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基质辅助激光解吸附飞行时间串联质谱法测定rhEPO唾液酸含量及鉴定糖基化位点
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作者 卢臣 蔡耘 +3 位作者 代景泉 王京兰 张养军 钱小红 《质谱学报》 EI CAS CSCD 2004年第B10期139-140,共2页
Erythropoietin (EPO) is a glycoprotein with three N-glycosylation sites and one O-glycosylation sites. According to the reference, all of the N-glyco-chains were acid complex type. The amount of sialic acid in rhEPO w... Erythropoietin (EPO) is a glycoprotein with three N-glycosylation sites and one O-glycosylation sites. According to the reference, all of the N-glyco-chains were acid complex type. The amount of sialic acid in rhEPO was determined and two N-glycosylation sites on it were confirmed by matrix-assisted laser desorption time of flight-time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF-TOFMS) in this paper. The total amount of sialic acid in rhEPO accounts for 12.97%. Two N-glycosylation sites (Asn38,Asn83) were identified successfully. 展开更多
关键词 基质辅助激光解吸附飞行时间串联质谱 唾液酸 含量测定 化位点鉴定 重组促红细胞生成素 糖蛋白
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高效液相色谱-基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱分离鉴定牛乳铁蛋白素 被引量:4
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作者 安美忱 刘宁 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期180-184,共5页
建立了高效液相色谱-基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF MS)分离鉴定牛乳铁蛋白素(bovine lactoferricin,LfcinB)的方法。采用胃蛋白酶酶解牛乳铁蛋白,酶解液离心后取上清液,经过离子交换色谱、反相液相色谱、透析等... 建立了高效液相色谱-基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF MS)分离鉴定牛乳铁蛋白素(bovine lactoferricin,LfcinB)的方法。采用胃蛋白酶酶解牛乳铁蛋白,酶解液离心后取上清液,经过离子交换色谱、反相液相色谱、透析等技术分离,对分离得到的目标产物进行抗菌活性分析、蛋白含量测定和MALDI-TOF/TOF MS鉴定。分离得到高活性的LfcinB,其相对分子质量为3124.89,蛋白含量为18.20μg/mL。本方法具有精度高、分析速度快和分辨能力强等优点,是其他传统的分析鉴定LfcinB方法所无法比拟的,为进一步研究LfcinB奠定了基础。 展开更多
关键词 高效液相色谱 辅助激光吸电离串联飞行时间质谱 牛乳铁蛋白素 牛乳铁蛋白
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基质辅助激光解吸电离-串联飞行时间质谱鉴定鲨鱼硒结合蛋白 被引量:2
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作者 王勇 李水明 何曼文 《质谱学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第5期257-262,共6页
