干细胞(mESCs)向神经前体细胞(NPCs)分化过程中巢蛋白(Nestin)表达的影响。方法:将mESCs分为正常组、空载体组和Olig2转染组,用含有RA、Purmorphamine、bF GF和P... 目的:探讨碱性螺旋-环-螺旋家族的少突胶质细胞转录因子2(Olig2)对小鼠胚胎干细胞(mESCs)向神经前体细胞(NPCs)分化过程中巢蛋白(Nestin)表达的影响。方法:将mESCs分为正常组、空载体组和Olig2转染组,用含有RA、Purmorphamine、bF GF和PDGF-AA的培养基将其诱导分化为NPCs;分别在诱导分化的第11 d和14 d,用免疫细胞化学荧光染色和蛋白免疫印迹法检测其神经前体细胞特异性标记物巢蛋白(Nestin)的表达情况。结果:经Olig2-GV218慢病毒转染后的mE SCs,Olig2蛋白的表达较正常组和空载体组明显增强;诱导分化后11 d,三组细胞Nestin蛋白表达无明显区别;14 d时,正常组和空载体组仍能检测到较高的Nestin蛋白表达,而Olig2转染组Nestin蛋白的表达明显减弱。结论:mESCs向NPCs分化过程,过表达Olig2可降低Nestin蛋白的表达。 展开更多

关键词 小鼠胚胎干细胞 神经前体细胞 过表达 少突胶质细胞转录因子2 巢蛋白

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小分子化合物组合将人胚胎成纤维细胞体外编程为神经前体细胞

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作者 杨盼 王圆圆 +5 位作者 高群伟 刘阳 王翼 郭俣 刘长青 刘高峰 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期360-367,共8页

目的通过小分子化合物组合将人胚胎成纤维细胞(HEFs)重编程为化学诱导神经前体细胞(ciNPCs)。方法HEFs重编程为ciNPCs涉及两个阶段,第1阶段是小分子组合诱导阶段,常氧条件下,将HEFs在含有小分子化合物组合VCR(VPA,CHIR99021,Repsox)的KS... 目的通过小分子化合物组合将人胚胎成纤维细胞(HEFs)重编程为化学诱导神经前体细胞(ciNPCs)。方法HEFs重编程为ciNPCs涉及两个阶段,第1阶段是小分子组合诱导阶段,常氧条件下,将HEFs在含有小分子化合物组合VCR(VPA,CHIR99021,Repsox)的KSR培养基中培养15 d,HEFs形态发生变化,形成致密细胞集落。第2阶段是特异性诱导ciNPCs,将形成的细胞集落胰酶消化后,低粘附板中悬浮培养,可以形成ciNPCs神经球。采用CM-DiI染料标记P3代ciNPCs,并将其移植于6-OHDA法制作的帕金森大鼠模型右脑内侧前脑束(MFB)区,检测ciNPCs在PD大鼠脑内微环境中的存活、迁移以及分化状况。结果VCR组合诱导10 d细胞开始出现明显的聚集趋势,15 d时,形成致密的细胞集落。单层培养1×10^(5)/孔中大约形成40个克隆,且AP染色呈阳性。将细胞集落消化后,低粘附板中悬浮培养培养2 d,可见大量神经球形成,即为第1代ciNPCs(P1代)。ciNPC高表达神经前体细胞(NPCs)特异性标记物(Nestin、Pax6和Sox2),经体外神经特异性诱导分化,ciNPCs表达神经元特异性标记物Tuj1和星形胶质细胞特异性标记物GFAP。而且,P3代ciNPCs移植PD大鼠脑内4周后,可以分化为Tuj1+、GFAP+、TH+和GABA+细胞。结论VCR可以将HEFs重编程为ciNPCs,而无需引入外源性基因,为神经科学研究和神经退行性疾病的治疗提供有利的供体材料。 展开更多

关键词 小分子化合物组合 细胞重编程 人胚胎成纤维细胞 神经前体细胞

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小鼠皮肤成纤维细胞与早期胚胎共生体系的构建

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作者 曹鸿国 李运生 邓宏魁 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2009年第1期39-43,共5页

