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甘草酸对海人藻酸癫痫大鼠模型癫痫发作及海马神经元损伤的影响
1
作者 陈艳 余艳华 +2 位作者 陈季南 李圣华 李军荣 《中国现代神经疾病杂志》 北大核心 2025年第4期303-310,共8页
目的探讨甘草酸对海人藻酸癫痫大鼠癫痫发作和海马神经元损伤的影响及可能作用机制。方法于大鼠海马组织注射海人藻酸制备癫痫模型,随机分为假手术组、癫痫模型组和甘草酸干预组(25 mg/kg组和50 mg/kg组),观察各组癫痫发作潜伏期及严重... 目的探讨甘草酸对海人藻酸癫痫大鼠癫痫发作和海马神经元损伤的影响及可能作用机制。方法于大鼠海马组织注射海人藻酸制备癫痫模型,随机分为假手术组、癫痫模型组和甘草酸干预组(25 mg/kg组和50 mg/kg组),观察各组癫痫发作潜伏期及严重程度、监测急性发作期异常脑电活动,免疫组化染色和免疫印迹法检测海马CA3区神经元损伤程度及高迁移率族蛋白1(HMGB1)表达变化。结果与模型组相比,甘草酸25 mg/kg组和50 mg/kg组大鼠癫痫发作潜伏期延长[(109.33±42.84)min对(51.17±22.31)min,t=-2.950,P=0.015;(109.50±35.79)min对(51.17±22.31)min,t=-3.388,P=0.007],模型制备后6 h内达≥Ⅳ级发作频次减少[(2.83±0.75)次对(5.00±1.55)次,t=3.081,P=0.012;(2.67±1.75)次对(5.00±1.55)次,t=2.445,P=0.035],脑电图痫样放电减少。癫痫发作急性期,模型组大鼠海马CA3区神经元数目减少且少于假手术组[(40.33±5.69)个对(72.33±7.51)个;t=5.886,P=0.004],甘草酸25 mg/kg组和50 mg/kg组神经元数目增加且多于模型组[(58.33±2.52)个对(40.33±5.69)个,t=-5.014,P=0.007;(57.00±6.25)个对(40.33±5.69)个,t=-3.418,P=0.027]。免疫组化染色显示,模型组大鼠海马CA3区HMGB1表达水平[积分光密度值(IOD)]升高且高于假手术组[(3.79±0.50)×10^(6)IOD对(2.16±0.45)×10^(6)IOD;t=-4.216,P=0.014],甘草酸25 mg/kg组和50 mg/kg组海马CA3区HMGB1表达水平下降且低于模型组[(2.50±0.52)×10^(6)IOD对(3.79±0.50)×10^(6)IOD,t=3.090,P=0.037;(2.66±0.44)×10^(6)IOD对(3.79±0.50)×10^(6)IOD,t=2.955,P=0.042]。免疫印迹法显示,模型组大鼠海马组织HMGB1表达水平(相对灰度值)高于假手术组(1.19±0.17对0.54±0.14;t=-5.078,P=0.007),甘草酸25 mg/kg组和50 mg/kg组海马组织HMGB1表达降低且低于模型组(0.65±0.04对1.19±0.17,t=5.286,P=0.028;0.58±0.13对1.19±0.17,t=4.953,P=0.008)。结论甘草酸可延长癫痫模型大鼠发作潜伏期、降低发作严重程度、减少脑电图痫样放电,并缓解海马神经元损伤,其作用机制可能与抑制海马组织HMGB1表达有关。 展开更多
关键词 癫痫 红藻氨酸 甘草酸 海马 神经元 高迁移率族蛋白质类 免疫组织化学 印迹法 蛋白质 大鼠 疾病模型 动物
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新生大鼠海马源性神经干细胞的分离培养及其向胆碱能神经元定向诱导分化研究(英文) 被引量：2
2
作者 罗湘颖 杨志敏 +4 位作者 宋晓斌 刘苏 赵匡彦 冯忠堂 王廷华 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期190-194,共5页
