疏血通抑制Bim依赖的小脑颗粒神经元凋亡

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作者 潘甚豪 曹东芳 +5 位作者 赵凡一 赵思捷 张承皓 梁建峰 伍健伟 袁忠民 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期549-556,共8页

【目的】探究疏血通及其主要成分水蛭素对Sprague-Dawley(SD)大鼠小脑颗粒神经元(CGNs)凋亡的影响及机制。【方法】体外成熟7 d的CGNs分为存活对照组(用含K+浓度为25 mmol/L的培养基,即25 K组)、凋亡组(用含K+浓度为5 mmol/L的培养基,即... 【目的】探究疏血通及其主要成分水蛭素对Sprague-Dawley(SD)大鼠小脑颗粒神经元(CGNs)凋亡的影响及机制。【方法】体外成熟7 d的CGNs分为存活对照组(用含K+浓度为25 mmol/L的培养基,即25 K组)、凋亡组(用含K+浓度为5 mmol/L的培养基,即5 K组)、以1/50、1/40、1/30、1/20、1/10浓度(稀释50、40、30、20、10倍)疏血通注射液处理组(25 K以及5 K合并疏血通处理组)以及对应不同浓度(2 U/mL、2.5 U/mL、3.34 U/mL、5 U/mL、10 U/mL)水蛭素处理组(25 K以及5 K合并水蛭素处理组),用Hoechst染色法观察并统计凋亡率。在蛋白印迹实验中,在25 K和5 K条件下用1/50、1/10浓度疏血通注射液以及对应2 U/mL、10 U/mL浓度水蛭素处理细胞,用Western blot法检测Cleaved Caspase-3、Bim、VEGF的表达水平。【结果】核染色结果显示,与25 K存活对照组比较,5 K凋亡组凋亡率增加;与25 K存活对照组比较,不同浓度疏血通注射液与水蛭素处理细胞后凋亡率无明显变化;与5 K凋亡组比较,不同浓度疏血通注射液与水蛭素处理细胞后凋亡率下降,且随着浓度的升高,凋亡率下降越明显。Western blot结果显示,与5 K凋亡组比较,不同浓度疏血通与水蛭素处理细胞后Cleaved Caspase-3、Bim蛋白表达水平均下降,VEGF蛋白表达水平升高。【结论】疏血通及其主要成分水蛭素通过抑制Bim表达,进而抑制线粒体依赖的小脑颗粒神经元凋亡。 展开更多

关键词 小脑颗粒神经元 凋亡 疏血通 水蛭素 BIM 血管内皮生长因子

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IGF-1经PI3K/Akt依赖性途径保护苯妥英诱导的小脑颗粒神经元凋亡 被引量：15

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作者 赵灵芝 银巍 +4 位作者 苏兴文 肖茹 曹林 邱鹏新 颜光美 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期53-57,共5页

目的　观察胰岛素样生长因子 1 (insulin likegrowfactor 1, IGF 1)对苯妥英(100μmol·L-1 )处理的大鼠小脑颗粒神经元 (cerebellargranularneurons, CGNs)存活率的影响,并探讨其与PI3K/Akt通路的关系。方法　体外培养 8的小脑颗... 目的　观察胰岛素样生长因子 1 (insulin likegrowfactor 1, IGF 1)对苯妥英(100μmol·L-1 )处理的大鼠小脑颗粒神经元 (cerebellargranularneurons, CGNs)存活率的影响,并探讨其与PI3K/Akt通路的关系。方法　体外培养 8的小脑颗粒神经元,同时给予 100μmol·L-1苯妥英和μmol·L-1 IGF 1, 48h后行凋亡分析,观察IGF 1对苯妥英诱导的小脑颗粒神经元的保护作用;采用PI3K/Akt通路特异性抑制剂LY294002(50μmol·L-1 )预先与小脑颗粒神经元孵育 30min,再加 1μmol·L-1 IGF 1和 100μmol·L-1苯妥英共孵育 48h,测定神经元存活率,观察IGF 1与PI3KAkt通路的关系;Westernblot法检测苯妥因处理不同时间小脑颗粒神经元内磷酸化Akt水平及总Akt的表达量,并观察IGF 1对磷酸化Akt水平的影响,进一步探讨IGF 1的作用是否经PI3K/Akt通路。结果　①1μmol·L-1 IGF 1可明显抑制 100μmol·L-1苯妥英引起的小脑颗粒神经元的凋亡明显提高小脑颗粒神经元的存活率,使其凋亡特征消失。②PI3K/Akt通路特异性抑制剂LY294002可取消IGF 1的保护作用。③苯妥英使小脑颗粒神经元内磷酸化Akt水平明显降低,但不影响总Akt表达量。④IGF 1可明显恢复被苯妥英抑制的磷酸化Akt的水平。结论　IGF 1保护苯妥英诱导的小脑颗粒神经元凋亡。 展开更多

