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miR-221对奶牛乳腺上皮细胞乳脂、乳蛋白合成的影响及作用机制 被引量：2
1
作者 冉耀祥 魏祥飞 +3 位作者 曲波 王春梅 姜毓君 张莉 《中国乳品工业》 北大核心 2025年第1期26-31,共6页
文章利用体外分离培养奶牛乳腺上皮细胞研究miR-221对乳脂和乳蛋白合成的影响。将miR-221转染至奶牛乳腺上皮细胞中,应用QRT-PCR检测miR-221表达量,应用Western blot技术和组织细胞甘油三酯(TG)含量酶法分别检测β-酪蛋白和甘油三酯含... 文章利用体外分离培养奶牛乳腺上皮细胞研究miR-221对乳脂和乳蛋白合成的影响。将miR-221转染至奶牛乳腺上皮细胞中,应用QRT-PCR检测miR-221表达量,应用Western blot技术和组织细胞甘油三酯(TG)含量酶法分别检测β-酪蛋白和甘油三酯含量。利用双荧光素酶试验分析miR-221和IGF-1的靶向关系,检测转染miR-221后IGF-1和相关泌乳信号通路蛋白表达的变化。结果表明,在奶牛乳腺上皮细胞中转染miR-221后,miR-221表达显著上升,β-酪蛋白和甘油三酯含量显著降低;泌乳调节相关基因IGF-1与miR-221具有靶向关系,过表达miR-221后,IGF-1、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR的表达也显著降低,表明miR-221可能通过靶向抑制IGF-1进而影响AKT/mTOR信号通路来影响乳脂和乳蛋白合成。 展开更多
关键词 奶牛乳腺上皮细胞 MIR-221 IGF-1 乳脂 乳蛋白
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TAK1调控奶牛乳腺上皮细胞炎症因子和趋化因子的机制
2
作者 陈平 王斐 +2 位作者 谢建鹏 张鉴 何振富 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第2期18-24,共7页
为了探索转化生长因子β激活激酶1(TAK1)调控奶牛乳腺上皮细胞(CMECs)炎症因子和趋化因子的机制,本试验通过生物信息学分析正常和乳腺炎CMECs信号通路;CMECs经细胞角蛋白18(CK-18)免疫荧光染色鉴定后分为对照组、过表达组和抑制组,对照... 为了探索转化生长因子β激活激酶1(TAK1)调控奶牛乳腺上皮细胞(CMECs)炎症因子和趋化因子的机制,本试验通过生物信息学分析正常和乳腺炎CMECs信号通路;CMECs经细胞角蛋白18(CK-18)免疫荧光染色鉴定后分为对照组、过表达组和抑制组,对照组正常培养CMECs,过表达组CMECs转染2μg TAK1过表达质粒,抑制组CMECs转染2μg TAK1过表达质粒后加入TAK1抑制剂5Z-7-oxozeaenol,蛋白质免疫印迹(WB)检测CMECs中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、核转录因子κB(NF-κB)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)和巨噬细胞炎性蛋白1β(MIP-1β)含量,流式细胞仪检测CMECs干细胞标志物乙醛脱氢酶(ALDH)含量。生物信息学分析结果显示,CMECs发生炎症时,细胞免疫应答和细胞表面受体信号通路被激活,参与正向调控炎症反应的相关基因呈高水平表达;TNF-α与IL-1β、MIP-1α、MIP-1β、MCP-1、上游蛋白分化簇3(CD3)、分化簇8(CD8)和趋化因子配体5(CCL5)之间存在相互作用。WB结果显示,与对照组相比,过表达组TAK1,炎症因子IL-1β、TNF-α和NF-κB,趋化因子MIP-1α、MIP-1β和MCP-1蛋白表达极显著增强(P<0.01或P<0.001);与过表达组相比,抑制组TAK1,炎症因子IL-1β、TNF-α和NF-κB,趋化因子MIP-1α、MIP-1β和MCP-1蛋白表达极显著受到抑制(P<0.001)。流式细胞仪检测发现,培养48 h之后,对照组ALDH阳性细胞率为6.7%,过表达组ALDH阳性细胞率为10.21%,抑制组ALDH阳性细胞率降为4.23%。本试验探究了TAK1与CMECs炎症因子和趋化因子之间的调控关系,为进一步治疗奶牛乳腺炎提供一定的试验支撑和理论依据。 展开更多
关键词 奶牛乳腺上皮细胞(cmecs) 转化生长因子β激活激酶1(TAK1) 炎症因子 相互作用
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叶酸对奶牛乳腺上皮细胞增殖及脂滴、β-酪蛋白合成的影响
3
作者 马晓聪 杨慧琳 +3 位作者 毛永尽 赵锋 曲波 崔英俊 《中国乳品工业》 北大核心 2025年第3期17-21,共5页
文章以奶牛乳腺上皮细胞为试验模型,探究叶酸对奶牛乳腺上皮细胞增殖及脂滴、β-酪蛋白合成的影响。用不同浓度的叶酸纯化处理奶牛乳腺上皮细胞,分别采用CCK-8法和Edu法检测奶牛乳腺上皮细胞增殖,筛选出叶酸最佳使用浓度。采用尼罗红法... 文章以奶牛乳腺上皮细胞为试验模型,探究叶酸对奶牛乳腺上皮细胞增殖及脂滴、β-酪蛋白合成的影响。用不同浓度的叶酸纯化处理奶牛乳腺上皮细胞,分别采用CCK-8法和Edu法检测奶牛乳腺上皮细胞增殖,筛选出叶酸最佳使用浓度。采用尼罗红法和组织细胞甘油三酯含量酶法检测不同处理组胞内胞外甘油三酯含量,通过Western blotting检测不同处理组β-酪蛋白(CSN2)及相关蛋白表达情况。结果表明,2.50μg/mL叶酸是促进奶牛乳腺上皮细胞增殖的最优浓度;叶酸可显著增加奶牛乳腺上皮细胞胞内胞外甘油三酯含量,显著提高CSN2蛋白表达,p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR、SREBP1、CyclinD1等蛋白表达显著提高。 展开更多
关键词 奶牛 乳腺上皮细胞 叶酸 泌乳 脂滴 Β-酪蛋白
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CD146基因参与乙酸钠对奶牛乳腺上皮细胞乳脂合成的调节