利用基质辅助激光解吸电离-串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF)高置信度地鉴定了原核表达的白鳍鲨硒结合蛋白。实验表明,硒结合蛋白肽段之一被错误指认为胰酶自水解峰和混合谱是影响其未进行串联质谱分析或不能被数据库搜索匹配的主要原因... 利用基质辅助激光解吸电离-串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF)高置信度地鉴定了原核表达的白鳍鲨硒结合蛋白。实验表明,硒结合蛋白肽段之一被错误指认为胰酶自水解峰和混合谱是影响其未进行串联质谱分析或不能被数据库搜索匹配的主要原因,同时还发现,虽然赖氨酸结尾肽段在MALDI源中信号强度普遍很低,但对它们进行串联质谱分析也可获得较好的谱图质量,部分数据可用于从头测序。考虑以上因素后,硒结合蛋白鉴定覆盖率由35%增至51%。 展开更多
关键词 硒结合蛋白 辅助激光吸电离-串联飞行时间质谱(MALDI-TOF TOF) 蛋白鉴定 数据库 搜索 手工
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基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱法进行肌红蛋白的从头测序
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作者 周春喜 张养军 +2 位作者 李晓海 蔡耘 钱小红 《质谱学报》 EI CAS CSCD 2004年第B10期141-142,共2页
Peptides were separated by reverse phase liquid chromatography (RPLC) from tryptic digest of myoglohin and sequenced by matrix-assisted laser desorption time of flight-time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF-TOFMS... Peptides were separated by reverse phase liquid chromatography (RPLC) from tryptic digest of myoglohin and sequenced by matrix-assisted laser desorption time of flight-time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF-TOFMS). The result showed the sequence coverage of myoglobin is up to 79.7%. 展开更多
关键词 辅助激光飞行时间串联质谱 肌红蛋白 序列分析
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基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术对分枝杆菌液体培养系统菌种鉴定的临床研究 被引量:7
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作者 杜岩青 秦中华 张丽霞 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期871-877,共7页
目的应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)对Bactec^(TM) MGIT^(TM) 960液体培养出的阳性培养物进行高通量、快速、准确的菌种鉴定,为... 目的应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)对Bactec^(TM) MGIT^(TM) 960液体培养出的阳性培养物进行高通量、快速、准确的菌种鉴定,为临床早期、精准治疗提供病原学依据。方法选取我院Bactec^(TM) MGIT^(TM) 960分枝杆菌快速液体培养的阳性培养物为研究对象,通过不同的孵育时间、不同大小的研磨珠处理、不同的破壁方式摸索出MALDI-TOF MS对Bactec^(TM) MGIT^(TM) 960阳性培养物鉴定的"最优处理方法",并将所有结果与基因芯片法菌种鉴定做参照进行比对,鉴定不一致的结果通过基因测序确认。结果Bactec^(TM) MGIT^(TM) 960液体培养报阳性后增加孵育时间可提高检出率及鉴定分值,同时使用0.5 mm的氧化锆珠研磨,使用超声震荡混匀处理,鉴定效果最佳。鉴定结果方面,液体系统报阳的420份阳性标本,基因芯片法鉴定结果为结核分枝杆菌占69.05%(290/420),非结核菌占28.81%(121/420),9例未鉴定出,未鉴定占2.14%(9/420),错误鉴定占0.95%(4/420),总鉴定率为97.86%(411/420);采用MALDI-TOF MS质谱鉴定420份阳性标本中鉴定出419例,其中结核分枝杆菌占69.05%(290/420),非结核占30.00%(126/420),星型奴卡菌0.48%(2/420),巴西奴卡菌占0.24%(1/420),1例未鉴定出,总鉴定率为99.76%。质谱鉴定分值≥2.0的400例占95.24%,分值在1.7~2.0的19例占4.52%,分值<1.7的1例占0.24%。结论本实验实现了Bactec^(TM) MGIT^(TM) 960液体培养阳性培养物的直接质谱鉴定,缩短了培养鉴定的时间,将分枝杆菌鉴定到种水平,能区分出结核菌与非结核菌,同时也能将与分枝杆菌相似的奴卡菌鉴定出来,对临床疾病的鉴别诊断起到了积极的作用。 展开更多