关键词 胰岛素样生长因子1 苯妥因 PI3K/AKT通路 小脑颗粒神经元 凋亡

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咖啡因对苯妥英诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用及机制 被引量：6

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作者 赵灵芝 苏兴文 +4 位作者 银巍 江伟健 黄亦俊 邱鹏新 颜光美 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期1370-1374,共5页

目的　观察咖啡因 (caffeine)对苯妥英 (diphenylhy dantoin ,DPH) 10 0 μmol·L-1处理的大鼠小脑颗粒神经元(cerebellargranularneurons ,CGNs)存活率的影响 ,并探讨其作用机制。方法　体外培养 8d的CGNs,同时给予 10 0μmol·... 目的　观察咖啡因 (caffeine)对苯妥英 (diphenylhy dantoin ,DPH) 10 0 μmol·L-1处理的大鼠小脑颗粒神经元(cerebellargranularneurons ,CGNs)存活率的影响 ,并探讨其作用机制。方法　体外培养 8d的CGNs,同时给予 10 0μmol·L-1苯妥英和 1 2 5～ 2 0mmol·L-1咖啡因 ,4 8h后行凋亡分析 ;采用dantrolene(2 0 μmol·L-1)、2APB (5 0 μmol·L-1)、nifedipine(10 0 μmol·L-1)和nimodipine(10 0 μmol·L-1)、MK80 1(4μmol·L-1)、KN93(1μmol·L-1)以及MEK1抑制剂PD980 5 9(5 0 μmol·L-1)分别预先孵育 30min ,再与10mmol·L-1咖啡因和 10 0 μmol·L-1苯妥英共孵育 4 8h ,测定CGNs存活率 ,观察咖啡因的作用与 [Ca2 + ]i 的关系 ;Westernblot法检测咖啡因对磷酸化c Jun和磷酸化ERK水平的影响。结果　① 1 2 5～ 2 0mmol·L-1咖啡因可浓度依赖性抑制 10 0 μmol·L-1苯妥英引起的CGNs凋亡 ,显著提高CGNs存活率 ;②dantrolene、2APB、nifedipine和nimodipine、KN93、MK80 1和PD980 5 9均不能取消 10mmol·L-1咖啡因对 10 0 μmol·L-1苯妥英引起的CGNs凋亡的保护作用。③咖啡因可明显抑制苯妥英诱导CGNs中c Jun磷酸化水平的升高 ,但不影响被苯妥英抑制的ERK的活性。结论　一定浓度的咖啡因可保护苯? 展开更多

关键词 咖啡因 苯妥因 小脑颗粒神经元 凋亡 胞外信号反应激酶(ERK) C-JUN

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LY294002对热预处理抗低钾诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡的影响 被引量：3

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作者 曹林 江伟健 +3 位作者 苏兴文 曹德雄 邱鹏新 颜光美 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期4-10,共7页

【目的】观察磷酸肌醇3位羟基激酶(PI3-K)的特异性阻断剂LY294002对热预处理抗低钾诱导的大鼠小脑颗粒神经元(CGN)凋亡的影响。探讨磷酸肌醇3位羟基激酶/AKT(PI3-K/AKT)信号转导通路是否参与了热预处理的保护作用及其机制。【方法】以... 【目的】观察磷酸肌醇3位羟基激酶(PI3-K)的特异性阻断剂LY294002对热预处理抗低钾诱导的大鼠小脑颗粒神经元(CGN)凋亡的影响。探讨磷酸肌醇3位羟基激酶/AKT(PI3-K/AKT)信号转导通路是否参与了热预处理的保护作用及其机制。【方法】以低钾诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡为模型。用相差显微镜观察形态学,DNA琼脂糖凝胶电泳和Hoechst33258核染色分析神经元凋亡,二乙酸荧光素(FDA)染色法检测细胞的存活率。蛋白质印迹(Westernblot)法检测蛋白的表达。【结果】热预处理(44℃,1h)可以保护低钾诱导的CGN的凋亡,使神经元存活率由(33.2±4.1)%上升至(76.1±5.6)%(P <0.01),核染色出现的核固缩和凋亡小体减少,DNA凝胶电泳DNA梯状条带明显减弱。LY294002(20μmol/L)可以明显抑制热预处理的保护作用,使神经元的存活率降至(37.4±3.5)%(P<0.01),核染色出现的核固缩和凋亡小体,DNA凝胶电泳出现梯状条带。热预处理可使HSP70、磷酸化AKT增高。LY294002可以抑制磷酸化AKT(p-AKT)的增加,而对HSP70则无明显影响。【结论】在低钾诱导CGN凋亡的模型中,LY294002可以抑制热预处理的抗凋亡作用,并可抑制p鄄AKT的增加,显示PI3鄄K/AKT信号转导通路参与了热预处理的保护作用,但该抑制作用可能不是通过抑制热休克蛋白(HSP) 展开更多

