我国D2-43病毒株PrM-E基因的复制型载体质粒DNA的免疫原性(英文)

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作者 陈水平 秦鄂德 +5 位作者 于曼 胡志君 赵卫 范宝昌 王鹏程 杨佩英 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期151-155,共5页

观察含我国登革 2型病毒株 (D2 4 3)的PrM E基因的复制型SFV(semlikiforestvirus)重组质粒DNA的免疫原性 ,为登革新型疫苗的研制提供依据 .将PrM E基因自T载体上切下 ,插入复制型SFV病毒载体质粒DNA中 .将此重组质粒DNA以电穿孔法导入... 观察含我国登革 2型病毒株 (D2 4 3)的PrM E基因的复制型SFV(semlikiforestvirus)重组质粒DNA的免疫原性 ,为登革新型疫苗的研制提供依据 .将PrM E基因自T载体上切下 ,插入复制型SFV病毒载体质粒DNA中 .将此重组质粒DNA以电穿孔法导入BHK2 1细胞 ,用间接免疫荧光法在感染细胞内可检测到登革 2型病毒特异蛋白的表达 .采用去除内毒素的质粒提取试剂盒制备重组质粒DNA ,然后以不同剂量通过肌肉多点注射途径免疫Balb c鼠 ,获得的鼠血清可与登革D2 4 3感染的C6 36抗原片起特异的抗原抗体反应 .结果表明 ,含登革 2型病毒PrM E基因的复制型SFV病毒载体质粒DNA在Balb c鼠中可诱导登革 2型病毒特异抗体的产生 ,但抗体水平较低 . 展开更多

关键词 D2-43病毒株 PrM-E基因 复制型载体质粒DNA 免疫原性 登革病毒 DNA免疫

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鸡痘病毒非复制型载体研究进展 被引量：2

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作者 罗坤 金宁一 《预防兽医学进展》 2000年第2期22-25,共4页

关键词 鸡痘病毒 非复制型载体 构建原则 重组疫苗

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马流感病毒血凝素基因甲病毒复制子重组表达质粒的构建及其免疫效力评价 被引量：1

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作者 仇铮 郭巍 +3 位作者 孙元 戚亭 仇华吉 相文华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期568-572,共5页

为评价马流感病毒(EIV)HA基因核酸免疫效果,本研究以甲病毒复制子载体pSFV1CS分别构建了表达EIV H3N8亚型的美洲型和欧洲型HA基因的重组真核表达质粒。并将其转染293T细胞,经间接免疫荧光鉴定表明HA基因获得表达;以重组质粒免疫的BALB/... 为评价马流感病毒(EIV)HA基因核酸免疫效果,本研究以甲病毒复制子载体pSFV1CS分别构建了表达EIV H3N8亚型的美洲型和欧洲型HA基因的重组真核表达质粒。并将其转染293T细胞,经间接免疫荧光鉴定表明HA基因获得表达;以重组质粒免疫的BALB/c鼠能够检测到特异性抗体产生,而且HI抗体水平持续升高,同时小鼠体内IFN-γ、IL-4分泌水平也有所升高。攻毒后小鼠表现轻度临床症状,但病毒分离和RT-PCR均未检测到病毒。上述结果表明,该重组质粒pSFV1CS-EIV-HA具有良好的免疫原性并且可以诱导免疫动物产生较高免疫应答的能力。 展开更多

关键词 马流感病毒 甲病毒复制子载体

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负载肝素酶复制缺陷型腺病毒的包装及鉴定 被引量：2

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作者 陈陵 蔡永国 +4 位作者 郑兴春 杨仕明 房殿春 罗元辉 王东旭 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期38-41,共4页