关键词 Bactec^(TM)MGIT^(TM)960液体培养 辅助激光吸附电离飞行时间质谱技术 结核分枝杆菌 非结核分枝杆菌
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人工解析提高串联质谱鉴定肽段的数据利用度
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作者 王勇 李水明 +1 位作者 何曼文 冯里茹 《深圳大学学报(理工版)》 EI CAS 北大核心 2013年第5期538-544,共7页
为降低蛋白质鉴定的假阴性,利用标准蛋白和实际样品,探讨影响基质辅助激光解吸电离–串联飞行时间质谱数据利用度的原因.发现误差设置偏小、翻译后修饰、异常酶解和氨基酸突变等是导致蛋白质数据库检索不匹配目标肽段的主要原因.实验表... 为降低蛋白质鉴定的假阴性,利用标准蛋白和实际样品,探讨影响基质辅助激光解吸电离–串联飞行时间质谱数据利用度的原因.发现误差设置偏小、翻译后修饰、异常酶解和氨基酸突变等是导致蛋白质数据库检索不匹配目标肽段的主要原因.实验表明,典型情况下一级和二级质谱误差可设定在0.3Da.对未与数据库匹配的串联质谱进行亚胺离子辅助的人工解析发现,色氨酸双氧化、丝氨酸乙酰胺化和半胱氨酸丙酰胺化等不常见修饰,酪氨酸与苯丙氨酸、天冬氨酸与谷氨酸两两之间的突变和非特异性酶解等现象,该研究可提高质谱鉴定的数据利用度. 展开更多
关键词 蛋白组学 数据库搜索 辅助激光吸电离-串联飞行时间质谱 人工 亚胺离子
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应用液体蛋白芯片-飞行时间质谱技术诊断乳腺癌的临床价值 被引量:3
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作者 杨帆 陈英剑 +1 位作者 亓敏 胡成进 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期490-493,512,共5页
目的应用弱阳离子磁珠-飞行时间质谱-Clin Prot系统联合筛选乳腺肿瘤患者与健康对照女性血清中的差异蛋白,建立乳腺癌诊断模型,并初步探究该模型诊断乳腺肿瘤的临床应用价值。方法采用弱阳离子交换磁珠吸附提取血清标本(乳腺癌120例,健... 目的应用弱阳离子磁珠-飞行时间质谱-Clin Prot系统联合筛选乳腺肿瘤患者与健康对照女性血清中的差异蛋白,建立乳腺癌诊断模型,并初步探究该模型诊断乳腺肿瘤的临床应用价值。方法采用弱阳离子交换磁珠吸附提取血清标本(乳腺癌120例,健康对照40例)中的表达蛋白质/多肽,应用基质辅助激光解析串联飞行时间质谱仪捕获血清蛋白谱图,利用Clin Prot v3.0软件分析质谱图信息,找到2组间具有明显差异蛋白质/多肽,建立乳腺癌诊断模型,并选择乳腺癌和健康对照标本各20例进行双盲验证。同时检测纳入标本血清中癌胚抗原(CEA)和癌抗原153(CA153)的含量,探究该模型对乳腺癌血清学诊断的临床价值。结果比对病例组和对照组的蛋白质谱图,得到35个具有明显差异的蛋白峰(P<0.05),其中7个在乳腺癌中表达上调,28个表达下调。根据遗传算法选取Mass 1 569、3 934、5 750、7 765建立乳腺癌诊断模型,该模型诊断乳腺癌和健康女性的灵敏性为95.0%,特异性为92.5%。双盲验证结果显示灵敏性为85.0%,特异性为90%。该模型对乳腺癌的诊断效能高于CEA和CA153的联合诊断。结论应用液体芯片-飞行时间质谱技术-Clin Prot系统能够检测乳腺癌血清中的差异蛋白,同时能够建立灵敏性、特异性均较好的乳腺癌诊断模型,为乳腺癌诊断开拓了新的途径。 展开更多
关键词 辅助激光串联飞行时间质谱 生物标志物 乳腺癌 诊断模型
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蛋白质胰蛋白酶水解过程双位点漏切肽段的质谱鉴定 被引量:4
8
作者 王勇 李水明 +1 位作者 何曼文 邹永东 《质谱学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第1期29-34,共6页
