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刚毛柽柳富含甘氨酸RNA结合蛋白ThGRP1基因克隆与表达分析 被引量:2
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作者 姜波 高彩球 +2 位作者 王玉成 于丽丽 杨传平 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2011年第2期256-262,共7页
在有机体的生长和发育过程中,基因表达在转录、转录后和翻译水平都受到严格地调控。转录调控是基因表达调控的第一步,曾被认为是基因表达的主要调控机制,但是随着对转录后调控机制越来越多的了解,发现转录后调控在基因表达调控中同样... 在有机体的生长和发育过程中,基因表达在转录、转录后和翻译水平都受到严格地调控。转录调控是基因表达调控的第一步,曾被认为是基因表达的主要调控机制,但是随着对转录后调控机制越来越多的了解,发现转录后调控在基因表达调控中同样起着重要作用。转录后的调控决定着基因表达最终产物的种类和表达量。转录后水平的基因表达调控主要是通过RNA结合蛋白(RBPs)直接完成,或通过RBPs控制其它转录因子间接完成的。 展开更多
关键词 刚毛柽柳 酸RNA结合蛋白 基因克隆 实时定量RT-PCR
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大豆天冬氨酸蛋白酶基因启动子的克隆及其表达活性分析
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作者 赵艳 孙天国 +3 位作者 王慧 张梅娟 崔巍 沙伟 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2012年第12期79-84,共6页
【目的】克隆大豆天冬氨酸蛋白酶基因(soyAP1)启动子,并对其表达方式及活性进行分析。【方法】利用TAIL-PCR方法从大豆基因组DNA中克隆soyAP1基因启动子片段。利用启动子在线预测工具分析soyAP1基因启动子片段的启动子元件,并用克隆得到... 【目的】克隆大豆天冬氨酸蛋白酶基因(soyAP1)启动子,并对其表达方式及活性进行分析。【方法】利用TAIL-PCR方法从大豆基因组DNA中克隆soyAP1基因启动子片段。利用启动子在线预测工具分析soyAP1基因启动子片段的启动子元件,并用克隆得到的SAP片段替换pCAMBIA1301中的CaMV35S启动子,构建表达载体pCAM-SAP。通过农杆菌介导法,使其在大豆各组织中进行瞬时表达,用GUS组织化学染色法分析SAP在各组织中的表达活性。【结果】克隆获得了大豆soyAP1基因的启动子片段,长1 650bp,并将之命名为SAP,其转录起始位点可能是553bp处的A;PLACE分析表明,SAP序列中含有多种典型的种子特异性表达元件;GUS组织化学染色显示,SAP驱动的GUS基因在大豆根、茎、叶中基本不表达,但在种子中有较高的表达活性,且表达强度与CaMV35S启动子相近。【结论】大豆SAP启动子可能具有种子特异表达特性。 展开更多
关键词 大豆 天冬蛋白基因 启动子 瞬时表达
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三个编码富含甘氨酸异构体的基因在棉花不同组织的差异表达 被引量:1
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作者 黄耿青 许文亮 +2 位作者 王秀兰 杜曼丽 李学宝 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期344-350,共7页