目的包装负载人肝素酶(hpa)全长cDNA的复制缺陷型腺病毒载体(Adhpa)。方法将肝素酶正义腺病毒穿梭质粒pDC315hpa与腺病毒包装质粒pBHGloxDeltaE1,3Cre共转染人胚肾293细胞(HEK293),包装Adhpa,并大量扩增,收集纯化。对纯化后的Adhpa进行... 目的包装负载人肝素酶(hpa)全长cDNA的复制缺陷型腺病毒载体(Adhpa)。方法将肝素酶正义腺病毒穿梭质粒pDC315hpa与腺病毒包装质粒pBHGloxDeltaE1,3Cre共转染人胚肾293细胞(HEK293),包装Adhpa,并大量扩增,收集纯化。对纯化后的Adhpa进行滴度测定、感染性鉴定、电镜鉴定及双引物PCR鉴定。结果包装成功的腺病毒载体具有良好的感染性,纯化浓缩后的病毒滴度可达5×1010pfu/ml。电镜证实病毒浓缩液中存在病毒颗粒,并可见病毒在HEK293细胞中复制。PCR双引物鉴定Adhpa可扩增出Ad及hpa特异片段,而对照则不能扩增出hpa片段。结论成功包装了负盘。 展开更多

关键词 肝素酶 腺病毒科 复制缺陷型腺病毒载体 转染

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腺病毒载体介导人KDR胞外段诱导抗小鼠肝癌的免疫效应 被引量：1

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作者 谭晓华 吴彬 +2 位作者 王芳 刘兵 王友臣 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2007年第4期312-316,共5页

目的:探讨复制缺陷型腺病毒载体(Ad)介导人血管内皮细胞生长因子受体-2(hVEGFR-2或hKDR)胞外段诱导抗小鼠肝癌血管免疫及打破免疫耐受的效果。方法:构建Ad hKDRE,用Ad hKDRE皮内免疫C57BL/6小鼠,7d后取脾细胞作为效应细胞(E),Hepa1-6/m... 目的:探讨复制缺陷型腺病毒载体(Ad)介导人血管内皮细胞生长因子受体-2(hVEGFR-2或hKDR)胞外段诱导抗小鼠肝癌血管免疫及打破免疫耐受的效果。方法:构建Ad hKDRE,用Ad hKDRE皮内免疫C57BL/6小鼠,7d后取脾细胞作为效应细胞(E),Hepa1-6/mKDR作为靶细胞(T),行乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测特异性CTL杀伤活性;给免疫小鼠接种肝癌细胞Hepa1-6,观察荷瘤小鼠成活情况。结果:Ad hKDRE免疫小鼠1周后,在E∶T为100∶1、50∶1和25∶1时,Ad hKDRE诱导的6hCTL杀伤率分别为(81.5±5.6)%、(68.4±5.5)%和(39.6±3.9)%。Ad hKDRE免疫小鼠1周后接种2×106 Hepa1-6肝癌细胞,观察2个月无小鼠成瘤;接种5×106 Hepa1-6细胞,小鼠无瘤成活率为60%。上述CTL效应和抗成瘤作用在清除CD8+和CD4+ T淋巴细胞后消失。结论:Ad介导异种(人)KDR胞外段能有效地打破小鼠肝癌的免疫耐受,诱发强烈的抗原特异性细胞免疫反应,这种特异性细胞免疫反应是CD4+和CD8+ T细胞依赖性的。 展开更多

关键词 复制缺陷型腺病毒载体 原发性肝癌 血管内皮细胞生长因子受体-2 异种抗原

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逆转录病毒载体介导的转基因鸡研究进展 被引量：3

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作者 王令 张涛 尹亚军 《中国家禽》 北大核心 2015年第14期44-48,共5页

转基因鸡作为重要的经济动物和理想的生物反应器,具有广阔的应用前景。鸡基因组测序的完成加快了转基因鸡的研究和发展。病毒载体法是转基因鸡制备的主导方法之一,具有效率高和遗传稳定性良好的优势。本文对逆转录病毒载体特征、复制缺... 转基因鸡作为重要的经济动物和理想的生物反应器,具有广阔的应用前景。鸡基因组测序的完成加快了转基因鸡的研究和发展。病毒载体法是转基因鸡制备的主导方法之一,具有效率高和遗传稳定性良好的优势。本文对逆转录病毒载体特征、复制缺陷型病毒载体和复制整合双缺陷型病毒载体的优缺点及其介导的转基因鸡研究进行综述,展望人工核酸酶技术结合复制整合双缺陷型逆转录病毒载体在转基因鸡研究领域的应用前景。 展开更多