为说明胰蛋白酶漏切位点数目设置对蛋白质搜库结果的影响,采用基质辅助激光解吸电离-串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF)高置信度地鉴定了细胞色素C和大豆脱落胁迫成熟蛋白。在细胞色素C和大豆脱落胁迫成熟蛋白的胰酶水解液中分别发现了2... 为说明胰蛋白酶漏切位点数目设置对蛋白质搜库结果的影响,采用基质辅助激光解吸电离-串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF)高置信度地鉴定了细胞色素C和大豆脱落胁迫成熟蛋白。在细胞色素C和大豆脱落胁迫成熟蛋白的胰酶水解液中分别发现了2个和4个双胰酶漏切位点肽段,确认了文献中报道的当赖氨酸和赖氨酸相邻或赖氨酸、精氨酸各自与天冬氨酸或者谷氨酸相邻时,会引起胰蛋白酶的漏切。此外,还发现组氨酸-赖氨酸-异亮氨酸/丙氨酸结构也有此现象。本研究中检测出漏切肽段并没有明显提高序列覆盖率,但显著增加了蛋白质鉴定结果的确定性。在实际样品分析中如将漏切数设置为1有可能产生肽段鉴定的假阴性。 展开更多
关键词 胰蛋白酶 辅助激光吸电离-串联飞行时间质谱 细胞色素C 大豆脱落胁迫成熟蛋白
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磺基异硫氰酸苯酯化学辅助方法对新蛋白质进行从头测序 被引量:1
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作者 周新文 严钦 +1 位作者 周珮 杨芃原 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2009年第4期706-711,共6页
利用基质辅助激光解吸电离-串联飞行时间(MALDI-TOF-TOF)质谱结合磺基异硫氰酸苯酯化学辅助的方法对一种从拟青霉(Paecilomyces bainier)分离纯化到的新人参皂苷Rb1水解酶的部分肽段进行了从头测序.共获得了这个新蛋白质8条肽段的序列,... 利用基质辅助激光解吸电离-串联飞行时间(MALDI-TOF-TOF)质谱结合磺基异硫氰酸苯酯化学辅助的方法对一种从拟青霉(Paecilomyces bainier)分离纯化到的新人参皂苷Rb1水解酶的部分肽段进行了从头测序.共获得了这个新蛋白质8条肽段的序列,一些磺化后信噪比非常低的肽段也获得了比较完整的序列.同时通过从头测序分析确定了一对甲硫氨酸非氧化和氧化肽段的序列.结果表明,磺化后的肽段离子化效率大大增强,在PSD(源后裂解)过程中只有肽键断裂产生的C端的碎片离子系列(y离子系列)出现在质谱图中,图谱背景清晰,信噪比高,单纯的y离子系列使得图谱解析变得非常容易.将这8条序列在NCBI(美国国立生物技术信息中心)数据库中进行BLAST(蛋白质序列比对工具)检索印证这种β-葡萄糖甘酶是一个新蛋白质,发现的两条相对保守的序列为进一步研究奠定了基础. 展开更多
关键词 异硫氰酸苯酯 辅助激光吸电离-串联飞行时间质谱 新蛋白 从头测序
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基于质谱的BLAST方法在金鱼胚胎蛋白质鉴定中的应用
10
作者 张玲 徐东 +2 位作者 陈锋菊 谢锦云 梁宋平 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期672-680,共9页
未知基因组及蛋白质序列数据库有限的物种的蛋白质组学分析是当前一些非模式生物物种蛋白质组学研究领域的瓶颈之一.基于同源性搜索的BLAST方法(MSBLAST),是近年新发展起来的一种用于未知基因组的蛋白质鉴定的搜索工具,已成功应用于许... 未知基因组及蛋白质序列数据库有限的物种的蛋白质组学分析是当前一些非模式生物物种蛋白质组学研究领域的瓶颈之一.基于同源性搜索的BLAST方法(MSBLAST),是近年新发展起来的一种用于未知基因组的蛋白质鉴定的搜索工具,已成功应用于许多未知基因组物种的蛋白质鉴定.SPITC化学辅助方法是本实验室建立的一种改进的denovo质谱测序方法.采用MSBLAST方法对经Mascot软件数据库搜索未能鉴定到的19个金鱼胚胎蛋白质进行鉴定,其中12个蛋白质是直接测序后进行MSBLAST搜索得到的结果,另外7个蛋白质是联合MSBLAST和SPITC衍生方法得到的鉴定结果.实验结果证明,采用MSBLAST方法进行蛋白质的跨物种鉴定具有可行性和可靠性,给蛋白质的跨物种鉴定提供了一条新的途径. 展开更多
关键词 辅助激光飞行时间串联质谱 从头测序 异硫氰酸苯酯 质谱的BLAST方法 蛋白组学
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激光捕获显微切割技术纯化的鼻咽癌和正常鼻咽上皮细胞的比较蛋白质组学研究 被引量:6
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作者 程爱兰 黄卫国 +8 位作者 张鹏飞 李茂玉 彭芳 李峰 李萃 易红 李美香 陈主初 肖志强 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第5期521-530,共10页