从棉花cDNA文库中分离了3个编码富含甘氨酸蛋白(glycine-rich proteins,GRPs)的基因,分别命名为GhGRP1、GhGRP2、GhGRP3.推断的编码蛋白质的氨基酸序列都富含甘氨酸,甘氨酸含量超过40%.而且GhGRP1和GhGRP2蛋白质序列同源性高达99%,仅在... 从棉花cDNA文库中分离了3个编码富含甘氨酸蛋白(glycine-rich proteins,GRPs)的基因,分别命名为GhGRP1、GhGRP2、GhGRP3.推断的编码蛋白质的氨基酸序列都富含甘氨酸,甘氨酸含量超过40%.而且GhGRP1和GhGRP2蛋白质序列同源性高达99%,仅在C末端有1个氨基酸残基(Arg/Pro)的差别.这3个蛋白在富含甘氨酸区相互显示较高的同源性,GhGRP1与GhGRP2达到100%,而GhGRP2与GhGRP3达到45·1%,但它们与基因数据库中其它蛋白质的同源性很低.根据结构域的组织特点,将GhGRP1和GhGRP2归为C端富含半胱氨酸结构域(C-cysteine-rich)类GRP,将GhGRP3归为N端有信号肽的GRP.GhGRP1和GhGRP2都含有12个GGX(此处X代表P/W/F)重复,GhGRP3含有22个GGX(此处X代表A/F/V/L/T/P)重复.此外,它们还含有不同数量GX,GGGX等的重复.实时RT-PCR分析表明,GhGRP1在花药中优势表达.GhGRP2在10dpa(day post anthesis)胚珠中表达最强,10dpa纤维和下胚轴次之,而在花药、根和花瓣中表达量相对较低.GhGRP3在花药,根和下胚轴中表达量较高,而在子叶,花瓣、纤维和胚珠中表达较低.上述结果表明,GhPRP基因家族的不同成员可能分别在棉花不同组织细胞的发育过程中发挥作用. 展开更多
关键词 棉花 蛋白 基因蛋白质结构 差异表达
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银杏木质部特异定位表达基因启动子克隆 被引量:6
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作者 陆海 王沙生 +2 位作者 李义 蒋湘宁 李凤兰 《北京林业大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2001年第4期10-12,共3页
用PCR方法成功地从木本植物银杏基因组总DNA中扩增克隆得到木质部细胞特异性表达的富甘氨酸蛋白质基因 (GRP1.8)的启动子 ,并克隆到pUC18载体中 .与菜豆的序列比较发现 ,碱基同源性高达 98%以上 .除发现启动子特有的TATAbox序列外 。
关键词 银杏 PCR 富甘氨蛋白基因启动子 木质部 基因克隆
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电子克隆获取甜菜富亮氨酸类受体蛋白激酶基因BvLRR-RPK2;1完整编码区 被引量:2
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作者 王希 陈丽 赵春雷 《中国糖料》 2019年第3期12-18,共7页
针对前期获得的甜菜分子标记位点进行分析,以获得甜菜中该位点相关的基因。结合电子克隆与常规克隆,获取并验证目的基因片段,最后预测基因产物结构与功能。结果获得了一段长3467bp的片段,其中包含一个长3141bp的完整编码区,编码一个长10... 针对前期获得的甜菜分子标记位点进行分析,以获得甜菜中该位点相关的基因。结合电子克隆与常规克隆,获取并验证目的基因片段,最后预测基因产物结构与功能。结果获得了一段长3467bp的片段,其中包含一个长3141bp的完整编码区,编码一个长1046aa的富亮氨酸类受体蛋白激酶。将基因命名为BvLRR-RPK2;1。基因编码区在基因组中连续存在,无内含子区域。基因翻译产物BvLRR-RPK2;1具有一个跨膜结构域,具有LRR-RPK家族的特征性结构域,与已知的LRR-RPK/RLK类蛋白序列相似性在85%以下,与甜菜本身的预测序列在编码区内部有5个碱基、2个氨基酸的差异。本文获得了一个甜菜中未经克隆的LRR-RPK2编码区,并预测了其产物功能。 展开更多
关键词 甜菜 酸类受体蛋白激酶(LRR-RPK) 基因克隆 电子克隆 完整编码区
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银杏木质部特异定位表达基因启动子在转基因烟草中的功能研究 被引量:4
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作者 曾庆银 陆海 +2 位作者 傅学奇 王沙生 蒋湘宁 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期1-4,共4页
