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维拉帕米对培养的人视网膜色素上皮细胞增殖和DNA合成的影响 被引量：3
1
作者 余建洪 赵刚平 邢怡桥 《国际眼科杂志》 CAS 2005年第2期232-234,共3页
目的:观察钙通道阻滞剂维拉帕米(verapamil)对培养的人视网膜色素上皮细胞(human retinalpig-ment epithelium,hRPE)增殖和DNA合成的影响。方法:含不同浓度维拉帕米的条件培养液作用于培养的hRPE细胞后,利用细胞计数和MTT比色试验观察... 目的:观察钙通道阻滞剂维拉帕米(verapamil)对培养的人视网膜色素上皮细胞(human retinalpig-ment epithelium,hRPE)增殖和DNA合成的影响。方法:含不同浓度维拉帕米的条件培养液作用于培养的hRPE细胞后,利用细胞计数和MTT比色试验观察维拉帕米对培养的hRPE细胞的作用,同时采用氚标胸腺嘧啶核苷(3H-thymidine,3H-TdR)掺入试验测定维拉帕米对培养的hRPE细胞DNA合成的影响。结果:维拉帕米在实验所设的浓度范围均能抑制培养的hRPE细胞的增殖和DNA合成,在浓度为10,50,100,200μm ol/L时其细胞增殖抑制率分别为:26.72%,37.25%,58.21%,79.54%(P<0.01);cpm值分别为对照组的0.81,0.61,0.52,0.44倍(P<0.01)。结论:维拉帕米对培养的hRPE细胞增殖和DNA合成具有抑制作用。 展开更多
关键词 维拉帕米 上皮细胞增殖 培养的人视网膜色素上皮细胞 hRPE细胞 细胞DNA合成 钙通道阻滞剂 胸腺嘧啶核苷 条件培养液 MTT比色 增殖抑制率 mol/L 不同浓度 试验观察 细胞计数 浓度范围 抑制作用 对照组
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高浓度葡萄糖对培养的人视网膜色素上皮细胞细胞表面黏附分子-1的影响 被引量：11
2
作者 韩小霞 惠延年 +3 位作者 宋虎平 王海涛 张晓光 刘百军 《国际眼科杂志》 CAS 2006年第2期317-320,共4页
目的:研究高浓度葡萄糖对体外培养人视网膜色素上皮(RPE)细胞细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响。方法:用免疫荧光法检测5.6mmol/L和30.0mmol/L葡萄糖作用1,2,3d后hRPE细胞表面ICAM-1表达量,MTT方法检测两种浓度葡萄糖作用下48hhRPE... 目的:研究高浓度葡萄糖对体外培养人视网膜色素上皮(RPE)细胞细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响。方法:用免疫荧光法检测5.6mmol/L和30.0mmol/L葡萄糖作用1,2,3d后hRPE细胞表面ICAM-1表达量,MTT方法检测两种浓度葡萄糖作用下48hhRPE表面黏附白细胞的数量。结果:30.0mmol/L葡萄糖作用1,2,3d后hRPE细胞表面荧光着色密度分别为5.6mmol/L葡萄糖作用下荧光着色的2.4,3.8,4.0倍。30.0mmol/L葡萄糖作用48h后hRPE细胞表面黏附的白细胞数量是5.6mmol/L葡萄糖组的2.34倍,有统计学显著性差异(P<0.05)。结论:高糖可以促进体外培养hRPE细胞的ICAM-1表达,提示RPE细胞在高糖作用下可能参与了糖尿病视网膜病变的早期病理反应。 展开更多
关键词 人视网膜色素上皮细胞 高糖 细胞间黏 附分子-1
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曲安奈德对培养的人视网膜色素上皮细胞的毒性作用 被引量：3
3
作者 孙二丹 庞利民 +3 位作者 庞慧民 张小猛 张天资 李曼丽 《眼科新进展》 CAS 2005年第5期425-427,共3页
目的探讨曲安奈德(triamcinolone acetonide,TA)对视网膜色素上皮细胞可能潜在的毒性作用。方法质量浓度0mg·L-1、10mg·L-1、30mg·L-1、300mg·L-1TA分别作用ARPE19细胞24h和72h后通过TUNEL和电镜观察2种方法从形态... 目的探讨曲安奈德(triamcinolone acetonide,TA)对视网膜色素上皮细胞可能潜在的毒性作用。方法质量浓度0mg·L-1、10mg·L-1、30mg·L-1、300mg·L-1TA分别作用ARPE19细胞24h和72h后通过TUNEL和电镜观察2种方法从形态和功能方面观察TA对ARPE19细胞生长的影响。结果(1)TUNEL法:质量浓度10mg·L-1TA不影响ARPE19细胞的生长,但是随着质量浓度增大,细胞凋亡程度逐渐增强(t=2.921,P<0.01),随着时间延长,ARPE19细胞的凋亡指数逐渐增大(t=2.306,P<0.01);(2)电镜:质量浓度10mg·L-1TA作用后ARPE19细胞状态良好,但是随着质量浓度增加,细胞走向凋亡的形态越明显,微绒毛消失,核染色质边集,凋亡小体形成。结论一定浓度的TA能够诱导视网膜色素上皮细胞的凋亡,而且这种凋亡效应呈浓度和时间依赖关系。因此,TA对视网膜色素上皮细胞可能有潜在毒性。 展开更多
关键词 视网膜色素上皮细胞 电镜 曲安奈德 TUNEL 细胞凋亡