4
作者 徐自如 葛慧聚 +5 位作者 刘佳琪 随风贤 刘美妍 杨洋 侯晓明 林叶 《东北农业大学学报》 北大核心 2025年第1期61-69,共9页
CD146是免疫球蛋白超家族成员,在脂肪组织中高表达,参与调节脂肪细胞分化、细胞迁移、免疫应答。为研究奶牛泌乳过程中CD146是否参与乙酸钠诱导的乳脂合成过程,采用荧光定量PCR、免疫印迹方法检测乙酸钠处理的奶牛乳腺上皮细胞中CD146... CD146是免疫球蛋白超家族成员,在脂肪组织中高表达,参与调节脂肪细胞分化、细胞迁移、免疫应答。为研究奶牛泌乳过程中CD146是否参与乙酸钠诱导的乳脂合成过程,采用荧光定量PCR、免疫印迹方法检测乙酸钠处理的奶牛乳腺上皮细胞中CD146的表达。结果表明:乙酸钠能够显著促进CD146 mRNA和蛋白水平表达。试验成功构建CD146干扰载体,通过瞬时转染方法转染乙酸钠诱导的奶牛乳腺上皮细胞,CD146干扰载体转染后抑制奶牛乳腺上皮细胞由乙酸钠诱导的CD146及乳脂合成相关基因表达,同时,细胞内甘油三酯合成下降。 展开更多
关键词 CD146 奶牛 乳腺上皮细胞 乙酸钠 乳脂合成
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多酚类物质对奶牛乳腺上皮细胞凋亡、炎性和氧化损伤的缓解作用及其机制
5
作者 罗轶翾 邢媛媛 +1 位作者 孙梅 李大彪 《动物营养学报》 北大核心 2025年第4期2200-2210,共11页
多酚类物质是由多个酚环构成的天然活性物质,其因对动物毒副作用在安全范围内,受到养殖业的广泛关注。目前,乳腺炎是影响奶牛生产效益的重要因素之一,对奶业发展以及人类健康造成严重危害。奶牛乳腺上皮细胞作为乳腺防御的第一道防线,... 多酚类物质是由多个酚环构成的天然活性物质,其因对动物毒副作用在安全范围内,受到养殖业的广泛关注。目前,乳腺炎是影响奶牛生产效益的重要因素之一,对奶业发展以及人类健康造成严重危害。奶牛乳腺上皮细胞作为乳腺防御的第一道防线,近年来成为人们关注的重点。利用多酚类物质的抗氧化、抑菌、抗炎及抗凋亡等生物活性功能,可降低奶牛炎症反应,增强抗氧化功能,有效缓解奶牛乳腺炎。因此,本文根据国内外对多酚类物质缓解奶牛乳腺炎的研究现状,从奶牛乳腺炎的致病因素、多酚类物质的分类及多酚类物质缓解奶牛乳腺上皮细胞凋亡、炎性和氧化损伤的具体作用机制等方面进行综述,并提出尚需要进一步研究的问题和方向,以期为相关领域的研究提供理论依据和新视野。 展开更多
关键词 多酚类物质 奶牛乳腺炎 奶牛乳腺上皮细胞
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丙氨酸、谷氨酸、脯氨酸及其适宜组合对奶牛乳腺上皮细胞合成α-酪蛋白的影响
6
作者 谢乐文 杨敏 +3 位作者 张欣雨 任万平 杨亮 邵伟 《动物营养学报》 北大核心 2025年第5期3383-3394,共12页
本研究以体外培养奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)为模型,探究添加不同水平丙氨酸(Ala)、谷氨酸(Glu)、脯氨酸(Pro)及其组合对α-酪蛋白合成的影响。采用3因素×7水平随机试验设计,体外培养MAC-T采用含10%胎牛血清的培养基培养贴壁后,换无... 本研究以体外培养奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)为模型,探究添加不同水平丙氨酸(Ala)、谷氨酸(Glu)、脯氨酸(Pro)及其组合对α-酪蛋白合成的影响。采用3因素×7水平随机试验设计,体外培养MAC-T采用含10%胎牛血清的培养基培养贴壁后,换无血清培养基饥饿培养18 h,然后以无血清培养基细胞为空白对照(CK),试验处理分别添加不同水平Ala(0.37、0.74、1.48、2.95、5.90、11.78 mmol/L)、Glu(0.77、1.53、3.06、6.13、12.25、24.50 mmol/L)和Pro(0.52、1.04、2.09、4.17、8.35、16.69 mmol/L)。采用Box-Behnken法建立模型,并运用DesignExpert 10.0.3软件进行数据分析,得到使α-酪蛋白合成量最高的Ala、Glu、Pro适宜配比组合。采用CCK8法检测MAC-T增殖率,并采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测α-酪蛋白合成量,同时采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测合成α-酪蛋白相关基因的相对表达量。结果表明:1)与CK相比,在4、6、12、24、48 h时,单一添加Ala、Glu、Pro均极显著提高MAC-T增殖率(P<0.01)。2)与CK相比,除3.06 mmol/L Glu和0.52 mmol/L Pro外,单一添加不同水平Ala、Glu、Pro均极显著提高体外培养24 h细胞内和细胞外(上清)α-酪蛋白合成量(P<0.01)。3)单一添加Ala、Glu、Pro时,对α-酪蛋白合成量影响的重要程度为Glu>Ala>Pro,3种氨基酸的适宜组合为6.80 mmol/L Ala、22.20 mmol/L Glu、8.30 mmol/L Pro。4)与CK相比,组合添加Ala、Glu、Pro显著提高MAC-T增殖率(P<0.01),且在24 h时MAC-T增殖率达到最高;组合添加Ala、Glu、Pro显著提高细胞内和细胞外α-酪蛋白合成量(P<0.01)。5)与CK相比,单一添加Ala、Glu、Pro及组合添加3种氨基酸均极显著提高α-酪蛋白合成相关基因α_(S1)-酪蛋白(CSN1S1)和α_(S2)-酪蛋白(CSN1S2)相对表达量(P<0.01)。综上所述,组合添加6.80 mmol/L Ala、22.20 mmol/L Glu、8.30 mmol/L Pro,对MAC-T合成α-酪蛋白促进效果最佳。 展开更多
关键词 丙氨酸 谷氨酸 脯氨酸 奶牛乳腺上皮细胞 α-酪蛋白
