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随机单链DNA文库SELEX筛选寡核苷酸适配子方法的建立 被引量:18
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作者 詹林盛 邵宁生 +2 位作者 彭剑淳 孙红琰 王全立 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第1期151-155,共5页
指数富集配基的系统进化 (SELEX)技术是一种新的组合化学技术 .体外构建了一个长度为 81nt、含有35个随机序列的单链DNA (ssDNA)文库 ,优化了ssDNA文库扩增为双链DNA (dsDNA)文库的PCR反应条件 .通过对比不对称PCR和生物素 -链亲和素磁... 指数富集配基的系统进化 (SELEX)技术是一种新的组合化学技术 .体外构建了一个长度为 81nt、含有35个随机序列的单链DNA (ssDNA)文库 ,优化了ssDNA文库扩增为双链DNA (dsDNA)文库的PCR反应条件 .通过对比不对称PCR和生物素 -链亲和素磁珠分离方法制备ssDNA文库的效果 ,确定了以生物素 -链亲和素磁珠分离方法制备ssDNA .由于脱氧核糖核酸的疏水性导致ssDNA文库与硝酸纤维素滤膜的结合背景过高 ,因此选择以微孔板为介质 ,分离与靶蛋白结合的适配子 .经过 9轮循环筛选 ,随机ssDNA文库与丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白 (C蛋白 )的结合率从 0 . 5 %上升到 32 . 5 % . 展开更多
关键词 随机单链DNA文库 SELEX技术 筛选 寡核苷酸适配子 丙型肝炎病毒核心蛋白
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丙型肝炎病毒NS3螺旋酶寡核苷酸适配子的筛选与鉴定 被引量:12
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作者 詹林盛 卓海龙 +2 位作者 王会中 彭剑淳 王全立 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第3期245-250,共6页
为筛选和鉴定抗丙型肝炎病毒(HCV) NS3螺旋酶(NS3h) 的寡核苷酸适配子(aptamers). 利用SELEX技术,以HCV NS3h为靶分子,从体外合成的81 bp随机单链DNA文库中筛选与HCV NS3h特异结合的寡核苷酸适配子. 克隆测序后,进行了解离常数(Kd) 测定... 为筛选和鉴定抗丙型肝炎病毒(HCV) NS3螺旋酶(NS3h) 的寡核苷酸适配子(aptamers). 利用SELEX技术,以HCV NS3h为靶分子,从体外合成的81 bp随机单链DNA文库中筛选与HCV NS3h特异结合的寡核苷酸适配子. 克隆测序后,进行了解离常数(Kd) 测定和Clustal W软件包分析适配子一级结构. 经过8轮循环筛选,随机ssDNA库与HCV NS3h的结合率从0.45%上升到29.5%. 所有的一级结构没有共同的同源序列,但可分5个家族,其中4个家族具有共同的保守序列. 解离常数测定表明,寡核苷酸适配子H2与HCV NS3h特异结合的亲和力最高,Kd值为140 nmol/L. 适配子H2 (10 μmol/L)在体外对HCV NS3h的活性具有一定的抑制作用,抑制率达44%. 利用随机寡核苷酸文库获得了抗HCV NS3h的寡核苷酸适配子. 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 NS3螺旋酶 SELEX 寡核苷酸适配子
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生物素-亲合素ELISA法对ANEPⅢ寡核苷酸适配子亲和力的定量测定 被引量:4
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作者 祝军 张景海 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期580-581,584,共3页
目的:定量分析SELEX(systematic evolution of ligands by exponential enrichment)筛选中寡核苷酸适配子的亲和力。方法:利用生物素和亲合素放大系统(BA-辣根过氧化物酶复合物系统)应用于ELISA的实验策略,对ANEPⅢ寡核苷酸适配子的亲... 目的:定量分析SELEX(systematic evolution of ligands by exponential enrichment)筛选中寡核苷酸适配子的亲和力。方法:利用生物素和亲合素放大系统(BA-辣根过氧化物酶复合物系统)应用于ELISA的实验策略,对ANEPⅢ寡核苷酸适配子的亲合力进行测定。结果:确定BA-ELISA方法定量分析测定寡核苷酸适配子的基本实验步骤。结论:BA-ELISA法可以替代IFMA(免疫荧光测定试验)或放射性荧光标记方法进行寡核苷酸适配子的亲和力的定量测定。 展开更多
关键词 SELEX筛选 寡核苷酸适配子 亲和力 BA-ELISA
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