基于蛋白组学分析旋毛虫原肌球蛋白过表达对小细胞肺癌NCI-H446细胞蛋白组分的影响 被引量：2

1

作者 王灏轩 朱莹莹 +2 位作者 程露阳 郭文平 杜娈英 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期758-765,共8页

目的研究旋毛虫原肌球蛋白(tropomyosin,Tm)过表达对人小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)NCI-H446细胞蛋白组分的影响。方法本研究通过串联质谱标记(Tandem mass tags,TMT)技术结合生物信息学分析旋毛虫Tm过表达对NCI-H446细胞... 目的研究旋毛虫原肌球蛋白(tropomyosin,Tm)过表达对人小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)NCI-H446细胞蛋白组分的影响。方法本研究通过串联质谱标记(Tandem mass tags,TMT)技术结合生物信息学分析旋毛虫Tm过表达对NCI-H446细胞蛋白组分的影响。比较旋毛虫Tm(Tm-pcDNA3.1)过表达和转染空载体(pcDNA3.1)48 h后NCI-H446细胞的蛋白组分,利用Uniprot数据库检索差异表达蛋白(Differentially expressed protein,DEPs)并对所得DEPs进行基因本体论(GO)富集分析。从STRING数据库获得DEPs相互作用数据,利用Cytoscape 3.9.0软件构建蛋白互作网络并筛选中心节点蛋白。通过Western blot对随机选取的中心节点蛋白NDRG1进行验证。结果旋毛虫Tm转染NCI-H446细胞48 h后,筛选出DEPs 70个,其中34个上调,36个下调;GO功能富集分析显示,DEPs主要涉及转录后的调控、免疫应答的调节等生物学功能;分析蛋白互作网络获得5个下调的中心节点蛋白:细胞周期蛋白G相关激酶(GAK)、组蛋白H3-7(H3-7)、辛普勒金Symplekin(SYMPK)、N-myc下游调节因子1(NDRG1)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶N2(PKN2);Westrne blot结果显示旋毛虫Tm降低NCI-H446细胞中NDRG1的表达。结论旋毛虫TM能引起NCI-H446细胞蛋白组分的显著变化;旋毛虫Tm可能通过下调NCI-H446细胞中GAK、H3-7、SYMPK、NDRG1、PKN2的表达发挥其生物学作用。 展开更多

关键词 旋毛虫 原肌球蛋白 小细胞肺癌nci-h446细胞 蛋白组学

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小白菊内酯对人小细胞肺癌NCI-H446细胞增殖及凋亡作用研究 被引量：3

2

作者 刘捷 徐玲 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期414-419,共6页

目的:研究小白菊内酯(parthenolide,PTL)对人小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)细胞株NCI-H446增殖及凋亡作用的影响及其可能的分子机制。方法:NCI-H446细胞株由武汉大学细胞库提供,PTL购于Gene Operation公司,将NCIH446细胞株... 目的:研究小白菊内酯(parthenolide,PTL)对人小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)细胞株NCI-H446增殖及凋亡作用的影响及其可能的分子机制。方法:NCI-H446细胞株由武汉大学细胞库提供,PTL购于Gene Operation公司,将NCIH446细胞株分为对照组和实验组(1.5μg/m L组、2.0μg/m L组、2.5μg/m L组和3.0μg/m L组),向实验组细胞培养基中加入对应浓度PTL处理细胞,对照组中加入等体积无血清培养基。MTT比色法观测不同浓度PTL对NCI-H446细胞增殖的影响;Hochest 33258染色后,荧光显微镜下观察细胞核形态学变化;流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析细胞凋亡率;RT-PCR分别检测不同浓度组PTL处理48 h后细胞中NF-κB、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9基因的表达状态,Wsetern blot检测NF-κB、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9蛋白的表达状态。结果:PTL抑制小细胞肺癌NCI-H446细胞增殖并呈浓度依赖性;Hochest33258染色结果显示,PTL作用NCI-H446细胞48 h后,细胞数量减少,细胞核固缩碎裂,形成凋亡小体,导致细胞凋亡;流式细胞术检测显示,PTL处理NCI-H446细胞后,细胞凋亡率与药物浓度梯度呈浓度依赖性,差异有统计学意义(P<0.05);RT-PCR及Wsetern blot结果显示,与对照组比较,经PTL处理的NCI-H446细胞中NF-κB m RNA及蛋白表达下调,同时Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9 m RNA及蛋白表达上调,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:PTL能抑制NCI-H446细胞的增殖并诱导其发生凋亡,PTL的作用机制可能与抑制NF-κB信号通路及活化Caspase系统有关。 展开更多

关键词 小白菊内酯 小细胞肺癌HCI-H446 细胞增殖 细胞凋亡

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茯苓多糖对非小细胞肺癌NCI-H460细胞的抑制作用 被引量：6