关键词 热预处理 LY294002 低钾 凋亡 小脑颗粒神经元 诱导 大鼠 激酶 DNA 凝胶电泳

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茶碱对低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用 被引量：3

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作者 邱鹏新 黎明涛 +4 位作者 唐孝礼 王文雅 苏兴文 许小林 颜光美 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期324-328,共5页

目的　研究茶碱对复极化浓度钾离子 (5mmol·L-1KCl,又称低钾 )诱导的小脑颗粒神经元凋亡是否具有保护作用。方法　体外培养大鼠小脑颗粒神经元 ,定性定量检测细胞凋亡 :①用FDA (fluoresceindiacetate)染色检测细胞存活率 ,用Hoech... 目的　研究茶碱对复极化浓度钾离子 (5mmol·L-1KCl,又称低钾 )诱导的小脑颗粒神经元凋亡是否具有保护作用。方法　体外培养大鼠小脑颗粒神经元 ,定性定量检测细胞凋亡 :①用FDA (fluoresceindiacetate)染色检测细胞存活率 ,用Hoechst 332 5 8染色 ,分析细胞核的形态变化 ;②琼脂糖凝胶电泳分析DNA断裂 ;③免疫荧光法检测细胞内cAMP水平。结果　茶碱使低钾培养的小脑颗粒神经元的存活率增加 ,使低钾引起的细胞核固缩、凝聚和断裂现象消失 ;低钾使神经元的DNA电泳图谱出现明显的“梯子状” ,而茶碱使此现象消失 ;敏感性内钙释放阻断剂、L 型钙通道阻断剂及NMDA受体阻断剂均不能抑制茶碱对神经元的保护作用 ;茶碱对细胞内cAMP水平没有明显的影响。结论　茶碱对复极化浓度钾离子诱导的小脑颗粒神经元凋亡具保护作用 ,此作用不依赖胞内钙离子浓度 。 展开更多

关键词 茶碱 小脑颗粒神经元 钙 环磷酸腺苷 细胞凋亡

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LINGO-1-Fc蛋白对低钾诱导小脑颗粒神经元凋亡的保护作用 被引量：5

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作者 赵湘辉 金卫林 +1 位作者 MI Sha 鞠躬 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第4期336-342,共7页

髓鞘抑制因子Nogo-A、MAG和OMgp通过共同的受体信号复合物NgR/p75NTR(或者TROY)发挥对中枢神经纤维再生的抑制作用.新近克隆的跨膜蛋白LINGO-1是该信号途径的另一个重要组成成分和调节分子.LINGO-1特异表达于中枢神经系统,神经元上的LIN... 髓鞘抑制因子Nogo-A、MAG和OMgp通过共同的受体信号复合物NgR/p75NTR(或者TROY)发挥对中枢神经纤维再生的抑制作用.新近克隆的跨膜蛋白LINGO-1是该信号途径的另一个重要组成成分和调节分子.LINGO-1特异表达于中枢神经系统,神经元上的LINGO-1被证明参与调节中枢神经再生的抑制信号,而少突胶质细胞表达的LINGO-1分子参与负调节少突胶质细胞的髓鞘化过程.为探讨LINGO-1分子在神经元凋亡过程中的作用,利用包含LINGO-1分子胞外段LRR和IgC2结构域的Fc融合蛋白作为功能性拮抗剂,研究LINGO-1对低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用.利用成熟的Hoechst标记凋亡细胞的方法,观察到经LINGO-1-Fc蛋白预处理2h能够显著阻止小脑颗粒神经元的凋亡.仅包括LRR结构域的GST-LINGO-1与LINGO-1-Fc蛋白,虽同样具有与颗粒神经元的结合活性,但是GST-LINGO-1不能有效地阻止低钾诱导的细胞凋亡.这些结果提示,LINGO-1-Fc蛋白能够阻止低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡,并且这种作用可能是IgC2结构域依赖的. 展开更多

关键词 LINGO-1 小脑颗粒神经元 凋亡 保护作用

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p38 MAPK抑制剂通过抑制JNK活性抑制培养的小脑颗粒神经元凋亡(英文) 被引量：4

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作者 黎明涛 王文雅 +4 位作者 孙娟 唐孝礼 苏兴文 邱鹏新 颜光美 《中山医科大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第3期165-169,F003,共6页

