腺相关病毒衣壳保守区多价抗原肽的原核表达及多克隆抗体制备 被引量：1

1

作者 李舒月 曹春雨 +6 位作者 张浩 李玉玲 张雄洲 杨子灿 夏燕 王磊 吕亚丰 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期944-948,共5页

目的原核表达和纯化腺相关病毒(AAV)衣壳保守区抗原肽,制备抗AAV衣壳保守区的兔多克隆抗体。方法设计并合成编码AAV衣壳蛋白保守区的DNA,将序列克隆到载体pET30a,获得质粒pET30a-AAV-CR,原核表达并纯化保守区多价抗原肽,考马斯蓝染色法... 目的原核表达和纯化腺相关病毒(AAV)衣壳保守区抗原肽,制备抗AAV衣壳保守区的兔多克隆抗体。方法设计并合成编码AAV衣壳蛋白保守区的DNA,将序列克隆到载体pET30a,获得质粒pET30a-AAV-CR,原核表达并纯化保守区多价抗原肽,考马斯蓝染色法及Western blot法对AAV保守区多价抗原肽进行鉴定。将日本大耳朵白兔分为实验组与对照组(1只/组),实验组注射AAV保守区蛋白制备多克隆抗体,对照组注射PBS,ELISA检测抗体效价,Western blot及细胞免疫荧光法检测抗体应用效果。结果成功构建了表达AAV衣壳保守区抗原肽的质粒pET30a-AAV-CR,表达纯化得到相对分子质量为17000的蛋白质;纯化后的蛋白可在兔体内诱导产生针对AAV衣壳保守区的抗体,且该抗体能广泛性识别AAV1-AAV10衣壳蛋白序列。结论诱导出AAV衣壳保守区蛋白并成功获得了抗AAV衣壳保守区的多克隆抗体,为后续载体开发以及生物学功能研究奠定了基础。 展开更多

关键词 腺相关病毒 多价抗原肽 蛋白纯化 多克隆抗体

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鸡志贺氏菌多价凝集抗原及其标准血清的研制 被引量：2

2

作者 李炜 蒋大伟 +4 位作者 程琨 宋海霞 许兰菊 张玉红 张瑞 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期526-530,共5页

利用鸡鲍氏志贺氏菌和鸡痢疾志贺氏菌制备多价凝集抗原,确定其最佳反应浓度及比例.选择合适的试验鸡只,用2种鸡志贺氏菌灭活疫苗定期肌肉注射免疫和抗体效价测定,适时采血分离血清.结果显示,鸡鲍氏抗原与痢疾抗原的最佳混合浓度为6×... 利用鸡鲍氏志贺氏菌和鸡痢疾志贺氏菌制备多价凝集抗原,确定其最佳反应浓度及比例.选择合适的试验鸡只,用2种鸡志贺氏菌灭活疫苗定期肌肉注射免疫和抗体效价测定,适时采血分离血清.结果显示,鸡鲍氏抗原与痢疾抗原的最佳混合浓度为6×109mL-1,最佳比例为1∶1.制备的鸡鲍氏和鸡痢疾志贺氏菌多价阳性血清,经抗体效价测定均达6 log2,阴性血清与鸡志贺氏菌多价凝集抗原作用无凝集现象出现.研制的多价凝集抗原及其标准血清经特异性试验、重复性试验和保存方法试验,具有特异性强、敏感性高、重复性好、易保存等特点,且可省去单价凝集抗原繁琐的检测程序和时间. 展开更多

关键词 鸡志贺氏菌 多价凝集抗原 标准血清

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多价精子抗原表位肽的设计与免疫效应研究

3

作者 何畏 梁志清 +4 位作者 吴玉章 李玉清 贾正才 周伟 史常旭 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第7期796-798,共3页

目的　开发可供两性使用的多价合成嵌合肽疫苗。方法　选择小鼠精子 /睾丸特异性抗原SP1 7、Cyritestin中特异性氨基酸序列与牛核糖核酸酶非限制性T细胞表位作为骨架 ,按一定连接方式设计、合成新抗原 35肽 ,并与弗氏佐剂混悬后免疫雌性... 目的　开发可供两性使用的多价合成嵌合肽疫苗。方法　选择小鼠精子 /睾丸特异性抗原SP1 7、Cyritestin中特异性氨基酸序列与牛核糖核酸酶非限制性T细胞表位作为骨架 ,按一定连接方式设计、合成新抗原 35肽 ,并与弗氏佐剂混悬后免疫雌性BALB/C小鼠。结果　在 430A固相自动肽合成仪上成功地合成 35肽 ,并经HPLC纯化、质谱鉴定证实其纯度达 95 %以上 ;免疫后小鼠血清特异性IgG抗体滴度最高达 1∶6 0 0 0 ,阴道粘膜冲洗液中特异性IgA抗体滴度最高达 1∶30 0 ;小鼠脾脏淋巴细胞增殖率达 50 %左右 ,淋巴细胞分泌的INF γ和IL 4分别为 60、1 0 8μg/ml;实验组BALB/C雌鼠妊娠率平均降至 60 % ,每胎产仔数平均降低 58%～71 %。结论　含有两种特异性精子抗原中特异性氨基酸序列的新抗原可激发小鼠产生较理想的特异性体液免疫和粘膜免疫 ,并使小鼠受孕率下降 。 展开更多