3

作者 孙恺婧 刘馨泽 +4 位作者 孙莹 金鑫 李琼 陈长宝 万茜淋 《食用菌学报》 CSCD 北大核心 2024年第1期76-83,共8页

为评价茯苓(Poria cocos)多糖对非小细胞肺癌NCI-H460细胞的抑制作用,用CCK-8法测定茯苓多糖对细胞增殖的抑制率,用DAPI染色法、AOEB双荧光染色法分析茯苓多糖对细胞凋亡的影响,用细胞划伤愈合实验测定茯苓多糖对细胞迁移能力的影响,用... 为评价茯苓(Poria cocos)多糖对非小细胞肺癌NCI-H460细胞的抑制作用,用CCK-8法测定茯苓多糖对细胞增殖的抑制率,用DAPI染色法、AOEB双荧光染色法分析茯苓多糖对细胞凋亡的影响,用细胞划伤愈合实验测定茯苓多糖对细胞迁移能力的影响,用蛋白免疫印迹实验检测茯苓多糖对细胞凋亡、迁移相关蛋白表达的影响。结果表明:茯苓多糖具有抑制NCI-H460细胞增殖、集落形成和迁移的能力,可诱导NCI-H460细胞凋亡;500、1000μg·mL^(-1)的茯苓多糖可使Bax和P53蛋白表达量升高,Bcl-2和MMP-2蛋白表达量降低。 展开更多

关键词 茯苓多糖 非小细胞肺癌 nci-h460细胞 细胞增殖 细胞迁移

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志苓胶囊对小细胞肺癌细胞株NCI-H446细胞凋亡及h-TERT、CD44表达的影响 被引量：4

4

作者 陈英玉 潘云苓 +3 位作者 郑志宏 潘明继 胡建达 刘庭波 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1382-1386,共5页

目的研究志苓胶囊(抗癌复方Ⅱ号)对人小细胞肺癌细胞株NCI-H446诱导凋亡作用机制以及对细胞黏附分子表达的影响。方法将志苓胶囊按其不同的中西药成份配制成相应的中药组、西药组和复方组,与NCI-H446共培养后,倒置显微镜观察、Hochest33... 目的研究志苓胶囊(抗癌复方Ⅱ号)对人小细胞肺癌细胞株NCI-H446诱导凋亡作用机制以及对细胞黏附分子表达的影响。方法将志苓胶囊按其不同的中西药成份配制成相应的中药组、西药组和复方组,与NCI-H446共培养后,倒置显微镜观察、Hochest33258荧光染色法检测凋亡细胞,RT-PCR、Western blot、流式细胞仪分别检测bcl-2、bax、hTERT基因mRNA和相应蛋白表达水平变化以及黏附分子CD44的表达变化。结果NCI-H446经不同的药物组处理后,倒置显微镜、Hochest33258荧光染色可观察到细胞凋亡形态学改变,bcl-2基因mRNA和蛋白表达水平均有不同程度下降,bax基因表达水平则有不同程度增强,复方组改变最明显,各药物组与对照组比较差异具有显著性(P<0.01)。中药组和西药组hTERT基因和蛋白表达水平未见明显改变,复方组表达水平下调,与对照组比较差异具有显著性(P<0.01)。各药物组CD44表达水平降低,其中复方组降低水平最明显(P<0.01)。结论志苓胶囊可能通过下调NCI-H446细胞bcl-2、hTERT基因和CD44分子表达,增强bax基因表达,从而诱导NCI-H446细胞凋亡,抑制细胞黏附、转移。 展开更多

关键词 小细胞肺癌细胞株nci-h446 志苓胶囊 凋亡 HTERT CD44

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反义bcl-2硫代磷酸寡脱氧核苷酸对小细胞肺癌细胞株NCI-H446的抑制作用及诱导细胞凋亡的研究 被引量：5

5

作者 陈鑫基 胡建达 +1 位作者 战榕 吕联煌 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期374-378,共5页

目的 :观察反义bcl- 2硫代磷酸寡脱氧核苷酸 (AS -PS -ODN)对小细胞肺癌细胞株NCI-H44 6mRNA、蛋白以及增殖、活力和凋亡的影响。方法 :合成bcl- 2AS -PS -ODN作用于小细胞肺癌细胞株NCI-H44 6,半定量RT -PCR检测bcl- 2mRNA表达 ;免疫... 目的 :观察反义bcl- 2硫代磷酸寡脱氧核苷酸 (AS -PS -ODN)对小细胞肺癌细胞株NCI-H44 6mRNA、蛋白以及增殖、活力和凋亡的影响。方法 :合成bcl- 2AS -PS -ODN作用于小细胞肺癌细胞株NCI-H44 6,半定量RT -PCR检测bcl- 2mRNA表达 ;免疫细胞化学染色和流式细胞仪检测Bcl- 2蛋白表达 ;通过克隆形成率、细胞计数、流式细胞仪DNA倍体分析、TUNEL等指标观察bcl- 2AS -PS -ODN对细胞增殖、活力和凋亡的影响。结果 :①bcl- 2AS -PS -ODN能特异性地降低NCI-H44 6细胞bcl- 2mRNA和Bcl- 2蛋白的表达。 1μmol/LAS -PS-ODN作用 2 4h后bcl- 2mRNA表达量下降 69 5 % ,48h后Bcl- 2蛋白下降 62 7%。②bcl- 2AS -PS -ODN能够抑制细胞增殖和活力 ,诱导细胞凋亡 ,1μmol/LAS -PS -ODN作用 2 4h后 ,细胞凋亡率约为 2 2 3 % - 3 2 7%。 结论 :bcl- 2AS -PS -ODN能够特异性降低bcl- 2mRNA、蛋白表达 ,抑制NCI-H44 6细胞的增殖和活力 。 展开更多

关键词 硫代磷酸寡脱氧核苷酸 小细胞 肺癌细胞株 nci-h446 BCL-2 细胞凋亡

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小细胞肺癌组织显著低表达的SPIDR通过降低血清依赖促进NCI-H446细胞增殖 被引量：1

