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疏水作用色谱法同时纯化及复性基因重组人干扰素-α 被引量:5
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作者 郭立安 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期301-303,共3页
使用高效疏水作用色谱直接从大肠杆菌表达的基因重组人干扰素 α(rhIFN α)包涵体的裂解液中纯化了rhIFN α ,并在纯化的同时获得了高的复性效率 ,使复性和纯化一步完成 ,大大地简化了操作步骤。用凝胶排阻色谱对该法纯化的rhIFN α进... 使用高效疏水作用色谱直接从大肠杆菌表达的基因重组人干扰素 α(rhIFN α)包涵体的裂解液中纯化了rhIFN α ,并在纯化的同时获得了高的复性效率 ,使复性和纯化一步完成 ,大大地简化了操作步骤。用凝胶排阻色谱对该法纯化的rhIFN α进行了纯度测定 ,纯度达到 95 %以上。该法的活性回收率分别比稀释法和透析法高 1 0倍和 1 展开更多
关键词 高效液相色谱 纯化 重组蛋白质 基因重组人干扰素-α 高效疏水作用色谱
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干扰素-γ基因敲除小鼠饲养繁殖方法的优化
2
作者 柳慧敏 何茜 +5 位作者 贾瑞莲 李娜 许瑞 冯耀宇 肖立华 郭亚琼 《中国实验动物学报》 北大核心 2025年第4期489-500,共12页
目的繁育获得干扰素-γ基因敲除纯合子(IFN-γ^(-/-))小鼠,并改善繁育策略,建立稳定的干扰素-γ基因敲除纯合子(IFN-γ^(-/-))小鼠繁育体系,为相关研究提供理想的动物模型。方法首先以C57BL/6J为背景的IFN-γ基因敲除杂合子(IFN-γ+/-)... 目的繁育获得干扰素-γ基因敲除纯合子(IFN-γ^(-/-))小鼠,并改善繁育策略,建立稳定的干扰素-γ基因敲除纯合子(IFN-γ^(-/-))小鼠繁育体系,为相关研究提供理想的动物模型。方法首先以C57BL/6J为背景的IFN-γ基因敲除杂合子(IFN-γ+/-)小鼠作为亲本进行繁育。之后,基于获得的子代小鼠,采用3种配种方式进行繁育:(1)雌性杂合子与雄性杂合子;(2)雄性纯合子与雌性杂合子;(3)雌性纯合子与雄性纯合子。并比较子代中IFN-γ^(-/-)小鼠的数量和存活情况,筛选最优繁育策略。在最优繁育策略下,评估雌鼠配种周龄和饲料种类对IFN-γ^(-/-)小鼠繁殖性能的影响,共统计60只IFN-γ^(-/-)雌鼠的前3胎窝产仔数、离乳存活数和离乳存活率,同时记录和分析了孕鼠营养补充、放置遮蔽物等环境优化措施对繁育效果的影响。结果在通过添加蛋黄以及瓜子充分保障孕鼠营养的条件下,雌性和雄性IFN-γ^(-/-)小鼠配种,单胎新生IFN-γ^(-/-)小鼠存活数为5~8只,繁育获得的IFN-γ^(-/-)小鼠的效率优于其他配种模式。此外,饲料种类和配种周龄对雌鼠繁殖性能影响显著,7~9周龄的雌性与雄性IFN-γ^(-/-)小鼠合笼配种并且饲喂繁殖饲料时,雌鼠的窝产仔数(6.9±1.7)、离乳存活数(6.5%±2.0%)和离乳存活率(93.2%±17.8%)均高于其他繁育条件。另外,通过放置遮蔽物预防种鼠打架有助于提高繁殖效果。结论采用优化的IFN-γ^(-/-)小鼠配种策略,结合高蛋白饲料饲喂、营养补充及规范化配种周龄管理,可显著提高IFN-γ^(-/-)小鼠的繁育效率和稳定性,为相关研究提供可靠的动物模型支持。 展开更多
关键词 干扰素-Γ 基因敲除小鼠 饲养 繁殖
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表达鸡γ-干扰素和传染性支气管病毒S1基因的重组鸡痘病毒疫苗对鸡外周血T淋巴细胞动态分布影响的研究 被引量:13
3