为筛选鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)的分子标志物,采用激光捕获显微切割技术(laser capture microdissection,LCM)分别从NPC组织和正常鼻咽上皮组织(normal nasopharyngal epithelial tissue,NNET)中切割纯化NPC细胞和正常鼻... 为筛选鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)的分子标志物,采用激光捕获显微切割技术(laser capture microdissection,LCM)分别从NPC组织和正常鼻咽上皮组织(normal nasopharyngal epithelial tissue,NNET)中切割纯化NPC细胞和正常鼻咽上皮细胞(normal nasopharyngal epithelial cells,NNEC),应用二维凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)分离LCM纯化细胞的蛋白质,图像分析识别差异表达的蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和电喷雾电离串联质谱(ESI-Q-TOF-MS)鉴定差异蛋白质点,Western blot检测差异蛋白cytokeratin8(CK8)在LCM纯化的NPC细胞和NNEC以及具有不同分化程度或转移潜能的4株NPC细胞中的表达,免疫组织化学检测CK8在63例NPC、28例NNET及20例颈淋巴结转移NPC组织中的表达水平.建立了LCM纯化的NPC细胞和NNEC的2-DE图谱,质谱鉴定了29个差异蛋白质,其中15个蛋白质只在NPC表达或表达明显增高,14个蛋白质在NPC中表达下调或缺失;Western blot结果显示,CK8的表达水平在NPC中较NNET明显下调,并与NPC细胞株的分化程度和转移潜能有关;免疫组织化学结果显示,CK8在NPC组织中的表达较NNET明显下调,在颈淋巴结转移NPC中的表达较原发NPC明显上调.研究结果提示,CK8与NPC分化及淋巴结转移相关,有望成为预测NPC转移和区别NPC分化程度的分子标志物. 展开更多
关键词 激光捕获显微切割 鼻咽癌 蛋白组学 二维凝胶电泳 辅助激光吸电离飞行时间质谱 电喷雾电离串联质谱 Western blot 免疫组织化学
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肝癌转移相关的核心岩藻糖基化蛋白质表达谱的研究 被引量:5
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作者 代智 刘银坤 +8 位作者 崔杰峰 冯钜涛 宋海燕 陈洁 孙瑞霞 李娜 申华莉 张予 杨芃原 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第5期442-448,共7页
通过比较研究不同转移潜能肝癌细胞系中核心岩藻糖基化蛋白质表达谱的差别,筛查与转移相关的重要糖蛋白.用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、双向电泳(2-DE)和凝集素印迹技术联合基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-MS/MS)分... 通过比较研究不同转移潜能肝癌细胞系中核心岩藻糖基化蛋白质表达谱的差别,筛查与转移相关的重要糖蛋白.用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、双向电泳(2-DE)和凝集素印迹技术联合基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-MS/MS)分析,建立3种不同转移潜能人肝癌细胞系Hep3B、MHCC97L和MHCC97H的核心岩藻糖基化蛋白质表达图谱.比较研究发现,不同转移潜能肝癌细胞呈现不同的SDS-PAGE/LCA凝集素印迹图谱,MHCC-97H和MHCC-97L在35~45 ku和45~60 ku间出现了Hep3B未见的条带.在核心岩藻糖基化蛋白质表达图谱中,Hep3B、MHCC97L和MHCC97H分别平均检测到(55±7)个蛋白质点(n=3),(60±6)个蛋白质点(n=3),(61±4)个蛋白质点(n=3);以各自双向电泳图谱为参考胶,Hep3B、MHCC97L和MHCC97H分别与其匹配的平均匹配点数为(25±3)个(n=3),(30±4)个(n=3),(28±3)个(n=3).该图谱中,与Hep3B相比,MHCC97L有13个点未匹配,其中9个点为Hep3B(-)/MHCC97L(+);MHCC97H有9个点未匹配,其中6个点为Hep3B(-)/MHCC97H(+),MALDI-TOF-MS/MS可鉴定出Annexin1、Keratin 8等12种差异蛋白质.这些结果证实了不同转移潜能的肝癌细胞有明显的核心岩藻基化糖蛋白差异性表达.提示肝癌转移可能与这些差异糖蛋白及其核心岩藻糖基化有关. 展开更多
