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基因重组心肌肌钙蛋白Ⅰ融合蛋白的抗肿瘤效应 被引量:1
1
作者 雷光强 刘朝阳 +4 位作者 姜懿纳 李金萍 曹勤燕 李涛 刘凤鸣 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1580-1585,共6页
目的研究基因重组心肌肌钙蛋白I与人工短肽的融合蛋白(CIS)对肿瘤生长的作用。方法用MTT法观察CIS体外对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)生长的作用。利用鸡胚绒毛尿囊膜模型观察CIS对新生血管生长的影响。用6种小鼠肿瘤异位可移植模型观察CIS... 目的研究基因重组心肌肌钙蛋白I与人工短肽的融合蛋白(CIS)对肿瘤生长的作用。方法用MTT法观察CIS体外对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)生长的作用。利用鸡胚绒毛尿囊膜模型观察CIS对新生血管生长的影响。用6种小鼠肿瘤异位可移植模型观察CIS在体内对肿瘤生长的作用。结果 CIS对HUVEC细胞增殖具有明显抑制作用,并呈剂量依赖关系;鸡胚绒毛尿囊膜实验显示,CIS浓度为5、10 mg·L^(-1)时,新生血管生成的数量明显减少;荷瘤鼠体内异位移植模型实验显示:CIS(10 mg·kg^(-1))处理组肿瘤生长缓慢,瘤体明显小于模型对照组,对S180肿瘤瘤重抑制率85.3%,对Lewis肺癌肿瘤瘤重抑制率87.0%,对H22肝癌肿瘤瘤重抑制率84.2%,对人小细胞肺癌H446肿瘤瘤重抑制率60.42%,对人可移植性肝癌SMMC7721肿瘤瘤重抑制率61.62%,对人胃低分化腺癌BGC823肿瘤瘤重抑制率为41.84%。结论 CIS在体外抑制HUVEC细胞的生长,在鸡胚绒毛尿囊膜实验中,CIS对新生血管生成有明显的抑制作用。在体内,CIS融合蛋白可有效抑制小鼠可移植肿瘤细胞的生长。CIS抗肿瘤效应很可能是通过抑制肿瘤组织中血管内皮细胞的增殖,进而减少肿瘤组织中新生血管生成的数量而达到的。 展开更多
关键词 基因重组心肌肌钙蛋白融合蛋白 人脐静脉内皮细胞 鸡胚绒毛尿囊膜 移植瘤 肿瘤抑制作用 血管生成抑制剂 裸鼠
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大鼠心肌肌钙蛋白I基因Lys184缺失突变重组腺病毒载体的构建 被引量:5
2
作者 万文辉 吴恒芳 +1 位作者 杨笛 张寄南 《医学研究生学报》 CAS 2008年第4期367-371,共5页
目的:构建SD大鼠心肌肌钙蛋白I(cTnI)赖氨酸(Lys)184缺失突变重组腺病毒载体。方法:利用PCR定点突变方法给大鼠cTn I基因引入Lys184缺失突变,将扩增片段克隆至pMD18-T载体,在C末端用PCR法加6×组氨酸(His)标签序列后,再亚克隆至Aden... 目的:构建SD大鼠心肌肌钙蛋白I(cTnI)赖氨酸(Lys)184缺失突变重组腺病毒载体。方法:利用PCR定点突变方法给大鼠cTn I基因引入Lys184缺失突变,将扩增片段克隆至pMD18-T载体,在C末端用PCR法加6×组氨酸(His)标签序列后,再亚克隆至Adeno-X腺病毒DNA,转染HEK 293细胞,包装形成重组腺病毒(Ad-cTnILys184del)。结果:PCR及测序结果表明,重组腺病毒序列正确,Western blot证明有融合突变蛋白表达。结论:本研究成功地构建了大鼠cTnI Lys184缺失突变重组腺病毒载体,为后续的功能研究提供了有价值的研究材料。 展开更多
关键词 心肌肌钙蛋白 定点突变 重组腺病毒
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中国肥厚型心肌病与肌钙蛋白T基因的相关性研究 被引量:5
3
