巴斯德毕赤酵母的基因表达系统研究进展 被引量：65

1

作者 欧阳立明 张惠展 +1 位作者 张嗣良 刘志敏 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第2期151-154,共4页

巴斯德毕赤酵母是一种近年来广泛使用的基因表达系统 ,它具有表达率高、遗传稳定、产物可分泌、发酵工艺成熟等许多优点 .综述了该系统在载体类型、载体元件 (包括启动子、选择标记和信号肽序列 )、受体类型。

关键词 巴斯德毕赤酵母 基因表达系统 载体 受体

在线阅读 下载PDF 职称材料

丝状真菌瑞氏木霉外源基因表达系统的构建 被引量：8

2

作者 汪天虹 吴志红 +1 位作者 刘世利 曲音波 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期736-742,共7页

采用PCR技术体外扩增获得了瑞氏木霉外切葡聚糖纤维二糖水解酶Ⅰ (CBHⅠ )启动子和终止子序列 .并以大肠杆菌质粒pUC1 9为骨架 ,在该启动子和终止子序列间加入多克隆位点 ,构建了瑞氏木霉强表达整合型载体pTRIL .以质粒pAN7 1为模板 ,... 采用PCR技术体外扩增获得了瑞氏木霉外切葡聚糖纤维二糖水解酶Ⅰ (CBHⅠ )启动子和终止子序列 .并以大肠杆菌质粒pUC1 9为骨架 ,在该启动子和终止子序列间加入多克隆位点 ,构建了瑞氏木霉强表达整合型载体pTRIL .以质粒pAN7 1为模板 ,体外扩增了带有潮霉素磷酸转移酶(hph)基因的DNA片段 ,将hph插入pTRIL的cbh1启动子和终止子序列之间 ,构建了Pcbh1 hph Tcbh1表达盒 .用此表达盒转化瑞氏木霉C30原生质体 ,在潮霉素平板上得到 1 5株抗性转化子 .对其中的H1转化子进行了PCR和Southern印迹分析 ,证实hph基因确实整合到转化子染色体DNA上 ,并在Pcbh1 启动子控制下进行高效表达 .转化子H1对潮霉素抗性达 1 5 0mg L ,比出发菌株提高 2倍 . 展开更多

关键词 瑞氏木霉 外源基因表达系统 cbhI启动子 构建 表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

杆状病毒多基因表达系统介导的轮状病毒样颗粒表达与组装 被引量：5

3

作者 龙虎 姚伦广 +3 位作者 王姗姗 陈士新 谭佩婵 孙京臣 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期1491-1495,共5页

目的构建能同时表达轮状病毒vp2、vp6、vp7基因的重组家蚕杆状病毒,并在BmN细胞中进行初步表达。方法利用MA104细胞繁殖人A组轮状病毒,RT-PCR扩增病毒结构蛋白vp2、vp6、vp7基因,连接至转移载体pFBDM和pUCDM中,同时引入含IE1启动子的绿... 目的构建能同时表达轮状病毒vp2、vp6、vp7基因的重组家蚕杆状病毒,并在BmN细胞中进行初步表达。方法利用MA104细胞繁殖人A组轮状病毒,RT-PCR扩增病毒结构蛋白vp2、vp6、vp7基因,连接至转移载体pFBDM和pUCDM中,同时引入含IE1启动子的绿色荧光蛋白基因利于检测感染和表达量,再分别通过Tn7及Cre-LoxP重组构建重组病毒。为方便检测基因的表达,在VP7的C-末端添加6-组氨酸(6-His)标签,可通过ELISA等方法快速检测目的基因表达。结果扩增获得了轮状病毒三个结构蛋白基因,构建了能高效组装轮状病毒样颗粒的重组表达载体,ELISA检测VP7得到了表达,在BmN细胞中观察到病毒样颗粒。结论成功构建杆状病毒多基因的表达系统,为生产多亚基蛋白复合物,研究大分子结构提供借鉴。 展开更多