6

作者 张泽忠 贾玉琳 +7 位作者 其力格尔 方一 李春晖 厉建蕾 顾晔 邓子新 张海平 马伟 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1026-1033,共8页

目的:探讨同源重组修复途径关键调控蛋白SPIDR在小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)中的作用与机制。方法:收集2013年1月至2015年1月上海肺科医院进行肿瘤手术切除、气管镜穿刺的SCLC患者癌组织标本60例及正常人群肺组织标本44例,... 目的:探讨同源重组修复途径关键调控蛋白SPIDR在小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)中的作用与机制。方法:收集2013年1月至2015年1月上海肺科医院进行肿瘤手术切除、气管镜穿刺的SCLC患者癌组织标本60例及正常人群肺组织标本44例,qRT-PCR检测临床组织样本SPIDR mRNA表达水平;经稳定过表达SPIDR改变NCI-H446细胞表达水平后,采用MTT、小鼠荷瘤实验等实验方法,在体内、体外探究SPIDR表达水平对SCLC细胞增殖等影响。结果:吸烟与患者SCLC的发生显著有关(P<0.01);SPIDR m RNA在SCLC组织样本中的表达显著低于正常肺组织(P<0.01)。人肺胚成纤维细胞株MRC-5中SPIDR mRNA和蛋白表达水平明显高于SCLC细胞株NCI-H446(均P<0.05)。在10%胎牛血清常规培养体系中,过表达SPIDR对NCI-H446细胞增值和化疗药物敏感性无明显影响(均P>0.05),但小鼠荷瘤实验从第9天开始,过表达SPIDR组(pMSCV-SPIDR)的瘤体积与原始NCI-H446组和空载体组(pMSCV)开始出现明显差异,第27天pMSCV-SPIDR组移植瘤平均体积分别比原始NCI-H446组与空载体组缩小58.99%和61.84%(均P<0.01)。在含1%～3%胎牛血清的非常规培养体系中,过表达SPIDR的NCI-H446细胞增殖速度显著低于原始NCI-H446组和空载体组(P<0.05或P<0.01)。结论:SCLC组织中SPIDR表达水平明显低于正常肺组织,过表达SPIDR的NCI-H446细胞体内及体外低血清含量培养(<3%)生长速度显著低于对照组,表明SPIDR以低血清浓度依赖方式影响SCLC细胞增殖。 展开更多

关键词 小细胞肺癌 nci-h446细胞 同源重组修复 SPIDR 血清依赖

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鸦胆子油乳抑制肺癌NCI-H460细胞的增殖及其机制 被引量：22

7

作者 张晓娇 王雪莲 +2 位作者 赵峰 安春丽 王晓娜 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期519-523,共5页

目的:探讨鸦胆子油乳在体外对人大细胞肺癌NCI-H460细胞的抑制作用及其机制。方法:以不同质量浓度鸦胆子油乳(2.5、5.0、10、20、40、80μg/ml)处理NCI-H460细胞,24、48、72h后收集细胞,MTT法检测鸦胆子油乳对NCI-H460细胞增殖的抑制作... 目的:探讨鸦胆子油乳在体外对人大细胞肺癌NCI-H460细胞的抑制作用及其机制。方法:以不同质量浓度鸦胆子油乳(2.5、5.0、10、20、40、80μg/ml)处理NCI-H460细胞,24、48、72h后收集细胞,MTT法检测鸦胆子油乳对NCI-H460细胞增殖的抑制作用;吉姆萨染色后光学显微镜下观察NCI-H460细胞形态学改变;流式细胞仪测定NCI-H460细胞凋亡率;caspase-3酶活性试剂盒检测NCI-H460细胞caspase-3酶活性。结果:鸦胆子油乳可剂量和时间依赖性抑制NCI-H460细胞的增殖,80μg/ml鸦胆子油乳作用72h时的抑制率达(91.07±1.60)%。鸦胆子油乳作用后,NCI-H460细胞呈现典型凋亡形态学改变;流式细胞术检测结果显示,10、20和40μg/ml鸦胆子油乳作用48h后,NCI-H460细胞凋亡率分别为(45.23±4.30)%、(54.14±3.09)%和(61.57±7.28)%(P<0.01)。鸦胆子油乳可剂量依赖性上调NCI-H460细胞caspase-3酶活性,40μg/ml鸦胆子油乳时caspase-3酶活性为(1.07±0.07)μmol/μg,是对照组的4.97倍(P<0.01)。结论:鸦胆子油乳可能通过活化caspase-3诱导NCI-H460细胞凋亡,抑制NCI-H460细胞增殖。 展开更多

关键词 肺癌 nci-h460细胞 鸦胆子油乳 凋亡 CASPASE-3

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槲皮素对人小细胞肺癌H446细胞增殖和凋亡的影响 被引量：13

8

作者 刘涛 张雅雅 +1 位作者 许英艺 包传恩 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期169-174,共6页