关键词 肝癌细胞 核心岩藻糖蛋白 辅助激光飞行时间串联质谱 扁豆凝集素 糖蛋白组学
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应用激光捕获显微切割和蛋白质组学技术筛选鼻咽癌的差异表达蛋白质 被引量:5
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作者 易红 程爱兰 +7 位作者 黄卫国 张鹏飞 李茂玉 彭芳 李峰 李萃 陈主初 肖志强 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期375-383,共9页
目的:筛选鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)的差异表达蛋白质,为寻找NPC的分子标志物提供科学依据。方法:采用激光捕获显微切割技术(laser capture microdissection,LCM)分别从NPC组织和正常鼻咽上皮组织(normal nasopharyngeal ep... 目的:筛选鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)的差异表达蛋白质,为寻找NPC的分子标志物提供科学依据。方法:采用激光捕获显微切割技术(laser capture microdissection,LCM)分别从NPC组织和正常鼻咽上皮组织(normal nasopharyngeal epithelial tissue,NNET)中纯化NPC细胞和正常鼻咽上皮细胞(normal nasopharyngeal epithelial cells,NNEC),应用二维凝胶电泳(2-DE)分离LCM纯化细胞的蛋白质,图像分析识别差异表达的蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和电喷雾电离串联质谱(ESI-Q-TOF-MS)鉴定差异蛋白质点,Western印迹和组织芯片(tissue microarray,TMA)免疫组织化学验证差异蛋白鳞状细胞癌抗原1(SCCA1)在两种组织中的表达水平。结果:建立了LCM纯化的NPC细胞和NNEC的2-DE图谱,质谱鉴定了36个差异蛋白质,其中20个蛋白只在NPC表达或表达上调,16个蛋白在NPC中表达下调或缺失。Western印迹和组织芯片免疫组织化学结果显示:SCCA1在NPC中的表达水平较NNET明显下调,与比较蛋白质组学结果一致。结论:36个差异蛋白可能与NPC的发病有关,为筛选NPC分子标志物奠定了基础。 展开更多
关键词 鼻咽癌 激光捕获显微切割技术 蛋白组学 二维凝胶电泳 辅助激光吸电离飞行时间质谱 电喷雾电离串联质谱 免疫印迹 组织芯片
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磺化修饰结合离子交换色谱和生物质谱富集鉴定含组氨酸肽段 被引量:1
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作者 曹冬 周春喜 +3 位作者 张养军 韩春光 邓玉林 钱小红 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期158-163,共6页
通过在肽段的N端引入磺酸基,从而使含组氨酸的肽段与其他肽段在pH<3.0的条件下产生电荷差异,建立了一种基于强阳离子交换色谱(SCX)结合生物质谱富集鉴定含组氨酸肽段的方法,并以含有组氨酸的标准蛋白质为模型,进行了方法学考察。结... 通过在肽段的N端引入磺酸基,从而使含组氨酸的肽段与其他肽段在pH<3.0的条件下产生电荷差异,建立了一种基于强阳离子交换色谱(SCX)结合生物质谱富集鉴定含组氨酸肽段的方法,并以含有组氨酸的标准蛋白质为模型,进行了方法学考察。结果表明,经N端磺酸化后,含组氨酸的肽段能有效地被阳离子交换色谱富集,且在肽的N端引入磺酸基促进了肽的裂解,使之产生简单而信息丰富的二级质谱图,从而得到完美的质谱鉴定结果。这说明磺化修饰结合强阳离子交换色谱用于含组氨酸肽段的富集鉴定是可行的,且具有在蛋白质组研究中应用的潜力。 展开更多
关键词 强阳离子交换色谱 辅助激光吸电离飞行时间串联质谱 磺化修饰 富集 鉴定 组氨酸标签肽
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茯苓菌丝蛋白双向电泳体系的建立及质谱鉴定 被引量:1
15
作者 李洪波 向小亮 +1 位作者 罗海燕 胡兴 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1311-1315,共5页