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苏拉明对体外培养的人视网膜色素上皮细胞增殖的影响 被引量：3
4
作者 宋秀胜 邢怡桥 +2 位作者 余建洪 彭坤 艾明 《眼科新进展》 CAS 2003年第4期248-250,共3页
目的 观察苏拉明(suramin)对体外培养的人视网膜色素上皮细胞(retinalpigment epithelial cells)生长、增殖的影响。方法 以300mg·L^(-1)苏拉明作用于培养的视网膜色素上皮细胞,于不同的时间点行细胞计数,绘制生长曲线,台盼蓝染色... 目的 观察苏拉明(suramin)对体外培养的人视网膜色素上皮细胞(retinalpigment epithelial cells)生长、增殖的影响。方法 以300mg·L^(-1)苏拉明作用于培养的视网膜色素上皮细胞,于不同的时间点行细胞计数,绘制生长曲线,台盼蓝染色判定细胞的活性;将不同浓度的苏拉明(0、100、200、300、400mg·L^(-1))加入RPE细胞培养液,72h后用四甲基唑盐(MTT)比色法测吸光值A,并计算不同浓度条件下的细胞增殖抑制率;流式细胞技术检测细胞周期变化。结果 苏拉明在所设浓度内均抑制RPE细胞增殖,并存在时间-效应及剂量-效应关系,最大增殖抑制率约78％,72h时IC_(50)为272mg·L^(-1)。FCM示suramin使G_2/M期细胞增加了14.2％。结论 苏拉明能抑制体外培养的人视网膜色素上皮细胞增殖,可作为防治增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)的候选药物作进一步研究。 展开更多
关键词 苏拉明 视网膜色素上皮细胞 生长因子 增生性玻璃体视网膜病变
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Rac1在缺氧条件下培养的人视网膜色素上皮细胞的表达 被引量：2
5
作者 郝晓凤 惠延年 +5 位作者 王雨生 张鹏 谢晓繁 刘晓娟 赵炜 朱洁 《眼科新进展》 CAS 2007年第5期333-336,共4页
目的观察Rac1在缺氧条件下培养的视网膜色素上皮(retinal pigment epitheli-um,RPE)细胞的表达,以探讨其在脉络膜新生血管形成中可能的作用。方法将人RPE细胞在含有200μmol·L-1CoCl2的培养液内分别培养0.5h、1h、2h、4h、8h、12h... 目的观察Rac1在缺氧条件下培养的视网膜色素上皮(retinal pigment epitheli-um,RPE)细胞的表达,以探讨其在脉络膜新生血管形成中可能的作用。方法将人RPE细胞在含有200μmol·L-1CoCl2的培养液内分别培养0.5h、1h、2h、4h、8h、12h和24h。运用免疫细胞化学方法及Western-blot技术检测缺氧条件下RPE细胞Rac1的表达及时相变化。常氧状态下培养的RPE细胞作为对照。结果缺氧条件下RPE细胞早期即有Rac1的表达,主要位于胞浆,随着缺氧时间的延长,阳性表达量上调,在8h达到高峰,12h开始下降。与常氧组对照,差异有统计学意义(P<0.05)。Western-blot分析结果与免疫细胞化学染色结果一致。结论Rac1在缺氧早期的RPE细胞中呈瞬时高表达,可能与脉络膜新生血管形成有关。 展开更多
关键词 RAC1 视网膜色素上皮细胞 缺氧 免疫细胞化学 Western-blot技术
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缺氧对体外培养的人视网膜色素上皮细胞热休克蛋白47表达的影响 被引量：2
6
作者 曾爱萍 曾水清 +1 位作者 吕明良 程扬 《国际眼科杂志》 CAS 2006年第6期1297-1299,共3页
目的:探讨缺氧对体外培养的人视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelium,RPE)细胞热休克蛋白47(heatshockprotein47,HSP47)表达的影响。方法:培养的人RPE细胞分为两组:缺氧组使用化学缺氧诱导剂CoCl2模拟RPE细胞缺氧环境来培养人RPE细胞... 目的:探讨缺氧对体外培养的人视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelium,RPE)细胞热休克蛋白47(heatshockprotein47,HSP47)表达的影响。方法:培养的人RPE细胞分为两组:缺氧组使用化学缺氧诱导剂CoCl2模拟RPE细胞缺氧环境来培养人RPE细胞,对照组置入正常环境中培养。采用半定量RT-PCR检测人RPE细胞中HSP47mRNA的表达,Westernblot蛋白印迹分析检测人RPE细胞中蛋白水平。结果:缺氧组AHSP47/Aβ-actin比值为1.46±0.15与对照组比值0.94±0.13比较,差异有显著意义(P<0.05)。同时缺氧组HSP47蛋白含量平均A值为728.03±38.15显著高于正常对照组平均A值571.47±26.95,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HSP47在缺氧状态下异常高表达。 展开更多
关键词 热休克蛋白47 人视网膜色素上皮细胞 缺氧
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舒拉明对培养的人视网膜色素上皮细胞移行的影响 被引量：1