【目的】研究特异性p38分裂原激活的蛋白激酶 (MAPK)抑制剂SB2 0 35 80对低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的作用。【方法】把体外培养的小脑颗粒神经元从含去极化浓度钾离子 (KCl 2 5mmol·L-1)的培养基中转移至低钾培养基 (KCl5mmol&... 【目的】研究特异性p38分裂原激活的蛋白激酶 (MAPK)抑制剂SB2 0 35 80对低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的作用。【方法】把体外培养的小脑颗粒神经元从含去极化浓度钾离子 (KCl 2 5mmol·L-1)的培养基中转移至低钾培养基 (KCl5mmol·L-1)中诱导神经元凋亡。凝胶电泳分析DNA片段 ,SAPK/JNK分析盒测定c JunN 末端蛋白激酶 (JNK)活性。【结果】低钾诱导小脑颗粒神经元的具有典型形态学和生化特征的凋亡。特异性的p38MAPK抑制剂SB2 0 35 80通过抑制细胞凋亡 ,促进低钾环境中培养的小脑颗粒神经元存活。这种保护作用具有浓度依赖性。培养于低钾环境中的颗粒神经元 ,c Jun表达和磷酸化水平升高了 ,且激活了JNK活性。当小脑颗粒神经元生长在含SB2 0 35 80 2 5 μmol·L-1的低钾培养基中 ,c Jun表达、磷酸化水平和JNK活性都明显降低。【结论】SB2 0 35 80抑制JNK活性 ,降低c 展开更多

关键词 小脑颗粒神经元 蛋白激酶抑制剂 凋亡 MAPK抑制剂 SB203580

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JNK抑制剂SP600125对低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用 被引量：2

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作者 王文雅 谢元斌 +2 位作者 刘炜 朱振宇 黎明涛 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期316-320,共5页

[目的]研究特异性c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125对低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用。[方法]把体外培养的小脑颗粒神经元从含去极化浓度钾离子(KCl 25mmol/L)的培养基中转移至低钾培养基(KCl 5mmol/L)中诱导神经元凋亡。... [目的]研究特异性c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125对低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用。[方法]把体外培养的小脑颗粒神经元从含去极化浓度钾离子(KCl 25mmol/L)的培养基中转移至低钾培养基(KCl 5mmol/L)中诱导神经元凋亡。以Western blot法检测JNK和c-Jun的磷酸化水平。[结果]低钾(KCl 5 mmol/L)磷酸化并激活JNK,诱导c-Jun磷酸化和小脑颗粒神经元凋亡。SP600125通过抑制c-Jun磷酸化而浓度依赖性地促进低钾环境中培养的小脑颗粒神经元的存活。其保护作用的半数有效量(ED_(50))为1.01μmol/L。[结论]SP600125通过特异性地抑制JNK活性而对低钾培养的小脑颗粒神经元具有保护作用;提示JNK是介导低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的关键激酶,它可能可以作为干扰神经元凋亡的药物的作用靶点。 展开更多

关键词 c-Jun 氨基末端激酶 SP600125 细胞凋亡 小脑颗粒神经元 神经保护

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诱导型HSP70过表达对低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用 被引量：2

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作者 曹林 毛海萍 +5 位作者 苏兴文 银巍 伍宇平 刘爱伶 邱鹏新 颜光美 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期37-42,共6页

目的观察腺病毒介导的人诱导型HSP70过表达对低钾诱导的原代培养的大鼠小脑颗粒神经元(cerebellargranuleneurons,CGN)凋亡的影响。方法原代培养5d的CGN共感染含人诱导型HSP70和绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒(AdTR5/HSP70-GFP)和四环素调... 目的观察腺病毒介导的人诱导型HSP70过表达对低钾诱导的原代培养的大鼠小脑颗粒神经元(cerebellargranuleneurons,CGN)凋亡的影响。方法原代培养5d的CGN共感染含人诱导型HSP70和绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒(AdTR5/HSP70-GFP)和四环素调控的启动子(AdCMV/tTA),或共感染含GFP的腺病毒(AdTR5/GFP)和AdCMV/tTA(对照组)。48h后,采用细胞荧光免疫组织化学法、Westernblot法检测HSP70的表达,或者换成无血清含5mmol·L-1KCl的培养基以诱导神经元凋亡。24h后,采用相差显微镜观察细胞形态学变化,MTT法检测神经元存活率,Hoechst33258核染色和DNA琼脂糖凝胶电泳分析神经元凋亡,以观察HSP70过表达对低钾诱导的CGN凋亡的影响。结果共感染了AdCMV/tTA和AdTR5/HSP70-GFP的CGN过表达了HSP70,抑制了低钾诱导的CGN的凋亡:使神经元存活率由45·5%±5·2%提高至82·3%±5·2%(P<0·01),核固缩减少,DNA的片段化减轻。结论腺病毒介导的人诱导型HSP70的过表达抑制了低钾诱导的CGN凋亡。 展开更多

关键词 小脑颗粒神经元 凋亡 腺病毒 热休克蛋白70

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表没食子儿茶素没食子酸酯对丙烯酰胺致小脑颗粒神经元凋亡的影响 被引量：2

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作者 刘春芳 江城梅 周礼华 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期944-950,共7页

