混合非淀粉多糖水解酶酶活测定方法的改进 被引量：4

1

作者 史锋 王璋 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第3期121-126,共6页

用分光光度法分别准确测定了混合非淀粉多糖水解酶预混洋中木聚糖酶、果胶酶、β-葡聚糖酶和纤维素酶的酶活。将酶以0.1%的比例添加到饲料中后,除木聚糖酶外,其余三种酶的酶活无法准确测定出来,于是对酶活测定方法进行了改进,利用凝胶... 用分光光度法分别准确测定了混合非淀粉多糖水解酶预混洋中木聚糖酶、果胶酶、β-葡聚糖酶和纤维素酶的酶活。将酶以0.1%的比例添加到饲料中后,除木聚糖酶外,其余三种酶的酶活无法准确测定出来,于是对酶活测定方法进行了改进,利用凝胶过滤色谱法对酶液进行预处理,排除了体系中还原糖等小分子量杂质的干扰;采用琼脂放射扩散法测定纤维素酶或β-葡聚糖酶酶活,提高了测定的特异性和灵敏度;利用专一性的酸性醋酸铜法测定果胶酶酶活,提高了特异性;采用硫酸铵沉淀法处理木聚糖酶,可排除别的酶对木聚糖酶酶活测定的干扰。 展开更多

关键词 非淀粉多糖水解酶 酶活 测定方法 改进 混合酶 预处理 抗干扰

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N末端结构模块缺失对嗜热酸性III型普鲁兰多糖水解酶TK-PUL酶学性质的影响 被引量：2

2

作者 曾静 何础阔 +1 位作者 郭建军 袁林 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第10期201-208,共8页

通过对嗜热酸性Ⅲ型普鲁兰多糖水解酶TK-PUL进行N末端截短突变,并比较TK-PUL与突变酶的酶学性质,确定N末端结构模块的缺失对酶学性质的影响。结构模块N1的缺失改良了TK-PUL的催化特性,其α-淀粉酶比活力提高至TK-PUL的1.11倍,普鲁兰酶... 通过对嗜热酸性Ⅲ型普鲁兰多糖水解酶TK-PUL进行N末端截短突变,并比较TK-PUL与突变酶的酶学性质,确定N末端结构模块的缺失对酶学性质的影响。结构模块N1的缺失改良了TK-PUL的催化特性,其α-淀粉酶比活力提高至TK-PUL的1.11倍,普鲁兰酶比活力提高至TK-PUL的1.12倍,于100℃的半衰期延长至TK-PUL的1.15倍。结构模块N2的缺失提高了酶的热稳定性,于100℃的半衰期延长至TK-PUL的1.25倍。但是结构域N2的缺失降低了酶的pH值稳定性、酶的底物结合能力以及比活力。并且结构域N2影响了酶的底物选择性,导致其α-淀粉酶活性与普鲁兰酶活性的比值由0.49提高至0.60。结果表明,TK-PUL的N末端结构模块N1和N2均不是其发挥催化活性所必需的结构区域,但是对酶的底物结合能力、底物降解能力以及稳定性具有重要影响。 展开更多

关键词 Ⅲ型普鲁兰多糖水解酶 N末端结构模块 缺失突变 催化特性

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制茶用多糖水解酶的发酵生产条件及其应用 被引量：3

3

作者 毛清黎 王星飞 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期374-377,共4页

应用微生物生理生态学原理 ,从固体发酵及抗酚性方面探讨了适于制茶用的多糖水解酶的发酵生产方法及酶法制茶效果 ,结果表明 :在稻草培养基中添加 3 0 %左右的茶梗粉 ,固体发酵所得粗酶液不仅纤维素酶和果胶酶活性高 ,且抗酚性较强 。

关键词 多糖水解酶 固体发酵 抗酚性 红碎茶 制茶

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嗜热酸性Ⅲ型普鲁兰多糖水解酶TK-PUL保守基序中关键氨基酸残基对其催化性质的影响 被引量：1

4

作者 曾静 何础阔 +3 位作者 郭建军 侯安伟 聂俊辉 袁林 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第22期113-120,共8页