作者 李敏 程宽 +4 位作者 王齐兵 朱文青 陈瑞珍 葛均波 陈灏珠 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1589-1591,共3页
目的研究肌钙蛋白T(Troponin T,TNNT2)在中国肥厚型心肌病(hypertrophic cardiomyopathy,HCM)患者中的突变情况。方法对95例无血缘关系的HCM先证者(其中22例为家族性HCM先证者)进行肌钙蛋白T基因(TNNT2)突变筛查,利用聚合酶链反应(PCR)... 目的研究肌钙蛋白T(Troponin T,TNNT2)在中国肥厚型心肌病(hypertrophic cardiomyopathy,HCM)患者中的突变情况。方法对95例无血缘关系的HCM先证者(其中22例为家族性HCM先证者)进行肌钙蛋白T基因(TNNT2)突变筛查,利用聚合酶链反应(PCR)扩增其功能区8、9、10、11、14、15、16号外显子片段,双脱氧末端终止法测序。家系资料调查包括:临床表现、体格检查、心脏超声和心电图。结果 16例FHCM患者及79例SHCM患者均未发现TNNT2基因的错义突变、移码突变、剪接突变。仅在9号外显子检出一同义突变,为ATC→ATT,均编码异亮氨酸(Ile)。结论 TNNT2不是我国肥厚型心肌病的常见致病基因。 展开更多
关键词 肥厚型心肌 肌钙蛋白T 基因 突变
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人心肌肌钙蛋白I-C融合蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化 被引量:1
4
作者 闫存玲 徐国宾 夏铁安 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第9期812-817,共6页
提取人心肌组织总RNA,RT PCR扩增出人心肌肌钙蛋白I(cardiactroponinI,cTnI)和肌钙蛋白C(TnC)基因,利用人工合成的可编码 19个中性氨基酸残基为主的DNA序列(Linker),将cTnI和TnC基因连接,插入到质粒pET15b中,将鉴定正确的重组pET15b质... 提取人心肌组织总RNA,RT PCR扩增出人心肌肌钙蛋白I(cardiactroponinI,cTnI)和肌钙蛋白C(TnC)基因,利用人工合成的可编码 19个中性氨基酸残基为主的DNA序列(Linker),将cTnI和TnC基因连接,插入到质粒pET15b中,将鉴定正确的重组pET15b质粒转化入大肠杆菌BL2 1(DE3)pLysS中,用异丙基 β D$C硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白质表达.结果在大肠杆菌中成功实现了全长cTnI C融合蛋白(cTnI linker TnC)的稳定可溶性高表达,在摇瓶中表达量可达 2 1mg/L.利用目的蛋白N端的组氨酸 标签"(His tag),经一步Ni2 + Sepharose柱亲和层析纯化,得到了聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)纯蛋白质.经初步研究,cTnI C具有较好的免疫原性和稳定性,有望成为cTnI测定系统可溯源的候选参考物质。 展开更多
关键词 心肌肌钙蛋白I-C 融合蛋白 表达 纯化
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肥厚型心肌病心肌肌钙蛋白Ⅰ相关激酶TNN13K基因突变的研究 被引量:2
5
作者 王红梅 高明明 +4 位作者 肖白 刘敬忠 周燕 杨新春 王明生 《中国心血管杂志》 2009年第1期59-61,共3页