本研究目的是从新生SD大鼠海马分离、培养神经干细胞并诱导其向胆碱能神经元方向分化。利用含b FGF(20ng/ml)和B27的无血清DMEM/F12培养基培养新生SD大鼠海马分离的具有自我更新和多向分化能力的细胞群,用免疫细胞化学技术检测巢蛋白(ne... 本研究目的是从新生SD大鼠海马分离、培养神经干细胞并诱导其向胆碱能神经元方向分化。利用含b FGF(20ng/ml)和B27的无血清DMEM/F12培养基培养新生SD大鼠海马分离的具有自我更新和多向分化能力的细胞群,用免疫细胞化学技术检测巢蛋白(nestin),并于分化后分别检查特异性成熟神经细胞、星形胶质细胞、少突胶质细胞的标记抗原β微管蛋白(Tuj1 )、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和半乳糖脑苷脂(Galc)的表达;用鸡胚骨骼肌提取液,诱导神经干细胞向胆碱能神经元方向分化。结果显示:从海马分离的细胞群具有自我更新能力,表达nestin,分化成熟后的细胞表达神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的特异性抗原;与对照组3. 9%相比,鸡胚骨骼肌提取液可以诱导这些细胞中的9. 6%分化成为胆碱能神经元。提示分离的细胞具有自我更新能力和多向分化潜能,是中枢神经系统的干细胞;在加有鸡胚骨骼肌提取液的培养基诱导下,能向胆碱能神经元方向分化。 展开更多
关键词 大鼠 海马源性神经干细胞 细胞培养 胆碱能神经元 诱导 分化 免疫细胞化学
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改良的胎鼠海马神经元原代培养及模拟糖尿病并发抑郁环境对其的损伤作用 被引量：26
3
作者 刘检 王宇红 +4 位作者 徐雅岚 孟盼 刘林 杨蕙 韩远山 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期459-465,共7页
目的:建立一种改良的胎鼠海马神经元原代培养方法,研究模拟糖尿病并发抑郁(diabetes mellitus with depression,DD)环境对其的损伤作用。方法:取胎龄18 d的SD大鼠,体视显微镜下分离海马,0.25%胰蛋白酶和0.2%胶原酶(1∶1)消化后进行体外... 目的:建立一种改良的胎鼠海马神经元原代培养方法,研究模拟糖尿病并发抑郁(diabetes mellitus with depression,DD)环境对其的损伤作用。方法:取胎龄18 d的SD大鼠,体视显微镜下分离海马,0.25%胰蛋白酶和0.2%胶原酶(1∶1)消化后进行体外培养,分别观察培养后4 h、24 h、5 d、8 d、14 d海马神经元的基本形态结构;神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)免疫细胞化学染色进行细胞鉴定。采用高糖联合皮质酮造模构建类似糖尿病并发抑郁症状的模拟DD环境,MTT法检测神经元的存活率;流式AnnexinV/PI双染和Hoechst荧光染色检测神经元的凋亡情况。结果:经NSE免疫细胞化学鉴定,培养7 d后的神经元纯度达95%以上,细胞胞体成球形,树突分支明显,并相互交织成丰富的神经网络;高糖、皮质酮及两者联用造模18 h后,与正常对照组相比,MTT检测细胞存活率分别为53.1%、64.3%和56.7%,P<0.05;流式细胞仪检测正常对照组、高糖组、皮质酮组、两者联用组Q3区的比例(分别为71.6%、47.9%、53.6%和39.2%),明显低于阴性对照组(98.5%),P<0.05。后四者Q2+Q4区总比例分别为24.4%、46.6%、40.4%、67.0%;Hoechst染色结果提示上述三个造模组的神经元细胞核均出现不同程度的核染色质聚集、浓缩,甚至核碎裂,呈现出典型的凋亡特征。结论:成功建立一种操作简便、细胞纯度佳、活性好、产率高的胎鼠海马神经元原代培养方法,验证了模拟DD环境对海马神经元的损伤作用,为体外深入研究DD的发病机制及药物防治提供了实验依据。 展开更多
关键词 细胞培养 海马神经元 糖尿病 抑郁症 模拟DD环境 凋亡 胎鼠
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新生大鼠海马神经元原代培养方法的研究 被引量：39
4
作者 王英 车宇 +2 位作者 苗建亭 李柱一 王者晋 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期197-199,共3页