关键词 轮状病毒样颗粒 家蚕杆状病毒 多基因表达系统 BmN细胞 疫苗

在线阅读 下载PDF 职称材料

毕赤酵母外源基因表达系统研究进展 被引量：8

4

作者 杜中军 朱水芳 +1 位作者 黄文胜 翟衡 《生物技术通报》 CAS CSCD 2002年第4期7-11,共5页

巴斯德毕赤酵母Pichiapastoris外源基因表达系统已经成功表达了很多胞间型和胞内型蛋白质。与酿酒酵母Saccharomycesceresiviae相比 ,该系统所具有的很多优势使其应用越来越广泛。有关研究主要涉及以下几个方面 :宿主菌株、表达载体、... 巴斯德毕赤酵母Pichiapastoris外源基因表达系统已经成功表达了很多胞间型和胞内型蛋白质。与酿酒酵母Saccharomycesceresiviae相比 ,该系统所具有的很多优势使其应用越来越广泛。有关研究主要涉及以下几个方面 :宿主菌株、表达载体、转化方法、外源基因整合、外源蛋白糖基化和高密度发酵培养等。 展开更多

关键词 毕赤酵母 外源基因表达系统 研究进展 甲醇营养型酵母

在线阅读 下载PDF 职称材料

Retro-Tet:一种基于逆转录病毒的诱导性基因表达系统 被引量：1

5

作者 龚小卫 姜勇 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期420-424,共5页

Retro Tet基因表达系统是一种新型的高效、稳定、无毒、具有严密开 关功能的可诱导性真核细胞基因表达系统 .该系统兼备了逆转录病毒基因表达系统和Tet off Tet on基因表达系统的优点 ,在稳定表达细胞系的筛选、基因的表达与调控及基... Retro Tet基因表达系统是一种新型的高效、稳定、无毒、具有严密开 关功能的可诱导性真核细胞基因表达系统 .该系统兼备了逆转录病毒基因表达系统和Tet off Tet on基因表达系统的优点 ,在稳定表达细胞系的筛选、基因的表达与调控及基因功能研究等方面得到了成功的应用 。 展开更多

关键词 诱导性基因表达系统 基因调控 基因治疗 Tetro-Tet 逆转录病毒

在线阅读 下载PDF 职称材料

重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位基因表达系统构建 被引量：1

6

作者 全胜 严杰 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2003年第2期14-15,20,共3页

从E .coli 4 4 815株基因组DNA中扩增不耐热肠毒素B亚单位 (LTB)基因并分析了核苷酸序列 ,构建pET32a的LTB表达载体 ,在E .coliBL2 1DE3宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导表达 ,采用SDS PAGE鉴定表达产物。克隆的LTB基因与报道的核苷酸和氨... 从E .coli 4 4 815株基因组DNA中扩增不耐热肠毒素B亚单位 (LTB)基因并分析了核苷酸序列 ,构建pET32a的LTB表达载体 ,在E .coliBL2 1DE3宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导表达 ,采用SDS PAGE鉴定表达产物。克隆的LTB基因与报道的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为 99.12 %～ 99.71%和 97.5 8%～ 99.19% ,pET32a LTB BL2 1DE3系统表达的rLTB量约占细菌总蛋白的 30 %。 展开更多

关键词 重组大肠杆菌不耐热肠毒素 B亚单位 基因表达系统 构建

在线阅读 下载PDF 职称材料

乳酸菌食品级基因表达系统的研究进展 被引量：9

7

作者 王海英 祁克宗 彭开松 《上海畜牧兽医通讯》 2008年第1期8-9,共2页

关键词 基因表达系统 乳酸菌 食品级 革兰氏阳性细菌 碳水化合物 分子遗传学 分子生物学 乳酸乳球菌

在线阅读 下载PDF 职称材料

基因表达系统与转基因动物乳腺反应器 被引量：1

8

作者 张旭晨 《河北大学学报（自然科学版）》 CAS 1999年第2期193-198,共6页

出于研究、医疗或工业目的，常常需要大量置备各种生物活性蛋白质，为此已经建立了多种基因工程表达系统，如微生物发酵系统、真核细胞培养系统、转基因植物表达系统和转基因动物表达系统等。近几年，利用转基因动物作为生物反应器由乳... 出于研究、医疗或工业目的，常常需要大量置备各种生物活性蛋白质，为此已经建立了多种基因工程表达系统，如微生物发酵系统、真核细胞培养系统、转基因植物表达系统和转基因动物表达系统等。近几年，利用转基因动物作为生物反应器由乳汁中生产蛋白药物的研究取得了很大进展，有多种动物可被用于转基因。基本过程是将基因构件显微注射到单细胞期受精卵，基因构件以一定几率整合到受体基因组中。通常转基因和其表达模式可忠实地遗传。许多蛋白将以高浓度低成本由转基因家畜的奶中生产。这些转基因动物与传统的动物细胞培养和细菌发酵技术相比尤显高效。乳腺能完成包括二硫桥形成、酰胺化、羧基化和糖基化在内的翻译后修饰，１头转基因羊就是１套发酵罐。据预测，到２０１０年由转基因动物生产的蛋白药物占全部基因工程药物的比率将增长到９５％以上。 展开更多