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竹叶黄酮对H_(2)O_(2)诱导奶牛乳腺上皮细胞焦亡的保护作用
7
作者 王靖 关淑文 +3 位作者 赵小博 王琳玮 郭刚 蒋林树 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第1期281-294,共14页
旨在以竹叶黄酮(BLF)为添加物,探究BLF对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)焦亡的保护作用。本研究以BMECs为研究对象,分为对照组、80μg·mL^(-1) BLF处理组、800μmol·L^(-1) H_(2)O_(2)处理组和80μg·m... 旨在以竹叶黄酮(BLF)为添加物,探究BLF对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)焦亡的保护作用。本研究以BMECs为研究对象,分为对照组、80μg·mL^(-1) BLF处理组、800μmol·L^(-1) H_(2)O_(2)处理组和80μg·mL^(-1) BLF+800μmol·L^(-1) H_(2)O_(2)处理组。利用RT-qPCR、Western blot、免疫荧光、流式细胞术等技术,检测细胞焦亡相关基因和蛋白表达以及凋亡相关微粒样蛋白(ASC)荧光强度。结果表明,与对照组相比,800μmol·L^(-1) H_(2)O_(2)处理BMECs 8 h显著增加了奶牛乳腺上皮细胞的焦亡(P<0.05),H_(2)O_(2)处理后,NLRP3、ASC、GSDMD、IL-18、IL-1β等焦亡相关基因的相对表达量均显著升高(P<0.05),尤其是NLRP3,说明H_(2)O_(2)显著增加BMECs焦亡。与H_(2)O_(2)处理组相比,BLF可以降低正常细胞焦亡水平,显著降低NLRP3、Nek7、ASC、GSDMD、IL-18、IL-1β基因mRNA上调的趋势,显著缓解了H_(2)O_(2)导致的NLRP3、ASC、Nek7、pro-caspase1、caspase1 p20、GSDMD-N、IL-18和IL-1β胞内焦亡相关蛋白表达的升高(P<0.05),ASC的荧光强度显著降低(P<0.05)。综上所述,H_(2)O_(2)显著上调NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18焦亡基因和蛋白表达水平,诱导奶牛乳腺上皮细胞焦亡。BLF通过降低NLRP3炎症小体通路蛋白和基因表达,降低了炎症因子水平,从而缓解奶牛乳腺上皮细胞焦亡。 展开更多
关键词 竹叶黄酮 奶牛乳腺上皮细胞 细胞焦亡
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重组克柔念珠菌14-3-3蛋白诱导奶牛乳腺上皮细胞铁死亡的信号通路分析
8
作者 马月 苗宇航 +5 位作者 丁涛 辛杰 马文妍 李雅楠 周学章 杜军 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第11期5706-5720,共15页
旨在研究重组克柔念珠菌14-3-3(rCK14-3-3)蛋白诱导奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)铁死亡的特征,为揭示克柔念珠菌毒力因子损伤奶牛乳腺上皮细胞的机制提供理论依据。采用CCK-8法筛选rCK14-3-3蛋白对MAC-T的最适作用浓度和时间;将奶牛乳腺上... 旨在研究重组克柔念珠菌14-3-3(rCK14-3-3)蛋白诱导奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)铁死亡的特征,为揭示克柔念珠菌毒力因子损伤奶牛乳腺上皮细胞的机制提供理论依据。采用CCK-8法筛选rCK14-3-3蛋白对MAC-T的最适作用浓度和时间;将奶牛乳腺上皮细胞分为空白对照组、阳性对照组(10μmol·L^(-1)Erastin)、试验组Ⅰ(不同浓度rCK14-3-3蛋白(25、50、75μg·mL^(-1)))、试验组Ⅱ(不同浓度rCK14-3-3蛋白(25、50、75μg·mL^(-1))+铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(20μmol·L^(-1)))、试验组Ⅲ(不同浓度rCK14-3-3蛋白(25、50、75μg·mL^(-1))+Nrf2特异性抑制剂ML385(25μmol·L^(-1))),透射电镜检测细胞铁死亡形态学特征;Western blot检测rCK14-3-3诱导MAC-T铁死亡Nrf2-SLC7A11/GPX4信号通路蛋白表达水平;免疫荧光法检测谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、活性氧(ROS)及线粒体膜电位(JC-1)的表达水平;比色法检测MAC-T中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和亚铁离子(Fe^(2+))的含量。结果发现,与空白对照组相比,阳性对照组、试验组Ⅰ出现明显铁死亡特征;阳性对照组、试验组ⅠNrf2、GPX4、SLC7A11蛋白表达水平及GSH含量显著下降(P<0.05),ROS、MDA、Fe^(2+)含量显著上升,JC-1含量显著下降(P<0.05),而与试验组Ⅰ相比,试验组ⅡNrf2、GPX4、SLC7A11蛋白表达水平及GSH含量显著上升(P<0.05),ROS、MDA、Fe^(2+)含量显著下降,JC-1含量显著上升(P<0.05);试验组ⅢNrf2、GPX4、SLC7A11蛋白表达水平及GSH含量显著下调(P<0.05),ROS、MDA、Fe^(2+)含量显著上升,JC-1含量显著下降(P<0.05)。本研究表明,rCK14-3-3蛋白可通过Nrf2-SLC7A11/GPX4信号通路诱导MAC-T发生铁死亡,为今后靶向干预铁死亡防治念珠菌性奶牛乳房炎提供了数据支持。 展开更多
关键词 重组克柔念珠菌14-3-3蛋白 奶牛乳腺上皮细胞 核因子E2相关因子2-溶质载体家族7A11/GPX4信号通路 铁死亡