目的:观察槲皮素(Quercetin)对人小细胞肺癌H446细胞凋亡的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法:MTT法检测20、40、80、160、200μmol/L槲皮素对H446细胞增殖的抑制作用,共聚焦显微镜观察100、200μmol/L槲皮素处理48 h对H446细胞增... 目的:观察槲皮素(Quercetin)对人小细胞肺癌H446细胞凋亡的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法:MTT法检测20、40、80、160、200μmol/L槲皮素对H446细胞增殖的抑制作用,共聚焦显微镜观察100、200μmol/L槲皮素处理48 h对H446细胞增殖的影响,流式细胞术检测槲皮素对H446细胞凋亡和细胞周期的影响,Western blotting检测槲皮素对H446细胞内P53、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。结果:槲皮素对H446细胞的增殖抑制具有显著的剂量和时间依赖性(P<0.05),在12、24、48及72 h四个时间点,槲皮素作用于H446细胞的IC50值分别为(172.2±2.6)、(102.4±5.3)、(68.6±2.7)及(48.8±1.9)μmol/L。槲皮素处理后,随着H446细胞密度的降低,细胞核部分皱缩并裂解为凋亡小体,其对H446细胞的促凋亡作用呈现出显著的剂量依赖性,40μmol/L组H446细胞的凋亡率即显著高于对照组[(8.3±0.4)%vs(4.0±0.5)%;P<0.01],当药物浓度达到200μmol/L时凋亡率达到最高。槲皮素能将H446细胞周期特异性地阻滞于G2/M期。与对照组相比,200μmol/L槲皮素处理组P53[(4.98±0.91)vs(0.68±0.26),P<0.01]和Bax蛋白[(4.26±0.23)vs(0.89±0.29),P<0.01]表达显著升高,Bcl-2蛋白表达[(0.36±0.06)vs(8.23±1.65),P<0.01]显著下降。结论:槲皮素能够抑制H446细胞的增殖并促进其凋亡,其机制可能与调控Bax、p53和Bcl-2等细胞凋亡相关蛋白有关。 展开更多

关键词 小细胞肺癌 H446细胞 槲皮素 凋亡 增殖 BAX P53 BCL-2

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苦杏仁苷抑制人肺癌NCI-H1299细胞体外侵袭的机制 被引量：18

9

作者 孙卓琳 刘京伟 匡长春 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期479-482,共4页

探讨天然产物苦杏仁苷对人非小细胞肺癌NCI-H1299细胞体外侵袭与转移的抑制作用及其机制。采用MTS法检测苦杏仁苷对肿瘤细胞生长的影响;采用Transwell小室和划痕试验检测苦杏仁苷对细胞侵袭和迁移能力的影响;采用Western blot和RT-PCR... 探讨天然产物苦杏仁苷对人非小细胞肺癌NCI-H1299细胞体外侵袭与转移的抑制作用及其机制。采用MTS法检测苦杏仁苷对肿瘤细胞生长的影响;采用Transwell小室和划痕试验检测苦杏仁苷对细胞侵袭和迁移能力的影响;采用Western blot和RT-PCR试验检测苦杏仁苷对MMP-2/9、integrinβ1、integrinβ4、整合素连接激酶(ILK)、黏附斑激酶(FAK)、p-FAK和β-catenin的表达水平,以及Akt和RICTOR的磷酸化水平的影响。结果表明:苦杏仁苷可显著抑制H1299细胞体外增殖,0.5和1 mg/m L苦杏仁苷作用H1299细胞48 h后,肿瘤细胞侵袭、迁移能力显著下降,MMP-2/9、integrinβ1/4、ILK、FAK、β-catenin蛋白和mRNA表达,MMP-2/9活性以及FAK、Akt和RICTOR磷酸化水平显著下调(P均<0.05)。 展开更多

关键词 苦杏仁苷 非小细胞肺癌 肿瘤转移 nci-h1299 整合素连接激酶 黏附斑激酶

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小细胞肺癌细胞系H446中肿瘤干细胞的分选与鉴定 被引量：4

10

作者 孟祥姣 李明 +2 位作者 王秀问 王亚伟 马道新 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期533-537,共5页

目的明确能否以表面黏附分子CD133为干细胞标志物,使用免疫磁珠分选(magnetic cell separation,MACS)法分离小细胞肺癌细胞系H446细胞中的肿瘤干细胞。方法以CD133为特异性分子标志物,使用MACS方法分选H446细胞,比较CD133阳性(CD133+)... 目的明确能否以表面黏附分子CD133为干细胞标志物,使用免疫磁珠分选(magnetic cell separation,MACS)法分离小细胞肺癌细胞系H446细胞中的肿瘤干细胞。方法以CD133为特异性分子标志物,使用MACS方法分选H446细胞,比较CD133阳性(CD133+)细胞与CD133阴性(CD133-)细胞在集落形成、自我更新、增殖分化、侵袭性、耐药性和成瘤性方面的不同。结果CD133+细胞和CD133-细胞在集落形成能力、自我更新能力、增殖能力、分化能力、侵袭能力和耐药性方面基本相同。集落形成和成瘤性实验结果显示:CD133+或CD133-细胞中40%以上的细胞都能够形成含有100个细胞以上的大集落,增殖成为与未分选细胞相同的细胞群,并能在裸鼠身上成瘤。结论表面黏附分子CD133不能作为分选小细胞肺癌H446细胞系中肿瘤干细胞的分子标志物,分选后的CD133+与CD133-细胞中含有相同的肿瘤干细胞。 展开更多

关键词 小细胞肺癌 H446细胞系 CD133 肿瘤干细胞

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新化合物D261抑制非小细胞肺癌NCI-H460细胞增殖及其作用机制 被引量：3