目的对肥厚型心肌病患者进行TNNI3K基因进行测序分析,探讨此范围内有无基因突变位点。方法对56例无血缘关系的肥厚型心肌病患者及30名健康对照者的TNNI3K基因第18~19及23外显子进行聚合酶链反应扩增产物,设计内引物直接测序,观察有无... 目的对肥厚型心肌病患者进行TNNI3K基因进行测序分析,探讨此范围内有无基因突变位点。方法对56例无血缘关系的肥厚型心肌病患者及30名健康对照者的TNNI3K基因第18~19及23外显子进行聚合酶链反应扩增产物,设计内引物直接测序,观察有无基因突变,并对发生突变的患者进行临床特点分析。结果肥厚型心肌病患者及正常对照者在TNNI3K基因第18~19及23外显子未发现突变位点。结论目前在中国人群肥厚型心肌病患者中未发现TNNI3K基因突变位点。 展开更多
关键词 心肌 肥厚型 肌钙蛋白I 基因
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心肌肌钙蛋白T基因突变在心肌病发病机制中的研究进展 被引量:5
6
作者 冯娟 张连峰 《中国比较医学杂志》 CAS 2007年第9期555-558,532,共5页
肥厚型和扩张型心肌病中,基因缺陷分别占发病的50%和35%,其病理生理机制,主要包括肌小节蛋白基因突变引起的收缩力产生缺陷,细胞骨架蛋白基因突变引起的收缩力传递缺陷等。心肌肌钙蛋白T将肌钙蛋白C和肌钙蛋白I连接到肌动蛋白和原肌球... 肥厚型和扩张型心肌病中,基因缺陷分别占发病的50%和35%,其病理生理机制,主要包括肌小节蛋白基因突变引起的收缩力产生缺陷,细胞骨架蛋白基因突变引起的收缩力传递缺陷等。心肌肌钙蛋白T将肌钙蛋白C和肌钙蛋白I连接到肌动蛋白和原肌球蛋白上,在心肌细胞收缩和舒张过程中发挥重要作用。在肥厚型和扩张型心肌病中发现了多种心肌肌钙蛋白T的基因突变,围绕心肌肌钙蛋白T的研究有助于阐明心肌病的发病机制。本文总结了心肌肌钙蛋白T基因突变在心肌病发病机制中的研究情况。 展开更多
关键词 心肌肌钙蛋白T 肥厚型心肌 扩张型心肌 基因突变
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心肌肌钙蛋白Ⅰ基因突变与心肌病的研究进展 被引量:1
7
作者 冯娟 张连峰 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2007年第5期387-389,共3页
心肌肌钙蛋白I(cTnI)是心肌肌钙蛋白复合物的亚单位之一,与心肌肌钙蛋白T和C相互作用,与肌动蛋白-原肌球蛋白结合从而抑制肌动蛋白-肌球蛋白的收缩作用。在肥厚型、扩张型和限制型心肌病中发现30多种cTnI基因的突变,cTnI基因突变转基因... 心肌肌钙蛋白I(cTnI)是心肌肌钙蛋白复合物的亚单位之一,与心肌肌钙蛋白T和C相互作用,与肌动蛋白-原肌球蛋白结合从而抑制肌动蛋白-肌球蛋白的收缩作用。在肥厚型、扩张型和限制型心肌病中发现30多种cTnI基因的突变,cTnI基因突变转基因小鼠也反映了心肌病的特征。本文总结了cTnI基因突变在心肌病发病机制中的研究情况。 展开更多
关键词 心肌肌钙蛋白 基因突变 心肌 基因动物
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人心肌肌钙蛋白I基因的克隆及其在大肠埃希菌中的表达
8
作者 刘红梅 王宇哲 +3 位作者 屈伸 周小芬 周玮 秦瑞芳 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期532-535,共4页
目的从人心肌组织中克隆出心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)的cDNA,构建成表达重组体导入特定宿主菌,以期大量表达并获得高纯度的心肌肌钙蛋白I,为临床检测心肌损伤及预后提供诊断试剂材料。方法利用RT-PCR方法从人心肌细胞的总... 目的从人心肌组织中克隆出心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)的cDNA,构建成表达重组体导入特定宿主菌,以期大量表达并获得高纯度的心肌肌钙蛋白I,为临床检测心肌损伤及预后提供诊断试剂材料。方法利用RT-PCR方法从人心肌细胞的总RNA中克隆出编码人心肌肌钙蛋白I的cDNA片段,将其插入原核表达载体形成重组体并导入宿主菌BL21(DE3)中,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导,表达出带6个组氨酸标签的融合蛋白,Ni-NTA树脂纯化后行Western blot进行鉴定。结果成功获取了人cTnI的cDNA,并在大肠埃希菌中高效表达。经Ni-NTA树脂纯化后获得的产物可与其特异性单克隆抗体反应。结论成功克隆了cTnI基因,构建的重组体能够在大肠埃希菌中高效表达,经纯化可获得电泳单点纯的cTnI蛋白。 展开更多