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对丙烯酰胺(ACR)致小脑颗粒神经元(CGNs)凋亡的保护作用。方法:体外培养的CGNs经不同浓度EGCG(5,10,25,50,100μmol/L)预处理48h后,加入ACR(5mmol/L)染毒24 h,用四甲基偶氮唑盐(M)比色法检测细... 目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对丙烯酰胺(ACR)致小脑颗粒神经元(CGNs)凋亡的保护作用。方法:体外培养的CGNs经不同浓度EGCG(5,10,25,50,100μmol/L)预处理48h后,加入ACR(5mmol/L)染毒24 h,用四甲基偶氮唑盐(M)比色法检测细胞存活率,测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)的含量,Hochst33342荧光显微镜染色观察凋亡时细胞核形态的变化,RT-PCR检测细胞bcl-2 mRNA与bax mRNA表达情况。结果:同ACR损伤组比较,终浓度为10,25,50μmol/L的EGCG能减轻ACR引起的CGNs的损伤,明显提高细胞的存活率(P<0.05),SOD活性增高,MDA含量降低。Hoechst33342染色发现细胞核固缩、致密浓染现象较ACR损伤组改善明显,bcl-2mRNA表达增强,bax mRNA表达减弱,bcl-2/bax比值降低(P<0.05),25μmol/LEGCG组保护效果最佳(P<0.01),而终浓度为100μmol/LEGCG组无明显保护作用。结论:EGCG在一定剂量范围内对ACR引起的CGNs凋亡有保护作用。 展开更多

关键词 表没食子儿茶素没食子酸酯 丙烯酰胺 小脑颗粒神经元 细胞凋亡 神经保护

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铜对低钾诱导大鼠小脑颗粒神经元凋亡的保护作用 被引量：1

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作者 蓝秀健 叶敏忠 +3 位作者 李莹莹 刘培庆 余剑平 皮荣标 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期154-158,共5页

【目的】探讨铜体外抗低钾诱导大鼠小脑颗粒神经元(CGNs)凋亡作用及其机制。【方法】体外培养乳鼠的CGNs并用去极化诱导凋亡模型;噻唑兰(MTT)法检测细胞存活率;相差显微镜及Hoechst 33258染色分别观察细胞及其核形态学变化;流式细胞仪(F... 【目的】探讨铜体外抗低钾诱导大鼠小脑颗粒神经元(CGNs)凋亡作用及其机制。【方法】体外培养乳鼠的CGNs并用去极化诱导凋亡模型;噻唑兰(MTT)法检测细胞存活率;相差显微镜及Hoechst 33258染色分别观察细胞及其核形态学变化;流式细胞仪(FCM)检测亚二倍体峰。【结果】1～40μmol/L的铜可抗低钾所致的大鼠CGNs凋亡,明显提高CGNs的存活率。铜(20 μmol/L)显著减少低钾所致的大鼠CGNs胞体皱缩、细胞核固缩和亚二倍体峰等凋亡特征。铜的神经保护作用可以持续72h以上。磷脂酰肌醇3-激酶(PI3-K)抑制剂LY294002可阻断铜的保护作用。【结论】一定浓度范围的铜对低钾所致的大鼠CGNs凋亡有保护作用,PI3-K/Akt信号传导通路可能参与其保护作用。 展开更多

关键词 铜 小脑颗粒神经元 凋亡 磷脂酰肌醇3-激酶

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小脑颗粒神经元谷氨酸兴奋性毒性模型的优化 被引量：1

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作者 王铁鹏 张婷 陈畅 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2013年第8期775-782,共8页

在急性、慢性神经退行性疾病和炎症引发的神经系统疾病的发病机制中,兴奋性毒性可能是造成后期神经元死亡的共同途径.小脑颗粒神经元谷氨酸兴奋性毒性模型是研究上述过程的重要实验手段,该模型的稳定性和可重复性是开展相关研究的重要基... 在急性、慢性神经退行性疾病和炎症引发的神经系统疾病的发病机制中,兴奋性毒性可能是造成后期神经元死亡的共同途径.小脑颗粒神经元谷氨酸兴奋性毒性模型是研究上述过程的重要实验手段,该模型的稳定性和可重复性是开展相关研究的重要基础.然而,文献报道的建模方法条件各异,说法不一,很难适从.本工作针对小脑颗粒神经元谷氨酸兴奋性毒性模型建立的关键环节,包括小脑颗粒神经元的培养、兴奋性毒性刺激条件的确定,毒性标志性指标的表征,分别进行了比较和优化,从培养皿的包被、神经元消化、兴奋性刺激的溶液介质选择、神经元刺激的最佳时间及谷氨酸的最佳刺激浓度等方面分别给出了优化条件.通过特征性钙离子曲线、NMDA受体特异性抑制剂MK-801的干预作用以及c-fos基因转录水平的动力学变化等指标,确认了毒性模型的成功建立.本工作不仅对建立小脑颗粒神经元谷氨酸兴奋性毒性模型的实验室具有重要参考意义,而且,其针对不同条件分析比较的结果及优化原则,对其他神经毒性模型的建立也具有普遍参考意义. 展开更多