11

作者 王萍 宋玉仙 +1 位作者 窦静杰 侯亚义 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期442-443,共2页

肺癌是当今恶性肿瘤死亡率最高的癌症。早期肺癌主要以手术治疗为主,并辅以放疗化疗。但是化疗药物毒副作用大,且抗药性在一些肿瘤靶向性药物中逐渐显现。因此,亟需新的抗肿瘤药物。天然产物是小分子新药的主要来源。我们在对天然小分... 肺癌是当今恶性肿瘤死亡率最高的癌症。早期肺癌主要以手术治疗为主,并辅以放疗化疗。但是化疗药物毒副作用大,且抗药性在一些肿瘤靶向性药物中逐渐显现。因此,亟需新的抗肿瘤药物。天然产物是小分子新药的主要来源。我们在对天然小分子化合物的筛选过程中发现D261（从固体发酵物中提取,纯度大于95%）具有潜在的抗肿瘤活性,且对非小细胞肺癌的抑制作用最显著。因此,本文对D261影响非小细胞肺癌NCI-H460及其相关机制作了初步探讨。 展开更多

关键词 非小细胞肺癌 nci-h460细胞 细胞增殖 凋亡 细胞周期 周期蛋白

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Notch3信号通路介导SAHA诱导的小细胞肺癌H446细胞凋亡 被引量：3

12

作者 陈红莲 刘辉 +1 位作者 杨旭光 袁磊 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1556-1561,共6页

目的:观察辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)对人小细胞肺癌H446细胞凋亡的影响,并探讨其分子机制。方法:选取人小细胞肺癌H446细胞作为研究对象,采用CCK-8法检测SAHA的细胞毒作用并测定IC50,采用流式细胞术检... 目的:观察辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)对人小细胞肺癌H446细胞凋亡的影响,并探讨其分子机制。方法:选取人小细胞肺癌H446细胞作为研究对象,采用CCK-8法检测SAHA的细胞毒作用并测定IC50,采用流式细胞术检测细胞凋亡,转染N3ICD真核表达质粒构建高表达N3ICD的H446细胞系,采用RT-PCR法检测Notch3的mRNA水平,采用Western blot法检测Notch3、N3ICD、Puma和cleaved caspase-3的蛋白水平。结果:SAHA可显著降低H446细胞存活率且呈剂量依赖性(P<0.05),SAHA作用48 h的IC50为1.91μmol/L;SAHA可诱导H446细胞凋亡且具有剂量依赖性(P<0.05);H446细胞中Notch3基因表达呈阴性,SAHA可使H446细胞Notch3基因恢复表达并激活Notch3信号通路(P<0.05);沉默Notch3基因可抑制SAHA对H446细胞的促凋亡作用(P<0.05);N3ICD高表达使H446细胞中Puma和cleaved caspase-3蛋白水平升高(P<0.01)。结论:在体外SAHA可激活人小细胞肺癌H446细胞Notch3信号通路,上调Puma蛋白表达水平,诱导H446细胞凋亡。 展开更多

关键词 辛二酰苯胺异羟肟酸 小细胞肺癌 NOTCH3 细胞凋亡 H446细胞

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二去水卫矛醇对肺癌NCI-H460细胞DNA拓扑异构酶Ⅱ的抑制作用 被引量：2

13

作者 黄银妹 刘华钢 +3 位作者 苏桂玉 李英杰 王小洁 蒋霞 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1601-1607,共7页

目的评价二去水卫矛醇(dianhydrogalactitol,DAG)在肺癌NCI-H460细胞上的抗肿瘤作用,探讨其抗肿瘤作用机制。方法采用CCK-8法、细胞克隆形成实验,评价DAG对NCI-H460细胞的增殖抑制作用。显微拍照观察细胞形态改变;Hoechst 33342检测细... 目的评价二去水卫矛醇(dianhydrogalactitol,DAG)在肺癌NCI-H460细胞上的抗肿瘤作用,探讨其抗肿瘤作用机制。方法采用CCK-8法、细胞克隆形成实验,评价DAG对NCI-H460细胞的增殖抑制作用。显微拍照观察细胞形态改变;Hoechst 33342检测细胞核染色质的变化。Real time PCR法检测拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)mRNA的表达水平。Western blot法检测TopoⅡ蛋白表达水平。另外,应用计算机模拟分子对接技术来预测DAG与TopoⅡ的相互作用。结果 CCK-8法检测结果显示,DAG对NCI-H460细胞的体外抗肿瘤活性明显。细胞克隆形成实验结果表明,DAG能持续抑制肿瘤细胞的增殖。Hoechst 33342检测细胞凋亡发现细胞核染色质发生明显改变。Real time PCR和Western blot检测结果显示TopoⅡ mRNA和蛋白表达量降低。计算机模拟分子对接显示DAG与TopoⅡ有相互结合作用。结论DAG能明显抑制NCI-H460细胞的增值,作用机制研究表明DAG能降低TopoⅡ mRNA和蛋白水平,并与TopoⅡ结合,最终可能导致DNA双链断裂,引起细胞死亡。 展开更多

关键词 二去水卫矛醇 肺癌 nci-h460细胞 拓扑异构酶Ⅱ 拓扑异构酶Ⅱ抑制剂 分子对接

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山柰酚通过Met/PI3K/Akt/mTOR通路诱导非小细胞肺癌NCI-H1650细胞发生自噬进而影响其增殖 被引量：4