关键词 多价精子抗原表位肽 免疫效应 肽疫苗 避孕 多价抗生育疫苗

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鸡志贺氏菌多价凝集抗原及其标准血清的应用 被引量：2

4

作者 宋海霞 李炜 +4 位作者 蒋大伟 许兰菊 李凯 潘国民 贾文科 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2009年第11期136-139,共4页

利用研制的鸡志贺氏菌多价凝集抗原及其标准血清,对信阳地区18家鸡场的351份鸡待检血清进行了血清抗体检测。结果显示:351份被检血清中,鸡鲍氏和痢疾志贺氏菌混合感染的抗体阳性率达8.33%(1/12)～73.91%(17/23),平均抗体阳性率为44.16%(... 利用研制的鸡志贺氏菌多价凝集抗原及其标准血清,对信阳地区18家鸡场的351份鸡待检血清进行了血清抗体检测。结果显示:351份被检血清中,鸡鲍氏和痢疾志贺氏菌混合感染的抗体阳性率达8.33%(1/12)～73.91%(17/23),平均抗体阳性率为44.16%(155/351)。通过与鸡志贺氏菌单价凝集抗原的检测结果相比较,发现其吻合率高达98.58%(346/351),说明鸡志贺氏菌多价凝集抗原及其标准血清用于血样的检测,具有高度的特异性,准确可靠、方法简便快速。 展开更多

关键词 鸡志贺氏菌多价凝集抗原 标准血清 血清学调查 抗体阳性率

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A组轮状病毒多个结构蛋白抗原表位的串联表达及其免疫原性的检测 被引量：6

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作者 杨艳梅 李霞 +5 位作者 杨慧 钱渊 张又 霍岩 方荣祥 陈晓英 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2011年第1期60-66,共7页

从北京腹泻婴儿粪便提取的轮状病毒(rotavirus,RV)(T114株)的RNA中,克隆到轮状病毒结构蛋白基因vp4,vp6和vp7的全长cDNA,对它们编码的蛋白质序列和可能的抗原表位肽进行了预测,选择了RV主要抗原蛋白VP7、VP6和VP4的4个抗原表位肽,通过... 从北京腹泻婴儿粪便提取的轮状病毒(rotavirus,RV)(T114株)的RNA中,克隆到轮状病毒结构蛋白基因vp4,vp6和vp7的全长cDNA,对它们编码的蛋白质序列和可能的抗原表位肽进行了预测,选择了RV主要抗原蛋白VP7、VP6和VP4的4个抗原表位肽,通过人工合成DNA的方式将这些抗原表位肽基因串联融合成一个阅读框RME(rotavirus multipleepitopes,RME)并构建原核表达载体.大肠杆菌表达的RME在ELISA反应中可被RV多克隆抗体识别,纯化的RME蛋白注射免疫小鼠可诱导特异性免疫应答,产生高滴度的同源氨基酸序列特异抗体和人RV抗体,其中针对RME的IgG抗体滴度达到l∶40 000,针对单个抗原表位EV7、EV6和EV4的IgG抗体滴度达l∶10 000～l∶20 000,针对RV Wa株的IgG抗体滴度较低为l∶2 500,但能特异地中和该病毒对MAC145细胞的侵染.上述结果为新型RV基因工程疫苗的研发提供了论据和基础. 展开更多

关键词 轮状病毒 基因工程疫苗 多价抗原表位

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种鸡场鸡白痢、鸡伤寒净化抗原比较及检测方法的确定 被引量：8