关键词 心肌肌钙蛋白 基因表达 纯化
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伴肌钙蛋白I3基因框移突变的限制型心肌病一例
9
作者 张震 蔡琳 +5 位作者 刘汉雄 周名纲 杨萌萌 巫文丽 彭佳 徐宇军 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2019年第12期1226-1228,共3页
1临床资料患者女性,23岁,以"反复晕厥13年有余,突发意识障碍2小时"于2014年4月入院。患者13年前反复于运动后出现头晕、气促、出汗,继之出现晕厥,约2~3 min后自行苏醒,每年发作2~3次。发作时心电图示:窦性心律,窦性停搏,交界... 1临床资料患者女性,23岁,以"反复晕厥13年有余,突发意识障碍2小时"于2014年4月入院。患者13年前反复于运动后出现头晕、气促、出汗,继之出现晕厥,约2~3 min后自行苏醒,每年发作2~3次。发作时心电图示:窦性心律,窦性停搏,交界性逸搏,ST段下移及T波倒置(图1)。 展开更多
关键词 肌钙蛋白I3 基因突变 限制型心肌 心脏磁共振成像
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人胚胎型心肌肌钙蛋白T1基因的克隆及表达
10
作者 陆青 赖春宁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第4期S016-S018,共3页
目的 构建人胚胎型心肌肌钙蛋白T1(cTnT1)中表达载体。方法 应用PT-PCR技术,从人胚胎心肌组织中扩增cTnT1基因,连接pExSecI高效表达载体进行诱导表达。结果 成功地扩增出cTnT1基因片段(764 ... 目的 构建人胚胎型心肌肌钙蛋白T1(cTnT1)中表达载体。方法 应用PT-PCR技术,从人胚胎心肌组织中扩增cTnT1基因,连接pExSecI高效表达载体进行诱导表达。结果 成功地扩增出cTnT1基因片段(764 bp)并测序证实;构建了表达载体pExSceI-cTnT1,并获得表达。结论 获得单一亚型cTnT1的表达,为研究心力衰竭时的胚胎型基因重构与发病机制的关系打下了基础。 展开更多
关键词 人胚胎型心肌肌钙蛋白T1 RT-PCR 基因表达
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IGF-1基因转染促进胚胎干细胞诱导分化的心肌细胞中IGF-1、肌球蛋白、肌动蛋白及心肌特异性肌钙蛋白-T的表达
11
作者 杨虹 邓成国 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期243-246,共4页
目的观察胰岛素样生长因子-T(IGF-1)基因转染对胚胎干细胞(ES细胞)诱导分化的心肌细胞中IGF-1、肌球蛋白(myoglobulin)、肌动蛋白(actin)及心肌特异性肌钙蛋白-T(Troponin-T)表达的影响。方法将含有IGF-1基因的真核质粒转染入大鼠胚胎... 目的观察胰岛素样生长因子-T(IGF-1)基因转染对胚胎干细胞(ES细胞)诱导分化的心肌细胞中IGF-1、肌球蛋白(myoglobulin)、肌动蛋白(actin)及心肌特异性肌钙蛋白-T(Troponin-T)表达的影响。方法将含有IGF-1基因的真核质粒转染入大鼠胚胎干细胞诱导分化的心肌细胞中,采用免疫组织化学方法对心肌细胞内上述4种蛋白的表达进行检测。利用HPIAS-2000图像分析系统测定4种蛋白在各组中表达的平均吸光度值和平均阳性面积率。结果IGF-1基因转染后的心肌细胞内上述4种蛋白的表达明显高于未转染的对照组(P<0.05)。结论IGF-1基因转染的心肌细胞较未转染的心肌细胞合成IGF-1、肌球蛋白、肌动蛋白及心肌特异性肌钙蛋白-T的能力增强,为IGF-1基因治疗心肌梗死提供了实验依据。 展开更多