为了研究银杏GRP 1 8启动子在木本植物中的调控制特性 ,用从银杏细胞壁形成及纤维素生物合成密切相关的 ,并定位于形成层木质部维管组织细胞表达的富甘氨酸蛋白质基因 (GRP 1.8)的启动子与GUS报告基因构建的表达载体转化烟草 ,经过South... 为了研究银杏GRP 1 8启动子在木本植物中的调控制特性 ,用从银杏细胞壁形成及纤维素生物合成密切相关的 ,并定位于形成层木质部维管组织细胞表达的富甘氨酸蛋白质基因 (GRP 1.8)的启动子与GUS报告基因构建的表达载体转化烟草 ,经过Southernblotting鉴定 ,得到一批转化再生植株 .经GUS组织化学检测 ,发现转基因烟草的茎木质部呈现GUS染色阳性 ,初步证明银杏GRP 1 8基因启动子确有韧皮部表达特性 。 展开更多
关键词 银杏 蛋白基因启动子 GUS报告基因 基因烟草 木质部 特异性定位表达
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农杆菌介导的转高赖氨酸蛋白基因(sb401)水稻T4代分析 被引量:9
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作者 李科 王世全 +5 位作者 吴发强 李双成 邓其明 王玲霞 梁越洋 李平 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期131-136,共6页
通过农杆菌介导的方法用富赖氨酸蛋白基因(sb401)转化粳稻品种日本晴,获得了独立的10个转化株系,对转化株系进行连续自交,通过筛选得到9个纯合的T4代转化株系。Southern blotting分析发现,整合位点是随机的,并为低拷贝(1~3个)... 通过农杆菌介导的方法用富赖氨酸蛋白基因(sb401)转化粳稻品种日本晴,获得了独立的10个转化株系,对转化株系进行连续自交,通过筛选得到9个纯合的T4代转化株系。Southern blotting分析发现,整合位点是随机的,并为低拷贝(1~3个)。TAIL-PCR扩增得到8个T—DNA侧翼序列,并定位于日本晴的7条染色体上。蛋白质和氨基酸测定分析发现,sb401基因对各株系的蛋白质、赖氨酸和其他氨基酸组分的提高起到了一定的作用。将杂交结果与T-DNA插入位置结合分析发现,在低拷贝的情况下,表达量的差异不明显。 展开更多
关键词 基因水稻 位置效应 蛋白基因 热不对称交错聚合酶链式反应 酸含量 蛋白质含量
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HGTP基因与羊毛细度的相关性分析及其启动子活性研究 被引量:5
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作者 王晶晶 杨涵羽璐 +4 位作者 代蓉 杨华 石国庆 杨永林 万鹏程 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第10期2988-2997,共10页
本研究旨在构建高甘氨酸-酪氨酸蛋白(HGTP)启动子荧光素酶报告基因载体并验证其活性,阐明HGTP基因在萨福克羊和中国美利奴羊皮肤毛囊组织中的表达差异与羊毛经济性状的关系。运用PCR方法扩增HGTP基因启动子序列片段,克隆至pGL3-Basic载... 本研究旨在构建高甘氨酸-酪氨酸蛋白(HGTP)启动子荧光素酶报告基因载体并验证其活性,阐明HGTP基因在萨福克羊和中国美利奴羊皮肤毛囊组织中的表达差异与羊毛经济性状的关系。运用PCR方法扩增HGTP基因启动子序列片段,克隆至pGL3-Basic载体中构建重组质粒,并通过双酶切验证和测定核酸序列鉴定;转染皮肤成纤维细胞并检测报告基因的活性;测定羊毛的纤维直径、长度的数据,利用实时荧光定量PCR分析HGTP基因在不同品种绵羊的皮肤毛囊组织中的表达情况。结果显示,萨福克羊与中国美利奴羊的羊毛纤维直径及自然长度差异极显著(P<0.01),HGTP基因表达水平与羊毛纤维直径存在极显著的高度正相关(P<0.01),与羊毛自然长度呈现显著的中等负相关(P<0.05),而羊毛直径与自然长度之间存在极显著的高度负相关(P<0.01)。HGTP基因在萨福克羊和中国美利奴羊皮肤组织中的表达水平差异极显著(P<0.01)。启动子活性荧光素酶检测结果显示,KAP6.1、KAP7和KAP8.1启动子元件在绵羊皮肤成纤维细胞和3T3细胞中均有表达,且在绵羊成纤维细胞中的活性极显著高于在3T3细胞中的活性(P<0.01)。HGTP基因可以作为研究羊毛纤维直径、自然长度的候选基因。构建不同长度的表达载体,转染皮肤成纤维细胞,获得的2个启动子元件都能驱动外源基因在体外细胞水平表达。绵羊HGTP基因启动子的功能研究为调控羊毛发育提供了理论依据。 展开更多