14

作者 朱志明 周绮纯 +7 位作者 王娟娟 邓芷茵 唐青 吴万垠 王晰 万信良 莫瀚丹 王苏美 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期965-972,共8页

目的:探讨山柰酚诱导人非小细胞肺癌(NSCLC)NCI-H1650细胞发生自噬及其机制。方法:常规培养NCI-H1650细胞,用不同浓度山柰酚处理细胞,用CCK-8法、MTT法以及EdU法检测山柰酚对NCI-H1650细胞增殖能力的影响,用自噬双标记腺病毒mCherry-EGF... 目的:探讨山柰酚诱导人非小细胞肺癌(NSCLC)NCI-H1650细胞发生自噬及其机制。方法:常规培养NCI-H1650细胞,用不同浓度山柰酚处理细胞,用CCK-8法、MTT法以及EdU法检测山柰酚对NCI-H1650细胞增殖能力的影响,用自噬双标记腺病毒mCherry-EGFR-LC3感染实验检测山柰酚对NCI-H1650细胞发生自噬的影响,用WB法检测山柰酚处理后NCI-H1650细胞中自噬相关蛋白及Met/PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达,用qPCR法检测山柰酚处理后NCI-H1650细胞中Met mRNA的表达。采用荧光素酶标记A549-luc细胞建立裸鼠移植瘤模型后用山柰酚进行处理,用活体动物成像技术观察移植瘤生长情况,用WB法检测移植瘤组织中自噬相关蛋白以及Met/PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达。结果:山柰酚能显著抑制NCI-H1650细胞的增殖能力(P<0.05),山柰酚处理后NCI-H1650细胞内的自噬小体数量明显增加(P<0.05)、自噬标志蛋白LC3B和beclin1表达均明显上调(均P<0.05)、P62表达明显下调(P<0.05),山柰酚可明显抑制NCI-H1650细胞中Met mRNA和蛋白的表达(均P<0.05)、抑制p-PI3K p85、PI3K p85、p-Akt和p-mTOR蛋白表达(均P<0.05)。山柰酚抑制A549细胞裸鼠移植瘤的生长(P<0.05)和影响其体内自噬、Met/PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白的表达(均P<0.05)。结论:山柰酚通过影响Met/PI3K/Akt/mTOR通路诱导NSCLC NCI-H1650细胞发生自噬,进而抑制其增殖能力。 展开更多

关键词 山柰酚 非小细胞肺癌 nci-h1650细胞 A549细胞 细胞自噬 Met/PI3K/Akt/mTOR通路 增殖

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埃本膦酸钠对肺癌H446细胞体外粘附、移动和侵袭的影响 被引量：1

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作者 俞惠新 林秀峰 +3 位作者 谭成 陈波 张荣军 王博诚 《医学研究生学报》 CAS 2003年第12期888-890,共3页

目的 :研究埃本膦酸钠 (BM 2 1 0 95 5 )对人小细胞肺癌细胞系H4 4 6在体外的粘附、移动及侵袭能力的影响。方法 :经BM 2 1 0 95 5体外诱导的H4 4 6细胞 ,应用SRB比色法测定其在重构基膜Matrigel胶上的粘附 ,使用Millicell PCF培养系统... 目的 :研究埃本膦酸钠 (BM 2 1 0 95 5 )对人小细胞肺癌细胞系H4 4 6在体外的粘附、移动及侵袭能力的影响。方法 :经BM 2 1 0 95 5体外诱导的H4 4 6细胞 ,应用SRB比色法测定其在重构基膜Matrigel胶上的粘附 ,使用Millicell PCF培养系统计数测定细胞的移动力和侵袭力。　结果 :BM2 1 0 95 5诱导的H4 4 6细胞在 2 4 0min粘附实验中的粘附率下降 32 .1 1 % (P <0 .0 5 ) ,而其移动和侵袭能力在 4～ 72h内均有显著下降 (P <0 .0 5 )。　结论 :BM 2 1 0 95 5可抑制人小细胞肺癌H4 4 6的体外粘附。 展开更多

关键词 埃本膦酸钠 小细胞肺癌细胞系/H446 侵袭

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基于网络药理学及分子对接与实验验证苗药抑癌汤经WNT/β-catenin信号通路抑制小细胞肺癌增殖的作用机制 被引量：3

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作者 陈珊 李波 +4 位作者 葛正行 谭韬 张军 余梅 龚香群 《世界科学技术-中医药现代化》 CSCD 北大核心 2024年第7期1847-1861,共15页