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miR-193a-5p在脂多糖诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎性反应中的作用
9
作者 李宇航 虎喜敏 +2 位作者 罗仍卓么 王正兴 王兴平 《华南农业大学学报》 北大核心 2025年第6期872-882,共11页
【目的】本研究通过构建脂多糖(LPS)诱导的奶牛乳腺上皮细胞系(MAC-T)炎性反应模型,旨在探究miR-193a-5p对奶牛乳腺炎的作用。【方法】检测LPS诱导的MAC-T细胞炎性反应模型中miR-193a-5p的表达水平。通过在MAC-T细胞中过表达miR-193a-5p... 【目的】本研究通过构建脂多糖(LPS)诱导的奶牛乳腺上皮细胞系(MAC-T)炎性反应模型,旨在探究miR-193a-5p对奶牛乳腺炎的作用。【方法】检测LPS诱导的MAC-T细胞炎性反应模型中miR-193a-5p的表达水平。通过在MAC-T细胞中过表达miR-193a-5p,使用qPCR、CCK-8和EdU等技术,检测炎症因子、增殖和凋亡相关基因的表达变化,以及细胞活力和增殖情况。利用生物信息学方法预测miR-193a-5p的候选靶基因,并通过GO和KEGG分析揭示其潜在的作用机制。【结果】在LPS诱导MAC-T细胞3、6和12 h时,miR-193a-5p表达水平显著下调(P<0.01)。过表达miR-193a-5p后能够促进炎症细胞因子(IL-1β和IL-8)和凋亡基因(CASP9)的表达,抑制增殖基因(BCL2和PCNA)的表达,同时抑制细胞活力和增殖。共预测到44个miR-193a-5p的候选靶基因,这些基因富集在真核生物核糖体发生、黏附连接、NF-κB信号通路、Wnt信号通路和阿尔兹海默症等信号通路,主要参与细胞分化的调控和细胞因子生成的调控等生物学过程。【结论】miR-193a-5p在LPS诱导的MAC-T细胞中表达下调,过表达miR-193a-5p可能通过NF-κB和Wnt信号通路促进炎症反应、抑制增殖并促进凋亡,表明其在奶牛乳腺炎发生中的潜在调控作用。 展开更多
关键词 奶牛 LPS 乳腺上皮细胞 miR-193a-5p 乳腺炎 炎性反应
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lncRNA TCONS_00143126在奶牛乳腺上皮细胞炎症反应中的表达及生物信息学分析
10
作者 冯芬 李彦霞 +3 位作者 王晋鹏 董益闻 罗仍卓么 王兴平 《华北农学报》 北大核心 2025年第1期199-206,共8页
为了深入探究lncRNA TCONS_00143126在E.coli型奶牛乳腺炎中的表达模式及其生物学功能,采用奶牛乳腺上皮细胞的cDNA为模板,运用PCR克隆及测序技术来确认lncRNA TCONS_00143126的存在,并进行lncRNA的亚细胞定位分析、预测可能靶向的miRN... 为了深入探究lncRNA TCONS_00143126在E.coli型奶牛乳腺炎中的表达模式及其生物学功能,采用奶牛乳腺上皮细胞的cDNA为模板,运用PCR克隆及测序技术来确认lncRNA TCONS_00143126的存在,并进行lncRNA的亚细胞定位分析、预测可能靶向的miRNA及靶基因,并通过KEGG通路富集分析探讨其在奶牛乳腺炎中的潜在作用机制。此外,采用LPS诱导bMECs以构建奶牛乳腺炎体外模型,并通过RT-qPCR技术检测lncRNA TCONS_00143126在LPS诱导bMECs 6,12,24 h的表达情况。结果表明,lncRNA TCONS_00143126是真实存在的,在LPS诱导的bMECs中的表达量显著上调,且主要分布于细胞核中。靶基因预测及KEGG富集分析结果显示,lncRNA TCONS_00143126可能通过靶向的miRNA(bta-miR-133a、bta-miR-193a-5p和bta-miR-375等)和靶基因(IFNE、SLC2A10、MEX3B)来调节JAK-STAT、mTOR和MAPK等炎症信号通路,进而在奶牛乳腺上皮细胞炎症中发挥作用。 展开更多
关键词 奶牛 lncRNA TCONS_00143126 乳腺上皮细胞 炎症 生物信息学分析
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干扰lncRNARNF5-AS1对奶牛乳腺上皮细胞炎症反应的影响
11
作者 虎喜敏 周冉 +3 位作者 王正兴 李宇航 罗仍卓么 王兴平 《生物技术通报》 北大核心 2025年第5期333-342,共10页
【目的】长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)能够通过直接调控下游分子或竞争性结合微小RNA(microRNA,miRNA)参与奶牛乳房炎症过程。lncRNA RNF5-AS1是新发现的lncRNA,旨在分析lncRNA RNF5-AS1在奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammar... 【目的】长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)能够通过直接调控下游分子或竞争性结合微小RNA(microRNA,miRNA)参与奶牛乳房炎症过程。lncRNA RNF5-AS1是新发现的lncRNA,旨在分析lncRNA RNF5-AS1在奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,bMECs)炎症反应中的作用。【方法】利用RT-PCR技术进行lncRNA RNF5-AS1的克隆,采用核质分离法探究其在bMECs中的亚细胞定位情况。采用脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导bMECs建立炎症模型,并利用RTqPCR检测lncRNA RNF5-AS1在炎性bMECs中的表达水平;干扰lncRNA RNF5-AS1后,检测促炎细胞因子表达水平,并利用CCK-8法和EdU法分别评估细胞活力和增殖能力;通过流式细胞术分析细胞凋亡情况。