Rho激酶抑制剂Y27632促进人诱导多能干细胞来源原始神经上皮细胞向多巴胺能神经前体细胞的转化

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作者 李洋洋 徐佳佳 +8 位作者 姜诚诚 陈子龙 陈颖 应梦娇 王澳 马彩云 王春景 郭俣 刘长青 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期236-243,共8页

目的提高人诱导多能干细胞来源原始神经上皮细胞(hiPSCs-NECs)定向诱导中脑多巴胺能神经前体细胞(DAPs)的效率。方法将人iPSCs在含有小分子组合[DMH1(10μmol/L)、SB431542(10μmol/L)、音猬因子(SHH 200 ng/mL)、成纤维细胞生长因8(FGF... 目的提高人诱导多能干细胞来源原始神经上皮细胞(hiPSCs-NECs)定向诱导中脑多巴胺能神经前体细胞(DAPs)的效率。方法将人iPSCs在含有小分子组合[DMH1(10μmol/L)、SB431542(10μmol/L)、音猬因子(SHH 200 ng/mL)、成纤维细胞生长因8(FGF8100 ng/mL)、嘌吗啡胺(2μmol/L)、CHIR99021(3μmol/L)、N2(1%)]的mTeSRTM培养基中诱导至12 d,细胞分化为原始神经上皮细胞(NECs)。特异性诱导DAPs,将诱导的hiPSCs-NECs用胶原酶IV消化后,在神经分化培养基[添加1%N2、2%B27-A、BDNF(10 ng/mL)、GDNF(10 ng/mL)、AA、TGF-β、cAMP、1%GlutaMax]中加入不同浓度的Rho激酶抑制剂Y27632重新接种,并于次日更换培养基去除Y27632,持续诱导至第28天获得DAPs。结果人iPSCs可在基质胶上稳定传代,表达多潜能性标记物OCT4、SOX2、Nanog和SSEA1,且碱性磷酸酶染色呈阳性。诱导分化至第13天获得hiPSCs-NECs,形成玫瑰花结样结构,能够表达特征性标记物(SOX2、Nestin和PAX6)。将hiPSCs-NECs消化后,添加5μmol/LY27632的hiPSCs-NECs相比较未加Y27632的对照组,细胞解离后贴壁存活率明显增加,处于S期的细胞(P<0.01)与细胞活力显著提高(P<0.01),且凋亡率显著降低(P<0.05),持续诱导至第28天,细胞高表达DAPs特异性的标记物(TH、FOXA2、NURR1和Tuj1)。结论添加Y27632(5μmol/L)24 h可显著提高人iPSCs-NECs细胞向iPSCs-DA神经前体转化时的细胞存活率,并且Y27632去除后,不会影响后续向DA神经前体细胞分化,间接的提高了细胞的分化效率. 展开更多

关键词 人诱导多能干细胞 Y27632 原始神经上皮细胞 多巴胺能神经前体细胞

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多巴胺能神经前体细胞的体外培养 被引量：1

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作者 王晓东 贡志刚 +1 位作者 兰青 黄强 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期i001-i003,共3页

1979年Bjorklund和Stenevi移植胚胎中脑组织到6-羟多巴胺所致帕金森病(Parkinson's disease,PD)大鼠模型的纹状体内,发现有明显功能改善,并且免疫组化显示这些动物脑内存在被移植的能产生多巴胺的细胞.由此掀起了治疗PD为代表的脑... 1979年Bjorklund和Stenevi移植胚胎中脑组织到6-羟多巴胺所致帕金森病(Parkinson's disease,PD)大鼠模型的纹状体内,发现有明显功能改善,并且免疫组化显示这些动物脑内存在被移植的能产生多巴胺的细胞.由此掀起了治疗PD为代表的脑内移植研究的热潮.从不断获得的研究成果来看,脑内移植细胞替代疗法极有希望成为治愈PD的一种治疗手段. 展开更多

关键词 多巴胺能神经前体细胞 体外培养 脑移植 细胞替代疗法 帕金森病

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端粒酶永生化的人单克隆神经前体细胞系诱导表达多巴胺D_2受体 被引量：4

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作者 扈启宽 林昌盛 +4 位作者 白云 白洁 何其华 沈丽 李凌松 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期271-273,共3页

