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多重聚合酶链反应-毛细管电泳-激光诱导荧光法检测三种食源性致病菌 被引量：6
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作者 毛红霞 黎源倩 +2 位作者 裴晓方 何超 渠凌丽 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期473-477,共5页
建立了食品中常见致病菌大肠杆菌O157：H7的uidA基因、沙门菌的invA基因和志贺菌的ipaH基因的多重聚合酶链反应（PCR）产物的毛细管电泳快速检测方法。根据这3种致病菌的特异性基因序列设计多重PCR引物,优化PCR扩增反应体系,采用7.0g/L... 建立了食品中常见致病菌大肠杆菌O157：H7的uidA基因、沙门菌的invA基因和志贺菌的ipaH基因的多重聚合酶链反应（PCR）产物的毛细管电泳快速检测方法。根据这3种致病菌的特异性基因序列设计多重PCR引物,优化PCR扩增反应体系,采用7.0g/L甲基纤维素为筛分介质,毛细管电泳-激光诱导荧光检测法同时检测了3种常见致病菌的PCR扩增产物。在优化的多重PCR反应和毛细管筛分电泳条件下,该方法可以同时检测沙门菌、志贺菌和大肠杆菌O157：H7基因的多重PCR扩增产物,22min内即可完成3种常见致病菌的毛细管电泳检测。迁移时间的相对标准偏差为1.47%-2.07%。与凝胶电泳法比较,该法简便快速,灵敏度高,可用于多种致病菌脱氧核糖核酸的检测,为食品安全提供了一种可靠的快速检测方法。 展开更多
关键词 多重聚合酶链反应 毛细管电泳法 激光诱导荧光检测 食源性致病菌
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IHC与PCR-CE法检测735例肿瘤微卫星不稳定性的一致性分析
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作者 郭颖 程亚林 +2 位作者 赵香宇 杨鑫鑫 孟宏学 《临床与实验病理学杂志》 北大核心 2025年第8期1050-1056,共7页
目的探讨免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)染色与聚合酶链反应-毛细管电泳法(polymerase chain reaction-capillary electrophoresis,PCR-CE)检测微卫星不稳定状态的一致性和可靠性。方法收集行活检或手术切除的735例实体瘤患者... 目的探讨免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)染色与聚合酶链反应-毛细管电泳法(polymerase chain reaction-capillary electrophoresis,PCR-CE)检测微卫星不稳定状态的一致性和可靠性。方法收集行活检或手术切除的735例实体瘤患者的临床资料,采用IHC和PCR-CE法对组织样本进行微卫星状态检测。结果在344例结直肠癌(colorectal carcinoma,CRC)中,IHC结果显示:290例(84.3%)错配修复功能正常(proficient mismatch repair,pMMR),54例(15.7%)错配修复功能缺失(deficient mismatch repair,dMMR);PCR-CE检测结果显示:53例(15.4%)患者高度微卫星不稳定(high microsatellite instability,MSI-H),291例(84.6%)患者微卫星稳定(microsatellite stability,MSS)。IHC和PCR-CE检测结果的一致性分析显示Kappa值为0.923(P<0.001)。在168例子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)中,IHC结果显示:42例(25.0%)dMMR,126例(75.0%)pMMR;PCR-CE检测结果显示:39例(23.2%)为MSI-H,129例(76.8%)为MSS。两种方法检测结果一致性分析显示Kappa值为0.854(P<0.001)。在165例胃癌中,IHC结果显示:有22例(13.3%)dMMR,143例(86.7%)pMMR;PCR-CE检测结果显示:22例(13.3%)为MSI-H,143例(86.7%)为MSS/微卫星低度不稳定(low microsatellite instability,MSI-L)。IHC和PCR-CE检测结果的一致性分析显示Kappa值为0.843(P<0.001)。58例头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)中,IHC结果显示:有3例(5.2%)dMMR,55例(94.8%)pMMR;PCR-CE检测结果显示:有3例(5.2%)为MSI-H,55例(94.8%)为MSS。两种方法检测一致性分析显示Kappa值为1.000(P<0.001)。结论IHC和PCR-CE在检测CRC、EC、胃癌和HNSCC患者的MSI状态时具有较高的一致性和可靠性,联合两者应用有助于提高实体瘤患者MSI检测的准确率。 展开更多
关键词 微卫星不稳定性 免疫组织化学 聚合酶链反应-毛细管电泳法
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3种溺死相关浮游生物检验方法用于诊断溺死的比较
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作者 张晓峰 苏秦 +6 位作者 陈晓晖 吴伟斌 郑冬云 赵建 陈玲 徐曲毅 刘超 《法医学杂志》 北大核心 2025年第3期244-251,共8页
目的比较浮游生物多重聚合酶链反应-毛细管电泳检测法(polymerase chain reaction-capillary electrophoresis,PCR-CE)、SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR法(real-time quantitative PCR,qPCR)及微波消解-真空抽滤-自动扫描电子显微镜法(mic... 目的比较浮游生物多重聚合酶链反应-毛细管电泳检测法(polymerase chain reaction-capillary electrophoresis,PCR-CE)、SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR法(real-time quantitative PCR,qPCR)及微波消解-真空抽滤-自动扫描电子显微镜法(microwave digestion-vacuum filtration-automated scanning electron microscopy,MD-VF-Auto SEM)在溺死诊断中的应用效果。方法采用3种溺死相关浮游生物检验方法对212例溺死尸体及30例非溺死尸体的肺、肝、肾组织进行检验,比较3种方法在各组织中浮游生物的检出率。结果对于溺死尸体,PCR-CE法、qPCR法、MD-VF-Auto SEM法在溺死组尸体中的总检出率分别为93.9%、96.2%、95.3%,三者间总检出率差异无统计学意义(P>0.05);MD-VF-Auto SEM法在肺组织中的检出率(100.0%)高于PCR-CE法及qPCR法(P<0.05),3种方法在肝、肾组织中的检出率差异无统计学意义(P>0.05)。对于非溺死尸体,仅MD-VF-Auto SEM法在部分肝、肾组织中检出少量硅藻(小于10个/10 g),其余两种方法检测结果均为阴性。结论3种方法对溺死尸体均有良好的检验效能。MD-VF-Auto SEM法通过扫描电镜直接观察硅藻的形态特征且定性定量分析直观准确,对疑难降解检材的检验具有较大优势。PCR-CE法和qPCR法检材需求量少(0.5 g)、操作简单、检测时间短(4~7 h),易于在基层推广,适用于水中尸体的快速溺死诊断。两种DNA方法与MD-VF-Auto SEM法相结合,可以提高浮游生物的检出率,确保检验结果的可靠性,联合使用在溺死诊断应用中具有重要意义。 展开更多
关键词 法医病理学 溺死 多重聚合酶链反应-毛细管电泳检测法 实时荧光定量PCR 微波消解-真空抽滤-自动扫描电子显微镜法 浮游生物
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