7
作者 康军 惠延年 +1 位作者 韩泉洪 崔志利 《山西医科大学学报》 CAS 2001年第2期117-119,共3页
目的　观察舒拉明 (suramin)对培养的人视网膜色素上皮细胞 (retinalpigmentepithelium ,RPE)移行的影响。 方法　在体外培养的RPE细胞的损伤模型中 ,加入不同浓度的舒拉明 (1 5 ,15 ,15 0mg/L) ,观察 12h、2 4h和 48h 3个时间点RPE细... 目的　观察舒拉明 (suramin)对培养的人视网膜色素上皮细胞 (retinalpigmentepithelium ,RPE)移行的影响。 方法　在体外培养的RPE细胞的损伤模型中 ,加入不同浓度的舒拉明 (1 5 ,15 ,15 0mg/L) ,观察 12h、2 4h和 48h 3个时间点RPE细胞移行率。结果　无血清培养液中的RPE细胞有较弱的移行能力 ,含有 10 0ml/L新生小牛血清的培养液可以显著刺激RPE细胞移行 (P <0 0 1) ,3种浓度舒拉明可以显著抑制 10 0ml/L血清条件下的RPE细胞的移行 ,12h移行率分别为对照组的 82 %、74%和 46 % ,2 4h为 92 %、83%和 5 2 % ,48h为 92 % ,84%和 5 5 % ,这种作用呈剂量依赖性。结论　血清中的某些成分可以刺激RPE细胞的移行 ,舒拉明可以抑制血清的这种作用 ,为临床预防和治疗增殖性玻璃体视网膜病变 (proliferativevit reoretinopathy ,PVR)提供了新的用药思路。 展开更多
关键词 细胞运动 舒拉明 人视网膜色素上皮细胞移行 细胞培养
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缺氧对培养的人视网膜色素上皮细胞中NOX4表达的影响 被引量：1
8
作者 李静 杨静 康前雁 《国际眼科杂志》 CAS 2017年第1期34-37,共4页
目的:观察缺氧对培养的人视网膜色素上皮细胞中NADPH氧化酶4(NOX4)表达的影响,探讨NADPH氧化酶与脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)形成的关系。方法:人视网膜色素上皮细胞(human retinal pigment epithelium,h RPE)体... 目的:观察缺氧对培养的人视网膜色素上皮细胞中NADPH氧化酶4(NOX4)表达的影响,探讨NADPH氧化酶与脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)形成的关系。方法:人视网膜色素上皮细胞(human retinal pigment epithelium,h RPE)体外常规培养和传代,取3~6代细胞用于实验。将培养的人RPE细胞分为常氧对照组和缺氧处理组,常氧对照组用DMEM完全培养液培养细胞,缺氧处理组培养液中含有终质量浓度为200μmol/L CoC l2,分别观察缺氧后4、6、8、12、24h后终止。采用细胞免疫荧光染色技术及Western-blot方法鉴定人RPE细胞中NOX4的表达以及缺氧不同时间对NOX4表达的影响。结果:常氧对照组及缺氧处理组人RPE细胞生长良好,形态呈梭形。缺氧处理组细胞的形态及排列方式与空白对照组相比无明显改变。免疫荧光染色显示,常氧对照组RPE细胞内有少量的NOX4表达,细胞质呈绿色荧光,细胞核呈蓝色荧光;缺氧处理后NOX4的表达量增加,一直持续到缺氧后期;Western-bolt显示缺氧条件下人RPE细胞中NOX4的表达明显增加,与缺氧时间呈正比,与常氧对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);结论:NADPH氧化酶在人RPE细胞中有表达,缺氧条件下NOX4的表达显著提高,且与时间呈正比。提示NADPH氧化酶可能在脉络膜新生血管形成中发挥重要调节作用。 展开更多
关键词 人视网膜色素上皮细胞 NADPH氧化酶4 脉络膜新生血管
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贝伐单抗对体外培养的人视网膜色素上皮细胞增殖及纤维化的影响
9
作者 李婵 任伟 《国际眼科杂志》 CAS 2016年第8期1449-1452,共4页
目的:观察贝伐单抗对体外培养的人视网膜色素上皮细胞ARPE-19增殖及钙黏连蛋白(E-cadherin)和纤维连接蛋白(fibronectin)表达变化的作用,探讨贝伐单抗对ARPE-19增殖及纤维化的影响。方法:用不同浓度(0、0.625、1.25、2.5、5.0mg/mL)的... 目的:观察贝伐单抗对体外培养的人视网膜色素上皮细胞ARPE-19增殖及钙黏连蛋白(E-cadherin)和纤维连接蛋白(fibronectin)表达变化的作用,探讨贝伐单抗对ARPE-19增殖及纤维化的影响。方法:用不同浓度(0、0.625、1.25、2.5、5.0mg/mL)的贝伐单抗干预体外培养人视网膜色素上皮细胞ARPE-19,采用CCK-8法分别于24、48、72h检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞周期;应用免疫蛋白印迹法(Western blotting)及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测ARPE-19中E-cadherin和fibronectin的蛋白及mRNA的表达变化。结果:浓度为2.5、5.0mg/mL贝伐单抗能有效抑制ARPE-19细胞的增殖及细胞周期,差异有统计学意义(P<0.05)。2.5、5.0mg/mL贝伐单抗能抑制E-cadherin基因,促进fibronectin基因的转录及表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:高浓度的贝伐单抗能够抑制ARPE-19细胞的增殖,下调纤维化相关因子E-cadherin,同时上调fibronectin的表达,提示高浓度的贝伐单抗可以引起ARPE-19细胞纤维化。 展开更多