目的 :检测人神经前体细胞系HNG12 10 E能否诱导表达多巴胺D2 受体mRNA和受体蛋白 ,表达的受体是否有生理功能。方法 :细胞因子诱导分化 ,RT PCR和免疫荧光染色检测D2 的表达 ;Fluo 3测定多巴胺刺激产生的胞浆Ca2 + 。结果 :RT PCR显示... 目的 :检测人神经前体细胞系HNG12 10 E能否诱导表达多巴胺D2 受体mRNA和受体蛋白 ,表达的受体是否有生理功能。方法 :细胞因子诱导分化 ,RT PCR和免疫荧光染色检测D2 的表达 ;Fluo 3测定多巴胺刺激产生的胞浆Ca2 + 。结果 :RT PCR显示D2 mRNA诱导后阳性 ,免疫荧光结果显示诱导后D2 受体蛋白在细胞膜表面阳性 ,Fluo3法测定胞浆Ca2 + ,结果显示诱导后的细胞对 5mmol·L-1多巴胺递质反应使胞浆Ca2 + 快速上升。结论 :从mRNA、蛋白和生理功能 3个层次均证明HNG12 10 E细胞系诱导后表达D2 。 展开更多

关键词 神经前体细胞 端粒酶永生化 多巴胺D2受体 细胞分化

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白细胞介素-6与脑源性神经营养因子对大鼠神经前体细胞向多巴胺神经元分化的诱导作用 被引量：3

4

作者 赵荷剑 柴立辉 +2 位作者 吴素霞 高林 贺维亚 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2009年第1期93-95,共3页

目的:探讨细胞因子在体外诱导胎鼠纹状体神经前体细胞向多巴胺(dopamine,DA)神经元分化的机制,为临床上应用细胞移植替代治疗诸如帕金森病等神经精神性疾病提供理论依据。方法:分离获取胎龄14.5d的SD大鼠纹状体神经前体细胞,白细胞介素-... 目的:探讨细胞因子在体外诱导胎鼠纹状体神经前体细胞向多巴胺(dopamine,DA)神经元分化的机制,为临床上应用细胞移植替代治疗诸如帕金森病等神经精神性疾病提供理论依据。方法:分离获取胎龄14.5d的SD大鼠纹状体神经前体细胞,白细胞介素-6(IL-6)(10μg/L)和脑源性神经营养因子(BDNF)(50μmol/L)分别或联合对胎鼠纹状体神经前体细胞进行诱导。诱导2周后观察细胞的形态变化;免疫细胞化学染色检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)和酪氨酸羟化酶(TH)的表达,RT-PCR检测NSE、TH及转录因子Nurr1和Lmx1b mRNA的表达。结果:免疫细胞化学染色结果表明IL-6处理组、BDNF处理组及2者联合处理组均较对照组NSE和TH阳性率高,且IL-6和BDNF联合处理组较单用IL-6或BDNF处理组的细胞阳性率高(P<0.05);RT-PCR结果显示对照组仅有NSE的表达,而IL-6处理组、BDNF处理组及2者联合处理组均有NSE、Nurr1、Lmx1b和TH mRNA的表达。结论:IL-6和BDNF均可在体外诱导胎鼠纹状体神经前体细胞向DA神经元分化,并具有协同作用。 展开更多

关键词 神经前体细胞 多巴胺神经元 白细胞介素-6 脑源性神经营养因子 大鼠

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BMP-2对室管膜前下区神经干细胞向多巴胺能神经元分化及对DLX5表达的影响 被引量：3

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作者 刘胜华 周政 +3 位作者 杨辉 刘俊 阴金波 辛志成 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期480-483,共4页

目的探讨骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)对室管膜前下区(anterior subventricular zone,SVZa)神经干细胞(neural stem cells,NSCs)向多巴胺能神经元分化及对DLX5表达的影响。方法体外培养SVZa NSCs,分为对照组、BMP-... 目的探讨骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)对室管膜前下区(anterior subventricular zone,SVZa)神经干细胞(neural stem cells,NSCs)向多巴胺能神经元分化及对DLX5表达的影响。方法体外培养SVZa NSCs,分为对照组、BMP-2组、BMP-2+Noggin组和Noggin组,通过免疫荧光染色和流式细胞术,观察其分化为酪氨酸羟化酶阳性(TH+)神经元的情况;用RT-PCR检测DLX5 mRNA表达水平。结果BMP-2组SVZaNSCs向TH+神经元分化的比例和DLX5 mRNA表达水平均显著高于对照组(P<0.05),且这种效应能被其拮抗剂Noggin特异性抑制。结论BMP-2可能通过上调DLX5表达水平从而促进SVZa NSCs向多巴胺能神经元分化。 展开更多

关键词 神经干细胞 室管膜前下区 多巴胺能神经元 DLX5 BMP-2

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损毁单侧黑质-纹状体通路的大鼠SVZ、纹状体和黑质神经前体细胞的变化 被引量：1

6

作者 刘丙方 高殿帅 +3 位作者 高尔静 蔡青 鲁强 徐群渊 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期383-388,共6页