作者 孙永科 田占成 +4 位作者 王云峰 刘胜旺 童光志 智海东 王玫 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期539-543,共5页
机体的免疫应答是一个复杂的生物学过程,它以体液和细胞免疫为主,二者相互影响,相互作用,而构成了一个动态整体。本研究通过FACS技术检测SPF鸡接种共表达IBVS1基因和鸡γ-干扰素基因的重组鸡痘病毒疫苗后外周血中CD4+、CD8+和TCRδγ+... 机体的免疫应答是一个复杂的生物学过程,它以体液和细胞免疫为主,二者相互影响,相互作用,而构成了一个动态整体。本研究通过FACS技术检测SPF鸡接种共表达IBVS1基因和鸡γ-干扰素基因的重组鸡痘病毒疫苗后外周血中CD4+、CD8+和TCRδγ+三种亚类T淋巴细胞的数量的变化,初步探讨了干扰素对鸡外周血中T淋巴细胞亚类动态分布的影响。结果表明,含有干扰素基因的重组鸡痘病毒能显著增高机体特异性的CD8+和TCRδγ+T淋巴细胞水平,CD4+T淋巴细胞比例则要低于其他的疫苗免疫组。 展开更多
关键词 T淋巴细胞 鸡γ-干扰素 传染性支气管病毒 重组鸡痘病毒
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猪γ-干扰素基因真核重组表达质粒的构建 被引量:7
4
作者 任慧英 郭鑫 +2 位作者 杨汉春 陈艳红 查振林 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2005年第3期5-7,共3页
用 RT- PCR方法从长白猪脾脏淋巴细胞中扩增出猪 γ-干扰素 (IFN- γ)基因 ,经克隆测序表明与已发表序列同源性为10 0 %。将目的基因插入表达载体 pc DNA3.1(+) ,构建出真核重组表达载体 IFN-γ- pc DNA。将重组质粒转染 COS7细胞 ,检... 用 RT- PCR方法从长白猪脾脏淋巴细胞中扩增出猪 γ-干扰素 (IFN- γ)基因 ,经克隆测序表明与已发表序列同源性为10 0 %。将目的基因插入表达载体 pc DNA3.1(+) ,构建出真核重组表达载体 IFN-γ- pc DNA。将重组质粒转染 COS7细胞 ,检测转染细胞培养上清 IFN- γ活性 ,结果表明转染上清对猪繁殖与呼吸综合征病毒有抑制作用。 展开更多
关键词 IFN-γ γ-干扰素 目的基因 转染 真核 重组表达质粒 培养上清 COS7细胞 表达载体 序列同源性
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重组鸭α-干扰素基因工程菌表达条件的研究 被引量:7
5
作者 杨梅 程安春 +3 位作者 汪铭书 张瑶 龚永强 陈斌 《四川农业大学学报》 CSCD 2007年第3期337-342,共6页
摘要:为了确定重组鸭α-干扰素(DuIFN—α)基因工程菌BL21(DE3)/pEW32a^+-DuIFN—α的最佳表达条件,对影响原核表达的主要因素:IPTG浓度、诱导时期、收获时间、培养诱导温度、葡萄糖浓度及培养基进行了优化;并利用抗性筛选对... 摘要:为了确定重组鸭α-干扰素(DuIFN—α)基因工程菌BL21(DE3)/pEW32a^+-DuIFN—α的最佳表达条件,对影响原核表达的主要因素:IPTG浓度、诱导时期、收获时间、培养诱导温度、葡萄糖浓度及培养基进行了优化;并利用抗性筛选对表达质粒的稳定性进行了研究。结果显示,诱导基因工程菌BL21(DE3)/pEW32a^+ -DulFN—a表达DuIFN—α的最佳条件为:以TB+5g九葡萄糖培养基37℃培养至菌体OD600=0.8~1.1时,加入IPTG至终浓度0.2mmol/L,30℃诱导培养4~5h。在最佳表达条件下,DuIFN—α的相对含量为34.1%,总含量(终菌体浓度×相对含量)达79.9;各种优化条件对表达质粒的稳定性未见明显影响。 展开更多
关键词 重组鸭α-干扰素 表达条件 优化