目的 :研究和比较 3种不同培养神经元的方法 ,提供一种纯化效率和存活率均较高的培养技术。方法 :取新生SD大鼠的海马区 ,应用一般培养法、加阿糖胞苷法、加阿糖胞苷和神经生长因子法培养神经元 ,观察神经元的形态。用倒置显微镜观察和... 目的 :研究和比较 3种不同培养神经元的方法 ,提供一种纯化效率和存活率均较高的培养技术。方法 :取新生SD大鼠的海马区 ,应用一般培养法、加阿糖胞苷法、加阿糖胞苷和神经生长因子法培养神经元 ,观察神经元的形态。用倒置显微镜观察和MTT比色分析检测神经元的存活率。用ABC免疫组化染色法 ,比较 3种不同培养方法在不同培养时间所获得神经元的纯度。结果 :加阿糖胞苷和神经生长因子培养组神经元生长良好 ,纯度和存活率均较高。结论 :加阿糖胞苷和神经生长因子培养神经元的方法具有简便可行 ,易于生长的优点 。 展开更多
关键词 新生大鼠 神经元 细胞培养 一般培养法 加阿糖胞苷法 神经生长因子
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大鼠海马神经元neurobasal无血清的原代培养方法 被引量：12
5
作者 王圆圆 张文斌 +5 位作者 龚晓兵 郭国庆 陈静 辛莉 沈伟哉 原林 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期547-551,共5页
目的：建立纯度和活力较高的无血清原代培养海马神经元的方法。方法：新生SD大鼠海马，用neurobasal培养基培养，免疫荧光鉴定神经元纯度，MTT法检测其活力。结果：神经元接种12～24h后贴壁，并长出细小突起，3d具有典型神经元形态特征... 目的：建立纯度和活力较高的无血清原代培养海马神经元的方法。方法：新生SD大鼠海马，用neurobasal培养基培养，免疫荧光鉴定神经元纯度，MTT法检测其活力。结果：神经元接种12～24h后贴壁，并长出细小突起，3d具有典型神经元形态特征，4d突起形成稀疏的神经纤维网络，8d后神经元5～10个聚集成团，突起密集，生长稳定，12d后出现细胞碎片。Tubulin荧光染色显示清晰的神经元，突起绵长且相互交织，占细胞总数的66．7％；GFAP荧光染色的细胞数量少，突起短粗，占33．7％。培养1～5d MTT代谢率逐渐上升，6～11d处于平台期，11d后下降。结论：neurobasal无血清培养获得的神经元纯度大于60％，6～11d的细胞适于细胞学实验。 展开更多
关键词 神经元 原代培养 neurobasal培养基 海马 大鼠
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低氧预适应可减少缺氧—复氧后大鼠海马培养神经元凋亡 被引量：7
6
作者 丁爱石 王福庄 +3 位作者 吴丽颖 于顺 赵彤 范明 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期7-10,共4页
用原位末端标记 ( TUNEL )法观察低氧预适应对大鼠海马培养神经元缺氧 -复氧后神经元凋亡的影响。结果显示 ,经低氧预适应的海马神经元缺氧 -复氧后凋亡神经元百分率明显低于对照组。本结果表明 ,低氧预适应可使体外培养的海马神经元对... 用原位末端标记 ( TUNEL )法观察低氧预适应对大鼠海马培养神经元缺氧 -复氧后神经元凋亡的影响。结果显示 ,经低氧预适应的海马神经元缺氧 -复氧后凋亡神经元百分率明显低于对照组。本结果表明 ,低氧预适应可使体外培养的海马神经元对缺氧产生耐受 ,减少缺氧 展开更多
关键词 低氧预处理 海马神经元 缺氧 调亡 大鼠
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新生大鼠离体海马神经元原代培养方法及鉴定 被引量：9
7
作者 尹金宝 常全忠 韩宇东 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期613-616,共4页
目的:建立一种稳定的生后大鼠离体海马神经元的培养方法。方法:无菌环境下将出生24 h内SD大鼠断头取脑分离海马,经消化后差速贴壁,采用无血清培养基进行培养,倒置显微镜下观察不同时间段细胞生长形态变化:采用Hoechst33258与NeuN抗体双... 目的:建立一种稳定的生后大鼠离体海马神经元的培养方法。方法:无菌环境下将出生24 h内SD大鼠断头取脑分离海马,经消化后差速贴壁,采用无血清培养基进行培养,倒置显微镜下观察不同时间段细胞生长形态变化:采用Hoechst33258与NeuN抗体双染方法鉴定神经元。结果:采用差速贴壁后,使用无血清培养基培养的神经元生长良好,纯度较高,12 d时经鉴定神经元纯度可以达到92%以上。结论:差速离心法后可以采用无血清培养神经元,培养的神经元具有纯度高,结果稳定的优点,该方法为以后进行相关的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 海马神经元 细胞培养 鉴定 大鼠