对嗜热酸性Ⅲ型普鲁兰水解酶TK-PUL保守基序中非保守氨基酸残基进行定点突变,通过比较TK-PUL与突变体的酶学性质,确定保守基序中关键氨基酸残基对其催化性质的影响。TK-PUL保守基序Ⅱ中I500W位点变化不影响其最适反应pH值、pH值稳定性... 对嗜热酸性Ⅲ型普鲁兰水解酶TK-PUL保守基序中非保守氨基酸残基进行定点突变,通过比较TK-PUL与突变体的酶学性质,确定保守基序中关键氨基酸残基对其催化性质的影响。TK-PUL保守基序Ⅱ中I500W位点变化不影响其最适反应pH值、pH值稳定性、最适反应温度、热稳定性,但使其α-淀粉酶活性和普鲁兰酶活性均明显降低。动力学常数测定结果显示,突变体I500W以麦芽三糖为底物的k_(cat)/K_(m)值基本不变,以异潘糖为底物的k_(cat)/K_(m)值约为TK-PUL的64.78%。结果表明,TK-PUL保守基序II中第500位氨基酸残基Ile对其水解糖苷键的偏好性起到重要作用。TK-PUL中I500W位点变化不影响其α-1,4-糖苷键水解活性,但使其α-1,6-糖苷键水解活性明显降低。本研究有助于深入理解TK-PUL的双功能催化机制,也可为TK-PUL的分子改造提供理论依据和设计思路。 展开更多

关键词 Ⅲ型普鲁兰多糖水解酶 保守基序 定点突变 催化活性 同源模建

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多糖水解酶活力的测定方法研究进展 被引量：1

5

作者 张永勤 王哲平 +1 位作者 孙岩 詹志春 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第32期15643-15645,15647,共4页

综述了目前常用的几种多糖水解酶活力的测定方法,并介绍了一些最新涌现的方法。还原糖测定法由于具有简便、快速、低成本、可高通量、实时测定的特点,仍是当前酶活力测定中的首推方法,其中灵敏度较高、可较准确地测定酶解初速度的3-甲基... 综述了目前常用的几种多糖水解酶活力的测定方法,并介绍了一些最新涌现的方法。还原糖测定法由于具有简便、快速、低成本、可高通量、实时测定的特点,仍是当前酶活力测定中的首推方法,其中灵敏度较高、可较准确地测定酶解初速度的3-甲基-2-苯并噻唑酮腙(MBTH)法将更加受到业界的推崇。灵敏度普遍较高的荧光法如果能克服底物成本较高,制备过程中分子量降低等问题,也将得以广泛应用。 展开更多

关键词 多糖水解酶 还原糖端基 底物显色 荧光法 3-甲基-2-苯并噻唑酮腙(MBTH)

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酶法制茶专用多糖水解酶的发酵生产技术研究 被引量：1

6

作者 毛清黎 王星飞 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期5-9,共5页

本研究根据微生物生理生态学原理 ,从液体、固体发酵及抗酚性几方面探讨了适于制茶用的多糖水解酶的发酵生产方法及酶法制茶效果的大生产试验 ,为酶法制茶的推广应用提供理论及实践依据。

关键词 酶法制茶专用多糖水解酶 发酵生产技术 抗酚性 红碎茶

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易错PCR技术提高嗜热酸性Ⅲ型普鲁兰水解酶TK-PUL催化活性的研究 被引量：1

7

作者 曾静 郭建军 袁林 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2022年第18期130-136,共7页

嗜热酸性Ⅲ型普鲁兰水解酶TK-PUL在液化条件下可完全水解淀粉为淀粉糖,在“液化糖化一步法”的淀粉制糖工艺中具有巨大的应用潜力。本研究拟采用易错聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术提高TK-PUL的催化活性。经过两轮... 嗜热酸性Ⅲ型普鲁兰水解酶TK-PUL在液化条件下可完全水解淀粉为淀粉糖,在“液化糖化一步法”的淀粉制糖工艺中具有巨大的应用潜力。本研究拟采用易错聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术提高TK-PUL的催化活性。经过两轮易错PCR及高通量筛选,获得了催化活性提高的突变体L538D。与TK-PUL相比,L538D以可溶性淀粉为底物的比酶活力提高了50%,以普鲁兰多糖为底物的比酶活力提高了21%;L538D以可溶性淀粉、普鲁兰多糖为底物的k/K值分别提高了44%、27%。即L538D的α-1,4-糖苷键水解活性和α-1,6-糖苷键水解活性均明显提高,并且其α-1,4-糖苷键水解活性的提高幅度更大。同源模建得到的蛋白质分子结构显示,将TK-PUL中Leu538替换为Asp,可能通过缩短氨基酸残基侧链的长度和减弱氨基酸残基的疏水性,提高了催化活性位点Glu538所在loop结构的柔性,从而提高酶的催化活性。本研究结果表明,TK-PUL中Leu538是影响其催化活性的重要氨基酸残基。 展开更多