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内皮抑素基因联合重组干扰素-α蛋白对卵巢癌抑制作用的研究 被引量:3
6
作者 魏增涛 卢爱英 +5 位作者 王晓燕 马春红 孙汶生 张艳 朱法良 郭春 《实用妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期594-594,595-596,I0001,共4页
目的:探讨联合应用内皮抑素基因和重组干扰素-α(IFN-α)蛋白对鼠卵巢癌移植瘤的抑制作用。方法:利用人卵巢上皮癌细胞株(3AO细胞)制备卵巢癌移植瘤动物模型,以重组IFN-α和脂质体介导分泌型内皮抑素重组载体基因(pVAX-sEn)瘤内及瘤周注... 目的:探讨联合应用内皮抑素基因和重组干扰素-α(IFN-α)蛋白对鼠卵巢癌移植瘤的抑制作用。方法:利用人卵巢上皮癌细胞株(3AO细胞)制备卵巢癌移植瘤动物模型,以重组IFN-α和脂质体介导分泌型内皮抑素重组载体基因(pVAX-sEn)瘤内及瘤周注射,每周2次,测量瘤体大小,流式细胞仪检测pVAX-sEn基因转染对肿瘤细胞细胞周期的影响,免疫组化法检测肿瘤微血管密度。结果:联合注射组瘤体体积显著小于pVAX-sEn单用组(P<0.01);联合治疗组肿瘤细胞凋亡率为18.5%,高于pVAX-sEn单用组;联合治疗组肿瘤细胞坏死明显,血管较少,肿瘤微血管密度为3.16±1.12,明显少于pVAX-sEn单用组(P<0.01)。结论:脂质体介导pVAX-sEn瘤内注射可有效抑制卵巢癌移植瘤的生长,联合应用重组IFN-α效果更显著。 展开更多
关键词 内皮抑素 分泌型内皮抑素重组载体基因 干扰素 卵巢癌
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共表达传染性支气管炎病毒S1基因和鸡干扰素-γ基因的重组鸡痘病毒部分生物学特性测定 被引量:2
7
作者 王云峰 石星明 +9 位作者 王玫 刘胜旺 童光志 崔红玉 木古丽 徐灵龙 何来 贺笋 葛俊伟 李一经 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1077-1082,共6页
将共表达传染性支气管炎病毒S1基因和鸡干扰素-γ基因的重组鸡痘病毒(rFPV-IFNγS1)接种4周龄SPF鸡,免疫3周后用异源病毒LSC99I株攻击,考察重组疫苗对异源病毒攻击的保护作用。结果显示,疫苗接种后,免疫鸡血清中很快出现抗体;外周血中C... 将共表达传染性支气管炎病毒S1基因和鸡干扰素-γ基因的重组鸡痘病毒(rFPV-IFNγS1)接种4周龄SPF鸡,免疫3周后用异源病毒LSC99I株攻击,考察重组疫苗对异源病毒攻击的保护作用。结果显示,疫苗接种后,免疫鸡血清中很快出现抗体;外周血中CD4+和CD8+T淋巴细胞的百分含量略高于非免疫对照组,但这种差异并不显著。LSC99I株IB病毒攻击后的保护率结果表明,免疫组的发病率为50%(5/10),死亡率为20%(2/10),非免疫对照组的发病率为100%(10/10),死亡率为50%(5/10);另外免疫鸡的病理损伤程度与非免疫对照组相比,二者差异不明显,在排毒时间和排毒量上也没有明显变化。体重分析结果显示,攻毒前免疫组与对照组相比,体重均没有显著变化,但攻毒后免疫组鸡体重增长的幅度要高于非免疫对照组。从以上结果可以说明,重组疫苗虽然能在动物体内很好地表达,但不能对实验动物产生很好的保护作用,而鸡干扰素-γ基因能在动物体内表达并发挥其免疫调节作用,减轻了重组疫苗对体重增长的影响。 展开更多
关键词 传染性支气管炎 重组鸡痘病毒 干扰素-Γ S1蛋白
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重组人γ-干扰素基因工程菌发酵工艺优化 被引量:1
8
作者 许崇利 欧阳红生 +1 位作者 许崇波 张艳平 《中国兽药杂志》 2011年第11期26-30,共5页