关键词 基因表达系统 转基因动物 乳腺反应器

在线阅读 下载PDF 职称材料

甲醇酵母基因表达系统研究

9

作者 王志方 艾秀莲 +4 位作者 李晨华 王玮 张伟 冯怀蓉 王成 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2002年第4期222-224,共3页

甲醇酵母基因表达系统是近年来发展起来的一种较为成熟的基因表达系统 ,它具有表达量高、产物活性保持好、产物易于分离纯化、发酵工艺成熟、成本低廉等许多优点。介绍了该系统的受体菌、表达载体、转化以及影响表达的主要因素等方面的... 甲醇酵母基因表达系统是近年来发展起来的一种较为成熟的基因表达系统 ,它具有表达量高、产物活性保持好、产物易于分离纯化、发酵工艺成熟、成本低廉等许多优点。介绍了该系统的受体菌、表达载体、转化以及影响表达的主要因素等方面的内容。 展开更多

关键词 甲醇酵母 基因表达系统 发酵工艺 受体菌 表达载体

在线阅读 下载PDF 职称材料

利用大肠埃希氏菌光控基因表达系统降解多菌灵农残 被引量：1

10

作者 余姝侨 官昭瑛 陈红 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期218-224,共7页

利用一种新型的重组大肠埃希氏菌光控基因诱导表达系统来生产多菌灵水解酶,用于环境中多菌灵农药残留的降解。该光控系统基于光敏融合蛋白LEV1在光照条件下发生同源二聚化并抑制下游基因转录的原理。SDS-PAGE和酶联免疫实验结果表明,异... 利用一种新型的重组大肠埃希氏菌光控基因诱导表达系统来生产多菌灵水解酶,用于环境中多菌灵农药残留的降解。该光控系统基于光敏融合蛋白LEV1在光照条件下发生同源二聚化并抑制下游基因转录的原理。SDS-PAGE和酶联免疫实验结果表明,异源多菌灵水解酶基因可通过光控机制被超表达,生产的多菌灵水解酶在溶液和土壤样品中具有降解多菌灵农药残留的活性。本技术利用光作为诱导剂,具备廉价易得、无毒害、可随时添加或去除等优势,是一种有前景并可大规模生产生物酶产品的工具。 展开更多

关键词 大肠埃希氏菌 光控基因表达系统 光敏蛋白 多菌灵水解酶 降解

在线阅读 下载PDF 职称材料

双系统协同进化的基因表达式编程及其在函数发现中的应用 被引量：3

11

作者 王超学 吴书玲 张婧菁 《计算机工程与科学》 CSCD 北大核心 2016年第11期2314-2320,共7页

受人类进化过程的启发,提出了一种双系统协同进化的基因表达式编程算法DSCE-GEP。DSCE-GEP由自然进化系统和人工干预系统组成。人工干预系统包括个体干预和种群干预。个体干预是依据基因库对种群中的个体进行去劣和增优操作,旨在改善种... 受人类进化过程的启发,提出了一种双系统协同进化的基因表达式编程算法DSCE-GEP。DSCE-GEP由自然进化系统和人工干预系统组成。人工干预系统包括个体干预和种群干预。个体干预是依据基因库对种群中的个体进行去劣和增优操作,旨在改善种群中个体的质量;种群干预通过引入随机和镜像个体来提高种群的多样性和全局寻优能力。与权威文献中改进的GEP关于函数发现问题的大量对比实验表明,本文算法在收敛速度、求解质量方面优于对比算法,具有明显的竞争力。 展开更多

关键词 双系统协同进化基因表达式编程 基因库 人工干预系统 函数发现问题

在线阅读 下载PDF 职称材料

反义RNA基因表达调控系统

12

作者 贾洪涛 《生物学教学》 北大核心 2003年第7期1-3,共3页

本文概述了原核生物和真核生物反义RNA的研究进展,介绍了细胞内天然反义RNA基因表达调控系统及其可能的调控机制。

关键词 反义RNA 基因表达调控系统 原核生物 真核生物 反义基因

在线阅读 下载PDF 职称材料

基于Tet-On系统构建Alb启动子调控猪uPA转基因表达的慢病毒载体 被引量：2

13

作者 刘宇 陈恒伟 +3 位作者 温悦婷 贾俊双 林晓琳 肖东 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第5期23-28,共6页