关键词 兴奋性毒性 小脑颗粒神经元 神经元培养

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简便、高效体外培养小鼠小脑颗粒神经元的研究 被引量：1

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作者 谭斐 赵冬雪 +1 位作者 李维帅 郭阳 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期621-624,共4页

目的简便、高效地分离和提纯小鼠小脑颗粒神经元,提高培养该神经元的纯度和活性。方法通过采用简便、可行的细胞分离方法,在出生7d的小鼠小脑组织中分离原代神经元。计数分离的原代神经元并分析其活性,免疫荧光染色证实其纯度,观察其胞... 目的简便、高效地分离和提纯小鼠小脑颗粒神经元,提高培养该神经元的纯度和活性。方法通过采用简便、可行的细胞分离方法,在出生7d的小鼠小脑组织中分离原代神经元。计数分离的原代神经元并分析其活性,免疫荧光染色证实其纯度,观察其胞体和轴突生长情况。结果分离的原代细胞活性可高达95%以上;免疫荧光染色证实神经元占分离细胞的97%;培养24h后的神经元易于观察细胞突起的变化,培养48h后的神经元易于观察轴突的变化。结论该方法方便、可行、高效,可用以提纯小脑颗粒神经元进行体外神经元的生长发育、轴突再生和神经系统疾病的研究。 展开更多

关键词 原代神经元培养 小脑颗粒神经元

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热刺激预处理对复极化诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用 被引量：5

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作者 陈丽君 苏兴文 +3 位作者 邱鹏新 蔡翔 郑素秋 颜光美 《中山医科大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第1期14-16,26,共4页

【目的】热刺激预处理诱导热休克蛋白表达 ,观察它对复极化诱导的小脑颗粒神经元凋亡是否具有保护作用。【方法】热刺激处理诱导热休克蛋白产生 ,复极化诱导体外培养的小脑颗粒神经元凋亡 ,FDA荧光染色计算细胞存活率 ,相差显微镜分析... 【目的】热刺激预处理诱导热休克蛋白表达 ,观察它对复极化诱导的小脑颗粒神经元凋亡是否具有保护作用。【方法】热刺激处理诱导热休克蛋白产生 ,复极化诱导体外培养的小脑颗粒神经元凋亡 ,FDA荧光染色计算细胞存活率 ,相差显微镜分析细胞形态 ,Hoechst332 5 8染色分析核形态 ,琼脂糖凝胶电泳分析DNA片段 ,Westernblotting检测HSP70 表达。【结果】小脑颗粒神经元在去极化条件 (2 5mmol/LKCl)下生长良好 ,复极化 (5mmol/LKCl )后 2 0h ,相差显微镜下神经元胞体缩小 ,突起断裂。Hoechst 332 5 8染色见核固缩和凋亡小体。琼脂糖凝胶电泳出现细胞凋亡的典型生化特征—DNA梯状条带。预先对小脑颗粒神经元进行热刺激处理 (4 4℃ )不同时间 (6 0min ,90min)再复极化 ,神经元凋亡数明显减少 ,且随热处理时间延长 ,保护作用增强。Westernblotting结果 :随热刺激 (4 4℃ )处理时间延长 ,HSP70 表达量逐渐增加。【结论】热刺激预处理对复极化诱导的小脑颗粒神经元凋亡具有保护作用。这一保护作用可能涉及HSP70 。 展开更多

关键词 热休克蛋白质类 小脑颗粒神经元 凋亡 热刺激预处理 复极化诱导

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重新去极化对小脑颗粒神经元c-Jun的影响 被引量：3

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作者 黄奕俊 龚守芳 +2 位作者 邱鹏新 苏兴文 颜光美 《中山医科大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第1期10-13,共4页

【目的】观察重新去极化 (redepolarization ,2 5mmol/LK+ )对原代培养的大鼠小脑颗粒神经元蛋白质c Jun的影响 ,对去极化挽救神经元过程中c Jun的作用及其调节机制进行初步探讨。【方法】用Westernblotting检测原代培养的大鼠小脑颗粒... 【目的】观察重新去极化 (redepolarization ,2 5mmol/LK+ )对原代培养的大鼠小脑颗粒神经元蛋白质c Jun的影响 ,对去极化挽救神经元过程中c Jun的作用及其调节机制进行初步探讨。【方法】用Westernblotting检测原代培养的大鼠小脑颗粒神经元胞内c Jun总量及磷酸化水平 ;用逆转录 聚合酶链反应 (reversetranscription polymerasechainreaction ,RT PCR)检测编码基因c jun表达水平 ;用免疫共沉淀 (coimmunoprecipitation)检测c Jun氨基末端激酶 (c JunN terminalkinase ,JNK)活性 ;用二乙酸荧光素 (fluoresceindiacetate ,FDA)染色检测神经元存活率。【结果】复极化 (repolarization ,5mmol/LK+ )使小脑颗粒神经元的c junmRNA、c Jun总量及磷酸化水平迅速增加 ,神经元存活率随后明显下降 ;复极化 2h后重新去极化 ,c junmRNA、c Jun总量及磷酸化在 2h内恢复至正常水平 ,而神经元存活率维持在正常水平 ;JNK活性在极化转换前后未改变。【结论】c Jun的抑制可能介导了重新去极化挽救小脑颗粒神经元的作用 。 展开更多