研究成年大鼠脑室下区 (SVZ)神经前体细胞 (neural precursors)在黑质 -纹状体通路损伤后的反应 ,本研究用 6-羟多巴胺单侧纹状体注射以损毁黑质 -纹状体通路 ,损毁 10 d后腹腔注射 Brd U ,连续 4d,每日两次 ;在 SVZ、纹状体和黑质部位... 研究成年大鼠脑室下区 (SVZ)神经前体细胞 (neural precursors)在黑质 -纹状体通路损伤后的反应 ,本研究用 6-羟多巴胺单侧纹状体注射以损毁黑质 -纹状体通路 ,损毁 10 d后腹腔注射 Brd U ,连续 4d,每日两次 ;在 SVZ、纹状体和黑质部位用免疫组化方法检测 Brd U、nestin以及 GFAP阳性细胞。结果显示 :(1) 6-羟多巴胺损毁黑质 -纹状体通路后 ,伤侧 SVZ的 Brd U阳性细胞数明显增多 ,并成簇分布 ;nestin和 GFAP阳性细胞数也增多 ,但以 GF AP阳性细胞增多明显 ;(2 )伤侧纹状体可见大量 Br-d U、GFAP以及少量 nestin阳性细胞分布 ,而健侧只有少量 GFAP阳性细胞 ;(3 )伤侧可见 Brd U阳性细胞在 SVZ和纹状体之间呈条带样分布 ;(4 )伤侧黑质除酪氨酸羟化酶阳性神经元减少外 ,未见 Brd U、GFAP和 nestin阳性细胞表达。上述结果表明 ,6-羟多巴胺损毁黑质 -纹状体通路后 ,SVZ神经前体细胞活动增强 ,有向纹状体迁移的趋势。 展开更多

关键词 6-羟多巴胺 神经前体细胞 脑室下区 黑质 纹状体 大鼠

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一种高纯度多巴胺神经元原代培养方法的建立 被引量：3

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作者 白龙梅 李学忠 +1 位作者 张志琳 刘春风 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期403-405,共3页

目的:通过胚胎中脑祖细胞(MPC)体外培养获得高纯度的多巴胺神经元培养体系。方法:取自E12鼠胚中脑腹侧的MPC悬液在添加bFGF的DMEM/F12/N2/L-抗坏血酸-2-磷酸酯倍半镁盐(AA-2P)培养液中扩增培养,5d后停用bFGF,促进细胞分化,4d后通过Neuro... 目的:通过胚胎中脑祖细胞(MPC)体外培养获得高纯度的多巴胺神经元培养体系。方法:取自E12鼠胚中脑腹侧的MPC悬液在添加bFGF的DMEM/F12/N2/L-抗坏血酸-2-磷酸酯倍半镁盐(AA-2P)培养液中扩增培养,5d后停用bFGF,促进细胞分化,4d后通过Neurobasal/阿糖胞苷(Ara-c)抑制胶质细胞生长,获得纯神经元,使用TH鉴定细胞,计数细胞比例和纯度,β-tubulinIII鉴定成熟神经元,并计数细胞比例和纯度。结果:在添加了bFGF20μg/L的DMEM/F12/N2/AA-2P培养液中MPC增殖良好,体外培养7d后细胞数量扩增到培养前的(16·54±1·25)倍;使用Neu-robasal/阿糖胞苷后胶质细胞受抑制,神经元占94%以上,其中多巴胺(DA)能神经元的比例约(35·56±4·13)%。结论:E12鼠胚MPC原代培养合并使用阿糖胞苷是获取高纯度DA能神经元培养体系的可靠途径。 展开更多

关键词 中脑前体细胞 多巴胺能神经元 细胞培养

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芯片毛细管电泳-NDA柱前衍生荧光检测多巴胺及组胺 被引量：12

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作者 闫琴 陈荣生 程介克 《分析科学学报》 CSCD 北大核心 2003年第6期519-521,共3页

本文以汞灯为激发光源,利用自组装的高灵敏芯片毛细管电泳荧光光子计数器检测系统,NDA柱前衍生检测神经递质多巴胺和组胺.优化了NDA衍生多巴胺、组胺以及衍生后分离与检测的条件.本法多巴胺和组胺的检出限(S/N=3)分别为2.5×10-7mo... 本文以汞灯为激发光源,利用自组装的高灵敏芯片毛细管电泳荧光光子计数器检测系统,NDA柱前衍生检测神经递质多巴胺和组胺.优化了NDA衍生多巴胺、组胺以及衍生后分离与检测的条件.本法多巴胺和组胺的检出限(S/N=3)分别为2.5×10-7mol/L、1.4×10-6mol/L.组胺和多巴胺可在45 s内分离和检测. 展开更多