目的运用网络药理学及分子对接技术挖掘并预测苗药抑癌汤(Miao-Yi-Ai-Tang,MYAT)治疗小细胞肺癌(Small cell lung cancer,SCLC)的作用靶点及相关信号通路,并通过细胞及动物实验验证其作用机制,为基础实验及临床应用提供理论依据。方法从... 目的运用网络药理学及分子对接技术挖掘并预测苗药抑癌汤(Miao-Yi-Ai-Tang,MYAT)治疗小细胞肺癌(Small cell lung cancer,SCLC)的作用靶点及相关信号通路,并通过细胞及动物实验验证其作用机制,为基础实验及临床应用提供理论依据。方法从TCMSP数据库获取MYAT有效成分,并结合PubMed、Swiss Target Prediction及Uniprot数据库获取潜在靶点;通过DrugBank、Genecards、OMIM、TTD数据库收集SCLC相关基因,通过Venny 2.1平台获取MYAT和SCLC的交集基因后导入STRING数据库,构建蛋白质相互作用网络(Protein-protein interaction,PPI),运用Cytoscape 3.9.1软件进行可视化分析,利用Metascape数据库进行GO富集分析及KEGG通路分析,预测MYAT治疗SCLC的直接作用靶点及信号通路;使用AutoDock Tools 1.5.7软件进行分子对接验证两者之间的紧密联系。通过细胞学实验验证,培养细胞加入MYAT处理并使用qPCR检测β-catenin、AXIN、c-myc的表达,Western blot检测细胞中β-catenin的表达;动物实验建立肺癌NCI-H446皮下移植瘤模型,观察MYAT对肿瘤生长的影响。结果共获得MYAT有效成分65个,SCLC基因1368个,MYAT与SCLC交集基因260个,富集分析显示与癌症通路、PD-L1/PD-1通路、NF-κB通路、Wnt等信号通路有关。分子对接验证结果显示,其有效活性成分与核心靶点蛋白的结合能均<0 kJ·mol-1,说明蛋白可与活性成分自发结合且稳定性较好。细胞实验显示MYAT组β-catenin、c-myc及AXIN mRNA表达量均显著下调(P<0.05)。动物实验显示:MYAT能明显抑制肿瘤在体内的生长。结论苗药抑癌汤可通过Wnt/β-catenin信号通路抑制小细胞肺癌增殖。 展开更多

关键词 苗药抑癌汤 网络药理学 分子对接 WNT/Β-CATENIN信号通路 小细胞肺癌(SCLC) NCIH446 细胞

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澳洲茄碱诱导肺癌细胞株H446凋亡及其机制探讨 被引量：12

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作者 黄文斯 王颖 +3 位作者 朱海涛 吴荧荧 谢晓东 王冬青 《中国肺癌杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期416-421,共6页

背景与目的肺癌的发病率和病死率都急剧上升,小细胞肺癌首选化疗而不能手术,而中医药副作用小,有研究表明中药澳洲茄碱具有抗肿瘤活性作用。本研究旨在探讨澳洲茄碱对肺癌细胞株H446凋亡作用的影响。方法用CCK8试剂盒筛选药物作用的合... 背景与目的肺癌的发病率和病死率都急剧上升,小细胞肺癌首选化疗而不能手术,而中医药副作用小,有研究表明中药澳洲茄碱具有抗肿瘤活性作用。本研究旨在探讨澳洲茄碱对肺癌细胞株H446凋亡作用的影响。方法用CCK8试剂盒筛选药物作用的合适浓度和时间,以药物浓度为0μmol/L、3.4μmol/L、6.8μmol/L、13.6μmol/L分4组,作用于H446细胞24 h后,倒置显微镜观察细胞形态的变化,DAPI核染观察细胞核变化,流式细胞术检测药物对细胞凋亡的影响,Western blot检测凋亡相关蛋白BCL2、BAX、CASP3表达的变化。结果澳洲茄碱可降低H446细胞的存活率,抑制其增殖,具有剂量相关性,存活率可降低至16.77%(P<0.001),最高凋亡率为44.62%(P<0.001);H446有明显的细胞凋亡形态学变化;Western blot显示凋亡相关蛋白BAX、CASP3表达上调(P<0.05),凋亡抑制基因蛋白BCL2表达下调(P<0.05)。结论澳洲茄碱可抑制H446细胞的增殖,上调促凋亡相关蛋白表达,下调抑凋亡蛋白表达,从而促进细胞的凋亡。 展开更多

关键词 澳洲茄碱 凋亡 肺癌细胞株H446

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抑制Bcl-2基因表达增强非小细胞肺癌NCI-H460细胞放射敏感性的研究 被引量：4

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作者 陈蜜 徐向英 +4 位作者 许德权 赵芳宗 许庆勇 胡松柳 徐建宇 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期641-645,共5页

背景与目的:Bcl-2基因是一种重要的抑制细胞凋亡的基因,广泛存在于各种肿瘤细胞中。本研究利用短发夹RNA(shRNA)重组质粒抑制Bcl-2基因的表达,观察其对非小细胞肺癌NCI-H460的细胞凋亡和放射敏感性变化的影响。方法:将特异性抑制Bcl-2... 背景与目的:Bcl-2基因是一种重要的抑制细胞凋亡的基因,广泛存在于各种肿瘤细胞中。本研究利用短发夹RNA(shRNA)重组质粒抑制Bcl-2基因的表达,观察其对非小细胞肺癌NCI-H460的细胞凋亡和放射敏感性变化的影响。方法:将特异性抑制Bcl-2基因表达的干扰质粒Bcl-2/shRNA稳定转染NCI-H460细胞,获得H460-RNAi细胞,同时设转染含无义序列Neg-shRNA质粒的H460-Neg细胞及未转染的H460细胞为对照组,采用Westernblot法,观察Bcl-2基因在蛋白表达水平的变化;X射线照射后,采用细胞形态学及克隆形成实验,检测RNA干扰对NCI-H460细胞凋亡和放射敏感性的影响。结果:H460-RNAi细胞的Bcl-2蛋白表达较对照组明显降低(P<0.05);H460-RNAi细胞的凋亡率[(10.8±0.7)%]明显高于对照组(P<0.05),4GyX线照射48h后的凋亡率[(24.9±1.4)%]明显高于对照组(P<0.05)及未照射组(P<0.05);H460-RNAi细胞的存活参数D0、Dq、N和SF2值分别为0.97、0.75、2.18和0.26,均低于其余两组,而H460细胞组与H460-Neg细胞组比较差异无统计学意义(分别为1.39、1.39、2.72、0.52和1.21、1.28、2.87、0.46)。结论:Bcl-2/shRNA重组质粒可以有效抑制非小细胞肺癌NCI-H460细胞的Bcl-2基因的表达,增强NCI-H460的细胞凋亡及放射敏感性。 展开更多