为建立茯苓菌丝体蛋白双向电泳体系并鉴定部分蛋白质,作者采用双向电泳技术对摇瓶培养的茯苓菌丝体蛋白进行分离,并利用MALDI-TOF/TOF对部分蛋白质进行鉴定。结果表明,2-DE图谱获得蛋白质点数较多、清晰、蛋白质点分离较完全且图谱背景... 为建立茯苓菌丝体蛋白双向电泳体系并鉴定部分蛋白质,作者采用双向电泳技术对摇瓶培养的茯苓菌丝体蛋白进行分离,并利用MALDI-TOF/TOF对部分蛋白质进行鉴定。结果表明,2-DE图谱获得蛋白质点数较多、清晰、蛋白质点分离较完全且图谱背景清晰,挑取蛋白质点进行了鉴定。本研究确定的双向电泳条件分离蛋白质效果及重复性好,为下一步利用该方法寻找具有重要功能的新茯苓菌丝体蛋白创造了条件。 展开更多
关键词 茯苓 菌丝体 总蛋白 双向电泳 辅助激光吸电离飞行时间串联质谱
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含二硫键的蛋白质/多肽的MALDI-TOF MS源内裂解研究 被引量:4
16
作者 姚文斌 汪亿晗 +4 位作者 苏蕊 连文慧 杨洪梅 陈长宝 刘淑莹 《质谱学报》 CSCD 北大核心 2017年第3期302-307,共6页
应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)法研究含二硫键的人胰岛素与甘精胰岛素酶解液的源内裂解(ISD)。比较了不同基质种类及不同结晶状态对含二硫键的人胰岛素与甘精胰岛素酶解液的源内裂解的影响。结果表明,含二硫键的... 应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)法研究含二硫键的人胰岛素与甘精胰岛素酶解液的源内裂解(ISD)。比较了不同基质种类及不同结晶状态对含二硫键的人胰岛素与甘精胰岛素酶解液的源内裂解的影响。结果表明,含二硫键的蛋白质的ISD发生受激光点照射位置的影响,在不同基质与结晶形态的条件下,含二硫键的蛋白质的ISD碎片信息不同。通过分析比较,含二硫键的蛋白质的ISD较容易控制,并且其基质的种类及结晶状态作用很关键。需要获得大量碎片时,使激光照射在样品和阿魏酸(FA)基质形成的大结晶处;不希望出现碎片时,可使用2,4,6-三羟基苯乙酮(THAP)为基质,或使激光照射在样品和其他基质形成的细小均匀结晶处。 展开更多
关键词 含二硫键的蛋白/多肽 辅助激光吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS) 源内裂(ISD) 结晶
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基于MALDI-TOF MS的串联富集策略在磷酸化蛋白组学中的应用 被引量:5
17
作者 张传静 吴婷 +2 位作者 任红鑫 张玲帆 杜一平 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1061-1068,共8页
提出一种除盐-富集串联用于磷酸肽富集研究的思路。选用C18柱和铈(Ⅳ)修饰的壳聚糖材料进行脱盐实验,以制备的基于聚合物基体螯合Fe3+的亲和色谱材料为富集材料。将直接富集和串联策略应用到标准品和血清中,研究结果表明,该富集材料具... 提出一种除盐-富集串联用于磷酸肽富集研究的思路。选用C18柱和铈(Ⅳ)修饰的壳聚糖材料进行脱盐实验,以制备的基于聚合物基体螯合Fe3+的亲和色谱材料为富集材料。将直接富集和串联策略应用到标准品和血清中,研究结果表明,该富集材料具有高选择性和高灵敏度(1.6 fmol),铈(Ⅳ)修饰的壳聚糖材料前提下的串联策略能明显降低样品的复杂性。相比直接富集方法,能够提高磷酸化肽的覆盖率。 展开更多
关键词 脱盐 固定金属离子亲和色谱 辅助激光吸/电离飞行时间质谱 磷酸肽 串联富集
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基于小分子化合物分析的MALDI-TOF MS新型基质研究进展 被引量:3
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作者 杨迎晨 陈企发 夏炎 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1381-1387,共7页
基质辅助激光解吸附离子化-飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)是一种新型的软电离生物质谱,近十年来得到了快速发展,在小分子化合物的分析检测中发挥了重要作用。其基质的选择一直是关注的重点,目前,研究者们已开发出多种新型MALDI-TOF MS基质... 基质辅助激光解吸附离子化-飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)是一种新型的软电离生物质谱,近十年来得到了快速发展,在小分子化合物的分析检测中发挥了重要作用。其基质的选择一直是关注的重点,目前,研究者们已开发出多种新型MALDI-TOF MS基质,主要分为纳米材料和新型有机化合物两大类,基质性能的完善与提高使得MALDI-TOF MS的检测结果有了更高的准确度和灵敏度,更小的背景噪音,更干净的谱图,但目前尚处于研究阶段,现阶段仍无法替代传统有机基质。该文通过对新型基质的研究进展进行整理,总结出不同种类基质的优点、特性及适用对象,并对未来的MALDI-TOF MS基质研究作出了展望。 展开更多