【目的】构建小鼠早期胚胎与皮肤成纤维细胞共生的微环境体系。【方法】分离培养EGFP纯合阳性成年ICR小鼠皮肤成纤维细胞。取激素超排合笼后2.5d小鼠8-细胞胚胎，通过显微操作系统将4～6个EGFP阳性小鼠皮肤成纤维细胞注射到小鼠早期8-... 【目的】构建小鼠早期胚胎与皮肤成纤维细胞共生的微环境体系。【方法】分离培养EGFP纯合阳性成年ICR小鼠皮肤成纤维细胞。取激素超排合笼后2.5d小鼠8-细胞胚胎，通过显微操作系统将4～6个EGFP阳性小鼠皮肤成纤维细胞注射到小鼠早期8-细胞胚胎中，转移发育到囊胚阶段的共生胚胎至小鼠胎儿成纤维细胞饲养层上，在小鼠胚胎干细胞分离培养条件下进行培养。【结果】EGFP阳性小鼠成纤维细胞注射到小鼠胚胎后，荧光显微镜下显示，EGFP阳性小鼠成纤维细胞分布到小鼠囊胚组成细胞中，参与小鼠囊胚组成。在发育到囊胚的共生胚胎中，EGFP阳性小鼠成纤维细胞分布到小鼠囊胚细胞中的比例为93．73％（269／287）。在小鼠胚胎干细胞的分离培养条件下，2．60％（7／269）共生胚胎中EGFP阳性小鼠成纤维细胞参与小鼠胚胎内细胞团的组成。【结论】小鼠皮肤成纤维细胞与小鼠早期胚胎能够形成共生的微环境体系。 展开更多

关键词 小鼠 成体细胞 早期胚胎 共生微环境

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3,3',5-碘-L-甲腺原氨酸对成骨细胞前体增殖和成骨分化的作用

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作者 薛英 王永炫 +4 位作者 余新曦 蓝旭华 陈霞霞 林滢 侯建明 《中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志》 CSCD 北大核心 2020年第1期27-33,共7页

目的观察不同浓度的3,3',5-碘-L-甲腺原氨酸(3,3',5-triiodo-L-thyronine,T3)对小鼠颅顶前成骨细胞亚克隆14(MC3T3-E1 subclone 14)细胞增殖及分化水平的作用.方法分别给予不同浓度T3干预细胞,培养1、2、3 d后采用CCK8法检测细... 目的观察不同浓度的3,3',5-碘-L-甲腺原氨酸(3,3',5-triiodo-L-thyronine,T3)对小鼠颅顶前成骨细胞亚克隆14(MC3T3-E1 subclone 14)细胞增殖及分化水平的作用.方法分别给予不同浓度T3干预细胞,培养1、2、3 d后采用CCK8法检测细胞增殖水平;在成骨分化诱导试剂干预7 d基础上,结合上述T3给药,通过碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色检测各浓度组成骨细胞分化水平,通过实时荧光定量PCR和免疫蛋白印迹(Western blot)法检测各浓度组的成骨细胞标记性基因及蛋白的表达差异.结果在分别干预1、2、3 d后,T3随着浓度增高,对细胞的增殖水平均呈明显上调;而且相同剂量的T3对于细胞增殖呈时间依赖性增强.此外,MC3T3-E1 Subclone 14细胞诱导7 d后,对比于0对照组,低浓度T3(1 nmol/L)对成骨细胞各分化参数均无明显作用,而10、100、1000 nmol/L的T3对细胞ALP染色,成骨细胞相关基因及蛋白均明显上调,其中以10和100 nmol/L组最为显著.结论T3对于MC3T3-E1 Subclone 14细胞的增殖和成骨细胞分化均有显著的促进作用. 展开更多

关键词 3 3' 5-碘-L-甲腺原氨酸 小鼠颅顶前成骨细胞亚克隆14 细胞增殖 分化

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自体成骨细胞的诱导培养及其生物学特性 被引量：3

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作者 杨福军 夏玉莲 +5 位作者 李雨民 孙元明 刘征 刘宗礼 李贺达 杨学琪 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2004年第3期263-266,276,共5页