研究不同类型培养基、诱导时间、菌体密度和不同补料对rhIFN-γ表达的影响,并运用高密度发酵工艺对rhIFN-γ的产量进行优化,目的蛋白表达量从4 000 mg/L提高到20 000 mg/L以上,发酵产量提高了5倍,大大提高了效率。同时为验证工艺的稳定... 研究不同类型培养基、诱导时间、菌体密度和不同补料对rhIFN-γ表达的影响,并运用高密度发酵工艺对rhIFN-γ的产量进行优化,目的蛋白表达量从4 000 mg/L提高到20 000 mg/L以上,发酵产量提高了5倍,大大提高了效率。同时为验证工艺的稳定性,将优化的发酵条件进行连续三批重复发酵实验。结果表明该优化条件具有重复性,表达稳定,维持在40%左右,从而为rhIFN-γ大规模生产奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 重组人Γ-干扰素 发酵 优化
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基因重组鸡α-干扰素在肉鸡体内的药代动力学研究 被引量:2
9
作者 张伟 于忠娜 +2 位作者 邹本革 朱凤华 朱连勤 《山东畜牧兽医》 2017年第12期18-19,共2页
选择40只32日龄健康AA肉鸡按1万IU/0.6ml基因重组鸡α-干扰素0.6ml肌肉注射给药后,不同时间点采血。用基因重组鸡α-干扰素检测试剂盒检测血清中浓度,研究其在血清中的药代动力学。通过3P97药动学软件分析主要药物动力学参数:分布半衰期... 选择40只32日龄健康AA肉鸡按1万IU/0.6ml基因重组鸡α-干扰素0.6ml肌肉注射给药后,不同时间点采血。用基因重组鸡α-干扰素检测试剂盒检测血清中浓度,研究其在血清中的药代动力学。通过3P97药动学软件分析主要药物动力学参数:分布半衰期(T_(1/2α))、消除半衰期(T_(1/2β))、药物清除率(CL)、药时曲线下面积(AUC)等。结果表明,肌肉注射1万单位基因重组鸡α-干扰素后肉鸡吸收迅速,达峰时间短,吸收较完全,能在体内较快的消除。 展开更多
关键词 基因重组鸡α-干扰素 肉鸡 药代动力学
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重组腺病毒介导γ-干扰素基因对小鼠结肠癌腹腔转移模型的实验治疗作用
10
作者 丁强 吴文溪 +3 位作者 沈历宗 范萍 华一兵 刘新垣 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2006年第8期664-666,共3页
背景与目的:肿瘤细胞靶向的细胞因子基因治疗是肿瘤治疗领域的研究热点。γ干扰素通过多种机制发挥抗肿瘤免疫的作用。本研究探讨利用γ-干扰素(IFN-γ)基因治疗对大肠癌的预防和治疗作用。方法:利用BALB/C小鼠成瘤的小鼠结肠癌CT26细... 背景与目的:肿瘤细胞靶向的细胞因子基因治疗是肿瘤治疗领域的研究热点。γ干扰素通过多种机制发挥抗肿瘤免疫的作用。本研究探讨利用γ-干扰素(IFN-γ)基因治疗对大肠癌的预防和治疗作用。方法:利用BALB/C小鼠成瘤的小鼠结肠癌CT26细胞株制备小鼠结肠癌腹腔转移瘤模型,用携带鼠IFN-γ基因的重组缺陷型腺病毒AdIFN-γ进行治疗,同时利用携带LacZ(β-galactosidase)基因的腺病毒AdLacZ和PBS(phosphate-bufferedsaline)作空白对照,检测经基因治疗后小鼠体内IFN-γ基因的表达情况、脾脏的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性变化、肝转移的发生及荷瘤小鼠的生存期。结果:经IFN-γ基因治疗后,与对照组相比,治疗组小鼠血清中IFN-γ表达量明显增加(P<0.01),脾脏的CTL活性明显增强(P<0.05),肿瘤生长受到抑制,肝转移的发生率明显下降,荷瘤小鼠的存活期明显延长。结论:利用IFN-γ基因治疗大肠癌具有明显的疗效,并对其肝转移具有一定的预防作用。 展开更多
