烟草曲茎病毒复制相关蛋白基因原核表达条件优化 被引量：20

1

作者 潘滨 吴建祥 +1 位作者 李桂新 周雪平 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期24-28,共5页

为了提高烟草曲茎病毒(Tobacco curly shoot virus,TbCSV)复制相关蛋白(replication-associated protein,Rep)基因在大肠杆菌中表达量,研究了大肠杆菌菌株、温度、诱导时间以及诱导剂IPTG浓度等不同条件对GST-Rep融合蛋白表达量的影响.... 为了提高烟草曲茎病毒(Tobacco curly shoot virus,TbCSV)复制相关蛋白(replication-associated protein,Rep)基因在大肠杆菌中表达量,研究了大肠杆菌菌株、温度、诱导时间以及诱导剂IPTG浓度等不同条件对GST-Rep融合蛋白表达量的影响.结果表明,大肠杆菌菌株Rosetta在37℃培养3h后,使用终浓度为0.5mmol·L-1的IPTG在28℃诱导培养4h时,GST-Rep融合蛋白表达量最高,表达的GST-Rep融合蛋白可占细菌总蛋白的42%以上.用GST-Sepharose 4B亲和层析柱对GST-Rep融合蛋白进行纯化,SDS-PAGE表明GST-Rep融合蛋白大小约为66kD,与预计的分子量大小一致,Western blot分析表明其能与GST多克隆抗体起特异性反应.Rep基因的优化表达为研究该基因的作用机理打下了基础. 展开更多

关键词 Q786烟草曲茎病毒 复制相关蛋白 原核表达

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PCV2 Rep蛋白N-糖基化位点突变对病毒复制的影响 被引量：1

2

作者 徐胜男 时建立 +7 位作者 彭喆 徐绍建 吴晓燕 丛晓燕 杜以军 吴家强 李俊 王金宝 《家畜生态学报》 北大核心 2015年第4期10-14,共5页

N-糖基化对病毒的感染与增殖均具有重要作用,与PCV2复制相关的Rep蛋白含有三个N-糖基化位点。为了分析PCV2Rep蛋白N-糖基化位点突变对病毒复制的影响,本试验构建了三个双拷贝突变体感染性克隆2M23、2M256、2M286,并成功拯救病毒。通过... N-糖基化对病毒的感染与增殖均具有重要作用,与PCV2复制相关的Rep蛋白含有三个N-糖基化位点。为了分析PCV2Rep蛋白N-糖基化位点突变对病毒复制的影响,本试验构建了三个双拷贝突变体感染性克隆2M23、2M256、2M286,并成功拯救病毒。通过间接免疫荧光检测病毒的拯救效果,TCID50测定病毒的感染力,荧光定量PCR检测细胞病毒的载量。结果显示,PCV2Rep蛋白的23~25aa、256~258aa N-糖基化位点突变后降低病毒的复制能力,而286~288aa突变后增强病毒的复制能力,为进一步阐明PCV2的复制及致病机制提供参考。 展开更多

关键词 猪圆环2型 rep蛋白 N-糖基化位点 双拷贝 复制

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马铃薯A病毒复制相关蛋白研究进展 被引量：5

3

作者 吴兴泉 谭晓荣 陈士华 《中国马铃薯》 2006年第4期231-234,共4页

马铃薯A病毒侵染寄主后的复制主要由推测的复制复合体参与完成,复制复合体蛋白包括RNA解螺旋酶CI、病毒基因组结合蛋白VPg、NIa蛋白酶部分NIaPro和RNA依赖性RNA聚合酶NIb。近年来关于PVA复制复合体蛋白的研究取得了一定的进展,很多蛋白... 马铃薯A病毒侵染寄主后的复制主要由推测的复制复合体参与完成,复制复合体蛋白包括RNA解螺旋酶CI、病毒基因组结合蛋白VPg、NIa蛋白酶部分NIaPro和RNA依赖性RNA聚合酶NIb。近年来关于PVA复制复合体蛋白的研究取得了一定的进展,很多蛋白在病毒系统侵染过程发挥的作用及各种蛋白间的互作关系等方面已明确。本文对近年来在PVA病毒复制相关蛋白的结构与功能方面的研究进展进行评述。 展开更多