关键词 贝伐单抗 人视网膜色素上皮细胞 增殖 纤维化
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苏拉明对培养的人视网膜色素上皮细胞DNA合成的影响
10
作者 宋秀胜 邢怡桥 +3 位作者 王红莉 贺涛 项奕 杨安怀 《湖北民族学院学报（医学版）》 2003年第3期11-13,共3页
目的　探讨苏拉明 (suramin)对体外培养的人视网膜色素上皮细胞 (retinalpigmentepithelialcell,RPE)DNA合成的影响 ,为防治增殖性玻璃体视网膜病变 (proliferativevitreoretinopathy ,PVR)提供理论依据。 方法　将不同浓度的苏拉明加... 目的　探讨苏拉明 (suramin)对体外培养的人视网膜色素上皮细胞 (retinalpigmentepithelialcell,RPE)DNA合成的影响 ,为防治增殖性玻璃体视网膜病变 (proliferativevitreoretinopathy ,PVR)提供理论依据。 方法　将不同浓度的苏拉明加入培养的人RPE细胞 ,分别于 4 8h、96h后用氚 -标脱氧胸苷 (tritium -labelledthymidinedeoxyri bose,3 H -TdR)掺入法测定DNA合成抑制率 ;以 30 0mg/L苏拉明作用于RPE细胞 ,用流式细胞仪 (flowcytome try ,FCM)分析RPE细胞周期。 结果　苏拉明在 10 0～ 4 0 0mg/L范围内对培养的人RPE细胞DNA合成有明显的抑制作用 ,且具有剂量 -效应及时间 -效应关系 ;FCM显示苏拉明将RPE细胞阻抑于G2 /M期。结论　苏拉明能抑制RPE细胞DNA合成 ,可作为防治PVR的药物进一步研究。 展开更多
关键词 苏拉明 视网膜色素上皮细胞 DNA合成 增殖性玻璃体视网膜病变 防治
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褪黑素对体外培养的人视网膜色素上皮细胞增殖的影响 被引量：4
11
作者 沙兰施.普拉塔 项奕 +2 位作者 邢怡桥 梅海峰 晏颖 《眼科新进展》 CAS 2005年第3期223-225,共3页
目的观察褪黑素对体外培养的人视网膜色素上皮细胞生长、增殖的影响,寻找药物以防治增殖性玻璃体视网膜病变。方法分别将不同浓度的褪黑素(0,125ng·L-1,250ng·L-1,500ng·L-1)加入体外培养的视网膜色素上皮细胞培养液,72... 目的观察褪黑素对体外培养的人视网膜色素上皮细胞生长、增殖的影响,寻找药物以防治增殖性玻璃体视网膜病变。方法分别将不同浓度的褪黑素(0,125ng·L-1,250ng·L-1,500ng·L-1)加入体外培养的视网膜色素上皮细胞培养液,72h后用四甲基唑盐(MTT)比色法在自动酶标测定仪测540nm处的吸光值A,并计算出不同浓度条件下的细胞增殖抑制率。结果褪黑素在不同浓度下抑制视网膜色素上皮细胞增殖,并存在剂量-效应关系,实验组125ng·L-1和500ng·L-1组与对照组比较有显著性差异(P<0.001),但实验组250ng·L-1组与对照组之间的差异无显著性。结论褪黑素能抑制体外培养的人视网膜色素上皮细胞增殖,可作为防治增生性玻璃体视网膜疾病的侯选药物作进一步研究。 展开更多
关键词 褪黑素 培养 人视网膜色素上皮细胞 增殖
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人参皂苷Rg1对缺氧诱导所致人视网膜色素上皮细胞损伤的抑制作用及机制 被引量：1
12
作者 白玫 苗得雨 吴忧 《山东医药》 CAS 2024年第34期29-33,共5页
目的探究人参皂苷Rg1(GRg1)对缺氧诱导所致人视网膜色素上皮(ARPE)细胞损伤的作用及机制。方法体外培养ARPE-19细胞,将其随机分为对照组、模型组及GRg1高、中、低剂量组与缺氧诱导因子1α(HIF-1α)抑制剂组。除对照组外,其余组采取氯化... 目的探究人参皂苷Rg1(GRg1)对缺氧诱导所致人视网膜色素上皮(ARPE)细胞损伤的作用及机制。方法体外培养ARPE-19细胞,将其随机分为对照组、模型组及GRg1高、中、低剂量组与缺氧诱导因子1α(HIF-1α)抑制剂组。除对照组外,其余组采取氯化钴诱导ARPE-19细胞构建缺氧模型,通过CCK-8法、TUNEL法测定各组不同时间点细胞活性及凋亡情况,DCFH-DA荧光探针对各组活性氧(ROS)水平,经由RT-qPCR、Western blotting法测定各组细胞内HIF-1α、BDNF、PACAP38 mRNA与蛋白表达。