关键词 绵羊 酸-酪蛋白(HGTP) 启动子 双荧光素酶报告基因
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黄瓜GR-RBP3启动子克隆及低温对其活性的诱导 被引量:11
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作者 王斌 黄泳谚 +1 位作者 易景怡 原远 《山东农业科学》 北大核心 2022年第7期15-23,共9页
低温诱导的富甘氨酸RNA结合蛋白GR-RBP3表达与采后黄瓜(Cucumis sativus)耐冷性密切相关。低温处理明显上调采后黄瓜的CsGR-RBP3表达,表明该基因是一个低温诱导型基因。为探究低温处理对CsGR-RBP3表达和启动子活性的诱导作用,本研究以... 低温诱导的富甘氨酸RNA结合蛋白GR-RBP3表达与采后黄瓜(Cucumis sativus)耐冷性密切相关。低温处理明显上调采后黄瓜的CsGR-RBP3表达,表明该基因是一个低温诱导型基因。为探究低温处理对CsGR-RBP3表达和启动子活性的诱导作用,本研究以黄瓜基因组DNA为模板,克隆了CsGR-RBP3开放阅读框上游1541 bp的启动子序列。生物信息学分析发现,克隆的启动子序列中含有真核生物典型的核心启动子元件TATA-box和CAAT-box,表明成功克隆了CsGR-RBP3启动子;含有低温响应元件LTR,推测低温可能通过影响CsGR-RBP3启动子活性激活CsGR-RBP3表达。启动子活性分析表明,CsGR-RBP3启动子能增强LUC活性,且能驱动GUS基因表达,表明该启动子具有启动基因转录的活性。在烟草和拟南芥中的转基因试验结果显示,低温处理明显提高了GUS活性和编码基因的表达,表明低温处理能增强CsGR-RBP3启动子活性。综之,低温通过诱导启动子活性进一步增强CsGR-RBP3的转录。 展开更多
关键词 采后黄瓜 酸RNA结合蛋白(GR-RBP3) 低温 转录调控 启动子活性
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苹果中新抗旱相关基因GR-RBPs的克隆与表达分析 被引量:4
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作者 王顺才 梁东 +2 位作者 师守国 马锋旺 束怀瑞 《干旱地区农业研究》 CSCD 北大核心 2011年第5期75-81,86,共7页
在构建楸子叶片SSH cDNA文库及EST分析的基础上,通过电子克隆(in silico cloning)和RT-PCR方法分别从楸子和平邑甜茶叶片中各克隆得到了1个富含甘氨酸RNA结合蛋白(GR-RBP)基因,分别命名为MpGR-RBP1(HM042682)和MhGR-RBP1(HQ380209)。它... 在构建楸子叶片SSH cDNA文库及EST分析的基础上,通过电子克隆(in silico cloning)和RT-PCR方法分别从楸子和平邑甜茶叶片中各克隆得到了1个富含甘氨酸RNA结合蛋白(GR-RBP)基因,分别命名为MpGR-RBP1(HM042682)和MhGR-RBP1(HQ380209)。它们的cDNA全长分别为781和558 bp,ORF分别编码171和164个氨基酸的多肽。MpGR-RBP1和MhGR-RBP1基因编码蛋白均含有一个RNA识别结构域(RRM)和一个富含甘氨酸区(glycine-rich region)。生物信息学分析表明,MpGR-RBP1和MhGR-RBP1蛋白属于植物GR-RBPs蛋白家族。定量PCR分析表明,MpGR-RBP1和MhGR-RBP1基因在根、茎和叶中均有表达;在干旱胁迫下,它们的表达量增加,而楸子MpGR-RBP1表达水平明显高于平邑甜茶MhGR-RBP1。结果表明,MpGR-RBP1和MhGR-RBP1可能参与植物对干旱胁迫的响应反应,并推测抗旱蛋白结构的差异可能对植物的抗旱性有影响。 展开更多
关键词 苹果 酸RNA结合蛋白 干旱 基因表达