关键词 基因转染 胚胎干细胞 胰岛素样生长因子-1 肌球蛋白 肌动蛋白 心肌特异性肌钙蛋白-T
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心肌肌钙蛋白I基因的克隆及真核表达
12
作者 荆清 秦永文 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 2000年第3期170-172,共3页
目的 克隆并表达人心肌肌钙蛋白I (cTnI)cDNA ,为高效获得大量蛋白、制备抗体打下基础。方法 采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)和分子生物学技术克隆人cTnI基因 ,重组构建pcDNA3 cTnI真核表达载体 ,转染人胚肾(HEK) 2 93细胞 ,并用... 目的 克隆并表达人心肌肌钙蛋白I (cTnI)cDNA ,为高效获得大量蛋白、制备抗体打下基础。方法 采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)和分子生物学技术克隆人cTnI基因 ,重组构建pcDNA3 cTnI真核表达载体 ,转染人胚肾(HEK) 2 93细胞 ,并用单克隆抗体检测特异性cTnI蛋白表达。结果 克隆了cTnI的全长基因 ,构建了pcDNA3 cTnI真核表达载体并成功地在真核细胞中获得了蛋白表达。结论 所表达的蛋白证明具有正确的cTnI免疫原性 。 展开更多
关键词 心肌肌钙蛋白I 基因 克隆 分子 基因表达
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旋毛虫编码新生幼虫p46 kDa抗原基因重组融合蛋白对小鼠的免疫保护性研究 被引量:11
13
作者 原丽红 付宝权 +8 位作者 刘明远 张亚兰 高飞 吴秀萍 李莲瑞 林本夫 卢强 陈启军 P.Boireau 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第3期221-224,共4页
目的 探讨旋毛虫编码新生幼虫p4 6kDa抗原基因重组融合蛋白WN10对小鼠的免疫保护性。 方法 将纯化的重组融合蛋白WN10以 2 0 μg/只的剂量分 3次免疫小鼠后 ,攻击感染旋毛虫肌幼虫 2 0 0条 /只 ,检查旋毛虫 7日龄成虫数、雌虫体外产... 目的 探讨旋毛虫编码新生幼虫p4 6kDa抗原基因重组融合蛋白WN10对小鼠的免疫保护性。 方法 将纯化的重组融合蛋白WN10以 2 0 μg/只的剂量分 3次免疫小鼠后 ,攻击感染旋毛虫肌幼虫 2 0 0条 /只 ,检查旋毛虫 7日龄成虫数、雌虫体外产生新生幼虫数、感染 35d的肌幼虫数并计算减虫率 ,同时用ELISA法检测血清中抗WN10抗体IgG滴度。结果 WN10免疫小鼠后获得旋毛虫 7日龄成虫、肌幼虫的减虫率分别为 6 4 .2 8%和 6 1.2 1% ,均与感染对照组和佐剂对照组差异显著 ;获得雌虫产新生幼虫的减虫率为 16 .4 6 % ,与感染对照组和佐剂对照组差异不显著 ;WN10免疫组小鼠在第 3次免疫后 1周可检测到高滴度的抗WN10抗体IgG ,在攻击感染旋毛虫 9周后仍维持在较高水平。 结论 编码旋毛虫新生幼虫 p4 展开更多
关键词 旋毛虫 新生幼虫 p46 kDa抗原基因 重组融合蛋白 保护性免疫
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表达犬瘟热病毒融合蛋白基因重组腺病毒的构建与鉴定 被引量:3
14