进一步通过在线工具预测lncRNA RNF5-AS1的潜在靶基因。【结果】lncRNA RNF5-AS1长度为1125 bp,主要分布于细胞质中。在LPS诱导的bMECs炎症模型中,lncRNA RNF5-AS1表达水平显著上调;干扰lncRNA RNF5-AS1后,促炎因子IL-6和IL-8的表达水平显著下调,细胞活力和增殖能力显著增加,细胞凋亡水平极显著降低。KEGG结果表明,lncRNA RNF5-AS1可能通过靶向bta-miR-375、bta-miR-615、bta-miR-193a-5p、btamiR-1291和bta-miR-1468而调控细胞炎症反应。【结论】lncRNA RNF5-AS1在bMECs炎症反应中表达上调,干扰后会抑制促炎因子的表达和细胞凋亡,提升细胞活力和增殖能力,提示其参与奶牛乳房炎的调控。 展开更多
关键词 奶牛乳房炎 lncRNA RNF5-AS1 乳腺上皮细胞 炎症因子
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lncRNA PFN1-AS1在奶牛乳腺上皮细胞炎症反应中的作用
12
作者 虎喜敏 罗仍卓么 +2 位作者 周冉 李宇航 王兴平 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第11期5875-5887,共13页
长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)在奶牛乳腺炎中存在差异表达,但其调控奶牛乳腺炎的分子机制尚不清楚。本研究旨在探究新发现的差异表达lncRNA TCONS_00062289在奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells, bMECs)... 长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)在奶牛乳腺炎中存在差异表达,但其调控奶牛乳腺炎的分子机制尚不清楚。本研究旨在探究新发现的差异表达lncRNA TCONS_00062289在奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells, bMECs)炎症反应中的作用。因该lncRNA的序列与肌动蛋白单体结合蛋白反义链(profilin1 antisense, PFN1-AS1)相同,将其命名为lncRNA PFN1-AS1。采用RT-PCR技术克隆lncRNA PFN1-AS1,预测lncRNA PFN1-AS1的功能。采用脂多糖(lipopolysaccharides, LPS)诱导bMECs建立炎症细胞模型,探究在炎症模型中干扰lncRNA PFN1-AS1对细胞炎症、增殖和凋亡的影响。结果显示:lncRNA PFN1-AS1长度为811 bp,可能参与调控细胞凋亡和炎症过程。lncRNA PFN1-AS1主要分布于细胞质中。在LPS诱导的bMECs炎症模型中,lncRNA PFN1-AS1表达水平显著下降(P<0.05);干扰lncRNA PFN1-AS1后,促炎细胞因子白介素(interleukin, IL)6、IL-8和IL-1β的转录和分泌水平均显著增加(P<0.05)。增殖基因细胞周期蛋白依赖激酶(cyclin dependent kinase,CDK)2、CDK4和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达水平显著下降(P<0.05),细胞活力值和增殖率显著下降(P<0.05);凋亡基因半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cysteinyl aspartate specific proteinase,CASP)3、CASP8和Bcl-2相关X蛋白(bcl-2-associated X protein,BAX)的表达水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率极显著增加(P<0.01)。干扰lncRNA PFN1-AS1后促进了IL-6、IL-8和IL-1β的转录和蛋白分泌,促进了细胞凋亡水平,同时降低了细胞活力和增殖能力,这些结果揭示了lncRNA PFN1-AS1在bMECs炎症中的作用,为进一步探究其在奶牛乳腺炎中的作用提供了科学依据。 展开更多
关键词 奶牛乳腺上皮细胞 lncRNA PFN1-AS1 脂多糖 炎症反应
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玉米赤霉烯酮对奶牛乳腺上皮细胞生长和乳脂合成相关基因表达的影响 被引量：1
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作者 马梓峰 李巧 +8 位作者 徐红梅 李悦悦 殷实 何翃闳 熊燕 兰道亮 李键 熊显荣 付伟 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2024年第1期201-210,共10页