结果与对照组相比,各组给药0、12、24 h时ARPE-19细胞活性均低、凋亡率高(P均<0.05);GRg1高剂量组给药12、24、48 h时ARPE-19细胞活性均高于模型组、GRg1低剂量组(P均<0.05),细胞凋亡率均低于模型组、GRg1低剂量组(P均<0.05);GRg1高剂量组给药24、48 h时细胞活性均高于GRg1中剂量组(P均<0.05)。与对照组相比,各组给药48 h时ARPE-19细胞ROS、HIF-1αmRNA及蛋白表达均高(P均<0.05);GRg1高剂量组ARPE-19细胞ROSHIF-1αmRNA及蛋白表达均低于模型组、GRg1低剂量组(P均<0.05);GRg1高剂量组ARPE-19细胞BDNF、PACAP38 mRNA及蛋白表达均高于模型组、GRg1低剂量组(P均<0.05);GRg1高剂量组与HIF-1α抑制剂组给药不同时间点细胞活性与凋亡率、细胞ROS、HIF-1α、BDNF、PACAP38表达比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论GRg1能减轻缺氧诱导所致ARPE-19细胞损伤,其机制可能与抑制细胞ROS、HIF-1α表达,上调BDNF、PACAP38表达有关。 展开更多
关键词 视网膜色素上皮细胞 缺氧 人参皂苷RG1 脑源性神经营养因子 垂体腺苷酸环化酶激活多肽38
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DRP1调控线粒体稳态对人视网膜色素上皮细胞上皮-间充质转化的影响
13
作者 汤中 唐云骢 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2024年第6期443-448,共6页
目的探讨线粒体动力相关蛋白(DRP1)对人视网膜色素上皮(ARPE-19)细胞上皮-间充质转化(EMT)进程的影响。方法构建H_(2)O_(2)干预ARPE-19细胞模型,将ARPE-19细胞分为3组,NG组:采用含体积分数10%胎牛血清的DMEM/F12培养基培养细胞6 h;H_(2)... 目的探讨线粒体动力相关蛋白(DRP1)对人视网膜色素上皮(ARPE-19)细胞上皮-间充质转化(EMT)进程的影响。方法构建H_(2)O_(2)干预ARPE-19细胞模型,将ARPE-19细胞分为3组,NG组:采用含体积分数10%胎牛血清的DMEM/F12培养基培养细胞6 h;H_(2)O_(2)组:先采用650μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)干预细胞,此后培养方式及时间与NG组相同;H_(2)O_(2)+Mdivi-1组:先采用10μmol·L^(-1)Mdivi-1处理ARPE-19细胞2 h,再给予650μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)干预,此后培养方式及时间与NG组相同。Western blot检测各组细胞p-DRP-1/DRP1、E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波型蛋白(Vimintin)及紧密连接蛋白(ZO-1)表达水平;线粒体红色荧光探针检测各组细胞线粒体形态;线粒体超氧化物红色荧光探针检测各组细胞线粒体活性氧(ROS)水平;JC-1染色试剂盒检测各组细胞线粒体膜电位;免疫荧光检测各组细胞中ZO-1表达水平。结果H_(2)O_(2)组细胞p-DRP-1/DRP1蛋白表达比值高于NG组,H_(2)O_(2)+Mdivi-1组细胞p-DRP-1/DRP1蛋白表达比值低于H_(2)O_(2)组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。H_(2)O_(2)+Mdivi-1组细胞较H_(2)O_(2)组线粒体碎片化程度得到改善。H_(2)O_(2)组细胞线粒体ROS水平(4.42±0.29)与NG组(1.00±0.17)及H_(2)O_(2)+Mdivi-1组(2.15±0.18)比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。H_(2)O_(2)组细胞红/绿荧光强度比值(0.16±0.12)与NG组(1.00±0.09)及H_(2)O_(2)+Mdivi-1组(0.42±0.05)比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。H_(2)O_(2)组细胞上皮样标志物表达下降,间质样标志物表达上升,H_(2)O_(2)+Mdivi-1组细胞上皮样标志物表达上升,间质样标志物表达下降。各组细胞α-SMA、N-钙黏蛋白、E-钙黏蛋白、Vimintin及ZO-1相对表达量比较,H_(2)O_(2)组与NG组及H_(2)O_(2)+Mdivi-1组比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。ZO-1免疫荧光染色实验显示,H_(2)O_(2)+Mdivi-1组的细胞连接紧密程度优于H_(2)O_(2)组。结论DRP1可调控线粒体动态平衡,靶向DRP1可改善线粒体功能并抑制EMT进展,从而减轻H_(2)O_(2)诱导的RPE细胞功能障碍。 展开更多
关键词 线粒体动力相关蛋白 线粒体功能 人视网膜色素上皮细胞 上皮-间充质转化 年龄相关性黄斑变性