作者 鞠会艳 高玉伟 +1 位作者 杨松涛 夏咸柱 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期89-96,共8页
利用pVAX1载体的表达元件CMV启动子和poly(A)多聚腺苷酸信号构建了含犬瘟热病毒融合蛋白基因(F)的重组犬腺病毒。首先,利用酶切、连接等实验方法构建了含CDV启动子F蛋白基因表达盒的转移质粒pVAXΔE3LPF。再以含CAV-2SY株全基因组的pPol... 利用pVAX1载体的表达元件CMV启动子和poly(A)多聚腺苷酸信号构建了含犬瘟热病毒融合蛋白基因(F)的重组犬腺病毒。首先,利用酶切、连接等实验方法构建了含CDV启动子F蛋白基因表达盒的转移质粒pVAXΔE3LPF。再以含CAV-2SY株全基因组的pPoly2-CAV-2为载体,构建重组质粒pCAV-2-pVAXLPF,利用脂质体介导方法转染MDCK细胞,转染3次后,细胞出现了典型的犬腺病毒感染样病变。电镜负染和切片观察、酶切、PCR扩增及测序鉴定的结果表明,成功构建了含犬瘟热病毒融合蛋白基因的重组犬腺病毒,表达的融合蛋白分子质量为72ku。在MDCK细胞上连续传30代试验表明重组病毒CAV-2-pVAXLPF具有良好的遗传稳定性。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 融合蛋白基因 重组腺病毒
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应用重组PCR构建猪源膜联蛋白A2和增强型绿色荧光蛋白融合基因 被引量:1
15
作者 陈江涛 吉艳红 +3 位作者 王光祥 尚佑军 刘艳红 刘湘涛 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期38-43,共6页
膜联蛋白A2是膜联蛋白多基因家族成员之一,在Ca2+存在时能与带负电荷的磷脂结合。最近研究显示,膜联蛋白A2在病毒感染方面发挥了重要作用。本研究应用RT-PCR和PCR方法分别获得了猪源膜联蛋白A2和增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)。然后用重... 膜联蛋白A2是膜联蛋白多基因家族成员之一,在Ca2+存在时能与带负电荷的磷脂结合。最近研究显示,膜联蛋白A2在病毒感染方面发挥了重要作用。本研究应用RT-PCR和PCR方法分别获得了猪源膜联蛋白A2和增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)。然后用重组PCR技术成功构建了膜联蛋白A2-EGFP融合基因,为研究膜联蛋白A2在病毒感染细胞中的定位和表达,以及病毒和宿主细胞相互作用奠定了基础。 展开更多
关键词 重组PCR 膜联蛋白A2 增强型绿色荧光蛋白 融合基因
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人心肌肌钙蛋白Ⅰ在大肠杆菌中的高效表达及纯化 被引量:1
16
作者 狄春辉 钟英成 施群 《北京医科大学学报》 CSCD 2000年第4期351-353,共3页
目的 :获得高纯度的人心肌肌钙重组蛋白 ,为临床上检测心肌损伤及预后提供新的诊断方法。方法 :利用RT PCR方法从人心肌细胞的cDNA文库中扩增编码人心肌肌钙蛋白Ⅰ的cDNA ,并克隆到大肠杆菌表达载体中 ,表达含凝血酶识别序列的MS2 cTn... 目的 :获得高纯度的人心肌肌钙重组蛋白 ,为临床上检测心肌损伤及预后提供新的诊断方法。方法 :利用RT PCR方法从人心肌细胞的cDNA文库中扩增编码人心肌肌钙蛋白Ⅰ的cDNA ,并克隆到大肠杆菌表达载体中 ,表达含凝血酶识别序列的MS2 cTnI融合蛋白 ,纯化后用Western blot进行鉴定。结果 :从人心肌cDNA文库中扩增出编码人cTnI的cDNA ,克隆并在大肠杆菌中表达 ,表达量达 30 %以上。经离子交换柱纯化 ,最终产物纯度在95 %以上。可与其特异性单克隆抗体反应。结论 :cTnI能够在大肠杆菌中高效表达和纯化 。 展开更多
