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增强型绿色荧光蛋白原核表达纯化与多克隆抗体的制备
被引量：
4
1
作者
高艳
陈雪梅
吴爱群
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2003年第3期345-348,共4页
目的 :进行增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)的克隆、原核表达和纯化以及多克隆抗体的制备 ,为以后纯化EGFP融合蛋白奠定基础。方法 :构建pGEX 4T3 EGFP重组质粒 ,在大肠杆菌BL2 1中进行原核表达 ,用亲和层析法纯化GST EGFP ,免疫BAB/C小鼠制...
目的 :进行增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)的克隆、原核表达和纯化以及多克隆抗体的制备 ,为以后纯化EGFP融合蛋白奠定基础。方法 :构建pGEX 4T3 EGFP重组质粒 ,在大肠杆菌BL2 1中进行原核表达 ,用亲和层析法纯化GST EGFP ,免疫BAB/C小鼠制备EGFP多克隆抗体。结果 :①目的蛋白GST EGFP表达量为 8g/L。②获得纯抗体溶液 5ml,浓度为 0 .4g/L。③EGFP抗体在 1 10 0 0 0 0稀释度时 ,Westernblot检测条带清晰 ,背景干净。结论 :通过优化诱导条件 ,利用大肠杆菌可低成本获得大量GST EGFP。直接使用GST EGFP融合蛋白免疫BAB/C小鼠 。
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关键词
增强型绿色荧光蛋白原核
表达
纯化
多克隆抗体
制备
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职称材料
利用柞蚕核型多角体病毒表达载体系统在柞蚕蛹中表达增强型绿色荧光蛋白
被引量：
7
2
作者
王林美
张波
+5 位作者
叶博
赵振军
李树英
李文利
岳冬梅
范琦
《蚕业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第5期792-799,共8页
为了探讨外源蛋白在柞蚕蛹-柞蚕核型多角体病毒(ApNPV)表达系统的表达水平和稳定性,将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因克隆到柞蚕核型多角体病毒转移表达载体pApM748BE中,获得重组质粒DNA,与ApNPV DNA共转染樗蚕(Phi-losamia cynthiam)培...
为了探讨外源蛋白在柞蚕蛹-柞蚕核型多角体病毒(ApNPV)表达系统的表达水平和稳定性,将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因克隆到柞蚕核型多角体病毒转移表达载体pApM748BE中,获得重组质粒DNA,与ApNPV DNA共转染樗蚕(Phi-losamia cynthiam)培养细胞Pc-01后,用末端稀释法筛选获得重组病毒ApNPV-Δph/egfp+。将该重组病毒感染柞蚕蛹,采用SDS-PAGE和Western blot方法检测EGFP在柞蚕蛹中的表达,结果显示:在柞蚕蛹感染重组病毒ApNPV-Δph/egfp+后6 d,EG-FP就有明显的表达;感染后12～18 d,蛹体液中的EGFP含量保持较高水平,以EGFP标准样品定量分析EGFP在柞蚕蛹体液中的表达水平高于1 mg/mL;感染后30～39 d仍可以检测到蛹体液中EGFP的表达,而且蛋白稳定。研究结果表明,利用柞蚕核型多角体病毒作表达载体,可在柞蚕蛹中高效稳定地表达EGFP,并且EGFP在雌雄蛹间的表达水平无明显差异。
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关键词
柞蚕蛹
核
型多角体病毒表达载体系统
增强型
绿色
荧光
蛋白
基因
樗蚕培养细胞
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职称材料
核因子-κB反应性不稳定增强型绿色荧光蛋白报告系统的建立与应用
被引量：
4
3
作者
王付龙
梁华平
+2 位作者
刘昕
徐祥
王正国
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2003年第1期78-83,共6页
建立核因子 κB (NF κB)反应性不稳定增强型绿色荧光蛋白 (d2EGFP)报告系统 ,作为筛选NF κB拮抗药物及研究其相关信号转导途径的工具 .分别以EGFP与d2EGFP为报告基因、neor 为筛选基因 ,构建成 4×κB基序为增强子、SV40为基本...
建立核因子 κB (NF κB)反应性不稳定增强型绿色荧光蛋白 (d2EGFP)报告系统 ,作为筛选NF κB拮抗药物及研究其相关信号转导途径的工具 .分别以EGFP与d2EGFP为报告基因、neor 为筛选基因 ,构建成 4×κB基序为增强子、SV40为基本启动子的报告基因载体 p4κB EGFP和 p4κB d2EGFP .两载体分别与p6 5载体瞬时共转染HEK2 93细胞 ,通过比较不同时相点EGFP和d2EGFP的调控表达 ,证明 p4κB d2EGFP是较理想的NF κB反应性绿色荧光蛋白 (GFP)报告基因载体 .将 p4κB d2EGFP稳定转染HEK2 93细胞 ,从而获得NF κB反应性报告细胞株HEK d2EGFP .应用NF κB“圈套”寡核苷酸 (TFD)与 p6 5载体瞬时共转染HEK d2EGFP ,1mg/L NF κB和 2mg/LNF κBTFD组对p6 5蛋白诱导调控表达的d2EGFP具有明显拮抗作用 .结果表明 ,NF κB反应性d2EGFP报告系统可特异、灵敏、动态地反映和监测NF κB的活性变化 .