旨在探索不同浓度玉米赤霉烯酮(ZEN)对奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)生长和乳脂合成相关基因表达的影响。首先,用不同剂量ZEN处理MAC-T细胞36 h,血细胞计数板统计细胞数量,染色并分析细胞凋亡与坏死情况,筛选ZEN添加的合适剂量;接着,试剂盒检... 旨在探索不同浓度玉米赤霉烯酮(ZEN)对奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)生长和乳脂合成相关基因表达的影响。首先,用不同剂量ZEN处理MAC-T细胞36 h,血细胞计数板统计细胞数量,染色并分析细胞凋亡与坏死情况,筛选ZEN添加的合适剂量;接着,试剂盒检测ZEN对MAC-T细胞中活性氧(ROS)以及线粒体膜电位的影响;最后,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术,分析ZEN对MAC-T细胞增殖、凋亡、氧化应激和乳脂合成相关基因表达的影响。结果表明,低剂量ZEN(0.01~1.00μmol/L)有促进MAC-T生长的趋势,而高剂量ZEN(5.00~10.00μmol/L)显著降低MAC-T细胞数量;0.10μmol/L ZEN对MAC-T中ROS和线粒体数量无明显影响,但10.00μmol/L ZEN显著增加了MAC-T中ROS水平,降低了线粒体数量;RT-qPCR结果表明,0.10μmol/L ZEN显著促进增殖基因(CDK1、CCND2)、抗氧化基因(DHODH、GPX4)和抗凋亡基因(BCL-2)表达,但同时提高了凋亡基因(CAS-3、BAX)表达量;10.00μmol/L ZEN显著抑制增殖基因(PCNA、CDK1、CCND2)、抗氧化基因(DHODH、GPX4、AIFM2)和抗凋亡基因(BCL-2)表达,但显著促进凋亡基因(CAS-3、BAX)表达;值得注意的是,0.10μmol/L ZEN显著促进了乳脂合成相关基因(PPARγ、FASN、JAK-2),但10.00μmol/L ZEN显著抑制了这些基因表达。上述结果提示,不同浓度ZEN对MAC-T细胞的作用存在差异:0.10μmol/L ZEN可以促进MAC-T细胞生长和乳脂合成相关基因表达的同时,也会诱导凋亡基因表达;10.00μmol/L ZEN会诱导MAC-T细胞氧化应激、降低线粒体数量,抑制增殖、抗氧化、抗凋亡和乳脂合成相关基因表达,同时促进凋亡基因表达,导致细胞死亡。 展开更多
关键词 奶牛 玉米赤霉烯酮 乳腺上皮细胞 乳脂合成 增殖 凋亡
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大肠杆菌感染奶牛乳腺上皮细胞和小鼠乳腺组织致其线粒体损伤的机制研究 被引量：2
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作者 庄翠翠 韩博 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期822-833,共12页
旨在探究大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)感染奶牛乳腺上皮细胞和小鼠乳腺组织致其线粒体损伤的机制。本试验以奶牛乳腺上皮细胞和小鼠乳腺为研究对象,按试验要求分别随机分成3组:空白对照(Control)组、大肠杆菌(E.coli)组和脂多糖(l... 旨在探究大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)感染奶牛乳腺上皮细胞和小鼠乳腺组织致其线粒体损伤的机制。本试验以奶牛乳腺上皮细胞和小鼠乳腺为研究对象,按试验要求分别随机分成3组:空白对照(Control)组、大肠杆菌(E.coli)组和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)组。Control组奶牛乳腺上皮细胞和小鼠乳腺未被E.coli感染;E.coli组奶牛乳腺上皮细胞和小鼠乳腺被感染复数为5或106 CFU的E.coli感染6或24 h,LPS组奶牛乳腺上皮细胞和小鼠乳腺经1μg·mL^(-1)或20 mg·kg^(-1)体重LPS处理6或24 h,奶牛乳腺上皮细胞每组3个重复,小鼠乳腺每组6只小鼠。结果表明:1)奶牛乳腺上皮细胞胞浆中角18蛋白被染成绿色且均匀分布在细胞浆内,细胞核被DAPI染成蓝色。2)正常培养的奶牛乳腺上皮细胞内线粒体结构完整,细胞连接紧密;经E.coli感染的奶牛乳腺上皮细胞细胞间隙增大,线粒体肿胀,线粒体嵴缺失且部分模糊消失。3)E.coli感染或LPS处理使小鼠乳腺腺泡内出现中性粒细胞,且使奶牛乳腺上皮细胞和小鼠乳腺线粒体能量代谢(D(520 nm)吸光值、ATP的含量、线粒体电子传递链复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ活性降低)、线粒体的融合与分裂(Drp1、Fis1、Mfn1、Mfn 2和OPA 1 mRNA表达减少)和线粒体的生物发生(PGC-1α、NRF1、TFAM和D-Loop的基因表达下降)极显著降低(P<0.05,P<0.01)。上述研究表明,E.coli感染主要通过LPS造成奶牛乳腺上皮细胞和小鼠乳腺线粒体能量代谢紊乱、抑制线粒体分裂与融合以及减少线粒体的生物发生,进而造成线粒体损伤,最终导致乳腺炎的发生。因此,确认E.coli感染是通过诱导线粒体损伤造成奶牛乳腺炎,且线粒体损伤可能是造成乳腺损伤的重要原因之一。 展开更多
关键词 奶牛乳腺炎 大肠杆菌 线粒体 奶牛乳腺上皮细胞 小鼠乳腺
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乙酰乙酸通过抑制Nrf2诱导奶牛乳腺上皮细胞线粒体损伤 被引量：1
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作者 宋倩 高爽 +2 位作者 董昊 徐闯 孙旭东 《黑龙江八一农垦大学学报》 2024年第1期41-48,共8页