6

作者 王海源 徐家芳 +3 位作者 莫国东 侯雪娇 葛子汉 韦平 《中国家禽》 北大核心 2014年第2期52-53,共2页

本试验通过对2家种鸡公司鸡群共803份血清样品同时用3种由不同公司生产的抗原进行比较检测,寻找适合的检测抗原及相应的检测方法。结果显示,3种鸡白痢、鸡伤寒多价染色抗原中以国内A公司生产的结果最准确,国内B公司生产的抗原准确率低... 本试验通过对2家种鸡公司鸡群共803份血清样品同时用3种由不同公司生产的抗原进行比较检测,寻找适合的检测抗原及相应的检测方法。结果显示,3种鸡白痢、鸡伤寒多价染色抗原中以国内A公司生产的结果最准确,国内B公司生产的抗原准确率低于其他2种抗原,但敏感度高,国外C公司的准确性良好,但成本较高;同时,血清平板凝集试验比全血平板凝集试验更为准确。 展开更多

关键词 鸡白痢 鸡伤寒 多价染色抗原 平板凝集试验

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乳糖诱导重组多价人精子表位肽在大肠杆菌中的表达 被引量：4

7

作者 谢琦 林军 +4 位作者 白玲 叶元 杨冰 石青峰 刘永明 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期171-175,共5页

旨在研究用乳糖替代IPTG作为诱导剂进行重组多价人精子抗原表位肽的表达及诱导表达的优化条件。在摇瓶发酵条件下,通过改变培养基组成、诱导时机、诱导温度、诱导剂浓度、诱导时间和诱导方式等条件,利用SDS-PAGE电泳和AlphaEase凝胶电... 旨在研究用乳糖替代IPTG作为诱导剂进行重组多价人精子抗原表位肽的表达及诱导表达的优化条件。在摇瓶发酵条件下,通过改变培养基组成、诱导时机、诱导温度、诱导剂浓度、诱导时间和诱导方式等条件,利用SDS-PAGE电泳和AlphaEase凝胶电泳图像分析系统,研究以上条件改变对GST-重组多价人精子抗原表位肽融合蛋白表达量的影响,并与IPTG诱导结果相比较。结果显示,在摇瓶试验中,最优表达条件为选用TB培养基,在菌体对数生长的中期进行诱导,诱导温度37℃、乳糖诱导终浓度3 mmol/L、诱导时间6 h。GST-重组多价人精子抗原表位肽融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的30.5%,且主要以可溶形式表达,与IPTG的诱导结果相同。分批流加乳糖和一次性加入乳糖诱导,效果一样。乳糖可以替代IPTG作为诱导剂诱导GST-重组多价人精子抗原表位肽融合蛋白的表达,优化条件下可获得与IPTG相同的诱导表达效果。 展开更多

关键词 重组多价人精子抗原表位肽 乳糖 IPTG 表达 诱导

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种鸡笼养可以加速净化鸡白痢

8

作者 赵善昌 梁家权 刘芳 《广西畜牧兽医》 1991年第1期35-37,共3页

近年来,国内不少鸡场已经开始探索并进行鸡白痢的净化工作,一般多以检疫为主,配合综合性的兽医卫生措施。实践已经证明,此综合措施只要持之以恒,长期不懈,

关键词 鸡白痢 兽医卫生 净化工作 带菌鸡 多价抗原 种鸡群 净化措施 平养 药物防治 试验鸡群

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博白县外贸鸡场白痢阳性鸡菌检报告

9

作者 梁家权 赵善昌 +6 位作者 刘芳 叶世福 廖天 李聪 邹发英 熊志明 符显栋 《广西畜牧兽医》 1993年第1期20-21,共2页

鸡白痢是危害养鸡业发展的重要疾病之一,为了尽快控制和消灭本病,我们采用了棚养、检疫和兽医卫生综合措施,以较快速度净化鸡白痢,检出的阳性鸡及时淘汰。但在现场检疫中检出的阳性鸡的带菌情况如何,国外有过不少的研究,在国内利用自然... 鸡白痢是危害养鸡业发展的重要疾病之一,为了尽快控制和消灭本病,我们采用了棚养、检疫和兽医卫生综合措施,以较快速度净化鸡白痢,检出的阳性鸡及时淘汰。但在现场检疫中检出的阳性鸡的带菌情况如何,国外有过不少的研究,在国内利用自然发病进行剖杀菌检的研究还不很多。1991年11月,我们在博白县外贸鸡场检出的阳性鸡随机取30只(160日龄)进行剖杀。 展开更多

关键词 鸡白痢 兽医卫生 带菌情况 器官病 生物制品厂 多价抗原 三黄鸡 试验鸡 在现场 坏死灶

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产肠毒素大肠杆菌FaeG-mSTa-LTb-STb融合表达及其包涵体口服免疫小鼠诱导的免疫应答 被引量：2

10

作者 赵鹏 夏爽 +5 位作者 关乃瑜 谷珊珊 姜艳平 崔文 马德星 葛俊伟 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期790-795,共6页