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LncRNA HAGLR靶向miR-625-5p对脂多糖诱导的视网膜色素上皮细胞凋亡和炎症因子表达的影响
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作者 李晶 曾卫娟 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2024年第3期178-182,共5页
目的 探讨长链非编码RNA HAGLR(LncRNA HAGLR)是否可通过靶向调控微小RNA-625-5p(miR-625-5p)表达而影响脂多糖(LPS)诱导的视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡、炎症因子表达,为揭示视网膜病变机制奠定实验基础。方法 将LPS诱导人视网膜色素... 目的 探讨长链非编码RNA HAGLR(LncRNA HAGLR)是否可通过靶向调控微小RNA-625-5p(miR-625-5p)表达而影响脂多糖(LPS)诱导的视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡、炎症因子表达,为揭示视网膜病变机制奠定实验基础。方法 将LPS诱导人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)设为LPS组,正常培养的ARPE-19细胞设为Con组。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测LncRNA HAGLR、miR-625-5p表达水平。根据转染物不同分为LPS+sh-NC组、LPS+sh-HAGLR组、LPS+miR-NC组、LPS+miR-625-5p组、LPS+sh-HAGLR+anti-miR-NC组、LPS+sh-HAGLR+anti-miR-625-5p组。采用流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA法检测白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平;验证LncRNA HAGLR、miR-625-5p靶向关系;Western blot检测活化的半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3(cleaved-Caspase 3)、cleaved-Caspase 9蛋白水平。结果 与Con组比较,LPS组LncRNA HAGLR表达水平升高,miR-625-5p表达水平降低(均为P<0.05),细胞凋亡率,cleaved-Caspase 3、cleaved-Caspase 9蛋白水平,IL-6、IL-1β水平均升高(均为P<0.05)。与LPS+sh-NC组比较,LPS+sh-HAGLR组细胞凋亡率,cleaved-Caspase 3、cleaved-Caspase 9蛋白水平,IL-6、IL-1β水平均降低(均为P<0.05);LncRNA HAGLR可负向调控miR-625-5p表达水平(P<0.05)。与LPS+miR-NC组比较,LPS+miR-625-5p组miR-625-5p表达水平升高,细胞凋亡率,cleaved-Caspase 3、cleaved-Caspase 9蛋白水平,IL-6、IL-1β水平均降低(均为P<0.05)。与LPS+sh-HAGLR+anti-miR-NC组比较,LPS+sh-HAGLR+anti-miR-625-5p组miR-625-5p表达水平降低,细胞凋亡率,cleaved-Caspase 3、cleaved-Caspase 9蛋白水平,IL-6、IL-1β水平均升高(均为P<0.05)。结论 干扰LncRNA HAGLR表达可通过靶向调控miR-625-5p表达抑制细胞凋亡、炎症因子表达,以减轻LPS诱导的ARPE-19细胞损伤。 展开更多
关键词 长链非编码RNA HAGLR 微小RNA-625-5p 脂多糖 视网膜色素上皮细胞 细胞凋亡 炎症
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姜黄素对人视网膜色素上皮细胞中基质金属蛋白酶、纤维粘连蛋白1表达的影响观察
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作者 杜颖华 王淑然 +1 位作者 滕达 梁小芳 《山东医药》 CAS 2024年第21期35-38,共4页