关键词 Γ-干扰素 基因治疗 大肠癌 肝转移
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重组β-干扰素上调HepG2细胞表达基因抑制性消减杂交技术筛选
11
作者 钟彦伟 成军 +3 位作者 曲建慧 张黎颖 郭江 李晓东 《医药导报》 CAS 2006年第2期96-98,共3页
目的利用抑制性消减杂交技术筛选重组β-干扰素(IFN-β)上调HepG2细胞表达基因。方法以重组IFN-β2000U·mL^-1刺激对数生长期HepG2细胞,设经0.9%氯化钠注射液作用的HepG2细胞为阴性对照组;制备HepG2细胞裂解液,从中提取mRN... 目的利用抑制性消减杂交技术筛选重组β-干扰素(IFN-β)上调HepG2细胞表达基因。方法以重组IFN-β2000U·mL^-1刺激对数生长期HepG2细胞,设经0.9%氯化钠注射液作用的HepG2细胞为阴性对照组;制备HepG2细胞裂解液,从中提取mRNA并逆转录合成cDNA,经RsaⅠ酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与阴性对照组cDNA进行两次消减杂交和两次抑制性聚合酶链反应(PCR),将产物与T/A栽体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠埃希菌进行基因文库扩增,随机挑选克隆PCR后进行测序及同源性分析。结果成功构建了重组IFN-β作用HepG2后差异表达的cDNA消减文库。扩增后得到50个200~1000bp插入片段的克隆,随机挑选其中31个插入片段测序,通过生物信息学分析获得其全长基因序列,共获得20种编码基因,其中1种为未知功能的新基因。结论通过该方法可筛选得到IFN-β作用于HepG2细胞后上调表达的部分基因,包括与细胞生长调节、物质代谢和细胞凋亡密切相关的一些蛋白编码基因。 展开更多
关键词 重组β-干扰素 抑制性消减杂交 反式调节
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环磷酸鸟苷-腺苷合成酶和干扰素基因刺激因子信号通路与缺血性脑卒中相关性的研究进展
12
作者 王亚敏 吕转 +4 位作者 陈露露 安雨琦 高静 张钰涵 冯晓东 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2024年第1期110-112,共3页
缺血性脑卒中(IS)是一种常见的神经系统损伤疾病,其特征是局部脑血流暂时或永久减少,其高发病率、高致残率和不良预后给社会带来了沉重负担[1]。迄今为止,治疗急性IS的方法主要是静脉注射重组组织型纤溶酶原激活剂,然而由于重组组织型... 缺血性脑卒中(IS)是一种常见的神经系统损伤疾病,其特征是局部脑血流暂时或永久减少,其高发病率、高致残率和不良预后给社会带来了沉重负担[1]。迄今为止,治疗急性IS的方法主要是静脉注射重组组织型纤溶酶原激活剂,然而由于重组组织型纤溶酶原激活剂的治疗窗口狭窄,只有少数患者接受溶栓治疗. 展开更多
关键词 卒中 免疫系统 环磷酸鸟苷-腺苷合成酶 干扰素基因刺激因子 信号通路
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基因重组猪α-干扰素防治猪无名高热小量临床试验效果显著 被引量:4
13
作者 岑路 李华雁 郭霄峰 《中国动物保健》 2007年第3期62-63,共2页