为研究产肠毒素大肠杆菌(ETEC)F4菌毛主要结构蛋白Fae G、STa、LTb和STb毒素融合蛋白的免疫原性,本研究采用重叠延伸PCR(SOE-PCR)扩增编码Fae G-m STa(STa突变体)-LTb-STb 4种蛋白融合基因,将其克隆于p Pro EXHTa表达载体中进行原核表... 为研究产肠毒素大肠杆菌(ETEC)F4菌毛主要结构蛋白Fae G、STa、LTb和STb毒素融合蛋白的免疫原性,本研究采用重叠延伸PCR(SOE-PCR)扩增编码Fae G-m STa(STa突变体)-LTb-STb 4种蛋白融合基因,将其克隆于p Pro EXHTa表达载体中进行原核表达。并以表达的包涵体口服免疫BALB/c小鼠,通过检测免疫鼠的体液和细胞免疫反应,评价其免疫效果。实验结果显示,融合蛋白在大肠杆菌中以包涵体的形式高效表达,并可以被特异性抗体所识别,具有良好的反应原性。免疫小鼠后均能够产生特异性Ig G和s Ig A,并诱导产生细胞免疫应答。免疫记忆反应试验证明,免疫鼠至少在3个月内保持对特异性抗原的免疫记忆应答。本研究结果表明,Fae G-m STa-LTb-STb融合蛋白具有良好的免疫原性,口服包涵体免疫是一种可行的免疫途径,提示所制备的融合蛋白作为口服疫苗抗原具有潜在的应用价值。 展开更多

关键词 产肠毒素大肠杆菌 断奶仔猪腹泻 多价抗原 包涵体 免疫应答

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伊犁地区牛源大肠埃希菌血清分型和ERIC-PCR分型研究 被引量：1

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作者 刘英玉 张妍 +3 位作者 刘俊飞 吾买尔江.牙合甫 张晓红 姚刚 《动物医学进展》 北大核心 2018年第1期34-40,共7页

调查某肉牛养殖场和其定点屠宰加工场中牛源大肠埃希菌的表型和基因型,为产业链中大肠埃希菌的污染情况提供科学依据。对分离鉴定的牛源大肠埃希菌采用O抗原多价血清进行检测,选取其中多价4和多价5的菌株进行单价PCR(O7、O39、O5、O114... 调查某肉牛养殖场和其定点屠宰加工场中牛源大肠埃希菌的表型和基因型,为产业链中大肠埃希菌的污染情况提供科学依据。对分离鉴定的牛源大肠埃希菌采用O抗原多价血清进行检测,选取其中多价4和多价5的菌株进行单价PCR(O7、O39、O5、O114、O116、O6、O9、O30、O55)的扩增,同时进行ERICPCR的基因分型。结果表明,牛源大肠埃希菌分离株以多价4、多价5、多价6和多价19较多,检出率均超过5%。单价PCR检测出O5(2株)、O114(3株)、O116(4株)、O6(6株)、O9(2株)血清型。ERIC-PCR基因分型多价4和多价5中含有13种基因型,分成6簇,同源性在59%~100%。同种多价血清在一个簇,其中D簇包括12株菌,同源性在70%以上。然而同一种血清型的不同菌株其基因型不在一个簇内。 展开更多

关键词 牛源大肠埃希菌 O抗原多价血清 聚合酶链反应 ERIC-PCR基因分型

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种鸡白痢净化措施的探讨

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作者 张嗣倪 叶连富 +2 位作者 龚生圭 叶霜景 李云英 《浙江畜牧兽医》 1990年第2期24-25,共2页

鸡白痢是鸡的常见病、多发病,对养鸡业危害很大。控制该病的发生,关键在于净化种鸡群及其环境,以阻断垂直传播和水平传播的途径。我市于1984年开始,开展了对种鸡白痢的净化工作,现报告如下。一、概况鸡白痢是由鸡白痢沙门氏菌引起的传... 鸡白痢是鸡的常见病、多发病,对养鸡业危害很大。控制该病的发生,关键在于净化种鸡群及其环境,以阻断垂直传播和水平传播的途径。我市于1984年开始,开展了对种鸡白痢的净化工作,现报告如下。一、概况鸡白痢是由鸡白痢沙门氏菌引起的传染病。初生雏鸡常呈急性全身感染,拉白色下痢和败血症,发病率和死亡率都很高。 展开更多

关键词 鸡白痢 净化措施 种鸡群 初生雏鸡 下痢 净化工作 多价抗原 兽医卫生防疫 平板凝集试验 水平传播

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