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烟草属RGP-3基因克隆及多样性分析 被引量:1
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作者 陈璇 曾千春 +2 位作者 张家瑞 胡尊红 李文正 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第3期960-965,共6页
前期研究表明普通烟草(N.tabacum cv.Xanthi)中富含甘氨酸RNA结合蛋白基因(NtRGP-3),该基因为涉及渗透胁迫相关的一个重要转录后调节基因,本研究旨在明确烟草属不同种中RGP-3基因多样性。通过PCR同源克隆方法克隆了12个烟草种中RGP-3基... 前期研究表明普通烟草(N.tabacum cv.Xanthi)中富含甘氨酸RNA结合蛋白基因(NtRGP-3),该基因为涉及渗透胁迫相关的一个重要转录后调节基因,本研究旨在明确烟草属不同种中RGP-3基因多样性。通过PCR同源克隆方法克隆了12个烟草种中RGP-3基因,对RGP-3基因及其编码蛋白的结构、变异和系统进化等方面进行了分析。结果显示,RGP-3在烟草属不同种中相似性介于89%~100%,其中栽培烟草种(N.tabacum_K326)和野生林烟草(N.sylvestris)相似性为100%;多序列比较显示,RGP-3在不同烟草种中存在484个变异位点,其中外显子中变异占8.88%,内含子中变异占79.55%,3'UTR中变异占11.57%,推导的氨基酸仅有14个变异位点,且RNA识别结构域(RRM)高度保守;系统进化分析显示,普通烟亚属(Tabacum)和碧冬烟亚属(Petunioides)中RGP-3遗传距离较近,而和黄花烟亚属(Rustica)较远,与植物分类学上烟草亲缘关系结论一致。研究结果表明烟草属中RGP-3基因变异丰富,而编码的蛋白较保守,且RGP-3基因能够较好地用于烟草系统进化分析,这些结果为进一步研究烟草属中RGP-3的生理功能奠定了基础。 展开更多
关键词 烟草 酸RNA结合蛋白 RGP-3 克隆 基因多样性
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基因多形性与抗心力衰竭药物疗效
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作者 邵黎 朱晓松 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期102-102,共1页
关键词 多形性 药物疗效 心力衰竭 酸受体 受体基因 蛋白结构 受体阻断剂 基因研究 合成 Β受体 表型 部位 表达 小鼠 人群
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黄瓜果实CsMYB62克隆及其对CsGR-RBP3表达的调控 被引量:8
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作者 王斌 武春爽 +4 位作者 汤冰琳 王光 何金明 曲姗姗 朱世江 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期907-917,共11页
本研究前期证实,低温诱导的CsGR-RBP3表达与黄瓜果实耐冷性密切相关,但调控其表达的具体机理尚不清楚。为鉴定调控CsGR-RBP3表达的MYB转录因子,本研究采用转录组测序,分析了黄瓜果实在5℃低温处理后的转录组变化,并通过共表达趋势分析,... 本研究前期证实,低温诱导的CsGR-RBP3表达与黄瓜果实耐冷性密切相关,但调控其表达的具体机理尚不清楚。为鉴定调控CsGR-RBP3表达的MYB转录因子,本研究采用转录组测序,分析了黄瓜果实在5℃低温处理后的转录组变化,并通过共表达趋势分析,鉴定了与CsGR-RBP3表达趋势一致的MYB基因。结果发现,CsMYB62与CsGR-RBP3表达的相关性很高,且低温处理能诱导黄瓜果实CsMYB62和CsGR-RBP3表达,推测CsMYB62转录因子可能调控CsGR-RBP3表达。为进一步分析CsMYB62基因的功能,从黄瓜果皮中克隆了CsMYB62基因全长序列。结果显示,CsMYB62基因全长834 bp,编码277个氨基酸残基。CsMYB62蛋白含有SANT保守域和MYB DNA结合域,定位在细胞核,在进化过程中高度保守。CsMYB62蛋白具有转录激活活性,能直接绑定到CsGR-RBP3启动子,增强CsGR-RBP3启动子活性,表明CsMYB62通过直接调控CsGR-RBP3表达而增强黄瓜果实耐冷性。本研究结果丰富了MYB调控网络,为进一步解析CsMYB62功能奠定了理论基础。 展开更多