目的观察姜黄素对人视网膜色素上皮(RPE)细胞中基质金属蛋白酶(MMP)、纤维粘连蛋白1(FN1)表达的影响。方法将人RPE细胞分成2组,姜黄素组加入0.5×10^(-5)mol/L的姜黄素,对照组不加姜黄素,两组细胞继续孵育48 h后,采用实时荧光定量PC... 目的观察姜黄素对人视网膜色素上皮(RPE)细胞中基质金属蛋白酶(MMP)、纤维粘连蛋白1(FN1)表达的影响。方法将人RPE细胞分成2组,姜黄素组加入0.5×10^(-5)mol/L的姜黄素,对照组不加姜黄素,两组细胞继续孵育48 h后,采用实时荧光定量PCR法检测细胞中MMP1、MMP2、MMP3、MMP9、FN1 mRNA,采用Western blotting法检测细胞中MMP1、MMP2、MMP3、MMP9、FN1蛋白。结果姜黄素组细胞中MMP1、MMP2、MMP3、MMP9、FN1 mRNA相对表达量分别为0.41±0.14、5.02±0.22、1.09±0.21、0.47±0.28、2.50±0.21,对照组分别为5.10±0.38、6.43±0.15、0.27±0.19、1.82±0.12、6.83±0.18,两组相比,P均<0.05。姜黄素组细胞中MMP1、MMP2、MMP3、MMP9、FN1蛋白相对表达量分别为6155.33±124.01、6208.00±157.33、8126.33±235.78、3541.67±130.16、3684.33±90.22,对照组分别为16207.33±210.19、8053.33±61.98、2543.67±122.20、9477.33±108.68、8218.00±239.86,两组相比,P均<0.05。结论姜黄素可上调人RPE细胞中MMP1、MMP2、MMP9、FN1的表达,下调MMP3的表达。 展开更多
关键词 姜黄素 视网膜色素上皮细胞 基质金属蛋白酶 纤维粘连蛋白1 增殖性玻璃体视网膜病变 细胞外基质
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体外原代培养人视网膜色素上皮细胞(英文) 被引量：17
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作者 徐国兴 杨娟 +3 位作者 孙堂胜 胡建章 谢茂松 郭健 《国际眼科杂志》 CAS 2004年第1期12-15,共4页
目的:探讨建立体外原代培养人类视网膜色素上皮细胞(RPE)技术。为研究溶血磷脂酸(lysophos-phatidic acid, LPA)对培养的人类视网膜色素上皮细胞DNA合成与增殖的作用。方法:取自愿者贡献的意外事故成年眼球,用2.5g/L胰酶消化获取人RPE... 目的:探讨建立体外原代培养人类视网膜色素上皮细胞(RPE)技术。为研究溶血磷脂酸(lysophos-phatidic acid, LPA)对培养的人类视网膜色素上皮细胞DNA合成与增殖的作用。方法:取自愿者贡献的意外事故成年眼球,用2.5g/L胰酶消化获取人RPE细胞、150mL/L胎牛血清的DMEM培养液培养,细胞接近融合状态时进行传代培养。取自愿者贡献的眼球并游离其视网膜色素上皮细胞,用DMEM加100mL/L血清及MEM氨基酸和庆大霉素,进行细胞传代培养。用溶血磷脂酸、转移因子β2(TGF-β2)及LPA+TGF-β2进行视网膜色素上皮细胞增殖试验,用细胞染色法进行细胞计数,提取视网膜色素上皮细胞DNA,用Spectrophotometer进行DNA定量测定。结果:RPE原代细胞镜下为圆形,大小不一,内含较多的色素颗粒,胞核无法辨认。原代细胞培养贴壁后3d增殖速度明显加快,至4～5d即可基本融合,细胞浆内色素颗粒则随传代次数增多而逐渐减少。第3代培养的视网膜色素上皮细胞膜表面可见微绒毛,细胞质内细胞器丰富,线粒体量多,体积较小,内外膜分界清晰,嵴较短。色素颗粒散在分布于胞浆内,多数细胞质内数量较少呈高电子密度包含物。LPA对原代培养的视网膜色素上皮细胞增殖有促进作用。含有和/或缺乏10mL/L小牛血清的两种LPA(10μmol/L雪均明显刺激视网膜色素上皮细胞? 展开更多
关键词 体外原代培养 人视网膜色素上皮细胞 LPA 溶血磷脂酸 原代培养 细胞增殖
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周细胞条件培养液对视网膜色素上皮细胞、胶质细胞及巨噬细胞增殖的影响 被引量：7
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作者 韩冰 徐强 +1 位作者 朱荃 韩凌 《国际眼科杂志》 CAS 2004年第5期829-830,共2页
目的观察体外培养的视网膜周细胞条件培养液对视网膜色素上皮细胞、巨噬细胞及胶质细胞生长的影响。方法MTT法测定不同稀释度的周细胞条件培养液对色素上皮细胞、巨噬细胞及胶质细胞生长的影响。结果随着周细胞条件培养液稀释度的增加,... 目的观察体外培养的视网膜周细胞条件培养液对视网膜色素上皮细胞、巨噬细胞及胶质细胞生长的影响。方法MTT法测定不同稀释度的周细胞条件培养液对色素上皮细胞、巨噬细胞及胶质细胞生长的影响。结果随着周细胞条件培养液稀释度的增加,其对上述细胞的抑制生长作用亦越明显。结论周细胞的缺失将导致色素细胞、巨噬细胞及胶质细胞的增殖,细胞间相互作用对于糖尿病视网膜病变的发生和发展是非常重要的。 展开更多
关键词 周细胞 巨噬细胞 胶质细胞 条件培养液 视网膜色素上皮细胞 增殖
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机械牵拉对培养人视网膜色素上皮细胞内钙离子的影响 被引量：10
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作者 侯旭 惠延年 +3 位作者 韩泉洪 张晓光 王建州 郭长梅 《国际眼科杂志》 CAS 2005年第1期50-54,共5页