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Brn-4抗体对大鼠海马神经干细胞分化为神经元的影响 被引量：3
8
作者 田美玲 胡文忠 +3 位作者 金国华 秦建兵 谭雪锋 施金洪 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期85-88,共4页
为探讨Brn-4在海马神经干细胞(NSCs)向神经元分化过程中的作用,分别制备成年SD大鼠海马伞切割侧和正常侧海马提取液;将从鼠胚海马中分离、克隆和扩增的神经干细胞球分成6组:(1)切割组:加入含切割侧海马提取液的DMEM/F12培养基;(2)切割... 为探讨Brn-4在海马神经干细胞(NSCs)向神经元分化过程中的作用,分别制备成年SD大鼠海马伞切割侧和正常侧海马提取液;将从鼠胚海马中分离、克隆和扩增的神经干细胞球分成6组:(1)切割组:加入含切割侧海马提取液的DMEM/F12培养基;(2)切割阻断组:在切割组培养基中加入Brn-4多克隆抗体;(3)正常组:加入含正常侧海马提取液的DMEM/F12培养基;(4)正常阻断组:在正常组培养基中加入Brn-4多克隆抗体;(5)空白组:加入单纯的DMEM/F12培养基;(6)空白阻断组:在空白组培养基中加入Brn-4多克隆抗体。培养后第14d对NSCs分化的神经元进行MAP-2免疫荧光检测,图像处理系统计数各组MAP-2阳性神经元数、处理胞体面积和细胞周长,STATA7.0软件进行统计分析。结果显示:各组以上三项形态学指标从优到劣的排列顺序为:切割组、正常组、切割阻断组、正常阻断组、空白组和空白阻断组。统计分析结果表明,除空白组与空白阻断组三项指标无显著性差异外,其余各组间差异均有显著性意义(P<0.05)。上述结果提示,Brn-4多克隆抗体在体外能部分地阻断切割海马伞侧海马提取液促进NSCs向神经元分化的作用,因而Brn-4在海马NSCs向神经元分化过程中可能发挥重要作用。 展开更多
关键词 Brn-4 神经干细胞 海马提取液 分化 神经元 大鼠
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鼠胚脑皮质及海马神经元原代培养方法的改进 被引量：14
9
作者 孙海梅 季凤清 +2 位作者 赵天德 岳旭 郭崇洁 《首都医科大学学报》 CAS 2000年第3期230-231,共2页
关键词 鼠胚脑皮质 海马神经元 原代培养
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移植神经干细胞对血管性痴呆大鼠海马胆碱能神经元的影响 被引量：9
10
作者 叶建新 王玮 郑志 《中国康复理论与实践》 CSCD 2005年第1期10-12,共3页
目的研究神经干细胞移植后血管性痴呆 (VD)大鼠海马胆碱能神经元的变化。方法制作VD大鼠模型 ,随机取用VD大鼠模型 12只 ,分移植组 6只 ,痴呆组 6只。另外 ,取假手术组 6只。新生大鼠脊髓神经干细胞经分离培养和纯化 ,移植于大鼠海马。... 目的研究神经干细胞移植后血管性痴呆 (VD)大鼠海马胆碱能神经元的变化。方法制作VD大鼠模型 ,随机取用VD大鼠模型 12只 ,分移植组 6只 ,痴呆组 6只。另外 ,取假手术组 6只。新生大鼠脊髓神经干细胞经分离培养和纯化 ,移植于大鼠海马。术后 8周 ,免疫组织化学及荧光染色检测神经干细胞能否存活、迁移及 3组大鼠海马CA1区胆碱能神经元数目的变化。结果移植组大鼠海马CA1区胆碱能神经元数目较痴呆组明显增多。结论神经干细胞移植后能迁移至海马 ,分化或诱导海马产生具有ChAT活性神经元 ,所产生的ChAT活性神经元可能就是胆碱能神经元。 展开更多
关键词 神经干细胞 移植 血管性痴呆 海马 胆碱能神经元 大鼠
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Aβ_((31-35))和ApoE_4对培养大鼠海马神经元的存活和生长的影响 被引量：4
11
作者 郭文平 周丽华 +1 位作者 谢瑶 姚志彬 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期261-264,共4页