目的　诱导培养来自自体骨髓间充质干细胞的成骨细胞或成骨细胞的前体细胞 ,进行自体成骨细胞异体骨复合移植实验研究。方法　抽取动物骨髓、抗凝稀释 ,以适当条件培养诱导 ,分化为成骨细胞并分析细胞生物学特性。成骨细胞生长在同种异... 目的　诱导培养来自自体骨髓间充质干细胞的成骨细胞或成骨细胞的前体细胞 ,进行自体成骨细胞异体骨复合移植实验研究。方法　抽取动物骨髓、抗凝稀释 ,以适当条件培养诱导 ,分化为成骨细胞并分析细胞生物学特性。成骨细胞生长在同种异体骨制成的载体上 ,形成复合物 ,植入人工缺损处 ,观察骨修复情况。结果　可以诱导培养出大量的成骨细胞或成骨细胞的前体细胞。自体成骨细胞异体松质骨复合物修复骨缺损的效果明显优于对照组。结论　本实验为自体成骨细胞异体骨复合移植的临床应用提供一个简单有效的方法。 展开更多

关键词 成骨细胞 自体 异体骨 复合移植 临床应用 前体细胞 诱导培养 细胞生物学特性 骨修复 缺损

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ADAM17异常表达对神经前体细胞迁移的影响

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作者 杨慈清 李小英 +3 位作者 王聪睿 付苏雷 李晗 林俊堂 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期683-687,共5页

目的：分析在胚胎发育过程ADAM17异常表达对神经前体细胞迁移的影响。方法：采用鸡胚活体电转和小鼠子宫内电转基因技术,在鸡胚发育的第5 d（E5）,将2μg/μl的p CAGGS-ADAM17和0.25μg/μl的p CAGGS-GFP质粒以1∶8混合液0.25-0.5μl准... 目的：分析在胚胎发育过程ADAM17异常表达对神经前体细胞迁移的影响。方法：采用鸡胚活体电转和小鼠子宫内电转基因技术,在鸡胚发育的第5 d（E5）,将2μg/μl的p CAGGS-ADAM17和0.25μg/μl的p CAGGS-GFP质粒以1∶8混合液0.25-0.5μl准确地注射到视顶盖内,然后电转基因,E12时收集胚胎;小鼠胚胎发育的15 d（E15）进行子宫内电转,将2μg/μl的shRNA-ADAM17和0.25μg/μl的p CAGGS-GFP质粒以1∶8混合液0.25-0.5μl准确地注射到一侧脑室,电转基因后E20时收集胚胎。冰冻切片,采用免疫荧光组织化学和DAPI染色观察组织形态结构及相关蛋白的变化。结果：在鸡胚模型中,ADAM17的超表达并不会明显的引起神经前体细胞迁移的改变,对细胞核转录因子Pax7的表达也没有影响;在鼠胚模型中,ADAM17的抑制表达能够引起神经前体细胞迁移受阻,但并没有引起大脑皮层各层的结构的变化。结论：ADAM17的抑制表达对神经前体细胞的迁移具有抑制作用,但并不会引起大脑皮层结构的改变。 展开更多

关键词 ADAM17 神经前体细胞 鸡胚 小鼠胚胎

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人第三磨牙牙囊前体细胞的分离

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作者 肖长杰 《国外医学（口腔医学分册）》 2006年第3期185-185,共1页

关键词 前体细胞 第三磨牙 牙囊 分离 间叶组织 成牙骨质细胞 牙周韧带细胞 cells 成骨细胞 分化潜能

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胚胎干细胞系向造血干细胞定向分化的研究 被引量：1

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作者 谢祁阳 焦解歌 +2 位作者 黄元华 姚红霞 涂蓉 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期15-19,共5页