目的:观察培养人视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial cells,RPEs)在受机械牵拉力时细胞内Ca^2+的变化。方法:将胶原包被的磁珠悬液加入培养人RPE细胞后孵育,附着磁珠的细胞放置在恒定磁场中,使用钙荧光指示剂fluo-3/AM和激... 目的:观察培养人视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial cells,RPEs)在受机械牵拉力时细胞内Ca^2+的变化。方法:将胶原包被的磁珠悬液加入培养人RPE细胞后孵育,附着磁珠的细胞放置在恒定磁场中,使用钙荧光指示剂fluo-3/AM和激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察在机械牵拉作用的前后细胞内钙离子的变化情况。结果:RPE细胞荧光着色很强,遍布整个细胞,其中细胞核比细胞质更强。机械牵拉后荧光强度显著增强,加入氯化锰后迅速降低。EGTA预处理的细胞在受力后荧光强度增加不显著,加入氯化钙后明显增强。细胞松弛素D预处理的细胞在受力后荧光强度比正常组增高2倍以上。结论:机械牵拉能显著增加钙离子内流,并且增加细胞内的钙库释放。钙离子内流可能是RPE细胞损伤前的信号。 展开更多
关键词 机械牵拉 RPE 人视网膜色素上皮细胞 胞内钙离子 钙离子内流 观察 氯化锰 培养 结论 LSCM
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缺氧对培养人视网膜色素上皮细胞线粒体酶活性的影响 被引量：8
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作者 朱洁 王雨生 +3 位作者 张金山 张鹏 王海燕 赵炜 《眼科新进展》 CAS 2005年第2期105-108,共4页
目的　研究缺氧对培养的人视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelium ,RPE)细胞线粒体琥珀酸脱氢酶(succinatedehydrogenase,SDH)和细胞色素氧化酶(cytochromeoxi dase,COX)活性的影响,以及缺氧对RPE细胞增生的作用。方法　氯化钴(CoCl... 目的　研究缺氧对培养的人视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelium ,RPE)细胞线粒体琥珀酸脱氢酶(succinatedehydrogenase,SDH)和细胞色素氧化酶(cytochromeoxi dase,COX)活性的影响,以及缺氧对RPE细胞增生的作用。方法　氯化钴(CoCl2 )法建立培养人RPE细胞缺氧模型。于缺氧后0 .5h、1h、2h、4h、6h、8h、16h和2 4h ,用组织化学法测定SDH和COX活性。于缺氧后第1天、2天、3天、4天和5天,用四甲基偶氮唑蓝[3(4,5dimethylthiazole 2 yl) 2 ,5diphenyltetrazoliumbromide,MTT]比色法检测RPE细胞增生。结果　RPE细胞SDH和COX活性随缺氧时间延长而逐渐降低,与对照组有显著性差异(P <0 .0 5 )。缺氧组RPE细胞增生能力增强(P <0 .0 5 )。结论　缺氧可使RPE细胞线粒体酶活性降低,并刺激RPE细胞增生。 展开更多
关键词 视网膜色素上皮 缺氧 琥珀酸脱氢酶 细胞色素氧化酶 细胞增生
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二甲基亚砜对培养人视网膜色素上皮细胞增殖的影响 被引量：11
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作者 彭坤 邢怡桥 +4 位作者 项奕 叶美红 艾明 杨安怀 杨燕宁 《眼科新进展》 CAS 2004年第2期91-93,共3页
目的　探讨细胞分化诱导剂及端粒酶抑制剂二甲基亚砜 (dimethylsulfoxide ,DMSO)对人视网膜色素上皮细胞增殖的抑制作用。方法　本研究分实验组和对照组 ,对照组弃原培养液 ,加无血清培养液继续培养 ,实验组用不同浓度的DMSO 5、10、2 0... 目的　探讨细胞分化诱导剂及端粒酶抑制剂二甲基亚砜 (dimethylsulfoxide ,DMSO)对人视网膜色素上皮细胞增殖的抑制作用。方法　本研究分实验组和对照组 ,对照组弃原培养液 ,加无血清培养液继续培养 ,实验组用不同浓度的DMSO 5、10、2 0、4 0mL·L-1分别作用于人RPE细胞 2 4、4 8、72、96h ,用MTT法检测DMSO对hRPE细胞生长的影响 ,流式细胞仪检测DMSO对hRPE细胞周期的影响。结果　 10mL·L-1DMSO处理的hRPE细胞从作用 4 8h开始 ,OD值 ( 0 .5 37± 0 .0 10 )小于对照组 ( 0 .6 4 7± 0 .0 2 2 ) ,有显著性差异 (P <0 .0 0 1) ,细胞生长受到抑制 ,且随浓度增加及作用时间延长 ,抑制越显著。流式细胞仪检测 2 0mL·L-1DMSO作用 72h细胞周期发生明显变化 ,G1期细胞由4 1 31%增加至 5 9.6 5 % ,S期由 32 .0 9%减至 2 1.2 1% ,G2 期由 2 6 .6 5 %减至 19 14 % ,细胞生长被阻滞在G1期 ,生长受到抑制。结论　DMSO能阻滞hRPE细胞于G1期 ,抑制hRPE细胞增殖且呈剂量依赖性。 展开更多
关键词 二甲基亚砜 视网膜色素上皮细胞 细胞增殖 MTT法 流式细胞术
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