关键词 转基因鸡 逆转录病毒载体 复制整合双缺陷型病毒载体 人工核酸酶技术

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论作品载体 被引量：11

7

作者 张胜先 《知识产权》 CSSCI 1996年第5期9-12,共4页

在著作权法律关系中,其客体是作品。根据著作权法第3条规定,我国著作权法保护的作品有九类之多,涉及到文学、艺术和自然科学、社会科学、工程技术等领域。尽管受著作权法保护的作品范围广泛、门类众多、形式各异,但是所有作品都涉及到... 在著作权法律关系中,其客体是作品。根据著作权法第3条规定,我国著作权法保护的作品有九类之多,涉及到文学、艺术和自然科学、社会科学、工程技术等领域。尽管受著作权法保护的作品范围广泛、门类众多、形式各异,但是所有作品都涉及到作品载体的问题。然而,对于作品载体却是被人们长期忽略的一个问题。在我国著作权法实施条例和有关著作权方面的论著中,虽然常常提及到“物质载体”、“作品的载体”、“载体”这类词。 展开更多

关键词 著作权法 作品载体 作品 表现载体 复制载体 固定载体

全文增补中

复制子荧光素酶表达质粒pSVK-luc的构建与应用 被引量：1

8

作者 李盼 张亮 +5 位作者 王宇 朱晓明 张巍 徐元基 于继云 阎瑾琦 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期765-768,共4页

目的为研究复制子DNA疫苗在生物活体内的表达情况,构建含有荧光素酶报告基因的复制子表达质粒pSVK-luc。方法 PCR扩增荧光素酶报告基因,克隆入DNA复制子载体pSVK,酶切鉴定和测序分析筛选阳性重组质粒pSVK-luc;化学法转染人胚肾293T细胞... 目的为研究复制子DNA疫苗在生物活体内的表达情况,构建含有荧光素酶报告基因的复制子表达质粒pSVK-luc。方法 PCR扩增荧光素酶报告基因,克隆入DNA复制子载体pSVK,酶切鉴定和测序分析筛选阳性重组质粒pSVK-luc;化学法转染人胚肾293T细胞,流式细胞术和免疫荧光法检测荧光素酶基因在293T细胞中的表达;利用基因电穿孔导入仪递送重组质粒至BALB/c小鼠股四头肌,活体成像仪动态观测荧光素酶基因在小鼠体内的表达。结果 pSVK-luc经相应酶切和测序鉴定,与预期设计完全一致。流式细胞术和免疫荧光检测均可见荧光素酶基因表达;同时活体成像仪也能检测到该基因在小鼠体内的表达。结论 pSVK-luc表达质粒的构建成功将为复制子DNA疫苗体内作用机制研究和体内电穿孔递送条件的优化奠定实验基础。 展开更多

关键词 荧光素酶基因 复制子载体 体内外表达 活体成像

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甲病毒载体的研究进展 被引量：2

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作者 龚文芝 刘灿 +1 位作者 张东东 宁宜宝 《中国兽药杂志》 北大核心 2015年第4期65-69,共5页

甲病毒属于披膜病毒科,是一类有包膜的单股正链RNA病毒。近些年来,国内外有关甲病毒载体的研究非常活跃,其已被用于疫苗研究、基因治疗以及分子生物学等研究领域。基于甲病毒载体的构造原理,将其分为三类,分别为复制完全型载体、复制缺... 甲病毒属于披膜病毒科,是一类有包膜的单股正链RNA病毒。近些年来,国内外有关甲病毒载体的研究非常活跃,其已被用于疫苗研究、基因治疗以及分子生物学等研究领域。基于甲病毒载体的构造原理,将其分为三类,分别为复制完全型载体、复制缺陷型载体和DNA/RNA载体。就这三类载体的改造过程进行了探讨,并对这三类载体的特点及其应用研究进展等方面进行了阐述,以期为开发出更安全、更有效的甲病毒载体提供参考。 展开更多

