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HEK 293T细胞中TRAF6多聚泛素化修饰KLF5的方式及其修饰位点的鉴定
被引量：
1
1
作者
李玉
应帅
+6 位作者
葛文
阮玉婷
吴宁霞
王伟民
张婧
邱文
王迎伟
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2023年第4期445-451,共7页
目的:研究人胚肾293T(HEK 293T,简称293T)细胞中外源性肿瘤坏死因子受体相关因子(tumor necrosis factor receptor⁃associated factor 6,TRAF6)与Krüppel样因子5(Krüppel⁃like factor 5,KLF5)的结合及TRAF6多聚泛素化修饰KLF...
目的:研究人胚肾293T(HEK 293T,简称293T)细胞中外源性肿瘤坏死因子受体相关因子(tumor necrosis factor receptor⁃associated factor 6,TRAF6)与Krüppel样因子5(Krüppel⁃like factor 5,KLF5)的结合及TRAF6多聚泛素化修饰KLF5的方式和修饰的位点。方法:将构建的Flag⁃TRAF6、HA⁃KLF5、泛素过表达质粒、shTRAF6小干扰质粒和TRAF6 C70A位点突变质粒行不同组合转染293T细胞48 h。用免疫沉淀(immunoprecipitation,IP)和免疫印迹(immunoblotting,IB)实验检查TRAF6与KLF5的结合以及KLF5 K63或K48多聚泛素化水平。此外,构建KLF5全部赖氨酸突变的质粒,分别与TRAF6质粒共转染293T细胞。用前述IP/IB检测KLF5 K63连接的多聚泛素化修饰,并确定KLF5 K63泛素化修饰的位点。结果:293T细胞中TRAF6能与KLF5结合;TRAF6过表达和基因沉默或TRA6酶活性缺失能相应上调或下调KLF5 K63的多聚泛素化;KLF5被TRAF6 K63多聚泛素化修饰的位点是其第99位和第100位的赖氨酸。结论:TRAF6能与KLF5相互作用,并对KLF5⁃K99和K100进行K63多聚泛素化修饰。
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关键词
肿瘤坏死因子受体相关因子6
Krüppel样因子5
K63连接的
多聚泛素化修饰
HEK
293T细胞
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职称材料
泛素链水解酶的选择性和产生机制
被引量：
2
2
作者
郑清芸
王涛
+2 位作者
潘漫
李宜明
田长麟
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2016年第9期864-879,共16页
底物蛋白的多聚泛素链修饰参与调节多种生命运动过程(包括蛋白质降解、自噬、DNA损伤修复、细胞周期、信号转导、基因表达、转录调节、炎症免疫等).去泛素化酶通过水解底物蛋白的单泛素和泛素链修饰,对泛素相关过程进行反向调节.人类基...
底物蛋白的多聚泛素链修饰参与调节多种生命运动过程(包括蛋白质降解、自噬、DNA损伤修复、细胞周期、信号转导、基因表达、转录调节、炎症免疫等).去泛素化酶通过水解底物蛋白的单泛素和泛素链修饰,对泛素相关过程进行反向调节.人类基因组中约含90余种去泛素化酶,它们通过对自身酶活性和底物识别特异性的调节,实现了对细胞内复杂泛素过程的精密且层次性的调控.本文针对去泛素化酶对不同泛素链的识别选择性,综述目前已知泛素链水解酶的选择性和产生机制.
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关键词
去
泛素
化
酶
泛素
链水解酶
多聚泛素化修饰
蛋白质
泛素
化
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职称材料
题名
HEK 293T细胞中TRAF6多聚泛素化修饰KLF5的方式及其修饰位点的鉴定
被引量：
1
1
作者
李玉
应帅
葛文
阮玉婷
吴宁霞
王伟民
张婧
邱文
王迎伟
机构
南京医科大学基础医学院免疫学系
出处
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2023年第4期445-451,共7页
基金
国家自然科学基金(81971468,82171740)。
文摘
目的:研究人胚肾293T(HEK 293T,简称293T)细胞中外源性肿瘤坏死因子受体相关因子(tumor necrosis factor receptor⁃associated factor 6,TRAF6)与Krüppel样因子5(Krüppel⁃like factor 5,KLF5)的结合及TRAF6多聚泛素化修饰KLF5的方式和修饰的位点。方法:将构建的Flag⁃TRAF6、HA⁃KLF5、泛素过表达质粒、shTRAF6小干扰质粒和TRAF6 C70A位点突变质粒行不同组合转染293T细胞48 h。用免疫沉淀(immunoprecipitation,IP)和免疫印迹(immunoblotting,IB)实验检查TRAF6与KLF5的结合以及KLF5 K63或K48多聚泛素化水平。此外,构建KLF5全部赖氨酸突变的质粒,分别与TRAF6质粒共转染293T细胞。用前述IP/IB检测KLF5 K63连接的多聚泛素化修饰,并确定KLF5 K63泛素化修饰的位点。结果:293T细胞中TRAF6能与KLF5结合;TRAF6过表达和基因沉默或TRA6酶活性缺失能相应上调或下调KLF5 K63的多聚泛素化;KLF5被TRAF6 K63多聚泛素化修饰的位点是其第99位和第100位的赖氨酸。结论:TRAF6能与KLF5相互作用,并对KLF5⁃K99和K100进行K63多聚泛素化修饰。
关键词
肿瘤坏死因子受体相关因子6
Krüppel样因子5
K63连接的
多聚泛素化修饰
HEK
293T细胞
Keywords
tumor necrosis factor receptor⁃associated factor 6
Krüppel⁃like factors 5
K63⁃linked polyubiquitination
HEK 293T cell
分类号
R393 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
泛素链水解酶的选择性和产生机制
被引量：
2
2
作者
郑清芸
王涛
潘漫
李宜明
田长麟
机构
合肥工业大学生物与医学工程学院
清华大学化学系
中国科学技术大学生命科学学院
出处
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2016年第9期864-879,共16页
基金
国家自然科学基金资助项目(21372058
21572043)~~
文摘
底物蛋白的多聚泛素链修饰参与调节多种生命运动过程(包括蛋白质降解、自噬、DNA损伤修复、细胞周期、信号转导、基因表达、转录调节、炎症免疫等).去泛素化酶通过水解底物蛋白的单泛素和泛素链修饰,对泛素相关过程进行反向调节.人类基因组中约含90余种去泛素化酶,它们通过对自身酶活性和底物识别特异性的调节,实现了对细胞内复杂泛素过程的精密且层次性的调控.本文针对去泛素化酶对不同泛素链的识别选择性,综述目前已知泛素链水解酶的选择性和产生机制.
关键词
去
泛素
化
酶
泛素
链水解酶
多聚泛素化修饰
蛋白质
泛素
化
Keywords
deubiquitinating enzyme
polyubiquitin chain hydrolases
polyubiquitylation
protein ubiquitylation
分类号
Q5 [生物学—生物化学]
O6 [理学—化学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
HEK 293T细胞中TRAF6多聚泛素化修饰KLF5的方式及其修饰位点的鉴定
李玉
应帅
葛文
阮玉婷
吴宁霞
王伟民
张婧
邱文
王迎伟
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2023
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
泛素链水解酶的选择性和产生机制
郑清芸
王涛
潘漫
李宜明
田长麟
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2016
2
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职称材料
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