关键词 Ⅲ型普鲁兰多糖水解酶 定向进化 易错聚合酶链式反应(易错PCR) 高通量筛选技术 催化活性本

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新型饲料用非淀粉多糖酶制剂研究取得突破

8

《猪业科学》 2014年第4期18-18,共1页

中国农业科学院饲料研究所姚斌研究团队通过近10年的潜心研究，圆满完成了“新型饲料用非淀粉多糖酶制剂产品的创制”项目。科研人员从酶的分子生物学基础研究入手，解决了木聚糖酶等多种非淀粉多糖水解酶的基因资源高效获取酶的性能、

关键词 非淀粉多糖酶制剂 饲料用 中国农业科学院饲料研究所 分子生物学 多糖水解酶 制剂产品 基础研究 科研人员

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海参体壁自溶机制及其控制技术的研究进展 被引量：10

9

作者 吕兴霜 张永勤 +1 位作者 王鹏博 张凤国 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2020年第3期327-331,共5页

海参作为海产品中的名贵滋补品,具有较高的商业价值,却极易受到外界刺激而迅速自溶,造成严重的经济损失。本文综述了海参体壁的组成及其在自溶过程中的变化,以海参内源酶为研究基点综述了引起海参自溶的原因和海参自溶的控制技术,并针... 海参作为海产品中的名贵滋补品,具有较高的商业价值,却极易受到外界刺激而迅速自溶,造成严重的经济损失。本文综述了海参体壁的组成及其在自溶过程中的变化,以海参内源酶为研究基点综述了引起海参自溶的原因和海参自溶的控制技术,并针对海参自溶的研究策略进行了展望。 展开更多

关键词 海参 自溶 体壁 多糖水解酶 蛋白酶

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臭氧在猕猴桃贮藏保鲜中的作用 被引量：2

10

作者 段眉会 《山西果树》 2014年第5期62-62,共1页

近年来，有部分贮库采用臭氧（O3）技术进行猕猴桃贮藏保鲜。臭氧是广谱性杀菌剂，对果实没有污染；同时臭氧也可抑制、降低果实细胞内多糖水解酶的活性，可分解乙烯，固而有较明显的保鲜效果。据报道，试验库内用ADS型臭氧杀菌保鲜机... 近年来，有部分贮库采用臭氧（O3）技术进行猕猴桃贮藏保鲜。臭氧是广谱性杀菌剂，对果实没有污染；同时臭氧也可抑制、降低果实细胞内多糖水解酶的活性，可分解乙烯，固而有较明显的保鲜效果。据报道，试验库内用ADS型臭氧杀菌保鲜机（臭氧产量5g／h），每天开机8h，每隔2h开1h，自动控制。 展开更多

关键词 臭氧杀菌 贮藏保鲜 猕猴桃 广谱性杀菌剂 多糖水解酶 保鲜效果 自动控制 细胞内

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姚斌团队实现饲料用酶低价生产

11

《北方牧业》 2014年第10期12-12,共1页

近日,中国农业科学院饲料研究所姚斌团队通过近10年潜心研究,完成了＂新型饲料用非淀粉多糖酶制剂产品的创制＂项目。该成果从酶的分子生物学基础研究入手,解决了木聚糖酶等多种非淀粉多糖水解酶的基因资源高效利用问题,从而实现了多种... 近日,中国农业科学院饲料研究所姚斌团队通过近10年潜心研究,完成了＂新型饲料用非淀粉多糖酶制剂产品的创制＂项目。该成果从酶的分子生物学基础研究入手,解决了木聚糖酶等多种非淀粉多糖水解酶的基因资源高效利用问题,从而实现了多种非淀粉多糖酶的低价生产。该研究成果获得了2014年北京市科学技术奖一等奖。 展开更多

关键词 饲料用酶 中国农业科学院饲料研究所 生产 低价 非淀粉多糖酶 分子生物学 多糖水解酶 科学技术奖

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