“无名高热”的发生是由多种病原微生物的协同致病作用或称混合感染导致。至少在笔者接诊试验治疗的猪场和查阅相关资料是如此,既有Pmc肺炎、SS、附红细胞体病、APP和蓝耳和猪流感病等,如果剖检病死猪或病后期猪,还可见到Hc、HPS、P... “无名高热”的发生是由多种病原微生物的协同致病作用或称混合感染导致。至少在笔者接诊试验治疗的猪场和查阅相关资料是如此,既有Pmc肺炎、SS、附红细胞体病、APP和蓝耳和猪流感病等,如果剖检病死猪或病后期猪,还可见到Hc、HPS、PCVD、沙门氏菌病等等。病程稍长,这些病原会形成极复杂的病原谱组合,这种组合无疑起到了协同致病的作用。此病传染快,死亡率高,采用抗生素、疫苗处理等常规治疗方法疗效不明显,死亡率未见控制,使许多猪场猪只死亡,损失惨重。 展开更多
关键词 试验效果 无名高热 Α-干扰素 猪场 基因重组 病原微生物 临床 防治
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基因重组γ-干扰素与化疗合用治疗慢性粒细胞白血病的临床观察 被引量:2
14
作者 杨芳 袁长吉 李舜华 《白求恩医科大学学报》 CSCD 1999年第5期673-674,共2页
目的:探讨基因重组干扰素与化疗药物合用治疗慢性粒细胞白血病( C M L)的疗效。方法:对 12 例慢性粒细胞白血病病人进行治疗前后临床表现、血液学及细胞遗传学指标的观察与分析。结果:12 例慢性粒细胞白血病病人,血液学... 目的:探讨基因重组干扰素与化疗药物合用治疗慢性粒细胞白血病( C M L)的疗效。方法:对 12 例慢性粒细胞白血病病人进行治疗前后临床表现、血液学及细胞遗传学指标的观察与分析。结果:12 例慢性粒细胞白血病病人,血液学完全缓解率 75% (9 例),血液学部分缓解率 25% (3例),总有效率 100% ,全部病例 Ph 染色体阳性,用药后 Ph 阳性率明显下降,其中有 4 例降至60% 。副作用仅有暂时微热、恶心。结论:干扰素与化疗药物合用起效快,维持缓解时间长,是治疗 C M L 最有效的方法。 展开更多
关键词 白血病 CML 基因重组干扰素 PH染色体 药物疗法
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重组人干扰素-β制品的质量标准研究 被引量:8
15
作者 刘长暖 张翊 +4 位作者 饶春明 林建伟 高凯 张明芳 王军志 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2000年第3期212-215,共4页
目的 :通过对重组IFN β的质量研究和实验方法参数的选择 ,建立重组IFN β的质量控制标准。 方法 :通过采用细胞病变抑制法 ,以IFN α国家标准品、WHO的IFN β国际标准品作为参考品测定样品的含量 ,比较Lowry法、BCA法测定IFN β的蛋白... 目的 :通过对重组IFN β的质量研究和实验方法参数的选择 ,建立重组IFN β的质量控制标准。 方法 :通过采用细胞病变抑制法 ,以IFN α国家标准品、WHO的IFN β国际标准品作为参考品测定样品的含量 ,比较Lowry法、BCA法测定IFN β的蛋白浓度 ,采用鲎试剂法检测内毒素含量 ,按照《中国生物制品规程》的有关要求进行其他项目的测定。结果 :结果表明可用IFN α标准品和IFN β标准品测定IFN β的生物活性 ,用Lowry法测定的蛋白浓度与实际值基本一致 ,鲎试剂法可用于制品细菌内毒素含量的测定。国内生产的重组IFN β制品达到了国家有关规定的要求。 结论 :建立了重组IFN β的质量标准 ,并可以有效地控制制品的质量 ,为我国重组IFN 展开更多
关键词 重组人β-干扰素 质量标准 基因工程 IFN-Β
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重组人β-干扰素在体内外对肿瘤生长的抑制作用 被引量:8
16
作者 楼国良 于益芝 +5 位作者 陈莉 张明徽 陈国友 章卫平 杨宏斌 曹雪涛 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2001年第1期49-51,共3页