关键词 马铃薯A病毒 复制相关蛋白 结构与功能

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回顾Rep与Cap的结构及其对研究CRESS DNA 病毒的启发

4

作者 王栓群 刘献辉 +2 位作者 王琳 张衡 谢相科 《微生物学杂志》 北大核心 2025年第2期120-129,共10页

编码复制相关蛋白(Replication-associated protein,Rep)的单链环状DNA病毒(Circular Rep Encoding Single-Stranded DNA (CRESS DNA) Viruses)感染真核生物,具有病毒基因组小、宿主范围多样化、流行率高、滚环复制以及亲和性强等特点。... 编码复制相关蛋白(Replication-associated protein,Rep)的单链环状DNA病毒(Circular Rep Encoding Single-Stranded DNA (CRESS DNA) Viruses)感染真核生物,具有病毒基因组小、宿主范围多样化、流行率高、滚环复制以及亲和性强等特点。CRESS DNA病毒广泛感染且潜伏于多种真核生物,包括植物、动物、人类和真菌等,在病毒学领域影响深远且具有重要意义。CRESS DNA病毒是一种小型非囊膜DNA病毒,直径15~25 nm。病毒具有单链环状的基因组,主要编码两种蛋白质包括衣壳相关蛋白(Capsid protein,Cap)以及复制相关蛋白。Cap是组成病毒衣壳的唯一蛋白质组分,且在整个病毒复制周期中起着至关重要的作用,其参与病毒附着、细胞进入、基因组脱壳和成熟病毒粒子的组装。Rep则介导病毒基因组复制起始位点的识别,并利用其核酸内切酶活性使环状DNA断裂以进行滚环复制(Rolling cycle replication,RCR)。CRESS DNA病毒能够利用碱基长度有限的基因组在多种真核生物中进行复制并引起许多重要疾病,是病毒自然进化过程中产生的一种优秀的研究模型,该病毒进行复制的分子机制以及感染宿主的免疫机制值得深入探究。本文回顾了目前对CRESS DNA病毒编码蛋白的结构研究,通过了解蛋白在复制周期中的作用及其相互关系,为进一步阐明CRESS DNA病毒相关疾病的发病机制提供参考。 展开更多

关键词 CRESS DNA病毒 衣壳蛋白 复制酶相关蛋白 蛋白质结构 致病机制

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HIV-I编码病毒蛋白R基因在真核细胞中的表达及其表达蛋白对KSHV溶解性周期复制的影响 被引量：4

5

作者 方欣 卢春 +3 位作者 曹戌 李久明 秦娣 吕志刚 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1089-1094,共6页

目的:构建含人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)编码病毒蛋白R(Vpr)基因的重组真核表达质粒并初步探索Vpr基因编码蛋白对卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)溶解性周期复制的影响。方法:构建pVpr-Flag重组质粒并进行酶切鉴定和序列测定;将pVpr-Flag... 目的:构建含人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)编码病毒蛋白R(Vpr)基因的重组真核表达质粒并初步探索Vpr基因编码蛋白对卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)溶解性周期复制的影响。方法:构建pVpr-Flag重组质粒并进行酶切鉴定和序列测定;将pVpr-Flag重组质粒临时转染BCBL-1和NIH3T3细胞,采用RT-PCR、IFA和Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测Vpr基因的表达情况;提取临时转染pVpr-Flag重组质粒的BCBL-1细胞总RNA,进行RT-PCR检测KSHV次要衣壳蛋白编码基因ORF26(仅在病毒裂解期表达)mRNA转录水平,初步探索HIV-1Vpr基因编码蛋白对KSHV复制的影响。结果:克隆的Vpr基因序列与GenBank中已登记的Vpr序列100%同源。RT-PCR、IFA和Western blot结果显示Vpr基因mRNA及其编码蛋白在真核细胞中得到了转录和表达。RT-PCR结果进一步显示,Vpr基因编码蛋白能够降低KSHV ORF26 mRNA转录水平。结论:成功构建含Vpr基因序列的重组质粒并在真核细胞中获得正确表达;初步探索表明Vpr蛋白能够抑制KSHV溶解性周期复制。 展开更多