关键词 甲病毒 复制子载体 高水平表达

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携TGFβ1正、反义基因载体对膀胱癌细胞体外生长的作用

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作者 李文录 赵秀英 +2 位作者 朱锡真 牛瑞芳 姚欣 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2003年第6期527-530,共4页

目的 :探讨表达TGFβ1正、反义基因的复制缺陷型逆转录病毒载体 ,对人膀胱癌细胞生长及细胞周期调控的作用。方法 :以逆转录病毒 pRevTRE为载体 ,构建表达TGFβ1正、反义基因的复制缺陷型逆转录病毒载体 pRevTβ和 pRevTβ AS ;分别转... 目的 :探讨表达TGFβ1正、反义基因的复制缺陷型逆转录病毒载体 ,对人膀胱癌细胞生长及细胞周期调控的作用。方法 :以逆转录病毒 pRevTRE为载体 ,构建表达TGFβ1正、反义基因的复制缺陷型逆转录病毒载体 pRevTβ和 pRevTβ AS ;分别转染膀胱癌细胞株EJ ,观察不同载体对膀胱癌细胞体外增殖、克隆形成和细胞周期时相的影响。结果 :pRevTβ、pRevTβ AS载体病毒滴度分别为 0 84、0 88× 10 5CFU/ml,对EJ细胞的整合率为10 0 % ,并有效表达 ;抑制TGFβ1表达可以降低靶细胞的生长速度和克隆形成率 ,同时出现G0 /G1期细胞比例增高和S期细胞比例降低。结论 :携TGFβ1反义基因的复制缺陷型逆转录病毒载体可以下调EJ细胞内源性TGFβ1表达 ,诱导肿瘤细胞G1期阻滞 ,抑制肿瘤细胞体外生长增殖。 展开更多

关键词 TGFΒ1 复制缺陷型逆转录病毒载体 反义RNA 膀胱癌 培养的肿瘤细胞 细胞周期

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猪水疱病自杀性DNA疫苗的初步研究 被引量：2

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作者 孙世琪 郭慧琛 +6 位作者 尹双辉 冯霞 尚佑军 代兴国 刘在新 刘湘涛 谢庆阁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1016-1020,共5页

利用RT-PCR技术,用保真酶扩增获得猪水疱病病毒外壳蛋白1BCD基因,克隆于DNA复制子载体pSCA1中,获得重组质粒pSCA/1BCD。将重组质粒转染BHK-21细胞,RT-PCR法和间接免疫荧光法检测显示,猪水疱病病毒外壳蛋白基因在转染细胞中表达。豚鼠免... 利用RT-PCR技术,用保真酶扩增获得猪水疱病病毒外壳蛋白1BCD基因,克隆于DNA复制子载体pSCA1中,获得重组质粒pSCA/1BCD。将重组质粒转染BHK-21细胞,RT-PCR法和间接免疫荧光法检测显示,猪水疱病病毒外壳蛋白基因在转染细胞中表达。豚鼠免疫试验表明,自杀性DNA疫苗pSCA/1BCD可诱导SVDV特异性抗体和T淋巴细胞增殖。 展开更多

关键词 猪水疱病病毒(SVDV) 甲病毒复制子载体 自杀性DNA疫苗

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鸡毒支原体穿梭质粒的构建

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作者 胡美容 陈鸿军 +4 位作者 于圣青 谭磊 仇旭升 高崧 丁铲 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期619-623,共5页