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关键词
核
因子-ΚB
不稳定
增强型
绿色
荧光
蛋白
报告系统
基因表达调控
寡
核
苷酸
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职称材料
题名
增强型绿色荧光蛋白原核表达纯化与多克隆抗体的制备
被引量：
4
1
作者
高艳
陈雪梅
吴爱群
机构
郑州大学基础医学院人体解剖学教研室
出处
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2003年第3期345-348,共4页
基金
河南省科技攻关资助项目 0 2 110 43 80 0
文摘
目的 :进行增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)的克隆、原核表达和纯化以及多克隆抗体的制备 ,为以后纯化EGFP融合蛋白奠定基础。方法 :构建pGEX 4T3 EGFP重组质粒 ,在大肠杆菌BL2 1中进行原核表达 ,用亲和层析法纯化GST EGFP ,免疫BAB/C小鼠制备EGFP多克隆抗体。结果 :①目的蛋白GST EGFP表达量为 8g/L。②获得纯抗体溶液 5ml,浓度为 0 .4g/L。③EGFP抗体在 1 10 0 0 0 0稀释度时 ,Westernblot检测条带清晰 ,背景干净。结论 :通过优化诱导条件 ,利用大肠杆菌可低成本获得大量GST EGFP。直接使用GST EGFP融合蛋白免疫BAB/C小鼠 。
关键词
增强型绿色荧光蛋白原核
表达
纯化
多克隆抗体
制备
Keywords
enhanced green fluorescent protein
preparation of antibody
ELISA
Western blot
mouse
分类号
R392－33 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
利用柞蚕核型多角体病毒表达载体系统在柞蚕蛹中表达增强型绿色荧光蛋白
被引量：
7
2
作者
王林美
张波
叶博
赵振军
李树英
李文利
岳冬梅
范琦
机构
辽宁省农业科学院大连生物技术研究所
出处
《蚕业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第5期792-799,共8页
基金
国家人事部留学人员科技活动项目(No.LXZZ2005005)
辽宁省科技攻关项目(No.2008208001)
文摘
为了探讨外源蛋白在柞蚕蛹-柞蚕核型多角体病毒(ApNPV)表达系统的表达水平和稳定性,将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因克隆到柞蚕核型多角体病毒转移表达载体pApM748BE中,获得重组质粒DNA,与ApNPV DNA共转染樗蚕(Phi-losamia cynthiam)培养细胞Pc-01后,用末端稀释法筛选获得重组病毒ApNPV-Δph/egfp+。将该重组病毒感染柞蚕蛹,采用SDS-PAGE和Western blot方法检测EGFP在柞蚕蛹中的表达,结果显示:在柞蚕蛹感染重组病毒ApNPV-Δph/egfp+后6 d,EG-FP就有明显的表达;感染后12～18 d,蛹体液中的EGFP含量保持较高水平,以EGFP标准样品定量分析EGFP在柞蚕蛹体液中的表达水平高于1 mg/mL;感染后30～39 d仍可以检测到蛹体液中EGFP的表达,而且蛋白稳定。研究结果表明,利用柞蚕核型多角体病毒作表达载体,可在柞蚕蛹中高效稳定地表达EGFP,并且EGFP在雌雄蛹间的表达水平无明显差异。
关键词
柞蚕蛹
核
型多角体病毒表达载体系统
增强型
绿色
荧光
蛋白
基因
樗蚕培养细胞
Keywords
Antheraea pernyi pupa
Nucleopolyhedrovirus expression vector system
Enhanced green fluorescent protein （EGFP） gene
Cultured Philosamia cynthia cells
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
核因子-κB反应性不稳定增强型绿色荧光蛋白报告系统的建立与应用
被引量：
4
3
作者
王付龙
梁华平
刘昕
徐祥
王正国
机构
第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所
出处
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2003年第1期78-83,共6页
基金
国家重点基础研究发展规划项目 ( 973) (G19990 5 42 0 3)
国家自然基金资助项目 ( 30 0 80 0 0 9) .~~
文摘
建立核因子 κB (NF κB)反应性不稳定增强型绿色荧光蛋白 (d2EGFP)报告系统 ,作为筛选NF κB拮抗药物及研究其相关信号转导途径的工具 .分别以EGFP与d2EGFP为报告基因、neor 为筛选基因 ,构建成 4×κB基序为增强子、SV40为基本启动子的报告基因载体 p4κB EGFP和 p4κB d2EGFP .两载体分别与p6 5载体瞬时共转染HEK2 93细胞 ,通过比较不同时相点EGFP和d2EGFP的调控表达 ,证明 p4κB d2EGFP是较理想的NF κB反应性绿色荧光蛋白 (GFP)报告基因载体 .将 p4κB d2EGFP稳定转染HEK2 93细胞 ,从而获得NF κB反应性报告细胞株HEK d2EGFP .应用NF κB“圈套”寡核苷酸 (TFD)与 p6 5载体瞬时共转染HEK d2EGFP ,1mg/L NF κB和 2mg/LNF κBTFD组对p6 5蛋白诱导调控表达的d2EGFP具有明显拮抗作用 .结果表明 ,NF κB反应性d2EGFP报告系统可特异、灵敏、动态地反映和监测NF κB的活性变化 .
关键词
核
因子-ΚB
不稳定
增强型
绿色
荧光
蛋白
报告系统
基因表达调控
寡
核
苷酸
Keywords
gene expression regulation, destabilized EGFP(d2EGFP), κB motif, nuclear factor kappa B (NF- κB) , transcription factor decoy (TFD)
分类号
Q756 [生物学—分子生物学]
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
增强型绿色荧光蛋白原核表达纯化与多克隆抗体的制备
高艳
陈雪梅
吴爱群
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2003
4
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
利用柞蚕核型多角体病毒表达载体系统在柞蚕蛹中表达增强型绿色荧光蛋白
王林美
张波
叶博
赵振军
李树英
李文利
岳冬梅
范琦
《蚕业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2010
7
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
核因子-κB反应性不稳定增强型绿色荧光蛋白报告系统的建立与应用
王付龙
梁华平
刘昕
徐祥
王正国
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2003
4
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职称材料
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