目的 :观察点突变重组人 β 干扰素 (IFN β)对人肿瘤细胞体内外生长的抑制作用 ,为其临床应用提供实验资料。 方法 :分别将人结肠癌LoVo、肺腺癌A5 49细胞置于含 2 0 0IU/ml,10 0 0IU/ml及 5 0 0 0IU/mlIFN β培养基中培养 2 4h后 ,于 ... 目的 :观察点突变重组人 β 干扰素 (IFN β)对人肿瘤细胞体内外生长的抑制作用 ,为其临床应用提供实验资料。 方法 :分别将人结肠癌LoVo、肺腺癌A5 49细胞置于含 2 0 0IU/ml,10 0 0IU/ml及 5 0 0 0IU/mlIFN β培养基中培养 2 4h后 ,于 0 .3%琼脂糖培养基中培养 10~ 14d ,观察软琼脂中集落形成情况。将裸鼠皮下接种LoVo ,A5 49细胞 ,72h后分组 ,每次注射 2 0万IU/kg或 10 0万IU/kg ,5 0 0万IU/kgIFN β ,每天 1次 ,连续 10d ,同时设置生理盐水对照组、标准品组和注射用环磷酰胺治疗组。荷瘤后第 14天处死小鼠 ,称取瘤重。以上实验均重复 3批。结果 :在体外 ,经重组人新型 β 干扰素处理的LoVo细胞及A5 49细胞的集落数均明显低于未经处理的细胞 (0 .0 5 >P >0 .0 1) ,与标准品组无明显差异 (P >0 .0 5 )。荷瘤裸鼠经治疗后 ,瘤重随着重组人 β 干扰素剂量的升高而降低 ,即重组人β 干扰素可呈剂量依赖性地抑制LoVo ,A5 49细胞在体内的生长 ,在疗效方面与标准品间无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论 :重组人 β 展开更多
关键词 重组人β-干扰素 结肠癌 肺腺癌 基因治疗
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人α-干扰素基因在转基因草鱼中的表达 被引量:17
17
作者 陈立祥 张学文 +5 位作者 肖调义 汪冬庚 符少辉 苏建明 陈开健 章怀云 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期177-178,共2页
为提高草鱼对出血病的抗性 ,采用显微注射法 ,将克隆在鲤 β-肌动蛋白基因启动子下游的人 α-干扰素基因转移到草鱼受精卵中 ,获得了大量转基因个体 .抽取转基因鱼血浆 ,以酶联免疫吸附法检测了转基因草鱼中人α-干扰素基因的表达情况 .... 为提高草鱼对出血病的抗性 ,采用显微注射法 ,将克隆在鲤 β-肌动蛋白基因启动子下游的人 α-干扰素基因转移到草鱼受精卵中 ,获得了大量转基因个体 .抽取转基因鱼血浆 ,以酶联免疫吸附法检测了转基因草鱼中人α-干扰素基因的表达情况 .从 6 72尾转基因草鱼中检测出 15 8尾有 α-干扰素的表达 ,阳性率为 2 3.5 1% ,其中表达水平最高个体血浆中α-干扰素质量浓度为 145 0 pg/ m L . 展开更多
关键词 草鱼 人α-干扰素 酶联免疫检测 基因转化 基因表达 出血病 抗生
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京巴犬α-干扰素全基因的克隆与分子进化分析 被引量:6
18
作者 陈红英 李新生 +3 位作者 董海聚 崔保安 郭明彦 宋亚朋 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期512-516,共5页