关键词 肺癌 nci-h460细胞 BCL-2基因 放射敏感性 RNA干扰 细胞凋亡

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以hsa-miR-491-3p为靶标的反义寡核苷酸对NCI-H446细胞生物学特性的影响 被引量：3

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作者 官士珍 付玉荣 +3 位作者 伊正君 李猛 裴景亮 高昆山 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期171-176,共6页

背景与目的:miRNAs是一类小分子RNA,参与转录后调控。前期研究结果显示,hsa-miR-491-3p在肺癌和肾癌组织中高表达,目前鲜见其功能研究的报道。本研究旨在探讨以hsa-miR-491-3p为靶标的反义寡核苷酸对人小细胞肺癌NCI-H446细胞生物学特... 背景与目的:miRNAs是一类小分子RNA,参与转录后调控。前期研究结果显示,hsa-miR-491-3p在肺癌和肾癌组织中高表达,目前鲜见其功能研究的报道。本研究旨在探讨以hsa-miR-491-3p为靶标的反义寡核苷酸对人小细胞肺癌NCI-H446细胞生物学特性的影响。方法:合成以hsa-miR-491-3p为靶标的反义寡核苷酸和随机对照序列,转染NCI-H446细胞。实验分4组:空白对照组(组1)、空白转染组(组2)、随机对照组(组3)和反义寡核苷酸组(组4)。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法筛选最佳作用浓度,Hoechst33258染色检测细胞核的形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡和周期变化,划痕实验检测细胞的迁移能力。结果:转染反义寡核苷酸后细胞生长受到抑制,最佳作用浓度为0.5μmol/L。Hoechst33258染色各组的凋亡率分别为(6.67±0.58)%、(7.00±1.00)%、(6.67±1.53)%和(26.33±1.53)%,组4的凋亡率明显高于前3组,差异有统计学意义(P<0.001)。流式细胞仪检测各组的凋亡率分别为(2.44±0.60)%、(2.59±0.85)%、(2.62±1.11)%和(5.22±0.40)%,组4的凋亡率明显高于前3组,差异有统计学意义(P<0.01),且G1期细胞增多,S期细胞减少。划痕实验显示各组细胞24 h的迁移距离分别为(196.88±39.13)、(163.06±21.28)、(225.49±23.42)和(77.41±6.07)μm,组4细胞的迁移距离小于前3组(P<0.05),迁移能力减弱。结论:以hsa-miR-491-3p为靶标的反义寡核苷酸能够抑制NCI-H446细胞增殖,诱导其凋亡,并降低其侵袭能力。 展开更多

关键词 hsa-miR-491-3p 反义寡核苷酸 细胞凋亡 nci-h446细胞

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TRAIL联合吉西他滨对肺癌NCI-H460细胞增殖和凋亡的影响 被引量：3

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作者 孙非凡 孙铭娟 +1 位作者 王梁华 焦炳华 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期296-300,共5页

目的：观察吉西他滨（gemcitabine）联合TNF相关凋亡诱导配体（TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL）对人肺癌细胞NCI-H460增殖和凋亡的影响。方法：MTT法检测NCI-H460细胞的增殖,流式细胞术检测NCI-H460细胞的凋亡。结果：... 目的：观察吉西他滨（gemcitabine）联合TNF相关凋亡诱导配体（TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL）对人肺癌细胞NCI-H460增殖和凋亡的影响。方法：MTT法检测NCI-H460细胞的增殖,流式细胞术检测NCI-H460细胞的凋亡。结果：吉西他滨和TRAIL单用或联用均可浓度（0.00110μg/ml）和时间（24、48、72 h）依赖性抑制NCI-H460细胞的增殖,两药联用比单用时抑制率更高,3组药物作用72 h时对肿瘤的抑制率分别为14.9%77.5%、23.4%74.8%、22.3%80.5%;作用72 h时两药单用和联用对细胞增殖抑制的IC50分别为0.085 3、0.098 2、0.043 5μg/ml。两药联用对NCI-H460细胞增殖的抑制效果还与用药顺序以及两药比例有关,吉西他滨作用24 h后再加TRAIL比TRAIL作用24 h后再加吉西他滨对NCI-H460的抑制效果更好,吉西他滨与TRAIL联用的比例为1∶0.3时对NCI-H460细胞增殖的抑制率最大。吉西他滨和TRAIL联用时NCI-H460细胞的凋亡率显著高于两药单用的凋亡率（49.04%vs29.33%、25.69%,P〈0.01）。结论：吉西他滨与TRAIL联用可协同抑制肺癌细胞NCI-H460的增殖、促进细胞凋亡。 展开更多

关键词 吉西他滨 TNF相关凋亡诱导配体 人肺癌细胞 nci-h460 增殖 凋亡

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