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采用定量竞争PCR技术定量分析猪DNA
1
作者 Wolf 高军肖 《中国畜牧兽医》 CAS 2003年第1期53-53,共1页
当今的许多肉产品都可能由几种动物的肉按照不同比例组成。为保证消费者不受欺骗 ,有必要对复合食物产品的成分同时进行定性和定量监测。多聚链式聚合反应 (PCR)等以 DNA为基础的技术被广泛应用于种类鉴定 ,但利用当前的技术不能测出某... 当今的许多肉产品都可能由几种动物的肉按照不同比例组成。为保证消费者不受欺骗 ,有必要对复合食物产品的成分同时进行定性和定量监测。多聚链式聚合反应 (PCR)等以 DNA为基础的技术被广泛应用于种类鉴定 ,但利用当前的技术不能测出某种特定成分的比例。本研究报道了一种用于猪 DNA检测和定量分析的定量竞争多聚链式聚合反应技术 (QC-PCR的开发和评定 ,该技术采用一种以生长激素基因 sus scrofa为基础的新型猪特异性 PCR系统。构建一个与猪的目标序列在长度上仅差 3 0 bp的 DNA竞争物 ,与目标序列一起用于 PCR。用来自牛、羊、肉鸡和火鸡的 DNA对这个新引物的特异性进行了评价。通过含有猪 DNA和相应数量牛 DNA的混合物的共同扩增使竞争物的浓度调到猪 DNA含量的2 %或 2 0 %。 展开更多
关键词 生长激素基础 定量竞争pcr技术 定量分析 猪DNA
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用定量竞争PCR检测和定量IBDV cDNA与RNA
2
作者 李凯年 《畜牧兽医科技信息》 1998年第21期6-6,共1页
最近,美国研究人员研制了一种定量竞争PCR。用这种方法可以测定传染性囊病病毒(IBDV)的互补DNA(cDNA)和RNA水平,并且可以用竞争PCR(QC-PCR)扩增达到定量的水平。将竞争者一个野生型IBDV cDNA的缺失突变型做连续10倍稀释,将病毒RNA逆转... 最近,美国研究人员研制了一种定量竞争PCR。用这种方法可以测定传染性囊病病毒(IBDV)的互补DNA(cDNA)和RNA水平,并且可以用竞争PCR(QC-PCR)扩增达到定量的水平。将竞争者一个野生型IBDV cDNA的缺失突变型做连续10倍稀释,将病毒RNA逆转录后用IBDV cDNA进行协同扩增。用琼脂糖凝胶电泳、染色和光密度扫描后。 展开更多
关键词 定量竞争pcr CDNA 传染性囊病病毒 互补DNA 计算机辅助 图像分析 数字化图像 凝胶电泳 缺失突变 光密度扫描
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宿根矮化病菌的竞争定量PCR检测方法建立 被引量：4
3
作者 王恒波 郭晋隆 +3 位作者 陈平华 阙友雄 陈如凯 许莉萍 《热带作物学报》 CSCD 2009年第10期1511-1516,共6页
利用宿根矮化病菌的特异检测引物,构建竞争定量PCR检测的非同源模板,建立宿根矮化病菌的竞争定量PCR检测方法。实验中非同源模板(竞争模板)构建是采用PCR方法对大肠杆菌基因组进行低严谨度扩增,回收合适的DNA片段并将其构建到T-esay载体... 利用宿根矮化病菌的特异检测引物,构建竞争定量PCR检测的非同源模板,建立宿根矮化病菌的竞争定量PCR检测方法。实验中非同源模板(竞争模板)构建是采用PCR方法对大肠杆菌基因组进行低严谨度扩增,回收合适的DNA片段并将其构建到T-esay载体上,通过测序和序列比对,除两端引物序列完全相似外,其余部分没有同源性,因此可以作为定量检测的非同源模板。通过计算非同源模板的拷贝数,进行竞争定量PCR检测宿根矮化病,建立宿根矮化病菌的标准竞争曲线和直线回归方程。本研究建立的竞争定量PCR检测方法操作简单、特异性和敏感性高,适合于宿根矮化病菌的检测,并可为其它病菌竞争定量PCR检测方法的建立提供参考。 展开更多
关键词 甘蔗 宿根矮化病菌 非同源模板 竞争定量pcr 检测
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鸭坦布苏病毒竞争定量PCR检测方法的建立与应用 被引量：5
4
作者 袁朋 王斌 +4 位作者 许传田 杨少华 黄庆华 张秀美 张琳 《山东农业科学》 2015年第3期113-117,共5页