目的应用Tet-On基因表达调控系统构建Alb启动子调控小型猪uPA (pig urokinase-type plasminogen activator,puPA)基因表达的慢病毒载体pLVX-Alb-TetOne-TRE-puPA-T2A-CopGFP(pLATTPUTG)。方法首先将pAlb-Cre-GH/BS作为模板,PCR扩增目的... 目的应用Tet-On基因表达调控系统构建Alb启动子调控小型猪uPA (pig urokinase-type plasminogen activator,puPA)基因表达的慢病毒载体pLVX-Alb-TetOne-TRE-puPA-T2A-CopGFP(pLATTPUTG)。方法首先将pAlb-Cre-GH/BS作为模板,PCR扩增目的基因Alb-enhancer/promoter,In-Fusion克隆至Xho I/Xba I双酶切的pLVX-TetOne中,获得Alb启动子替换pLVX-TetOne原有的PGK启动子的质粒pLVX-Alb-TetOne;接着以pCD823 A-1为模板,PCR扩增T2A-CopGFP,In-Fusion克隆至BamH I/Age I酶切的pLVX-Alb-TetOne中,获得pLVX-Alb-TetOne-TRE-T2A-CopGFP(pLATTTG);最后以H8803为模板,PCR扩增puPA(3′端含Flag标签),In-Fusion克隆至pLATTTG中,最终获得慢病毒载体pLVX-Alb-TetOne-TRE-puPA-T2A-CopGFP (pLATTPUTG);所构建的质粒均经酶切和测序鉴定。pLATTPUTG瞬转293T细胞,转染24 h后倒置荧光显微镜检测绿色荧光;随后六孔板内加入强力霉素(Dox),48 h后倒置荧光显微镜下检测CopGFP表达(包括未加Dox的孔),接着收集细胞以抽提总RNA和总蛋白,以用于qRT-PCR检测puPA和CopGFP表达及Western blot检测Flag表达。结果酶切鉴定和测序证实成功构建了慢病毒载体pLATTPUTG。pLATTPUTG转染293T细胞,24 h后倒置荧光显微镜下未见绿色荧光,而加入Dox 48 h后几乎所有细胞均发强的绿色荧光,而不加Dox的孔内仍然未见绿色荧光;加Dox的孔内细胞上puPA、CopGFP和Flag表达水平均显著升高,而不加Dox的孔内细胞上检测到上述基因极低表达;以上数据提示,应用该Tet-On基因表达调控系统实现了puPA基因在293T细胞上可诱导性表达。结论成功基于Tet-On基因表达调控系统构建Alb启动子调控puPA转基因表达的慢病毒载体pLATTPUTG,这为相关后续研究奠定了坚实基础。 展开更多

关键词 Alb启动子 小型猪uPA copGFP Tet-On基因表达调控系统 慢病毒载体

在线阅读 下载PDF 职称材料

基于核糖开关的新型基因表达调控系统的应用 被引量：1

14

作者 熊莹喆 曹苑青 +1 位作者 肖玲慧 李招发 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期41-46,共6页

核糖开关是能对细胞环境的改变做出反应的顺式作用元件,通过改变自身的构象实现对基因表达的调控。基于核糖开关调控方式简洁,无需蛋白质参与,响应迅速,且自身片段小,结构简单,易于设计和改造等特性使其在生物医学领域体现出诸多应用优... 核糖开关是能对细胞环境的改变做出反应的顺式作用元件,通过改变自身的构象实现对基因表达的调控。基于核糖开关调控方式简洁,无需蛋白质参与,响应迅速,且自身片段小,结构简单,易于设计和改造等特性使其在生物医学领域体现出诸多应用优势。对核糖开关的结构,调节机理以及这种新型基因表达调控系统在基因治疗、抗生素新靶点的开发、病毒疫苗的安全控制、新型核糖选择器和生物体内传感器的应用进行了综述,旨为启示我国核糖开关的新型应用。 展开更多

关键词 核糖开关 基因表达调控系统 机理

在线阅读 下载PDF 职称材料

Tet调控STGC3基因表达CNE2细胞系的建立及其功能初步研究 被引量：8

15

作者 邓敏 贺修胜 +3 位作者 罗桥 赵帅 曾超 李艳兰 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第1期39-44,共6页