关键词 去极化 C-JUN 小脑颗粒神经元 凋亡 细胞凋亡

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小脑颗粒神经元撤钾凋亡中JNK/c-Jun通路对促凋亡基因Hrk的转录调控 被引量：1

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作者 王传付 芈静 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期84-87,共4页

目的研究小脑颗粒神经元(CGNs)撤钾凋亡模型中,BH3-only促凋亡基因Hrk的转录,及JNK/c-Jun通路对Hrk基因转录的调控。方法新生7 d Sprague-Dawley大鼠CGNs在含10%胎牛血清和25 mmol/L KCl培养液中培养。培养第7天,分别用不含胎牛血清的25... 目的研究小脑颗粒神经元(CGNs)撤钾凋亡模型中,BH3-only促凋亡基因Hrk的转录,及JNK/c-Jun通路对Hrk基因转录的调控。方法新生7 d Sprague-Dawley大鼠CGNs在含10%胎牛血清和25 mmol/L KCl培养液中培养。培养第7天,分别用不含胎牛血清的25或5 mmol/L KCl培养液处理2、4、8 h,或5 mmol/L KCl+JNK通路抑制剂处理细胞4 h;或在培养第5天用表达负显性c-Jun突变体的腺病毒载体(Ad-FLAGΔ169)感染CGNs 36 h后,用5mmol/L KCl处理细胞4 h。用RT-PCR方法检测各组CGNs促凋亡基因Hrk mRNA的表达。结果在CGNs撤钾凋亡模型中促凋亡基因Hrk mRNA转录上调;JNK通路抑制剂CEP-11004或SP600125均部分地下调了Hrk的转录;负显性c-Jun突变体抑制了Hrk mRNA的表达。结论在CGNs撤钾凋亡模型中促凋亡基因Hrk转录上调;JNK/c-Jun信号通路介导了Hrk的转录。 展开更多

关键词 小脑颗粒神经元 细胞凋亡 基因 Hrk 原癌基因蛋白质c-Jun C-JUN氨基末端激酶

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通过抑制ATM上调Bim促进小脑颗粒神经元凋亡 被引量：1

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作者 刘锶锶 曾淑莲 +4 位作者 吴力强 黄紫燕 郅程 王业忠 袁忠民 《中山大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期337-342,共6页

【目的】研究抑制共济失调毛细血管扩张突变(ATM)蛋白对SD大鼠小脑颗粒神经元(CGN)凋亡的影响及机制。【方法】将原代培养7～8 d的CGN分为25 K组、5 K组和ATM抑制组。分别应用含有25和5 mmol/L KCl的培养基处理25 K组和5 K组,建立体外... 【目的】研究抑制共济失调毛细血管扩张突变(ATM)蛋白对SD大鼠小脑颗粒神经元(CGN)凋亡的影响及机制。【方法】将原代培养7～8 d的CGN分为25 K组、5 K组和ATM抑制组。分别应用含有25和5 mmol/L KCl的培养基处理25 K组和5 K组,建立体外神经元存活和凋亡模型。在25 K神经元存活模型中,应用ATM抑制剂KU-55933(10μmol/L,ATM抑制组)、KU-55933联合Mithramycin A(1μmol/L,MMA组)或Chromomycin A3(0.3μmol/L,CMA3组)处理,用Western Blot方法检测p-ATM、ATM、Bim、Caspase 3的表达水平,用Hoechst染色法观察并统计核固缩情况。【结果】Western Blot结果显示,与25 K组比较,5 K组和ATM抑制组的Bim、Caspase 3蛋白表达均上调(P <0.05)。核染色结果显示,与25 K组比较,5 K组和ATM抑制组核固缩率均明显增多(P <0.05)。与ATM抑制组比较,MMA组和CMA3组中Bim表达、Caspase3活性及核固缩率均明显减少。【结论】抑制ATM上调Bim活性,促进小脑颗粒神经元凋亡。 展开更多

关键词 小脑颗粒神经元 凋亡 共济失调毛细血管扩张突变 BIM

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左归丸对低钾大鼠小脑颗粒神经元凋亡的保护作用 被引量：5

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作者 张涛涛 黄奕俊 +5 位作者 苏兴文 赵灵芝 江伟建 张海新 邱鹏新 颜光美 《中医药学刊》 2003年第2期202-204,共3页