为构建大肠菌(E.coli)-鸡支原体(MG)穿梭质粒,本研究基于MG复制原点(oriC)部分活性序列区域,以pBluescript-SK(+)为骨架载体,庆大霉素为筛选基因,构建了E.coli-MG穿梭质粒pBSoriC-GmR,经PCR及western blot检测该载体能够在MG中稳定存在2... 为构建大肠菌(E.coli)-鸡支原体(MG)穿梭质粒,本研究基于MG复制原点(oriC)部分活性序列区域,以pBluescript-SK(+)为骨架载体,庆大霉素为筛选基因,构建了E.coli-MG穿梭质粒pBSoriC-GmR,经PCR及western blot检测该载体能够在MG中稳定存在22代以上,并能够高效表达庆大霉素乙酰转移酶。本研究为利用该载体进行MG基因功能的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 鸡毒支原体 复制原点 ORIC 可复制载体

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重组腺病毒介导绿色荧光蛋白基因对小鼠眼组织的转染和表达 被引量：2

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作者 于慧 吴继红 +4 位作者 张圣海 刘新建 张巨峰 易苗英 黄倩 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2007年第12期904-907,共4页

目的研究不同剂量Ad5-EGFP前房注射后,报告基因在小鼠眼部组织的表达情况及分布特点。方法24只BALB/c小鼠随机分组。实验组以不同浓度梯度前房注射Ad5-EGFP。对照组前房分别注射PBS和不给予任何注射。观察活体眼部组织EGFP表达情况及阳... 目的研究不同剂量Ad5-EGFP前房注射后,报告基因在小鼠眼部组织的表达情况及分布特点。方法24只BALB/c小鼠随机分组。实验组以不同浓度梯度前房注射Ad5-EGFP。对照组前房分别注射PBS和不给予任何注射。观察活体眼部组织EGFP表达情况及阳性细胞的类型。结果低浓度注射组在各个时间点眼表均未观察到EGFP荧光表达。高浓度注射组在注射病毒第1d即可以观察EGFP的表达,在第10d时眼表EGFP荧光亮度、范围增加最为明显。EGFP在角膜内皮细胞、虹膜色素上皮细胞及小梁网阳性表达。结论Ad5型腺病毒载体定向携带报告基因在眼前节表达,为眼前节疾病的基因治疗提供了实验依据。 展开更多

关键词 复制缺陷型腺病毒载体 基因治疗 角膜内皮细胞 报告基因

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柔嫩艾美耳球虫gam22基因重组质粒的免疫原性及保护效果

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作者 董青 王京森 +2 位作者 李新 王晓岑 李建华 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2021年第9期6-11,共6页

为了评价重组质粒pSMART2b-Etgam22抗柔嫩艾美耳球虫的保护效果,本试验用PCR扩增获得Etgam22基因后连接至pSMART2b载体以构建重组质粒pSMART2b-Etgam22,用Western Blot分析重组质粒pSMART2b-Etgam22在293T细胞中的表达情况,用重组质粒pS... 为了评价重组质粒pSMART2b-Etgam22抗柔嫩艾美耳球虫的保护效果,本试验用PCR扩增获得Etgam22基因后连接至pSMART2b载体以构建重组质粒pSMART2b-Etgam22,用Western Blot分析重组质粒pSMART2b-Etgam22在293T细胞中的表达情况,用重组质粒pSMART2b-Etgam22免疫雏鸡,并检测抗体水平和细胞因子分泌情况,随后用柔嫩艾美耳球虫卵囊感染免疫的雏鸡,观察死亡情况,检测体重变化、卵囊数量、盲肠病变,通过抗球虫指数评价pSMART2b-Etgam22对柔嫩艾美耳球虫感染的保护效果。结果显示,本试验成功构建了重组质粒pSMART2b-Etgam22;Western Blot分析表明,该重组质粒可在细胞中表达融合蛋白,表达蛋白可被抗柔嫩艾美耳球虫阳性血清识别。与未免疫感染组相比,pSMART2b-Etgam22免疫雏鸡显著提升了抗体水平(P<0.01)及IL-2和IFN-γ分泌(P<0.01),显著增加了体重(P<0.01),显著减少了卵囊排出数量(P<0.05),显著减轻了盲肠病变(P<0.05)。根据存活率、相对增重率、盲肠病变计分、卵囊值计算得出的抗柔嫩艾美耳球虫指数为165。结果表明,pSMART2b-Etgam22具有良好的抗柔嫩艾美耳球虫保护效果。 展开更多