关键词 心肌肌钙蛋白 大肠杆菌 基因转移 心血管疾病
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重组人糖蛋白激素β5/α2融合蛋白在CHO-S细胞中的表达纯化及功能活性分析 被引量:1
17
作者 千爱君 萧耿苗 +4 位作者 李壮 梁志成 穆云萍 赵子建 李芳红 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期390-396,共7页
目的在悬浮中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells,CHO-S)中分泌表达、纯化重组hCGH-CTP融合蛋白,验证其对3T3-L1成熟脂肪细胞脂质积累的影响。方法构建CTP连接肽融合人糖蛋白激素β5/α2重组蛋白表达载体pcDNA3.1-rhCGH-CTP,... 目的在悬浮中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells,CHO-S)中分泌表达、纯化重组hCGH-CTP融合蛋白,验证其对3T3-L1成熟脂肪细胞脂质积累的影响。方法构建CTP连接肽融合人糖蛋白激素β5/α2重组蛋白表达载体pcDNA3.1-rhCGH-CTP,将其瞬时转染CHO-S悬浮细胞中,大量表达纯化并验证rhCGH-CTP蛋白生物学活性;通过干预3T3-L1成熟脂肪细胞24 h,观察细胞内甘油三酯(TG)水平的变化。结果Western blot结果显示,rhCGH-CTP蛋白在CHO-S细胞中成功表达,表达量可达715.4 mg·L^(-1);用AKTA pure蛋白纯化系统纯化蛋白,SDS-PAGE方法鉴定纯化出的蛋白纯度较高可达90%。此外,在高表达TSHR基因的成熟脂肪细胞3T3-L1中,利用ELISA试剂盒测定不同浓度rhCGH-CTP蛋白干预后胞内cAMP含量明显升高,说明rhCGH-CTP蛋白具有生物活性;油红O染色结果发现,与对照组相比,不同浓度rhCGH-CTP蛋白干预组的成熟脂肪细胞中TG含量明显降低(P<0.05)。结论成功表达并纯化了rhCGH-CTP融合蛋白,其具有良好的生物学活性并能有效降低TG,该研究为后续深入揭示CGH蛋白的生理作用及在临床实践中的潜在应用提供了重要基础。 展开更多
关键词 重组人糖蛋白激素β5/α2融合蛋白 真核表达 悬浮CHO-S细胞 cAMP活性 基因工程 脂代谢
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恶性疟原虫裂殖子表面蛋白2融合HBS基因重组质粒的免疫原性研究 被引量:1
18
作者 赖秀球 朱家勇 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第3期63-67,共5页
目的 构建恶性疟原虫海南分离株 (FCC1/HN)裂殖子表面蛋白 2 (MSP2 )融合HBsAg基因片断真核重组表达质粒 pVXORF1-PfMSP2 -HBS ,观察该DNA疫苗的免疫特性。方法  (1)以恶性疟原虫海南分离株 (FCC1/HN)基因组为模板 ,扩增出pfMSP2 DNA... 目的 构建恶性疟原虫海南分离株 (FCC1/HN)裂殖子表面蛋白 2 (MSP2 )融合HBsAg基因片断真核重组表达质粒 pVXORF1-PfMSP2 -HBS ,观察该DNA疫苗的免疫特性。方法  (1)以恶性疟原虫海南分离株 (FCC1/HN)基因组为模板 ,扩增出pfMSP2 DNA片断 ,将该片段克隆入质粒pVXORF1-HBS中HBS的上游并与之紧密相连 ,构建质粒 pVXORF1-PfMSP2 -HBS ;构建真核重组表达质粒 pVXORF1-PfMSP2 以作为对照。 (2 )用上述构建的质粒及空质粒 pVXORF1免疫KM小鼠 ,以ELISA检测血清IgG抗体。 结果  (1)筛选出的重组子为编码FCC1/HNMSP2 基因片断的重组质粒 pVXORF1-PfMSP2 -HBS及 pVXORF1-PfMSP2 。 (2 )裸DNA尾根多点注射KM小鼠 ,显示 pVXORF1-PfMSP2 -HBS组小鼠较pVXORF1-PfMSP2 组小鼠产生抗PfMSP2 蛋白的抗体效价明显增高 ,二者比较 ,差异有非常显著意义 (P <0 0 1)。结论 PfMSP2 融合HBsAg基因片段激发机体产生抗PfMSP2 抗体的能力显著增强 ,提示PfMSP2 展开更多
