目的:探讨运动性心房损伤和纤维化发生过程中大鼠心房基质金属蛋白酶及其抑制剂的表达变化。方法:8周龄SD雄性大鼠48只,随机分为安静对照组(24只)和大强度运动组(24只),每组又分为8周组、12周组和16周组,每组8只。安静组正常饲养,大强...目的:探讨运动性心房损伤和纤维化发生过程中大鼠心房基质金属蛋白酶及其抑制剂的表达变化。方法:8周龄SD雄性大鼠48只,随机分为安静对照组(24只)和大强度运动组(24只),每组又分为8周组、12周组和16周组,每组8只。安静组正常饲养,大强度运动组分别进行8周、12周和16周的跑台运动,跑速为28 m/min,坡度为10°,每天运动1小时,每周5天。采用荧光定量PCR和Western Blot检测心肌基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)m RNA与蛋白的表达,并计算MMP-1/TIMP-1m RNA和蛋白比值。结果:与安静组相比,8周大强度运动组MMP-1 m RNA和蛋白的表达均显著性增加(P<0.05),12周大强度运动组MMP-1 m RNA和蛋白的表达具有增加趋势,16周大强度运动组MMP-1 m RNA和蛋白的表达具有降低趋势,但无明显差异。MMP-1 m RNA的表达随运动时间的延长具有逐渐降低趋势,16周大强度运动组显著低于8周大强度运动组(P<0.05);与安静组相比,8周大强度运动组TIMP-1的表达无明显差异,12周和16周大强度运动组TIMP-1 m RNA和蛋白的表达均出现显著性增加(P<0.01、P<0.05)。随运动时间的延长,TIMP-1 m RNA的表达逐渐增加,16周大强度运动组显著高于8周大强度运动组(P<0.05);MMP-1/TIMP-1 m RNA和蛋白的比值先升高后降低,16周大强度运动组MMP-1/TIMP-1 m RNA的比值显著低于安静对照组和8周大强度运动组(P<0.05)。结论:长期大强度运动导致大鼠心房MMP-1的表达先升高后降低,而TIMP-1的表达逐渐增加,MMP-1/TIMP-1的比例失调,可能是运动性心房损伤和纤维化发生的分子病理机制。展开更多
目的:研究PRL-2基因增强肿瘤细胞侵袭及转移能力的机制。方法:采用脂质体转染的方法将PRL-2基因表达质粒转染至正常永生化肝细胞系CL1中,G418筛选阳性克隆。应用明胶酶谱法检测转染肝细胞分泌MMPs酶谱变化,W estern b lotting及RT-PCR...目的:研究PRL-2基因增强肿瘤细胞侵袭及转移能力的机制。方法:采用脂质体转染的方法将PRL-2基因表达质粒转染至正常永生化肝细胞系CL1中,G418筛选阳性克隆。应用明胶酶谱法检测转染肝细胞分泌MMPs酶谱变化,W estern b lotting及RT-PCR检测转染肝细胞MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2的变化。以PRL-2磷酸酯酶特异性抑制剂处理转染细胞,观察抑制PRL-2活性对上述指标的影响。结果:经过8周G418筛选及RT-PCR和W estern b lotting鉴定,获得稳定表达PRL-2的细胞亚系PRL-2-CL1。转染后的CL1细胞分泌MMP-9、活性型MMP-9和MMP-2,均显著高于转染前CL1细胞的MMPs分泌(P<0.01);使用特异性抑制剂后,MMP-9、活性型MMP-9和MMP-2活性显著降低(P<0.01)。W estern b lotting及RT-PCR检测显示PRL-2-CL1细胞MMP2、MMP9蛋白及mRNA含量均较转染前显著升高(P<0.05),TIMP-2则显著降低(P<0.05);使用抑制剂后,可以逆转上述变化。结论:PRL-2在永生化肝细胞中获得稳定、高效表达,PRL-2基因增强肝细胞侵袭及转移能力与其提高细胞MMP2、MMP9表达,降低TIMP-2有关。展开更多
文摘目的:探讨运动性心房损伤和纤维化发生过程中大鼠心房基质金属蛋白酶及其抑制剂的表达变化。方法:8周龄SD雄性大鼠48只,随机分为安静对照组(24只)和大强度运动组(24只),每组又分为8周组、12周组和16周组,每组8只。安静组正常饲养,大强度运动组分别进行8周、12周和16周的跑台运动,跑速为28 m/min,坡度为10°,每天运动1小时,每周5天。采用荧光定量PCR和Western Blot检测心肌基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)m RNA与蛋白的表达,并计算MMP-1/TIMP-1m RNA和蛋白比值。结果:与安静组相比,8周大强度运动组MMP-1 m RNA和蛋白的表达均显著性增加(P<0.05),12周大强度运动组MMP-1 m RNA和蛋白的表达具有增加趋势,16周大强度运动组MMP-1 m RNA和蛋白的表达具有降低趋势,但无明显差异。MMP-1 m RNA的表达随运动时间的延长具有逐渐降低趋势,16周大强度运动组显著低于8周大强度运动组(P<0.05);与安静组相比,8周大强度运动组TIMP-1的表达无明显差异,12周和16周大强度运动组TIMP-1 m RNA和蛋白的表达均出现显著性增加(P<0.01、P<0.05)。随运动时间的延长,TIMP-1 m RNA的表达逐渐增加,16周大强度运动组显著高于8周大强度运动组(P<0.05);MMP-1/TIMP-1 m RNA和蛋白的比值先升高后降低,16周大强度运动组MMP-1/TIMP-1 m RNA的比值显著低于安静对照组和8周大强度运动组(P<0.05)。结论:长期大强度运动导致大鼠心房MMP-1的表达先升高后降低,而TIMP-1的表达逐渐增加,MMP-1/TIMP-1的比例失调,可能是运动性心房损伤和纤维化发生的分子病理机制。
文摘目的:研究PRL-2基因增强肿瘤细胞侵袭及转移能力的机制。方法:采用脂质体转染的方法将PRL-2基因表达质粒转染至正常永生化肝细胞系CL1中,G418筛选阳性克隆。应用明胶酶谱法检测转染肝细胞分泌MMPs酶谱变化,W estern b lotting及RT-PCR检测转染肝细胞MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2的变化。以PRL-2磷酸酯酶特异性抑制剂处理转染细胞,观察抑制PRL-2活性对上述指标的影响。结果:经过8周G418筛选及RT-PCR和W estern b lotting鉴定,获得稳定表达PRL-2的细胞亚系PRL-2-CL1。转染后的CL1细胞分泌MMP-9、活性型MMP-9和MMP-2,均显著高于转染前CL1细胞的MMPs分泌(P<0.01);使用特异性抑制剂后,MMP-9、活性型MMP-9和MMP-2活性显著降低(P<0.01)。W estern b lotting及RT-PCR检测显示PRL-2-CL1细胞MMP2、MMP9蛋白及mRNA含量均较转染前显著升高(P<0.05),TIMP-2则显著降低(P<0.05);使用抑制剂后,可以逆转上述变化。结论:PRL-2在永生化肝细胞中获得稳定、高效表达,PRL-2基因增强肝细胞侵袭及转移能力与其提高细胞MMP2、MMP9表达,降低TIMP-2有关。