目的建立并稳定和优化诱导胚胎干细胞（ES）向造血干细胞定向分化的方法。方法应用体外胚胎干细胞分化系统，观察了多种因素对原始细胞成集落细胞（BLast Colony-Forming Cell，BL-CFC）形成集落的影响。结果植入不同数量的３．５d胚体... 目的建立并稳定和优化诱导胚胎干细胞（ES）向造血干细胞定向分化的方法。方法应用体外胚胎干细胞分化系统，观察了多种因素对原始细胞成集落细胞（BLast Colony-Forming Cell，BL-CFC）形成集落的影响。结果植入不同数量的３．５d胚体衍生的细胞与BL-CFC集落生成数量之间呈高度相关，大约每植入１００个３．５d胚体衍生的细胞，能生成１．０８～１．２个BL-CFC集落；２０％与３０％浓度的D４T条件培养液促BL-CFC集落生成作用的效率最高；单用D４T条件培养液、EPO或KL对BL-CFC集落的生长无明显促进作用（P＞０．０５）；但单用VEGF对BL-CFC集落的生成有极显著的促进作用（P＜０．００１）。但当这四种因素两两组合使用时，均比单用VEGF具有明显的促BL-CFC集落生成作用。在VEGF＋KL＋D４T合用的基础上加用EPO，则促BL-CFC集落生成作用大大增强，与其它各组相比较，BL-CFC集落数极显著地增多（P＜０．００１）。大约每植入１００个３．５d胚体衍生的细胞，能生成１．５～１．６个BL-CFC集落。结论影响BL-CFC生长的主要因素可能为VEGF；D４T条件培养液具有强大的协同作用；EPO和KL为诱导BL-CFC向造血细胞系分化的主要因素；３．５d胚体衍生的细胞比３．２５d胚体衍生的细胞对各种刺激因子反应更敏感。 展开更多

关键词 胚胎干细胞系 原始细胞成集落细胞 造细胞 内皮细胞 共同前体细胞 造血干细胞 定向分化

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糖基化终末产物刺激下长链非编码RNA H19通过WNT/β-catenin信号通路调控MC3T3细胞骨向分化

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作者 邓超 强诗雨 +3 位作者 马一凡 阮晓旭 孙翼 李雪雪 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期765-769,共5页

目的:探究长链非编码RNA H19(LncRNA H19)在糖基化终末产物(AGEs)刺激下对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1成骨分化的调控作用及其可能的机制。方法:10μg/mL AGEs浓度刺激下培养MC3T3-E1细胞,7 d后碱性磷酸酶染色、21 d后茜素红染色观察细胞矿... 目的:探究长链非编码RNA H19(LncRNA H19)在糖基化终末产物(AGEs)刺激下对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1成骨分化的调控作用及其可能的机制。方法:10μg/mL AGEs浓度刺激下培养MC3T3-E1细胞,7 d后碱性磷酸酶染色、21 d后茜素红染色观察细胞矿化情况;RT-PCR检测细胞中ALP、Runx-2、OCN、SP7以及LncRNA H19 mRNA的表达水平,Western blotting检测细胞中Runx-2蛋白表达水平;采用细胞转染技术过表达LncRNA H19,RT-PCR检测LncRNA H19的转染效率;并检测转染LncRNA H19后细胞中骨基因的表达水平、ALP染色情况以及β-catenin的表达情况。结果:AGEs刺激下MC3T3-E1细胞碱性磷酸酶染色变浅、钙化结节形成减少,ALP、Runx-2、OCN、SP7、LncRNA H19基因表达水平降低(P<0.05),Runx-2蛋白水平表达下降;转染过表达LncRNA H19(lv-H19)后,LncRNA H19表达水平显著上调(P<0.05),ALP、Runx-2、OCN、SP7基因表达水平上升(P<0.05),碱性磷酸酶染色变深,β-catenin的表达增加。结论:AGEs刺激下,LncRNA H19可能通过WNT/β-catenin的表达影响了MC3T3-E1细胞的骨向分化。 展开更多

关键词 糖基化终末产物 长链非编码RNA H19 小鼠前成骨细胞 骨向分化

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免疫活性细胞对骨代谢的调控作用 被引量：4

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作者 王凌 李大金 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期287-288,F0003-F0004,共4页