为探究乙酰乙酸(Acetoacetic acid,ACAC)是否通过抑制核转录因子NF-E2相关因子2(Nuclear factor E2-reate d factor2,Nrf2)导致奶牛乳腺上皮细胞线粒体损伤。在奶牛乳腺上皮细胞系(MAC-T)中添加0、0.6、1.2或1.8 mmol·L-1ACAC处理2... 为探究乙酰乙酸(Acetoacetic acid,ACAC)是否通过抑制核转录因子NF-E2相关因子2(Nuclear factor E2-reate d factor2,Nrf2)导致奶牛乳腺上皮细胞线粒体损伤。在奶牛乳腺上皮细胞系(MAC-T)中添加0、0.6、1.2或1.8 mmol·L-1ACAC处理24 h;用10μmol·L-1的萝卜硫素(Sulforaphane,SFN)预处理MAC-T 24 h后,加入1.2 mmol·L-1ACAC处理24 h。流式细胞术检测活性氧(Reactive oxygen species,ROS);采用JC-1染色检测线粒体膜电位变化情况;通过q-PCR测定线粒体氧化磷酸化复合物Ⅰ-Ⅴ(Oxidative phosphorylation complexesⅠ-Ⅴ,COⅠ-Ⅴ)的基因表达情况以及线粒体生物合成调节因子Nrf2、过氧化物酶体增殖体激活受体γ-γ活化剂1-α(Peroxlsome proliferator-activated re ceptor-γ coac tlvator-1α,PGC-1α)、线粒体转录因子A (Mitoc hondrial transcription factor A,TFA M)、核呼吸因子-1 (Nuclear respiratory fac tor-1,Nrf1)、线粒体DNA(Mitochondrial DNA,mt DNA);使用试剂盒检测腺嘌呤核苷三磷酸(A denosine triphosphate,ATP)含量。结果显示,ACAC处理后,ROS的含量显著升高(P<0.05),而线粒体膜电位显著下降(P<0.05),并且COⅠ、COⅡ、COⅢ、COⅣ和COⅤ的m RNA表达水平显著降低(P<0.05),PGC-1α、TFAM、Nrf1以及Nrf2的m RNA表达量显著下降(P<0.05),mtDNA含量显著降低(P<0.05),ATP含量显著降低(P<0.05),而SFN预处理缓解了上述影响。结果表明,ACAC通过抑制Nrf2信号通路诱导了MAC-T细胞线粒体损伤。 展开更多
关键词 萝卜硫素 核转录因子E2相关因子2 乙酰乙酸 奶牛乳腺上皮细胞 线粒体损伤
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脂噬对奶牛乳腺上皮细胞脂滴大小的调控研究
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作者 康方圆 刘镇滔 +5 位作者 吴奎显 倪晗 钟凯 李和平 杨国宇 韩立强 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1095-1101,共7页
脂噬是一种新的自噬形式,可以选择性识别脂滴并将其降解,在维持细胞内脂质稳态等过程中发挥着重要的作用。本研究旨在探讨奶牛乳腺上皮细胞经饥饿诱导脂噬后对细胞脂滴大小的调控作用。试验用100μmol·L^(-1)的亚油酸处理细胞24 h... 脂噬是一种新的自噬形式,可以选择性识别脂滴并将其降解,在维持细胞内脂质稳态等过程中发挥着重要的作用。本研究旨在探讨奶牛乳腺上皮细胞经饥饿诱导脂噬后对细胞脂滴大小的调控作用。试验用100μmol·L^(-1)的亚油酸处理细胞24 h,刺激细胞脂滴蓄积,然后分别饥饿诱导细胞0、6、12、24、48 h,油红O染色观察细胞内脂滴的尺寸和数量随饥饿时间的变化情况,随后饥饿诱导24 h通过免疫荧光观察脂滴和自噬蛋白LC3的共定位,蛋白免疫印迹检测细胞内自噬蛋白LC3和P62的表达,透射电镜观察脂滴自噬情况。结果发现:随着饥饿处理时间的延长,脂滴直径从1.57μm显著增加到2.12μm,每个细胞的脂滴数量显著减少,从39个·cell^(-1)减少到24个·cell^(-1),大脂滴比例显著增加,小脂滴比例显著减少(P<0.05),免疫荧光发现LC3与脂滴发生共定位,透射电镜观察发现自噬溶酶体包裹着脂滴,饥饿处理24 h后LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白的比值显著增加1倍,P62蛋白表达显著下降(P<0.05)。以上结果表明,脂噬对奶牛乳腺上皮细胞脂滴的大小发挥调控作用。 展开更多
关键词 奶牛乳腺上皮细胞 脂滴 脂噬
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GPR37L1对奶牛乳腺上皮细胞乳成分合成相关基因表达的影响
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作者 邢鹏飞 王晓雪 +4 位作者 王智慧 谢雅琳 杨洋 侯晓明 林叶 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期22-31,共10页
运用分子生物学技术构建GPR37L1表达和干扰载体,以奶牛乳腺上皮细胞为试验模型,通过瞬时转染技术构建载体转染乳腺上皮细胞,探究GPR37L1对乳成分合成相关基因表达的影响。结果表明,GPR37L1表达和干扰载体构建成功,GPR37L1过表达或干扰... 运用分子生物学技术构建GPR37L1表达和干扰载体,以奶牛乳腺上皮细胞为试验模型,通过瞬时转染技术构建载体转染乳腺上皮细胞,探究GPR37L1对乳成分合成相关基因表达的影响。结果表明,GPR37L1表达和干扰载体构建成功,GPR37L1过表达或干扰可提高或降低乳脂合成相关基因及β-酪蛋白表达,揭示GPR37L1可正向调节乳成分合成。 展开更多
关键词 奶牛乳腺上皮细胞 GPR37L1 乳脂 Β-酪蛋白 载体构建
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结缔组织生长因子体外调控奶牛乳腺上皮细胞生长和泌乳分化
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作者 王若薇 许曦瑶 +2 位作者 汤晓娜 王春梅 赵锋 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期3446-3459,共14页