为探讨β-淀粉样蛋白 ( Aβ)和载脂蛋白 E4( Apo E4)对培养大鼠海马神经元的作用 ,本文采用了神经细胞培养、MTT比色法、免疫组化及图象分析等技术进行了研究。结果显示 :( 1) MTT法测得 Aβ( 3 1 - 3 5) ( 10 μmol/ L) +Apo E4( 10 μ... 为探讨β-淀粉样蛋白 ( Aβ)和载脂蛋白 E4( Apo E4)对培养大鼠海马神经元的作用 ,本文采用了神经细胞培养、MTT比色法、免疫组化及图象分析等技术进行了研究。结果显示 :( 1) MTT法测得 Aβ( 3 1 - 3 5) ( 10 μmol/ L) +Apo E4( 10 μg/ ml)和 Aβ( 3 1 - 3 5)( 2 0μmol/ L ) +Apo E4( 10μg/ ml)的 OD值 ,分别为 0 .197± 0 .0 2 1和 0 .191± 0 .0 2 4,明显低于对照组 ( 0 .2 2 9± 0 .0 3,P<0 .0 5 )。( 2 )这两组神经元胞体的最长径分别为 ( 10 .0 7± 1.98)μm和 ( 10 .0 1± 1.6 8)μm;最短径分别为 ( 6 .40± 0 .77)μm和 ( 6 .2 8± 0 .89) μm,明显低于对照组、Apo E4组、Aβ( 3 1 - 3 5) 组的最长径和最短径 ( P<0 .0 5 ) ;其突起平均长度分别为 ( 2 6 .36± 7.73) μm和 ( 2 3.86± 7.2 9)μm,明显低于对照组 ( 30 .88± 9.79)μm、Apo E4组 ( 30 .6 0± 7.30 )μm以及 Aβ( 3 1 - 3 5) ( 10μmol/ L )组 ( 2 8.34± 4.40 )μm( P<0 .0 5 )。 ( 3) Aβ( 3 1 - 3 5) ( 2 0 μmol/ L)组的突起平均长度为 ( 2 6 .81± 5 .42 ) μm,也明显低于对照组 ( 30 .88± 9.79) μm和Apo E4组 ( 30 .6 0± 7.30 )μm ( P<0 .0 5 )。本研究结果提示 ,Aβ( 3 1 - 3 5) +Apo E4对神经元的抑制作用较 Aβ( 展开更多
关键词 Β-淀粉样蛋白 载脂蛋白E4 海马 大鼠 神经元 存活 生长 AD 病理
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红藻氨酸致痫后大鼠海马神经元和星形胶质细胞的反应性变化 被引量：3
12
作者 刘智良 徐如祥 +4 位作者 杨志军 戴宜武 罗成义 杜谋选 姜晓丹 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第11期1151-1155,共5页
目的研究红藻氨酸(Kainic acid, KA)诱导大鼠癫痫发作后海马内神经元和星形胶质细胞的反应变化情况。方法立体定向大鼠侧脑室内注射KA引起大鼠癫痫发作,用抗即早反应基因Fos蛋白和抗神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的免疫组织化学方法,分... 目的研究红藻氨酸(Kainic acid, KA)诱导大鼠癫痫发作后海马内神经元和星形胶质细胞的反应变化情况。方法立体定向大鼠侧脑室内注射KA引起大鼠癫痫发作,用抗即早反应基因Fos蛋白和抗神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的免疫组织化学方法,分别观察痫性发作后在各时间点反应性神经元和星形胶质细胞在海马各区的分布情况。结果KA诱导大鼠癫痫发作后,海马内Fos阳性神经元和GFAP阳性星形胶质细胞明显增多。癫痫发作30 min后GFAP开始增多,1 h达高峰;1 h 后Fos阳性产物开始增多,2 h达高峰。结论海马内反应性的神经元和星形胶质细胞在癫痫发作后增加,反应性星形胶质细胞可能参与癫痫的发生及其调节。 展开更多
关键词 红藻氨酸 大鼠 海马 神经元 星形胶质细胞 癫痫
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大鼠惊厥持续状态及培养海马神经元惊厥样放电后的BDNF表达研究 被引量：1
13
作者 何志慧 蒋莉 +2 位作者 张明 胡越 张晓萍 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2007年第3期225-228,274,共5页