关键词 免疫活性细胞 骨代谢 调控作用 造血前体细胞 内环境稳定 平衡调节 成骨细胞 破骨细胞 基质分子 骨吸收

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低温氩氧等离子体处理的无机牛骨对MC3T3-E1细胞黏附、增殖及分化的影响 被引量：1

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作者 马凯 李昊 +3 位作者 赵红梅 王永亮 刘杰 柏娜 《国际口腔医学杂志》 CAS CSCD 2020年第3期278-285,共8页

目的研究小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1在低温氩氧等离子体处理的无机牛骨上的黏附、增殖及分化特征。方法使用低温氩氧等离子体对无机牛骨进行表面活化(实验组)后,使用扫描电子显微镜(SEM)观察无机牛骨表面形貌的变化,X射线光电子能谱分析(... 目的研究小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1在低温氩氧等离子体处理的无机牛骨上的黏附、增殖及分化特征。方法使用低温氩氧等离子体对无机牛骨进行表面活化(实验组)后,使用扫描电子显微镜(SEM)观察无机牛骨表面形貌的变化,X射线光电子能谱分析(XPS)检测表面元素的组成。将MC3T3-E1细胞接种于低温氩氧等离子体处理的无机牛骨表面,使用SEM观察细胞的黏附形态,CCK-8法检测细胞1、3、5 d的增殖变化,碱性磷酸酶(ALP)法检测细胞7、14 d的分化状态。以不作处理的无机牛骨作为对照。结果对照组与实验组的表面形貌无明显改变;在表面材料的元素组成上,实验组表面碳元素减少,氧、钙、磷元素均增高。实验组MC3T3-E1细胞的黏附更充分,细胞伸出伪足;培养1、3、5 d时,实验组细胞增殖数量明显高于对照组;培养14 d时,实验组ALP活性明显高于对照组(P<0.05)。结论低温氩氧等离子体处理对无机牛骨表面小鼠胚胎成骨细胞的黏附、增殖及分化具有一定的促进作用。 展开更多

关键词 低温等离子体 无机牛骨 小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1 引导骨组织再生

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黄瓜籽总黄酮对MC3T3-E1细胞增殖分化的影响 被引量：1

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作者 孙银玲 陈丽艳 +4 位作者 张蕾 丁纯洁 郑宏宇 綦菲 王伟明 《中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志》 CSCD 北大核心 2022年第4期362-369,共8页

目的探讨黄瓜籽总黄酮提取物(cucumber seed flavonoids,CSF)对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(mouse embryo osteoblast precursor cells,MC3T3-E1)增殖、分化和矿化的影响,以及对富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(secreted protein acidic and r... 目的探讨黄瓜籽总黄酮提取物(cucumber seed flavonoids,CSF)对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(mouse embryo osteoblast precursor cells,MC3T3-E1)增殖、分化和矿化的影响,以及对富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(secreted protein acidic and rich in cysteine,SPARC)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)/核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor kappa B ligand,RANKL)/核因子κB受体活化因子(receptor activator of nuclear factor kappa B,RANK)信号通路的作用。方法通过噻唑蓝(MTT)实验、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性检测、茜素红染色,考察不同浓度CSF对MC3T3-E1细胞增殖、分化及矿化的影响;采用RT-PCR方法检测SPARC、OPG/RANKL mRNA表达水平;Western blot检测OPG/RANKL的蛋白表达量。结果CSF高、中剂量组能够明显提高细胞增殖率(P<0.05),分别为阳性对照组的1.92和1.77倍;CSF高、中剂量组ALP活性为(2.756±0.073)和(1.961±0.107)U/mL,明显高于阳性对照组(0.453±0.029)U/mL(P<0.05);CSF高、中剂量组钙化结节面积为(34.899±0.811)和(22.112±0.914)mm 2/10个视野,与阳性对照组(16.577±0.649)mm 2/10个视野相比明显增加(P<0.05);与空白组相比,CSF高、中剂量组在不同时间点均明显上调SPARC、OPG/RANKL mRNA表达量,并促进OPG/RANKL蛋白表达水平(P<0.05)。结论黄瓜籽总黄酮类成分能够促进成骨细胞MC3T3-E1的增殖、分化及矿化能力,并通过上调SPARC、OPG/RANKL的表达水平提高MC3T3-E1细胞的成骨能力。 展开更多