旨在探究结缔组织生长因子在体外培养体系中对奶牛乳腺上皮细胞生长和泌乳分化的调控作用。本研究主要通过人为添加结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)重组蛋白和过表达CTGF基因分析其对细胞增殖、凋亡、乳脂和乳... 旨在探究结缔组织生长因子在体外培养体系中对奶牛乳腺上皮细胞生长和泌乳分化的调控作用。本研究主要通过人为添加结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)重组蛋白和过表达CTGF基因分析其对细胞增殖、凋亡、乳脂和乳蛋白合成分泌及信号通路的影响。使用EdU试剂盒和流式细胞仪分别检测细胞增殖凋亡情况;应用尼罗红染料和甘油三酯试剂盒检测细胞内脂滴数量和细胞外培养液乳脂含量;实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹检测细胞增殖凋亡,β酪蛋白,乳脂和乳蛋白合成关键信号分子以及细胞外基质细胞表面受体β1整联蛋白的表达;免疫共沉淀分析CTGF和β1整联蛋白之间的蛋白质相互作用。结果表明:体外培养时,无论CTGF重组蛋白还是CTGF过表达均能通过增强增殖、抑制凋亡促进贴壁细胞生长;实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹结果表明,CTGF在转录和翻译水平增强促增殖的CyclinD1、MAPK和Bcl2表达,抑制促凋亡的Caspase3和Bax表达;CTGF一方面上调乳脂合成关键基因FASN、SREBP1、PPARγ表达水平,促进细胞内脂滴合成和胞外甘油三酯分泌;另一方面上调乳蛋白合成关键基因PRLR、STAT5和p-STAT5表达水平,进而显著促进β酪蛋白合成;CTGF上调β1整联蛋白表达水平,Co-IP也证实了CTGF和β1整联蛋白之间存在蛋白质相互作用。综上所述,CTGF促进体外培养的奶牛乳腺上皮细胞生长及泌乳能力;CTGF与β1整联蛋白共存于黏附复合物,可以通过影响β1整联蛋白信号途径实现其部分生物学作用。 展开更多
关键词 奶牛 乳腺上皮细胞 CTGF 细胞生长 乳脂 Β-酪蛋白
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RANKL对LPS诱导奶牛乳腺上皮细胞炎症反应的作用研究
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作者 杨慧琳 马晓聪 +1 位作者 曲波 崔英俊 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2024年第8期11-15,共5页
文章研究利用LPS诱导建立奶牛乳腺上皮细胞炎症模型,过表达RANKL后,采用MTT法检测奶牛乳腺上皮细胞炎症模型中奶牛乳腺上皮细胞活力,采用荧光定量PCR技术检测奶牛乳腺上皮细胞炎症模型中炎症因子IL1β、IL6、i NOS、TNF-α的m RNA表达,... 文章研究利用LPS诱导建立奶牛乳腺上皮细胞炎症模型,过表达RANKL后,采用MTT法检测奶牛乳腺上皮细胞炎症模型中奶牛乳腺上皮细胞活力,采用荧光定量PCR技术检测奶牛乳腺上皮细胞炎症模型中炎症因子IL1β、IL6、i NOS、TNF-α的m RNA表达,探讨RANKL对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎症反应的作用。结果表明,以10μg/mL LPS处理奶牛乳腺上皮细胞24 h建立奶牛乳腺上皮细胞炎症模型,RANKL可显著提高奶牛乳腺上皮细胞炎症模型中奶牛乳腺上皮细胞活力,降低奶牛乳腺上皮细胞炎症模型中IL1β、IL6、i NOS的mRNA表达,同时显著降低奶牛乳腺上皮细胞炎症模型中TNF-α的mRNA及蛋白表达。 展开更多
关键词 奶牛乳腺上皮细胞 RANKL LPS 炎症因子
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miR-223对脂多糖诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎症反应的影响
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作者 赵天夺 王若薇 +4 位作者 张莉 魏祥飞 杨慧琳 符海鑫 王春梅 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2024年第1期28-32,共5页
以中国荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞(dairy cow mammary epithelial cell,DCMECs)为研究模型,探讨mi R-223对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的DCMECs炎症反应与乳脂合成的影响。应用Western blot检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis fac... 以中国荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞(dairy cow mammary epithelial cell,DCMECs)为研究模型,探讨mi R-223对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的DCMECs炎症反应与乳脂合成的影响。应用Western blot检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)与脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FASN)的表达情况,通过脂质体转染技术将mi R-223转染至DCMECs,qRT-PCR检测mi R-223的相对表达量,采用原位荧光技术分别检测DCMECs的凋亡与乳脂合成能力。结果表明LPS诱导DCMECs炎症反应的最佳浓度为1μg/m L;添加LPS可促进DCMECs mi R-223的表达;DCMECs转染mi R-223后,mi R-223的表达显著上调;mi R-223可下调LPS诱导的DCMECs炎症蛋白因子TNF-α,上调乳脂合成相关蛋白FASN,抑制LPS诱导的细胞凋亡,促进LPS诱导的乳脂合成。 展开更多
关键词 奶牛乳腺上皮细胞 miR-223 脂多糖 凋亡 乳脂
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