关键词 辅助激光吸附离子化-飞行时间质谱 小分子化合物 新型 综述
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MALDI-TOF质谱准内标法及其用于rhTPO复杂糖一致性研究 被引量:2
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作者 刘悦玫 侯利平 +2 位作者 杨梅 孟晓光 魏开华 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1458-1463,共6页
采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)准内标法准确测定重组人血小板生成素(rhTPO)仿制药和原研药中4类糖修饰的相对含量,并进行样本间和批间一致性比较。结合多种切糖酶逐步切除rhTPO的N-糖、唾液酸和O-糖;以牛血清白蛋... 采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)准内标法准确测定重组人血小板生成素(rhTPO)仿制药和原研药中4类糖修饰的相对含量,并进行样本间和批间一致性比较。结合多种切糖酶逐步切除rhTPO的N-糖、唾液酸和O-糖;以牛血清白蛋白(BSA)为标准品,与样本非混合点靶;采用MALDI-TOF质谱准内标法检测,分别获得各样本完整含糖分子量及不同层次切糖后分子量;通过分子量差值计算4类糖修饰的相对含量;最后比较仿制药与原研药样本间和批间一致性。以BSA多电荷峰对rhTPO切糖前后的MALDI-TOF质谱测定值进行准内标法校正,BSA多电荷峰之间相对标准偏差(RSD)均≤0.075%,批间RSD为0.001%~0.004%,方法误差均<0.01%。rhTPO仿制药N-糖、O-糖唾液酸、O-糖和糖化糖的相对含量分别约为24.6%、2.9%、9.0%和5.1%,批间一致性良好,且总糖含量与文献值一致;rhTPO原研药N-糖、O-糖唾液酸、O-糖和糖化糖的相对含量分别约为25.6%、2.9%、7.9%和3.5%,总糖含量较文献值偏低。与rhTPO原研药相比,仿制药糖基化糖相对含量基本一致,糖化糖含量有差异。rhTPO糖化糖研究未见文献报道,其差异是不同厂家rhTPO之间差异的重要因素,主要由发酵工艺差异导致。 展开更多
关键词 重组人血小板生成素(rhTPO) 辅助激光吸附电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS) 准内标法 糖含量 糖化
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水稻根尖质膜蛋白质组学研究方法的建立 被引量:7
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作者 齐耀程 王宁 +2 位作者 程彦伟 徐朗莱 张炜 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期111-117,共7页
以徐稻3号水稻苗期幼嫩根尖为材料,利用葡聚糖/聚乙二醇两相分配法纯化得到纯度达90%的质膜组分,使用优化的双向电泳水化液溶解质膜蛋白,通过等电聚焦/十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶双向电泳(IEF/SDS-PAGE)分离和基质辅助激... 以徐稻3号水稻苗期幼嫩根尖为材料,利用葡聚糖/聚乙二醇两相分配法纯化得到纯度达90%的质膜组分,使用优化的双向电泳水化液溶解质膜蛋白,通过等电聚焦/十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶双向电泳(IEF/SDS-PAGE)分离和基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱(MAI-DI—TOF/TOF)分析,鉴定了31个水稻质膜相关蛋白。结果表明IEF/SDSPAGE双向电泳适合分离亲水性相对较高的膜附着蛋白。进一步利用高盐和温和去污剂对纯化的质膜进行洗涤,以降低质膜组分的复杂程度,通过SDS-PAGE单向电泳分离和液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)分析,鉴定了8个质膜蛋白。经洗涤后的质膜组分复杂度显著降低,SDS-PAGE中的蛋白条带只包含1~2种蛋白,且主要为疏水性较强的穿膜蛋白,说明多种生物化学分离方法及不同质谱分析的综合运用,是解决生物膜蛋白质组学难点的有效途径。 展开更多
关键词 水稻 蛋白组学 等电聚焦/十二烷磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶双向电泳 辅助激光吸电离串联飞行时间质谱 纳升电喷雾串联质谱
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