利用Tet-on调控系统,建立受强力霉素诱导STGC3基因表达的CNE2细胞系,为进一步研究STGC3的功能提供了一个理想的实验平台.先后将调控质粒pTet-on和反应质粒pTRE-STGC3转染入CNE2细胞,并用G418和潮霉素分别进行两轮筛选,运用RT-PCR选择对... 利用Tet-on调控系统,建立受强力霉素诱导STGC3基因表达的CNE2细胞系,为进一步研究STGC3的功能提供了一个理想的实验平台.先后将调控质粒pTet-on和反应质粒pTRE-STGC3转染入CNE2细胞,并用G418和潮霉素分别进行两轮筛选,运用RT-PCR选择对强力霉素诱导敏感的细胞克隆.用不同浓度强力霉素诱导CNE2/Tet/pTRE-STGC3细胞,RT-PCR检测STGC3的表达,确定强力霉素的最佳诱导浓度.采用此浓度的强力霉素分别诱导CNE2、CNE2/Tet/pTRE、CNE2/Tet/pTRE-STGC3三组细胞,测定细胞的生长曲线、克隆形成率和细胞周期分布.诱导STGC3基因高表达,CNE2细胞增殖速度显著减慢(P<0.05),克隆形成能力显著降低(P<0.01);流式细胞仪检测结果显示,瘤细胞群体中处于G0/G1期细胞数增加,细胞阻滞于G0/G1期.Tet调控STGC3基因表达CNE2细胞系的成功建立,为进一步研究STGC3基因的功能提供一个理想的细胞模型. 展开更多

关键词 鼻咽癌 STGC3基因 Tet-on基因表达系统

在线阅读 下载PDF 职称材料

巴斯德毕赤酵母表达系统研究进展 被引量：10

16

作者 王黎明 王琦 梅汝鸿 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2004年第2期42-45,共4页

巴斯德毕赤酵母外源基因表达系统是近年来发展的一种优秀的真核表达系统 ,与传统的大肠杆菌和酿酒酵母表达体系相比 ,其具有的诸多优势使之研究价值及应用价值不断体现。综述了其在生物学特性、表达载体、基因整合、外源蛋白的分泌、诱... 巴斯德毕赤酵母外源基因表达系统是近年来发展的一种优秀的真核表达系统 ,与传统的大肠杆菌和酿酒酵母表达体系相比 ,其具有的诸多优势使之研究价值及应用价值不断体现。综述了其在生物学特性、表达载体、基因整合、外源蛋白的分泌、诱导表达及发酵等方面的基础研究及新近研究进展。 展开更多

关键词 巴斯德毕赤酵母 基因表达系统 外源蛋白 生物学特性 表达载体 基因整合 真核表达系统

在线阅读 下载PDF 职称材料

Tet调控的脑相对特异性新基因LRRC4表达细胞系的构建 被引量：1

17

作者 张秋红 王莉莉 +4 位作者 彭聪 曹利 王洁如 李小玲 李桂源 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第4期325-330,共6页

LRRC4是一个在脑相对特异性表达的富亮氨酸重复超家族新成员,在神经胶质瘤表达明显下调或缺失且具有抑制脑胶质瘤细胞生长的潜能. 利用Tet-on基因表达系统,经过两轮转染,先后将调控质粒pTet-on和表达质粒pTRE-2hyg-LRRC4转染U251细胞系... LRRC4是一个在脑相对特异性表达的富亮氨酸重复超家族新成员,在神经胶质瘤表达明显下调或缺失且具有抑制脑胶质瘤细胞生长的潜能. 利用Tet-on基因表达系统,经过两轮转染,先后将调控质粒pTet-on和表达质粒pTRE-2hyg-LRRC4转染U251细胞系,分别用G418和潮霉素Hygromycin进行两次筛选. 在第一轮挑取的80个克隆中,利用pTRE-2hyg-luciferase报告基因进行最佳的低背景高表达的pTet-on细胞克隆筛选,在通过量效关系和动力学检测筛选的最佳克隆基础上,再进行pTRE-2hyg-LRRC4的转染,并通过RT-PCR和RNA印迹检测,成功获得了两个具有良好诱导性Tet调控的LRRC4双稳定表达细胞系,为进一步阐明LRRC4在脑胶质瘤发生发展中的作用,提供有利的研究基础和理想的实验平台. 展开更多

关键词 LRRC4 Tet-on基因表达系统 DOXYCYCLINE

在线阅读 下载PDF 职称材料

Tet调控CYP2E1基因表达细胞系的代谢能力分析 被引量：1

18

作者 侯德富 万恂恂 +1 位作者 贺智敏 陈主初 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期163-168,共6页

