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应用多重标记引物增强寡核苷酸芯片的荧光信号强度(英文) 被引量:1
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作者 文思远 曹恒杰 +3 位作者 刘军波 丁雨 陈苏红 王升启 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第8期747-752,共6页
寡核苷酸芯片技术是一种高通量发掘和采集生物信息的强大技术平台,目前已广泛应用于生物科学领域.为改善寡核苷酸芯片的分析性能,对影响芯片杂交结果的因素,如片基表面的化学处理、探针的长度、间隔臂的长度、杂交条件等,进行了深入的... 寡核苷酸芯片技术是一种高通量发掘和采集生物信息的强大技术平台,目前已广泛应用于生物科学领域.为改善寡核苷酸芯片的分析性能,对影响芯片杂交结果的因素,如片基表面的化学处理、探针的长度、间隔臂的长度、杂交条件等,进行了深入的研究和优化.对寡核苷酸芯片而言,仍有待解决的问题是如何产生更强的荧光信号来改善其检测灵敏度.利用两种类型的多个荧光分子标记的引物,来增强二维寡核苷酸芯片平面上的荧光信号强度.两种引物分别命名为:多标记线性引物和多标记分支引物.通过增加标记在目标DNA 片段上的荧光分子数,可以显著增强寡核苷酸芯片上相应捕获探针的信号强度.实验表明,使用多标记引物能将所用的寡核苷酸微阵列的检测限(以能够检测的最低模板量计算)降低至单荧光标记引物的1/100 以下,多重标记技术是一种有效增强微型化探针矩阵检测灵敏度的信号放大方法. 展开更多
关键词 寡核苷酸芯片 信号放大 多重标记 分子标记 荧光信号 信号强度 引物 多重 应用 检测灵敏度
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多重荧光标记结合拉曼光谱原位研究多粘芽胞杆菌降解秸秆的生物膜特征
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作者 肖健 王丽萍 +1 位作者 沈其荣 余光辉 《农业环境科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期854-859,共6页
利用多粘芽胞杆菌(Paenibacillus polymyxaSYX-1)快速降解稻草秸秆,用多重荧光标记技术进行标记,共聚焦激光显微镜观察(CLSM)并结合激光拉曼光谱(Raman),原位研究纤维素降解过程中形成的生物膜特征,进一步探究植物纤维的酶解机制。共聚... 利用多粘芽胞杆菌(Paenibacillus polymyxaSYX-1)快速降解稻草秸秆,用多重荧光标记技术进行标记,共聚焦激光显微镜观察(CLSM)并结合激光拉曼光谱(Raman),原位研究纤维素降解过程中形成的生物膜特征,进一步探究植物纤维的酶解机制。共聚焦激光扫描跟踪结果表明:在0~13d的降解过程中,SYX-1菌株定殖的稻草秸秆表面物质成分呈复杂化趋势,表明在秸秆表面有良好的生物膜形成;拉曼光谱结果显示SYX-1菌株对稻草秸秆的降解主要发生在拉曼强度1580~1590cm-1处,证实了相关秸秆纤维素降解酶主要以β-折叠构象和无规卷曲构象共存。多重荧光标记技术和拉曼光谱手段相结合,可以作为深入研究纤维素降解过程中生物膜的形成特征及探究植物纤维酶解机制的有效手段。 展开更多
关键词 稻草秸秆 多重荧光标记 拉曼光谱 生物膜
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洋葱Ms位点多重PCR标记的开发与优化
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作者 王振宝 霍雨猛 +7 位作者 刘冰江 缪军 杨妍妍 高莉敏 孔素萍 程斐 陈宁 吴雄 《山东农业科学》 2014年第9期7-11,共5页
以本课题组已获得的洋葱Ms位点侧翼序列为基础,设计、筛选引物获得了一个兼容的多重PCR分子标记,并对其反应体系和反应程序进行了优化。优化后的扩增体系:10×PCR buffer(Mg2+free)2.5μL、25 mmol/L MgCl24μL、2.5 mmol/L dNTP 6... 以本课题组已获得的洋葱Ms位点侧翼序列为基础,设计、筛选引物获得了一个兼容的多重PCR分子标记,并对其反应体系和反应程序进行了优化。优化后的扩增体系:10×PCR buffer(Mg2+free)2.5μL、25 mmol/L MgCl24μL、2.5 mmol/L dNTP 6μL、DNA模板1μL(约50 ng)、10μmol/L引物各1μL、5 U/μL rTaq聚合酶0.6μL、用灭菌双蒸水补齐至25μL;反应程序:94℃预变性5 min;94℃变性30 s,65.4℃退火45 s,72℃延伸1 min,35个循环;最后72℃延伸10 min。优化后的体系和程序可以检测到清晰的目的条带,通过一次PCR反应即可鉴定Ms位点的3种基因型(MsMs、Msms、msms),操作简单,稳定性好。 展开更多
关键词 洋葱 雄性不育 Ms位点 多重PCR标记
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利用多重PCR分析丝羽乌骨鸡遗传多样性 被引量:4
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作者 周艳 朱庆 李亮 《湖北农业科学》 北大核心 2006年第5期546-548,共3页
以丝羽乌骨鸡为材料,在家鸡1号染色体和Z染色体上分别选取15对和5对微卫星标记,应用多重PCR技术对140只试验个体的基因组DNA进行了扩增,结果表明,所选用的20对微卫星引物中,除MCW0101和MCW0181因扩增效果不理想而剔除外,其余18对标记均... 以丝羽乌骨鸡为材料,在家鸡1号染色体和Z染色体上分别选取15对和5对微卫星标记,应用多重PCR技术对140只试验个体的基因组DNA进行了扩增,结果表明,所选用的20对微卫星引物中,除MCW0101和MCW0181因扩增效果不理想而剔除外,其余18对标记均表现出丰富的多态性,所有结果都能重复。18对微卫星引物平均检测到6.83个等位基因(5~8个),平均杂合度和多态信息含量分别为0.833和0.805。其结果可作为进一步QTL定位和标记辅助选择研究的参考。 展开更多
关键词 丝羽乌骨鸡 多重聚合酶链式反应分子标记 遗传多样性
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