目的:结合在体和体外实验,探索脑源性神经营养因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)在惊厥发作后表达的变化。方法:建立生后20天幼年(IRs)及2～3月健康成年(ARs)Wistar大鼠惊厥持续状态(Status convulsion,SC)模型、原代培养... 目的:结合在体和体外实验,探索脑源性神经营养因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)在惊厥发作后表达的变化。方法:建立生后20天幼年(IRs)及2～3月健康成年(ARs)Wistar大鼠惊厥持续状态(Status convulsion,SC)模型、原代培养海马神经元惊厥样放电模型,采用免疫组化、ELISA对SC后6个时点大鼠海马、惊厥样放电后海马神经元BDNF的表达变化进行观察分析。结果:(1)SC后大鼠海马各区BDNF阳性着色均有不同程度的增强,以齿状回更为明显;幼年鼠海马BDNF含量在SC后3h即显著增加(从惊厥前的6.65±1.60pg/μg升至11.22±2.44pg/μg)(P<0.05),至惊厥后1天达到高峰,继之逐渐回落,SC后3天仍显著高于发作前水平,7天接近正常;成年鼠海马BDNF在SC后1天显著增加(从惊厥前的5.91±1.63pg/μg升至13.37±5.61pg/μg)(P<0.05),至惊厥后3天达到高峰并高于同时点幼年鼠(P<0.05),之后逐渐下降,持续7天左右。(2)原代培养海马神经元惊厥样放电后24h细胞样本BDNF表达显著高于对照组(P<0.05)。结论:惊厥发作在动物和细胞模型均引起了自身BDNF的高表达,可能是海马神经元对惊厥损伤的内源性保护反应。幼年与成年大鼠海马惊厥后的BDNF表达在反应速度、维持程度上的差异性可能与未成熟脑对自身的保护性反应有关。 展开更多
关键词 WISTAR大鼠 海马神经元 惊厥 BDNF
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钾通道在培养大鼠海马神经元凋亡性容积减少中的作用 被引量：1
14
作者 王颖 陈明 +4 位作者 李晓明 李建国 胡平 肖中举 高天明 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第5期749-754,共6页
为探讨钾通道参与神经元凋亡的可能机制 ,在星形孢菌素 (STS)诱导的培养海马神经元凋亡模型上 ,研究了凋亡时神经细胞容积的动态变化及钾通道在其中的作用 .实验结果显示 ,钾通道阻断剂四乙铵或升高细胞外K+ 均能够明显抑制STS诱导的神... 为探讨钾通道参与神经元凋亡的可能机制 ,在星形孢菌素 (STS)诱导的培养海马神经元凋亡模型上 ,研究了凋亡时神经细胞容积的动态变化及钾通道在其中的作用 .实验结果显示 ,钾通道阻断剂四乙铵或升高细胞外K+ 均能够明显抑制STS诱导的神经元凋亡 ,并且大电导钙激活钾通道 (BK)选择性阻断剂iberiotoxin和paxilline具有同样程度的抗细胞凋亡作用 ,表明钾通道 (可能主要是BK通道 )参与了STS诱导的培养海马神经元凋亡 .在STS诱导神经元凋亡的早期就出现了细胞容积的显著减少 ,而钾通道阻断剂或升高细胞外K+ 均可阻断该细胞容积减少 .研究结果提示细胞内钾离子的外流可能参与了凋亡性细胞容积减少 ,这也可能是钾通道介导细胞凋亡的重要机制之一 . 展开更多
关键词 钾通道 培养 大鼠 海马神经元 凋亡性容积减少 细胞凋亡
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大鼠海马神经干细胞的分离、培养及鉴定 被引量：4
15
作者 郭洪波 邹飞 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2004年第10期1143-1146,共4页
目的探寻出生后1～3 d和成年大鼠海马分离、培养并鉴定神经干细胞(NSC)的可行性.方法向培养基添加碱性成纤维细胞生长因子、脑源性神经营养因子及其他生长因子,采用单细胞克隆技术,分离出生后1～3 d和成年SD大鼠海马组织并分别无血清培... 目的探寻出生后1～3 d和成年大鼠海马分离、培养并鉴定神经干细胞(NSC)的可行性.方法向培养基添加碱性成纤维细胞生长因子、脑源性神经营养因子及其他生长因子,采用单细胞克隆技术,分离出生后1～3 d和成年SD大鼠海马组织并分别无血清培养;以免疫细胞化学方法对原代和传代培养形成的克隆细胞,以及其分化后的细胞进行鉴定.结果上述条件下培养可形成悬浮生长的表达巢蛋白的神经球,且具有连续克隆的能力;分化后可得到具有网状联系的、分别呈神经元特异性烯醇化酶阳性和胶质纤维酸性蛋白阳性的神经元及胶质细胞.结论新生及成年SD大鼠海马存在神经干细胞. 展开更多