目的 :探讨补益方左归丸体外抗凋亡作用及其分子机制。方法 :应用体外培养的大鼠小脑颗粒神经元去极化诱导凋亡模型 ,观察不同浓度左归丸水提液对神经元存活率、DNA断裂特性、胞核形态学变化的影响。结果 :左归丸水提液浓度依赖性地逆... 目的 :探讨补益方左归丸体外抗凋亡作用及其分子机制。方法 :应用体外培养的大鼠小脑颗粒神经元去极化诱导凋亡模型 ,观察不同浓度左归丸水提液对神经元存活率、DNA断裂特性、胞核形态学变化的影响。结果 :左归丸水提液浓度依赖性地逆转低钾所致的大鼠小脑颗粒神经元凋亡 ,这种逆转作用不能被ERK抑制剂PD980 5 9所阻断 ,但可被PI3K抑制剂LY2 94 0 0 2阻断。结论 :左归丸水提液对低钾所致的大鼠小脑颗粒神经元凋亡有保护作用 ,PI3K/Akt信号传导通路参与其作用。 展开更多

关键词 左归丸 低钾症 小脑颗粒神经元 细胞凋亡

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体内和体外条件下Nogo-A在大鼠小脑颗粒神经元上表达差异的研究

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作者 姚琴 金卫林 +1 位作者 王颖 鞠躬 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期379-384,共6页

Nogo-A是网膜家族蛋白的成员之一,在抑制成年哺乳动物中枢神经系统损伤后轴突再生的过程中发挥着重要作用。Nogo-A表达于寡突胶质细胞和多种神经元,但在成年动物的小脑颗粒神经元中却未检测到。为探讨Nogo-A在小脑颗粒神经元上的表达情... Nogo-A是网膜家族蛋白的成员之一,在抑制成年哺乳动物中枢神经系统损伤后轴突再生的过程中发挥着重要作用。Nogo-A表达于寡突胶质细胞和多种神经元,但在成年动物的小脑颗粒神经元中却未检测到。为探讨Nogo-A在小脑颗粒神经元上的表达情况及其影响因素,本实验应用免疫荧光组织化学染色法研究了Nogo-A蛋白在新生大鼠脑切片上和不同体外培养条件下小脑颗粒神经元中的表达。结果显示:在体条件下Nogo-A蛋白在新生大鼠的小脑颗粒神经元上的表达逐渐减少,至新生14d时检测不到;而在体外培养的来源于新生7d大鼠的小脑颗粒神经元中Nogo-A蛋白持续表达,可维持到14d;与胶质细胞共培养,或加入胶质细胞培养上清的小脑颗粒神经元仍然表达Nogo-A蛋白。本研究结果表明,体内和体外两种条件下Nogo-A蛋白在小脑颗粒神经元上的表达存在差异,新生期Nogo-A在小脑颗粒神经元上的表达下调可能与Purkinje细胞有关,提示Nogo-A在生后发育过程中可能与神经元的迁移或突触的形成密切相关。 展开更多

关键词 NOGO-A 小脑颗粒神经元 表达 免疫荧光组织化学染色 大鼠

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一种改进的小脑颗粒神经元原代培养方法及其性质鉴定 被引量：3

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作者 陈海云 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期1476-1480,共5页

目的在已报导的原代小脑颗粒细胞(cerebellar granule neurons,CGNs)的提取培养方法基础上进行改进,以获得较少杂质、更高存活率及更高纯度的CGNs,为后续体外研究做准备。方法将Tryple Express消化液消化及前后两次离心后得到的单细胞悬... 目的在已报导的原代小脑颗粒细胞(cerebellar granule neurons,CGNs)的提取培养方法基础上进行改进,以获得较少杂质、更高存活率及更高纯度的CGNs,为后续体外研究做准备。方法将Tryple Express消化液消化及前后两次离心后得到的单细胞悬液,经台盼蓝活细胞计数后接种在预先用多聚赖氨酸(poly-L-lysine,PLL)包被的培养板中。接种20~24 h后,加入10μmol·L-1的阿糖胞苷(cytosine arabinoside,Ara-C),以及从d 4开始每隔3天加入终浓度5 mmol·L-1的Glucose。借助荧光显微镜及神经元特异性标志物微管蛋白(β-Ⅲ-tubulin)对CGNs细胞进行形态观察及纯度鉴定。结果与原有的胰酶提取方法相比,改进后的CGNs提取方法细胞生长状态良好、突触发育完善、细胞碎片等杂质含量较少,并具有较高存活率及纯度(97%)。结论该方法简便可行,结果稳定,可以为体外神经元的生长发育、轴突再生和神经系统疾病的研究提供有力支持。 展开更多

关键词 小脑颗粒神经元 Tryple Express 阿糖胞苷 提取 β-Ⅲ-tubulin 免疫荧光染色

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