关键词 芯片毛细管电泳 NDA 柱前衍生荧光 检测 多巴胺 组胺 神经递质 2 3-萘二甲醛

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下丘脑黑皮质素及中脑多巴胺系统对奖赏行为的调控 被引量：2

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作者 刘颖 刘超 +4 位作者 林青华 张建军 杜文洁 梁璟 隋南 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2021年第5期541-549,共9页

动机行为受生理需求相关神经环路的调控,包括管理摄食、能量代谢等内在动机行为的下丘脑黑皮质素(melanocortin,MC)系统和负责奖赏环路的中脑多巴胺(dopamine,DA)系统.MC系统中前阿黑皮素原(proopiomelanocortin,POMC)神经元与刺豚鼠相... 动机行为受生理需求相关神经环路的调控,包括管理摄食、能量代谢等内在动机行为的下丘脑黑皮质素(melanocortin,MC)系统和负责奖赏环路的中脑多巴胺(dopamine,DA)系统.MC系统中前阿黑皮素原(proopiomelanocortin,POMC)神经元与刺豚鼠相关蛋白(agouti-related protein,AgRP)神经元合成与分泌的递质及神经肽协同完成了对摄食等动机行为的调控,且DA系统通过调节奖赏环路参与摄食等动机行为的发生过程.此外,高强度的激活DA系统是成瘾性药物的共同特征,当DA系统激活与用药行为反复关联后,部分使用者进入药物成瘾状态,他们表现出强迫性的觅药动机.已有研究提示,药物成瘾的过程可能是药物导致动机行为调控中枢发生适应性改变的过程,这个变化反之促发了强迫性觅药行为的形成.本文将从下丘脑黑皮质素系统两种主要的神经元——POMC神经元和AgRP神经元——在对于摄食和用药相关的奖赏行为调控作用入手,分析它们与DA系统的相互作用模式,论述下丘脑黑皮质素系统的功能失调与药物成瘾的关系. 展开更多

关键词 动机行为 药物成瘾 多巴胺 黑皮质素系统 前阿黑皮素原神经元 刺豚鼠相关蛋白神经元

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Diacrin公司加速猪细胞移植体开发

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作者 李思经 《生物技术通报》 CAS CSCD 1996年第5期24-25,共2页

Diacrin公司公开发行了首期债券,总计约2.3亿万美元。公司计划利用这笔收入投资于猪细胞专用药物的开发,以治疗由于细胞机能不良或细胞死亡引起的一系列疾病。尽管细胞移植在临床实验中能够存活,但由于人类供体细胞的供量不足,大大妨碍... Diacrin公司公开发行了首期债券,总计约2.3亿万美元。公司计划利用这笔收入投资于猪细胞专用药物的开发,以治疗由于细胞机能不良或细胞死亡引起的一系列疾病。尽管细胞移植在临床实验中能够存活,但由于人类供体细胞的供量不足,大大妨碍了其广泛应用。而Diacrin公司认为。它有能力解决这个问题,即采用猪细胞移植法。 展开更多

关键词 细胞移植 移植体 胺能神经元 临床前期 亨廷顿舞蹈病 帕金森疾病 供体细胞 公司计划 细胞死亡 临床前研究

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关于脑的对话(二)

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作者 张烈雄 晁东满 《生物学教学》 1995年第7期40-40,共1页

问:是否有能改善脑功能的食物? 答:食物中某些氨基酸是神经递质（神经细胞放电时释放的物质）的前体。一些脑细胞能把色氨酸转化为5—羟色胺.还有一些脑细胞能把胆碱合成为乙酰胆碱。在其他一些脑细胞中酷氨酸是多巴胺、去甲肾上腺素... 问:是否有能改善脑功能的食物? 答:食物中某些氨基酸是神经递质（神经细胞放电时释放的物质）的前体。一些脑细胞能把色氨酸转化为5—羟色胺.还有一些脑细胞能把胆碱合成为乙酰胆碱。在其他一些脑细胞中酷氨酸是多巴胺、去甲肾上腺素和肾上腺素（所谓“儿茶酚胺类递质”）的前体物质。某些患有影响记忆的疾病的病人.服用胆碱很有用。胆碱以卵磷脂（在大豆中可找到）的形式被吸收。下幸的是.目前在大多数用卵磷脂制备的保健食品中,作为胆碱唯一有效来源的磷脂酸胆碱的含量十分低。 展开更多

关键词 多巴胺 神经递质 含酒精的饮料 卵磷脂 脑细胞 神经毒素 胆碱 帕金森病 脑功能 前体物质

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