关键词 人类免疫缺陷病毒1型 病毒蛋白R 卡波济肉瘤相关疱疹病毒 真核表达 复制

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血清HBsAg定量检测与乙型肝炎病毒复制的相关性研究进展 被引量：2

6

作者 杨阳 杨龙 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2013年第5期686-687,共2页

HBV外膜蛋白是HBV颗粒的外膜组成部分，是决定病毒吸附至易感细胞受体的成分，编码包膜蛋白的基因分为前S1、前S2及S三个编码区，分别编码前S1蛋白、前S2蛋白及HBsAg。HBsAg是一种跨膜糖蛋白，在HBV感染时大量释放到患者血清中。

关键词 血清HBSAG 乙型肝炎病毒复制 定量检测 相关性 HBV颗粒 前S1蛋白 外膜蛋白 跨膜糖蛋白

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痘病毒锚蛋白重复序列蛋白对NF-кB信号通路的影响 被引量：3

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作者 陈轶霞 龙玲 骆学农 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期765-768,772,共5页

痘病毒科（Poxviridae）病毒是在细胞质中复制的双链DNA病毒,拥有130 kb～〉350 kb的基因组。分为两个亚科：脊椎动物痘病毒亚科（Chordopoxvirinae）和昆虫痘病毒亚科（Entomopo-xvirinae）。脊椎动物痘病毒亚科包含10个属。痘病毒间... 痘病毒科（Poxviridae）病毒是在细胞质中复制的双链DNA病毒,拥有130 kb～〉350 kb的基因组。分为两个亚科：脊椎动物痘病毒亚科（Chordopoxvirinae）和昆虫痘病毒亚科（Entomopo-xvirinae）。脊椎动物痘病毒亚科包含10个属。痘病毒间的基因组结构有很高的相似性,病毒DNA复制和转录所必需的基因以及涉及病毒粒子形态和结构的基因位于基因组高度保守的中间区域。基因组的末端区域在不同的属间呈现很大的多样性，包括一些属或种特异性基因以及感染和毒力相关基因。 展开更多

关键词 痘病毒科 锚蛋白重复序列 信号通路 基因组结构 双链DNA病毒 DNA复制 毒力相关基因 脊椎动物

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链霉菌中一类同源非典型端粒的克隆及分析

8

作者 李鹏 刘兰 +1 位作者 王通 黄筱萍 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期42-50,共9页

采用自连接-PCR的方法克隆和测序了Streptomyces cattleya DSM46488、Streptomyces mobaraensisDSM40847及Streptomyces davawensisJCM4913的端粒,序列比对发现,这3种端粒具有较高的序列相似性,前60个核苷酸的序列相似性达到了80%以上;... 采用自连接-PCR的方法克隆和测序了Streptomyces cattleya DSM46488、Streptomyces mobaraensisDSM40847及Streptomyces davawensisJCM4913的端粒,序列比对发现,这3种端粒具有较高的序列相似性,前60个核苷酸的序列相似性达到了80%以上;在二级结构水平,这些端粒含有多个回文序列,其中,包含相同的回文序列I和II,但并不能通过折返形成超级发夹结构;Streptomyces cattleya DSM46488、StreptomycesmobaraensisDSM40847及Streptomyces davawensis JCM4913的端粒与线性质粒pSHJG1端粒及Streptomyces albus J1074染色体端粒均具有较高的序列相似性;系统发育分析显示它们与典型端粒及其他非典型端粒处于不同的进化分支,S.cattleyaDSM46488、S.mobaraensis DSM40847、S.davawensisJCM4913、S.albus J1074及S.hydroscopicussubsp.Jinggangensis 5008都编码同源的潜在末端蛋白-端粒相关蛋白,暗示了这类同源的非典型端粒系统广泛存在于链霉菌中。 展开更多

关键词 链霉菌 线性复制子 同源非典型端粒 端粒系统 回文序列 末端蛋白-端粒相关蛋白

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RNA干扰V1和C1提高番茄植株对番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)的抗性 被引量：2

9

作者 李云洲 岳宁波 +4 位作者 陈相儒 李玉龙 曹贺贺 闫见敏 梁燕 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期2027-2034,共8页