在现行PCR检测鸭坦布苏病毒(DTMUV)方法的基础上,设计制备DTMUV竞争模板并以其为定量内标物建立竞争定量PCR(QC-PCR)体系。该体系特异性强、灵敏性高,竞争模板和目标模板可在400个分子/μL的水平上共扩增。临床应用结果表明,建立的体系... 在现行PCR检测鸭坦布苏病毒(DTMUV)方法的基础上,设计制备DTMUV竞争模板并以其为定量内标物建立竞争定量PCR(QC-PCR)体系。该体系特异性强、灵敏性高,竞争模板和目标模板可在400个分子/μL的水平上共扩增。临床应用结果表明,建立的体系能够满足简单快速确定病毒含量的要求。 展开更多
关键词 鸭坦布苏病毒 竞争定量pcr 定量检测
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35S启动子定量PCR非同源竞争模板的构建 被引量：1
5
作者 徐景升 阙友雄 +1 位作者 李峰 陈如凯 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期12-15,共4页
利用35S启动子特异引物,以大肠杆菌基因组DNA为异源模板,经低严谨度PCR扩增并回收克隆适宜DNA片段,构建了35S启动子的非同源竞争对照。测序结果表明,该片段与35S启动子相应序列即靶序列除两端引物序列完全相同外,其他部分没有同源性。... 利用35S启动子特异引物,以大肠杆菌基因组DNA为异源模板,经低严谨度PCR扩增并回收克隆适宜DNA片段,构建了35S启动子的非同源竞争对照。测序结果表明,该片段与35S启动子相应序列即靶序列除两端引物序列完全相同外,其他部分没有同源性。利用该非同源竞争对照,建立了转基因玉米35S启动子的QC-PCR技术体系,并进行了校正。 展开更多
关键词 竞争定量pcr 非同源对照模板 转基因检测
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赤拟谷盗HSP70基因克隆和竞争定量PCR检测
6
作者 苏丽娟 董晓慧 尹新明 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期218-223,共6页
为研究赤拟谷盗Tribolium castaneum受到热胁迫后高度保守的热激蛋白70(heat shock protein70,HSP70)基因的表达变化,本研究扩增了681bp的赤拟谷盗hsp70片段,编码227个氨基酸残基,GenBank登录号为HM345948。同源性分析表明:赤拟谷盗hsp7... 为研究赤拟谷盗Tribolium castaneum受到热胁迫后高度保守的热激蛋白70(heat shock protein70,HSP70)基因的表达变化,本研究扩增了681bp的赤拟谷盗hsp70片段,编码227个氨基酸残基,GenBank登录号为HM345948。同源性分析表明:赤拟谷盗hsp70核苷酸序列与马铃薯甲虫Leptinotarsa decemlineata的hsp70(GenBank登录号:AF322911.1)同源性最高,为97%;其推测的蛋白序列与马铃薯甲虫、甘蓝夜蛾Mamestra brassicae、黑腹果蝇Drosophila melanogaster和美洲斑潜蝇Liriomyza sativae的HSP70蛋白均有94%以上的同源性。利用RT-PCR技术得到与赤拟谷盗hsp70进行竞争定量的内部竞争物,以等量的目标cDNA和一系列稀释的竞争模板进行竞争PCR扩增,构建了hsp70的竞争定量PCR检测体系,该体系标准曲线的线性方程为Y=1.032X-1.618(r2=0.975)。这些结果为赤拟谷盗的hsp70定量检测提供了方便,并为热控技术防治害虫提供了基础资料。 展开更多
关键词 赤拟谷盗 热激蛋白70 竞争定量pcr 内部竞争物 同源性分析
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定量PCR的非同源对照模板的构建 被引量：2
7
作者 陈燃 金詟 毛裕民 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期247-250,共4页
建立了HCVRNA和hTERTmRNA的竞争定量PCR系统。对照模板的构建方法是 :利用计算机辅助优选设计连接引物 ,低严紧型扩增大肠杆菌DNA ,回收并克隆预期的DNA片段。该片段与靶序列除两端引物序列完全相同外 ,无同源性 ,因此可作为非同源对照... 建立了HCVRNA和hTERTmRNA的竞争定量PCR系统。对照模板的构建方法是 :利用计算机辅助优选设计连接引物 ,低严紧型扩增大肠杆菌DNA ,回收并克隆预期的DNA片段。该片段与靶序列除两端引物序列完全相同外 ,无同源性 ,因此可作为非同源对照模板。这种构建非同源对照模板的方法 ,简便易行 。 展开更多
关键词 竞争定量pcr 对照模板 异源双链 大肠杆菌