关键词 采后黄瓜 耐冷性 MYB转录因子 酸RNA结合蛋白 转录调控
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SHP-1在食管鳞状细胞癌组织中异常低表达的表观遗传学调节机制及其临床意义 被引量:1
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作者 刘磊 张少为 +1 位作者 刘新波 刘俊峰 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期602-608,共7页
目的:探讨食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中蛋白酪氨酸磷酸酶1(protein tyrosin phosphatase 1,SHP-1)基因异常低表达的表观遗传学调节机制及其临床意义。方法:所用组织标本均来自河北医科大学第四医院20... 目的:探讨食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中蛋白酪氨酸磷酸酶1(protein tyrosin phosphatase 1,SHP-1)基因异常低表达的表观遗传学调节机制及其临床意义。方法:所用组织标本均来自河北医科大学第四医院2008-2011年行食管癌根治术并且病理诊断为ESCC患者的癌组织及相应癌旁组织(距癌灶边缘2 cm以上),共71例。ESCC细胞株(Eca109、Kyse170、Yes-2)培养完成后,进行甲基化抑制剂5-Aza-dC或组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA处理,qPCR和Western blotting实验检测ESCC组织和细胞系中SHP-1 mRNA和蛋白的表达变化,亚硫酸氢盐基因组测序(bisulfite genome sequencing,BGS)法检测ESCC细胞系中SHP-1基因启动子区CpG位点的甲基化频率,甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)技术检测ESCC组织和细胞中SHP-1启动子区的甲基化状态,应用双荧光素酶报告基因实验检测SHP-1启动子区CpG岛甲基化对其转录活性影响。分析ESCC组织中SHP-1甲基化状态分别与临床病理特征和SHP-1 mRNA表达的关系,对组织SHP-1甲基化水平与ESCC患者生存率进行Kaplan-Meier生存分析和Log-Rank检验。结果:5-Aza-dC处理后,SHP-1 mRNA蛋白在3种细胞株中的表达显著上调(均P<0.05),同时其启动子区的甲基化程度均明显降低(均P<0.05);应用TSA处理细胞株后,SHP-1在各细胞株中的表达情况及甲基化状态无明显改变(P>0.05);甲基转移酶处理细胞荧光素报告载体活性显著低于未处理细胞荧光素报告载体活性(P<0.05),表明SHP-1的甲基化可抑制自身的转录。ESCC组织中启动子区的甲基化率明显高于癌旁组织(P<0.05),并与TNM分期、病理分级及淋巴结转移密切有关(P<0.05);与癌旁组织相比,ESCC组织中SHP-1 mRNA相对表达量显著降低(P<0.05),并与启动子区甲基化有关(P<0.05);Kaplan-Meier分析显示,启动子区高甲基化与ESCC患者的不良预后有关(P<0.05)。结论:ESCC组织和细胞株中SHP-1基因启动子区高甲基化状态可抑制其自身的转录活性,进而导致该基因表达沉默;SHP-1的高甲基化与ESCC患者预后不良有关,SHP-1的甲基化状态可能成为ESCC患者预后的评估指标。 展开更多
关键词 食管鳞状细胞癌 蛋白酸磷酸酶1基因 启动子 甲基化 预后评估
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