根据基因库(GenBank)中收录的犬α-干扰素(IFN-α)基因核苷酸序列(AB102731),设计并合成了1对引物,PCR扩增京巴犬IFN-α全基因,并克隆、测序。结果表明,犬IFN-α基因全基因序列为564 bp,包含1个开放阅读框,编码187个氨基酸的多肽,推导... 根据基因库(GenBank)中收录的犬α-干扰素(IFN-α)基因核苷酸序列(AB102731),设计并合成了1对引物,PCR扩增京巴犬IFN-α全基因,并克隆、测序。结果表明,犬IFN-α基因全基因序列为564 bp,包含1个开放阅读框,编码187个氨基酸的多肽,推导氨基酸序列有3个潜在的N-糖基化位点,有10个与二硫键形成有关的半胱氨酸。序列比较分析发现,京巴犬IFN-α基因序列与GenBank发表的其它品种犬IFN-α基因序列核苷酸同源性为96.3%以上,氨基酸同源性为94.1%以上,其中与AB102731核苷酸同源性最高,为99.5%,仅有3个碱基差异。京巴犬与人和其他8种动物的IFN-α基因序列分析和系统进化分析表明,IFN-α基因存在种属的差异性,亲缘关系越近,同源性越高。京巴犬IFN-α基因的成功克隆为进一步研究犬IFN-α基因表达、生物学活性和应用奠定基础。 展开更多
关键词 京巴犬 α-干扰素基因 扩增 基因克隆 进化分析
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重组人γ-干扰素包涵体稀释复性 被引量:11
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作者 靳挺 关怡新 +1 位作者 费峥峥 姚善泾 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第5期770-774,共5页
采用稀释法研究了重组人γ 干扰素包涵体复性条件 ,如温度、pH值、蛋白浓度、复性液中脲浓度 ,同时对加样操作方式进行了考察 ,得到了较为适宜的复性条件 .结果表明 ,脲能有效地抑制复性过程中蛋白质的聚集 ,合适的脲浓度随复性蛋白浓... 采用稀释法研究了重组人γ 干扰素包涵体复性条件 ,如温度、pH值、蛋白浓度、复性液中脲浓度 ,同时对加样操作方式进行了考察 ,得到了较为适宜的复性条件 .结果表明 ,脲能有效地抑制复性过程中蛋白质的聚集 ,合适的脲浓度随复性蛋白浓度的增加而有所增大 ,在 4℃、pH值 8 0、脲浓度 1 0mol·L-1、蛋白浓度0 1mg·ml-1及脉冲加样操作方式等条件下 ,复性后重组人γ 干扰素的活性为 2 39× 10 5IU·ml-1,比活达 2 2 1× 10 7IU·mg-1. 展开更多
关键词 重组人Γ-干扰素 包涵体 稀释复性
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鸡γ-干扰素在重组杆状病毒中的表达及抗病毒活性的测定 被引量:8
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作者 秦立廷 王喜军 +3 位作者 赵莉 葛金英 刘思当 步志高 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期212-216,共5页
本研究构建了表达鸡γ-干扰素(Chicken interferon-γ,ChIFN-γ)的重组杆状病毒rBac-ChIFN-γ。采用鼠抗ChIFN-γ免疫血清作为一抗进行间接免疫荧光(IFA)及间接ELISA检测,表明ChIFN-γ在重组杆状病毒rBac-ChIFN-γ感染的昆虫细胞中获得... 本研究构建了表达鸡γ-干扰素(Chicken interferon-γ,ChIFN-γ)的重组杆状病毒rBac-ChIFN-γ。采用鼠抗ChIFN-γ免疫血清作为一抗进行间接免疫荧光(IFA)及间接ELISA检测,表明ChIFN-γ在重组杆状病毒rBac-ChIFN-γ感染的昆虫细胞中获得表达。细胞病变抑制法测定重组ChIFN-γ抗病毒活性试验显示,重组杆状病毒表达ChIFN-γ能有效抑制水疱性口炎病毒(VSV)在鸡胚成纤维细胞(CEF)上的复制,而且其抗病毒活性可以被鼠抗ChIFN-γ免疫血清阻断。试验结果表明,重组杆状病毒能良好表达ChIFN-γ,并具有高效抗病毒活性。 展开更多
关键词 Γ-干扰素 重组杆状病毒 抗病毒活性
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