为了获得高抗番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)番茄材料,本研究通过人工设计以TYLCV病毒基因V1、C1为靶标的双链RNA(dsRNA),通过农杆菌介导法转化番茄,探索RNAi技术在番茄抗TYLCV中的防御效果。结果表明,通过RNAi技术干扰TYLCV V1和C1基因可以... 为了获得高抗番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)番茄材料,本研究通过人工设计以TYLCV病毒基因V1、C1为靶标的双链RNA(dsRNA),通过农杆菌介导法转化番茄,探索RNAi技术在番茄抗TYLCV中的防御效果。结果表明,通过RNAi技术干扰TYLCV V1和C1基因可以延缓病毒症状的发生,提高番茄植株对TYLCV的抗性。田间试验结果发现,以TYLCV V1和C1为靶标的RNAi株系RNAi-CP-2和RNAi-Rep-12,不仅可以干扰病毒V1、C1的表达,而且可以干扰TYLCV其他4个基因V2、C2、C3和C4,表明RNAi技术可以在靶标基因附近传递,影响相邻其他基因的表达。本研究结果为番茄抗病毒研究奠定了理论基础。 展开更多

关键词 番茄黄化曲叶病毒 外壳蛋白(CP) 复制相关蛋白(rep) RNAi 抗病性

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Ferulaldehyde的体外抗流感作用研究

10

作者 周艳 宿露 +4 位作者 王云 范韦佟 李洪梅 李蓉涛 刘丹 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2023年第8期1364-1371,共8页

本研究对从蜘蛛香(Valeriana jatamansi Jones)和赤芍(Paeoniae Rubra Radix)中分离的一种苯丙素类化合物ferulaldehyde的抗甲型流感病毒的作用机制进行探索。通过加药时间点、免疫荧光实验、红细胞凝集法与神经氨酸酶活力检测等实验,... 本研究对从蜘蛛香(Valeriana jatamansi Jones)和赤芍(Paeoniae Rubra Radix)中分离的一种苯丙素类化合物ferulaldehyde的抗甲型流感病毒的作用机制进行探索。通过加药时间点、免疫荧光实验、红细胞凝集法与神经氨酸酶活力检测等实验,发现化合物ferulaldehyde主要影响流感病毒的复制和释放环节,干扰病毒的生命周期从而发挥抗流感病毒活性。分子对接结果进一步确认流感病毒NP和NA蛋白很可能是它作用的靶点。同时,该化合物还能显著抑制由流感病毒引起的巨噬细胞炎症相关蛋白和趋化因子的表达。综上所述,化合物ferulaldehyde可能通过直接抑制流感病毒复制和释放的过程以及影响免疫细胞的功能从而发挥抗流感的作用。 展开更多

关键词 ferulaldehyde 苯丙素 病毒复制周期 炎性相关蛋白 抗流感病毒

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KSHV RTA通过上调宿主细胞survivin表达促进病毒子代产生 被引量：1

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作者 高建明 Erle S.ROBERTSON 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期2085-2089,共5页

目的:研究卡波西肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)复制及转录激活因子(replication and transcription activator,RTA)上调宿主细胞存活蛋白(survivin)表达的生物学意义。方法:构建RNA干扰慢病毒载体,筛... 目的:研究卡波西肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)复制及转录激活因子(replication and transcription activator,RTA)上调宿主细胞存活蛋白(survivin)表达的生物学意义。方法:构建RNA干扰慢病毒载体,筛选稳定感染的JSC细胞,用Western blot证实survivin抑制的KSHV阳性细胞成功构建。Survivin抑制的JSC细胞经TPA诱导48 h后,用PCR检测病毒子DNA;在TPA诱导24、48和72 h后分别用realtime PCR和PI染色流式细胞术检测病毒裂解基因ORF57和TK表达及细胞凋亡率。结果:TPA诱导的JSC-shSur细胞与对照组细胞相比,病毒子代产生减少,病毒裂解基因表达下调,细胞凋亡率增加(P <0. 05)。结论:KSHV RTA能够利用survivin信号通路延缓裂解性感染宿主细胞的凋亡,并促进病毒子代产生。 展开更多

关键词 卡波西肉瘤相关疱疹病毒 复制及转录激活因子 存活蛋白 细胞凋亡 病毒子代

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