关键词 柔嫩艾美耳球虫 Etgam22 甲病毒复制子载体 抗球虫指数 免疫原性 保护效果

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肝癌选择性溶瘤腺病毒的构建及其体外抑瘤作用

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作者 傅强 王慧萍 +4 位作者 韦芳 李慧明 陈霞芳 王煜非 黄倩 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期113-119,共7页

目的:构建由AFP基因增强子-启动子调控,并携带自杀基因TK的新型条件复制型腺病毒载体,观察该载体的选择复制能力、溶瘤作用及其与前药GCV联合处理对肝癌细胞的杀伤作用。方法:以HepG2基因组DNA为模板,PCR扩增AFP基因启动子(AFPp)和增强... 目的:构建由AFP基因增强子-启动子调控,并携带自杀基因TK的新型条件复制型腺病毒载体,观察该载体的选择复制能力、溶瘤作用及其与前药GCV联合处理对肝癌细胞的杀伤作用。方法:以HepG2基因组DNA为模板,PCR扩增AFP基因启动子(AFPp)和增强子(AFPe),构建表达质粒pAFPp-EGFPluc和pAFPep-EGFPluc,再构建由AFPep调控E1A表达、并携带TK基因的穿梭质粒pDC311-AFPep-E1A/CMV-TK,利用AdMax系统包装腺病毒Ad.AFPep-E1A/CMV-TK;利用Western blotting、病毒增殖测试、细胞病变效应实验、病毒联合前药GCV对肝癌细胞的杀伤实验等鉴定病毒的复制能力、溶瘤作用和对肝癌细胞的杀伤作用。结果:成功构建的腺病毒载体Ad.AFPep-E1A/CMV-TK在AFP阳性细胞中选择性复制,病毒自身具有一定的溶瘤作用;该病毒载体联合GCV前药系统处理肝癌细胞后,AFP阳性肝癌HepG2细胞和Hep3B细胞的存活率分别为(10.35±1.07)%、(15.49±5.80)%,AFP阴性的张氏肝细胞和人肺癌NCIH460细胞的存活率分别为(73.55±4.36)%、(74.54±9.89)%(P<0.01)。结论:构建的新型溶瘤腺病毒载体具有选择性杀伤肝癌细胞的能力,在肝癌治疗方面有良好的应用前景。 展开更多

关键词 肝肿瘤 条件复制型腺病毒载体 HSV-1TK基因 甲胎蛋白基因启动子 甲胎蛋白基因增强子 病毒-基因治疗

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兔病毒性出血症DNA疫苗研究进展 被引量：3

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作者 付强 郭广君 +1 位作者 程立坤 王艳 《湖北畜牧兽医》 2014年第8期82-85,共4页

兔病毒性出血症是养兔业最重要的疾病之一,其发病急,致死率高,可对养兔业造成巨大的经济损失,在疫苗研究方面,由于传统组织灭活疫苗存在诸多缺点,迫切需要研制新型疫苗。本文主要从兔病毒性出血症DNA疫苗的构建、免疫佐剂、临床免疫途... 兔病毒性出血症是养兔业最重要的疾病之一,其发病急,致死率高,可对养兔业造成巨大的经济损失,在疫苗研究方面,由于传统组织灭活疫苗存在诸多缺点,迫切需要研制新型疫苗。本文主要从兔病毒性出血症DNA疫苗的构建、免疫佐剂、临床免疫途径以及临床使用的效果等方面进行简要介绍。 展开更多

关键词 兔瘟 DNA疫苗 甲病毒复制子载体疫苗 免疫

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