关键词 神经干细胞 细胞培养 细胞分化 大鼠海马
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垂体腺苷酸环化酶激活肽减轻谷氨酸引起的大鼠海马神经元细胞内钙离子浓度升高的可能机理 被引量：1
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作者 董艳 韩晞 +4 位作者 唐铁山 娄素杰 路长林 黄秀英 孙方臻 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期261-264,共4页
目的　探讨垂体腺苷酸环化酶激活肽 38(PACAP 38)稳定海马神经元细胞内钙离子浓度([Ca2 + ]i)作用的可能机理。方法　取新生SD大鼠海马 ,用B2 7无血清培养基培养神经元 ;经Fura 2 /AM标记后 ,共聚焦显微镜下测定 [Ca2 + ]i。结果PACAP ... 目的　探讨垂体腺苷酸环化酶激活肽 38(PACAP 38)稳定海马神经元细胞内钙离子浓度([Ca2 + ]i)作用的可能机理。方法　取新生SD大鼠海马 ,用B2 7无血清培养基培养神经元 ;经Fura 2 /AM标记后 ,共聚焦显微镜下测定 [Ca2 + ]i。结果PACAP 38(10pmol·L- 1)能抑制谷氨酸 (5 0 0 μmol·L- 1)所致海马神经元 [Ca2 + ]i 升高 ,而Rp型硫化环腺苷酸 (2 0 μmol·L- 1)或氯化白屈菜赤碱 (0 .1μmol·L- 1)能阻断PACAP 38的抑制作用。二丁基环腺苷酸 (0 .1～ 10 0 μmol·L- 1)和豆寇酰佛波醇乙酯(0 .0 1～ 10 μmol·L- 1)也能抑制谷氨酸引起的海马神经元 [Ca2 + ]i 升高。结论　PACAP 38减轻谷氨酸引起的海马神经元 [Ca2 + ]i 展开更多
关键词 垂体腺苷酸环化酶激活肽 谷氨酸 大鼠 海马 神经元细胞 钙离子
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新生Balb/c鼠脑神经元和星形胶质细胞纯培养的实验研究 被引量：1
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作者 赵兰娟 龚蕴贞 +2 位作者 林维芬 胡涛 张咏南 《安徽医科大学学报》 CAS 2001年第4期251-254,共4页
目的　探讨纯培养神经元和星形胶质细胞的合适方法。方法　采用Balb/c鼠尾胶原、大鼠尾胶原、阿糖胞苷、贴壁处理及传代培养等方法纯培养Balb/c鼠神经元和星形胶质细胞。结果　纯培养Balb/c鼠神经元的纯度为 90 % ,纯培养星形胶质细胞... 目的　探讨纯培养神经元和星形胶质细胞的合适方法。方法　采用Balb/c鼠尾胶原、大鼠尾胶原、阿糖胞苷、贴壁处理及传代培养等方法纯培养Balb/c鼠神经元和星形胶质细胞。结果　纯培养Balb/c鼠神经元的纯度为 90 % ,纯培养星形胶质细胞的纯度为 97%。结论　纯培养神经元宜选择Balb/c鼠尾胶原为生长基质并经 3mg·L-1阿糖胞苷处理。纯培养星形胶质细胞宜用大鼠尾胶原为生长基质和培养 展开更多
关键词 神经元 星形胶质细胞 细胞培养 新生Balb/c鼠
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应用穿孔全细胞膜片钳记录技术研究培养大鼠耳蜗螺旋神经节神经元的基本电生理特性 被引量：1
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作者 查定军 王智明 +3 位作者 薛涛 林颖 邱建华 李云庆 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期157-160,共4页
为了深入了解耳蜗螺旋神经节(SG)神经元的基本电生理特点,本研究首先成功培养了急性分离的大鼠SG神经元,然后采用穿孔全细胞膜片钳记录技术观察了培养SG神经元的基本电生理特性。结果表明,可从培养的SG神经元记录到动作电位,且不同的SG... 为了深入了解耳蜗螺旋神经节(SG)神经元的基本电生理特点,本研究首先成功培养了急性分离的大鼠SG神经元,然后采用穿孔全细胞膜片钳记录技术观察了培养SG神经元的基本电生理特性。结果表明,可从培养的SG神经元记录到动作电位,且不同的SG神经元具有异质性的放电特征。上述结果提示穿孔全细胞膜片钳记录技术可用于体外培养耳蜗SG神经元的电生理特征研究,为开展听觉信息传导和调控的功能研究开辟了新途径。 展开更多