应用Tet-On基因表达系统,调控CYP2E1基因在NIH3T3细胞中的表达水平,探讨CYP2E1在化学致癌物二甲基亚硝胺(N-nitrosodimethylamine,NDMA)代谢中的作用.先后将Tet-on基因表达系统的调控质粒pRevTet-on和反应质粒pRevTRE-2E1转染NIH3T3细胞... 应用Tet-On基因表达系统,调控CYP2E1基因在NIH3T3细胞中的表达水平,探讨CYP2E1在化学致癌物二甲基亚硝胺(N-nitrosodimethylamine,NDMA)代谢中的作用.先后将Tet-on基因表达系统的调控质粒pRevTet-on和反应质粒pRevTRE-2E1转染NIH3T3细胞,分别用G418和潮霉素筛选,并通过RT-PCR和Western印迹检测,成功获得了3个具有良好诱导性Tet调控的CYP2E1基因表达细胞系(Tet/3T3-2E1).应用不同浓度强力霉素(doxycycline,Dox)处理Tet/3T3-2E1细胞诱导CYP2E1表达,HPLC分析细胞对CYP2E1特异性药物探针氯唑沙腙的原位代谢能力及MTT法分析CYP2E1介导的NDMA细胞毒性作用.结果显示,Tet/3T3-2E1细胞CYP2E1的表达及其代谢能力有明显的Dox浓度依赖性,而且NDMA对Dox诱导组细胞有明显浓度依赖性细胞毒性作用,其IC50值为12.06μmol/L,无Dox诱导组未见明显的NDMA细胞毒性作用.该细胞模型的成功建立对于开展与CYP2E1相关的毒物、致癌物代谢研究,筛选抗毒物、抗癌物等具有重要价值. 展开更多

关键词 CYP 2E1 Tet—on基因表达系统 二甲基亚硝胺 强力霉素

在线阅读 下载PDF 职称材料

巴斯德毕赤酵母表达系统研究进展 被引量：1

19

作者 魏凡华 曹瑞兵 +1 位作者 吴润 陈溥言 《农业科学研究》 2007年第1期68-71,共4页

巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统是基因工程研究中广泛使用的真核表达系统,对Pichia pastoris基因结构、载体元件以及影响外源基因表达的因素等进行了较为全面的综述.

关键词 巴斯德毕赤酵母 基因表达系统 研究进展

在线阅读 下载PDF 职称材料

Tet-on调控TAp63γ基因表达EC9706细胞系的建立及对细胞增殖的影响

20

作者 范天黎 侯桂琴 +4 位作者 许培荣 袁保梅 杨静 刘兰琦 杨观瑞 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2007年第2期286-289,共4页

目的:利用Tet-on基因表达调控系统建立由强力霉素(Dox)诱导TAp63γ基因表达的EC9706细胞系,为进一步研究TAp63γ基因的功能奠定基础。方法:将调控质粒pTet-on转入EC9706细胞,经G418筛选后的细胞再次转染反应质粒pTRE-TAp63γ-HA,再用潮... 目的:利用Tet-on基因表达调控系统建立由强力霉素(Dox)诱导TAp63γ基因表达的EC9706细胞系,为进一步研究TAp63γ基因的功能奠定基础。方法:将调控质粒pTet-on转入EC9706细胞,经G418筛选后的细胞再次转染反应质粒pTRE-TAp63γ-HA,再用潮霉素筛选出阳性细胞克隆,RT-PCR法选择对Dox敏感的细胞克隆。最后用不同浓度Dox诱导,Westernblot法确定Dox的最佳诱导浓度。采用此浓度的Dox分别诱导EC9706、EC9706/Tet/pTRE、EC9706/Tet/pTRE-TAp63γ3组细胞,细胞增殖分析试剂盒(CCK-8试剂盒)检测细胞生长抑制率。结果:Dox浓度为3mg/L时可诱导TAp63γ基因高表达,EC9706/Tet/pTRE-TAp63γ细胞的生长抑制率均高于EC9706和EC9706/Tet/pTRE细胞(P<0.05或0.01)。结论:成功构建了Tet-on调控TAp63γ基因表达的EC9706细胞系,为进一步研究食管鳞癌细胞内P63蛋白的生物学行为提供了一个理想的研究平台。TAp63γ基因表达可使EC9706细胞增殖受到抑制。 展开更多

关键词 Tet—on 基因表达系统 TAp63γ基因 食管癌 EC9706细胞

在线阅读 下载PDF 职称材料