关键词 恶性疟原虫 裂殖子表面蛋白2 融合HBS基因 重组质粒 免疫原性 研究 DNA疫苗
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人心肌肌钙蛋白T亚型的克隆及表达
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作者 陆青 赖春宁 +3 位作者 李志梁 王建安 李五举 沈倍奋 《第一军医大学学报》 CSCD 2000年第3期204-206,共3页
目的 构建人心肌肌钙蛋白T(cTnT)亚型的重组载体。 方法 应用RT-PCR技术,从人胚胎心肌组织中扩增cTnT1及cTnT2基因,连接到T Easy vector载体上,筛选重组子。结果 成功地扩增出cTnT1(764 bp)及cTnT2(124)基因片段,经测序证实,构建... 目的 构建人心肌肌钙蛋白T(cTnT)亚型的重组载体。 方法 应用RT-PCR技术,从人胚胎心肌组织中扩增cTnT1及cTnT2基因,连接到T Easy vector载体上,筛选重组子。结果 成功地扩增出cTnT1(764 bp)及cTnT2(124)基因片段,经测序证实,构建pExSecI-cTnT1表达载体并获得表达。结论 获得单一亚型的cTnT1及cTnT2基因片段,为研究心力衰竭时的胚胎型基因重构与发病关系提供了依据。 展开更多
关键词 心肌肌钙蛋白T亚型 基因表达 心力衰竭 克隆
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人IL-2信号肽和大鼠心肌肌凝蛋白α重链片段融合基因的构建及分泌表达
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作者 张军 吕新华 沈茜 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第10期674-677,共4页
目的 :克隆编码大鼠心肌肌凝蛋白α重链aa736~ 96 0的cDNA片段 ,构建携带融合基因的逆转录病毒分泌表达载体。方法 :以RT PCR方法从幼龄大鼠心肌组织中扩增出 6 81bp的目的基因 ,与hIL 2cDNA序列拼接 ,构建融合基因hIL 2 myosin及其... 目的 :克隆编码大鼠心肌肌凝蛋白α重链aa736~ 96 0的cDNA片段 ,构建携带融合基因的逆转录病毒分泌表达载体。方法 :以RT PCR方法从幼龄大鼠心肌组织中扩增出 6 81bp的目的基因 ,与hIL 2cDNA序列拼接 ,构建融合基因hIL 2 myosin及其逆转录病毒载体。采用脂质体法转染NIH3T3和PA317细胞 ,经G4 18筛选后 ,用RT PCR、免疫组化、免疫电镜和Dot blot法分析检测融合基因的表达。结果 :核苷酸序列测定显示克隆基因的核苷酸及推导的氨基酸序列与报告序列一致 ,开放阅读框正确 ;RT PCR检测提示转染细胞有融合基因mRNA转录 ;免疫组化、免疫电镜和Dot blot检测表明转染细胞有该肌凝蛋白重链片段的分泌表达。结论 :大鼠心肌肌凝蛋白α重链基因逆转录病毒载体构建成功 ,并可分泌表达 ,为心肌肌凝蛋白转基因诱导机体特异性免疫耐受及对心肌免疫损伤的研究打下了基础。 展开更多
关键词 IL-2信号肽 心肌免疫损伤 病毒性心肌 心肌肌凝蛋白 克隆 融合基因 逆转录病毒载体 RT-PCR方法
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