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猪IL-18 mRNA定量RT-PCR检测方法的建立
8
作者 王霞泰 汤世坤 +1 位作者 周双海 刘凤华 《北京农学院学报》 2008年第4期37-40,共4页
根据GenBank中猪白介素(IL)-18基因序列,设计1对引物,用RT-PCR技术从猪肺泡巨噬细胞总RNA中扩增出其411 bp cDNA片段,将其与pGEM-T Easy载体连接,经转化、筛选阳性克隆、酶切与测序鉴定后,构建出含猪IL-18 cDNA部分片段的重组质粒。后... 根据GenBank中猪白介素(IL)-18基因序列,设计1对引物,用RT-PCR技术从猪肺泡巨噬细胞总RNA中扩增出其411 bp cDNA片段,将其与pGEM-T Easy载体连接,经转化、筛选阳性克隆、酶切与测序鉴定后,构建出含猪IL-18 cDNA部分片段的重组质粒。后用反向PCR技术构建出与扩增411 bp片段共用同1对引物,但缺失174 bp的竞争重组质粒。通过上述2种质粒的竞争PCR方法,建立了猪IL-18 mRNA的标准竞争曲线,得到其直线回归方程^y=0.583 2x-2.903 4(R2=0.9898)。 展开更多
关键词 猪 IL-18 竞争定量pcr
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转基因大豆非同源对照模板QC-PCR检测方法的建立
9
作者 徐景升 阙友雄 +2 位作者 李峰 陈华墙 陈如凯 《生物技术通报》 CAS CSCD 2007年第5期156-159,共4页
建立了转基因大豆CP4EPSPS基因的非同源对照模板QC-PCR检测方法。非同源竞争对照构建方法如下:利用CP4EPSPS基因特异引物,以大肠杆菌基因组DNA为异源模板,在低严谨度PCR扩增,回收适宜DNA片段并克隆到pMD-8载体上。该片段与CP4EPSPS基因... 建立了转基因大豆CP4EPSPS基因的非同源对照模板QC-PCR检测方法。非同源竞争对照构建方法如下:利用CP4EPSPS基因特异引物,以大肠杆菌基因组DNA为异源模板,在低严谨度PCR扩增,回收适宜DNA片段并克隆到pMD-8载体上。该片段与CP4EPSPS基因相应序列除两端引物序列完全相同外,其他部分没有同源性。 展开更多
关键词 竞争定量pcr 非同源对照 CP4EPSPS 转基因检测
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猪繁殖与呼吸综合征病毒感染对猪肺泡巨噬细胞外源性抗原加工递呈相关分子和共刺激分子的影响 被引量：9
10
作者 磨美兰 杨汉春 +4 位作者 郭鑫 吕艳丽 周双海 陈艳红 查振林 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期568-573,共6页
采用定量竞争PCR技术对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染后不同时相猪肺泡巨噬细胞(PAM)中外源性抗原加工递呈相关分子SLA-DRI、i链和SLA-DM分子及共刺激分子CD40、CD80、CD86的mRNA转录动态进行了定量检测。结果表明,PRRSV感染后PAM... 采用定量竞争PCR技术对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染后不同时相猪肺泡巨噬细胞(PAM)中外源性抗原加工递呈相关分子SLA-DRI、i链和SLA-DM分子及共刺激分子CD40、CD80、CD86的mRNA转录动态进行了定量检测。结果表明,PRRSV感染后PAM的SLA-DR mRNA转录水平在3、7和14 d下调,低于对照组;感染后3 d,Ii链、SLA-DM和CD40的mRNA转录水平极显著下调(P<0.01);CD80和CD86mRNA转录水平也在感染后3 d明显下调(P<0.05)。用流式细胞术检测PAM表面的SLA-DR抗原的结果表明,在感染后3 d短暂上升,7 d之后一直低于对照组。由此说明,PRRSV感染早期对猪肺泡巨噬细胞的外源性抗原加工和递呈功能产生显著影响,导致其外源性抗原递呈功能下降,进而影响机体的体液免疫应答。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪肺泡巨噬细胞 抗原加工和递呈相关分子 共刺激分子 定量竞争pcr
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