关键词 黄瓜籽总黄酮 小鼠胚胎成骨细胞前体细胞 富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白 骨保护素/核因子κB受体活化因子配体

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载rhPTH(1-34)纳米缓释纤维促成骨作用的体外研究 被引量：1

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作者 袁月 刘童斌 +4 位作者 孟帅岑 蔡青 张喆 王晶晶 孟维艳 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期771-774,共4页

目的:制备载甲状旁腺相关肽(rhPTH(1-34))的电纺丝缓释纤维,研究其缓释效果及对成骨细胞增殖、分化的影响。方法:制备含rhPTH(1-34)电纺丝缓释纤维(PLLA/rhPTH(1-34)),扫描电镜(SEM)观察其形貌。紫外分光光度法测定释放速率。噻唑蓝法(M... 目的:制备载甲状旁腺相关肽(rhPTH(1-34))的电纺丝缓释纤维,研究其缓释效果及对成骨细胞增殖、分化的影响。方法:制备含rhPTH(1-34)电纺丝缓释纤维(PLLA/rhPTH(1-34)),扫描电镜(SEM)观察其形貌。紫外分光光度法测定释放速率。噻唑蓝法(MTT)测定PLLA/rhPTH(1-34)对小鼠前成骨细胞(MC3T3-E1)的增值活性,碱性磷酸酶(ALP)测定其分化。结果:含模型药物的电纺丝缓释纤维体外有效释放21d,PLLA/rhPTH(1-34)缓释纤维促进细胞的增殖作用明显(P<0.05),并能显著促进细胞的分化(P<0.05)。结论:PLLA/rhPTH(1-34)缓释纤维可以有效缓释药物,并能促进MC3T3-E1DE增殖、分化。 展开更多

关键词 电纺丝 甲状旁腺激素 小鼠前成骨细胞

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明胶改性聚醚醚酮微载体的制备、表征及性能 被引量：1

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作者 焦自学 高承哲 +2 位作者 孙硕 武振旭 章培标 《应用化学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期390-397,共8页

微载体因其具有较高的表面积/体积比等优点可以大大提高哺乳动物细胞培养效率,被广泛应用于生物制药和组织工程等领域。但微载体多为一次性使用,不耐高温,且主要依赖进口,价格昂贵,因而限制了其国内的应用和推广。聚醚醚酮(PEEK)材料具... 微载体因其具有较高的表面积/体积比等优点可以大大提高哺乳动物细胞培养效率,被广泛应用于生物制药和组织工程等领域。但微载体多为一次性使用,不耐高温,且主要依赖进口,价格昂贵,因而限制了其国内的应用和推广。聚醚醚酮(PEEK)材料具有良好的生物相容性、化学稳定性及耐高温等特性,是一种优异的微载体材料,但存在熔点高,加工方法单一和生物惰性等缺陷。本文以浓硫酸为溶剂,乙醇溶液为萃取剂,采用气流辅助滴注/相分离法,将PEEK制备成448μm左右,尺寸均匀的微球;经氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)处理,获得表面氨基化修饰的PEEK微球(PEEK-N);进一步,以N,N′-羰基二咪唑(CDI)为活性中间体,将明胶分子接枝到PEEK-N微球表面,获得表面明胶修饰的PEEK微载体(PEEK-G)。对材料的物理化学性质、表面接枝量进行表征;并通过体外细胞实验评估其细胞毒性、细胞粘附效率和细胞增殖能力。结果显示,通过该方法制备成功了3种不同明胶接枝含量的PEEK细胞微载体(PEEK-G1,PEEK-G2,PEEK-G3),其中明胶含量较高的PEEK-G3毒性最低,细胞粘附和增殖效果最理想。 展开更多

关键词 微载体 聚醚醚酮 明胶修饰 小鼠胚胎成骨细胞前体细胞 细胞增殖与粘附

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