关键词 螺旋神经节神经元 细胞培养 穿孔全细胞膜片钳记录 大鼠
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大鼠海马CA3区神经元和星形胶质细胞三维结构重塑 被引量：1
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作者 杨志军 饶志仁 +3 位作者 徐如祥 魏玲 王晓斌 姜晓丹 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2004年第4期426-429,共4页
目的观察大鼠海马CA3区神经元锥体细胞及其周围星形胶质细胞(AST)的分布,重塑两者之间的三维构象。方法采用脑片膜片钳全细胞记录、细胞内荧光黄(LY)染色、免疫荧光和激光共聚焦显微镜检查(LSCM)相结合的技术。结果根据放电形式的不同... 目的观察大鼠海马CA3区神经元锥体细胞及其周围星形胶质细胞(AST)的分布,重塑两者之间的三维构象。方法采用脑片膜片钳全细胞记录、细胞内荧光黄(LY)染色、免疫荧光和激光共聚焦显微镜检查(LSCM)相结合的技术。结果根据放电形式的不同把海马锥体细胞分为位相型和非位相型放电神经元。LSCM下单层光学图像和三维立体重建显示许多AST紧密围绕在LY染色锥体细胞周围并形成紧密接触。2类神经元与AST形成接触的部位存在区别。非位相型放电神经元的树突和胞体周围都有许多AST形成接触的部位在,而位相型放电神经元则仅位于树突。结论不同特性海马神经元周围AST的空间分布可能存在差异。 展开更多
关键词 大鼠 海马 CA3区神经元 星形胶质细胞 三维结构重塑
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5-HTR2C重组质粒电转染至大鼠海马神经元对细胞活性的影响 被引量：1
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作者 王杰琼 高冬梅 +2 位作者 于艳红 张媛媛 张惠云 《世界科学技术-中医药现代化》 2015年第4期794-799,共6页
目的:5-羟色胺2C受体在抑郁症的发病及治疗机制中发挥重要的作用,模拟5-HTR2C表达的异常升高,建立5-HTR2C高表达的细胞模型,为抑郁症治疗药物的开发提供平台。方法:采用课题组前期已构建5-HTR2C真核表达载体;按试剂盒方法提取5-HTR2C重... 目的:5-羟色胺2C受体在抑郁症的发病及治疗机制中发挥重要的作用,模拟5-HTR2C表达的异常升高,建立5-HTR2C高表达的细胞模型,为抑郁症治疗药物的开发提供平台。方法:采用课题组前期已构建5-HTR2C真核表达载体;按试剂盒方法提取5-HTR2C重组质粒;并取新生24 h内Wistar乳鼠海马,制备海马神经元,按试剂盒方法对质粒进行电转染,并于荧光显微镜下观察转染效果;将所培养细胞分为:非转染细胞(NTC)和转染细胞(TC),转染细胞分为:转染组(TC+5-HTR2C质粒)、空质粒组(TC+空质粒)、激动剂组(TC+激动剂);为确定激动剂组细胞提取蛋白的时间,分别于加入激动剂后0、5、10、20、40、60 min提取蛋白,Western-blot检测;待各组细胞处理后,采用Western-blot检测5-HTR2C以及MEK/P-MEK的表达,以验证5-HTR2C重组质粒转染后是否仍有活性。结果:海马神经元电转染后48 h后,神经元数量较多,电转染率及生存率最高;体外培养的海马神经元中加入激动剂m CPP后5 min至60 min,MEK磷酸化水平逐渐升高,在20 min时MEK磷酸化水平已较高;与NTC相比,TC+5-HTR2C质粒和TC+激动剂组中P-MEK的蛋白水平明显升高。结论:5-HTR2C重组质粒导入海马神经元后48 h细胞生长良好,死亡率低,细胞饱满,电转染率较高,可于此时收集细胞。激动剂组可在m CPP与细胞共培养后20-60 min间收集细胞。通过比较TC+5-HTR2C质粒组及TC+激动剂组,发现加入激动剂的细胞中MEK磷酸化水平较前者要强。因此,5-HTR2C重组质粒转染至海马神经元中后仍具有生理活性,说明5-HTR2C重组质粒的转染比较成功。 展开更多
关键词 5-HTR2C重组质粒 电转染 大鼠海马神经元 抑郁症
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