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地高辛标记DNA探针对茶园NPV的检测 被引量:1
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作者 谭荣荣 毛迎新 龚自明 《湖北农业科学》 北大核心 2013年第23期5894-5897,共4页
研究合成了茶尺蠖核型多角体病毒(Ectropis oblique nuclear polyhedrosis virus,EcobNPV)的地高辛标记DNA探针,采用斑点杂交检测茶园几种核型多角体病毒。结果表明,以含EcobNPV克隆片段的大肠杆菌菌液为样品时,斑点杂交检测灵敏度为80 ... 研究合成了茶尺蠖核型多角体病毒(Ectropis oblique nuclear polyhedrosis virus,EcobNPV)的地高辛标记DNA探针,采用斑点杂交检测茶园几种核型多角体病毒。结果表明,以含EcobNPV克隆片段的大肠杆菌菌液为样品时,斑点杂交检测灵敏度为80 CFU/μL。以感染病毒致死的茶尺蠖幼虫为试材,提取病毒基因组DNA,采用斑点杂交法检测均得到强的杂交信号。斑点杂交检测可有效区分茶园中几种核型多角体病毒,表明地高辛标记DNA探针的特异性好。 展开更多
关键词 茶尺蠖核型多角体病毒(Ectropis OBLIQUE NUCLEAR polyhedrosis virus EcobNPV) 地高辛标记dna探针 斑点杂交 检测
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地高辛标记DNA探针在α-地中海贫血基因诊断中的应用
2
作者 冯建生 何启智 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 1993年第4期16-20,共5页
以地高辛标记DNA片段作探针,用点杂交法可检出0.1pg目标DNA。消化5~10μg人基因组DNA,经印迹转移后与相应标记探针杂交,可得清晰的α—珠蛋白基因限制酶切图谱,试用本法于α—地贫基因分析,31例受检者的结果为:14例无α—珠蛋白基因缺... 以地高辛标记DNA片段作探针,用点杂交法可检出0.1pg目标DNA。消化5~10μg人基因组DNA,经印迹转移后与相应标记探针杂交,可得清晰的α—珠蛋白基因限制酶切图谱,试用本法于α—地贫基因分析,31例受检者的结果为:14例无α—珠蛋白基因缺失,10例为α—地贫1杂合子。5例为α—地贫2杂合子,2例为α—地贫1与α—地贫2杂合子。 展开更多
关键词 地高辛 dna探针 地中海贫血
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地高辛标记cDNA探针组织及细胞mRNA原位杂交技术 被引量:8
3
作者 杜卫东 周晓虹 +3 位作者 马学玲 吴浩 翟为溶 张月娥 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 1997年第1期77-79,共3页
地高辛标记cDNA探针组织及细胞mRNA原位杂交技术*杜卫东周晓虹马学玲吴浩翟为溶张月娥*国家自然科学基金重点项目和国家教委博士点专项基金资助课题作者单位:上海医科大学病理学教研室200032(第一作者现工作单位:中... 地高辛标记cDNA探针组织及细胞mRNA原位杂交技术*杜卫东周晓虹马学玲吴浩翟为溶张月娥*国家自然科学基金重点项目和国家教委博士点专项基金资助课题作者单位:上海医科大学病理学教研室200032(第一作者现工作单位:中国科学院上海生理研究所200031... 展开更多
关键词 地高辛标记 Cdna探针 MRNA 原位杂交
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地高辛素标记弓形虫DNA探针的制备及在产前诊断的应用 被引量:14
4
作者 陈观今 韦相才 +2 位作者 朱家铭 罗超权 郑焕钦 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1995年第5期7-9,共3页
本文建立了地高辛素标记的弓形虫DNA探针并在23例产前咨询孕妇中作产前诊断。通过聚合酶链反应扩增弓形虫RH株TGR4核酸片段,扩增产物778bp片段经寡核苷酸层析柱纯化后,用地高辛素标记作为探针,与待检材料斑点杂交。... 本文建立了地高辛素标记的弓形虫DNA探针并在23例产前咨询孕妇中作产前诊断。通过聚合酶链反应扩增弓形虫RH株TGR4核酸片段,扩增产物778bp片段经寡核苷酸层析柱纯化后,用地高辛素标记作为探针,与待检材料斑点杂交。结果显示该探针与待杂交的弓形虫RH、ZS1、ZS2、SH1株DNA杂交;而与恶性疟原虫、卡氏肺孢子虫、杜氏利什曼原虫、大肠杆菌、巨细胞病毒DNA无杂交。并能在待杂交液中检测出相当于1pg水平DNA,表明该探针具有高度的特异性及敏感性。检测23例孕期10—14周孕妇中,阳性3例,其中一孕妇外周血、绒毛组织及羊水均呈阳性。另一例的外周血及绒毛组织呈阳性。该探针稳定、敏感、操作简单,具有推广意义。 展开更多
关键词 地高辛 弓形体病 产前诊断 dna 探针
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地高辛标记HBVDNA探针原位分子杂交技术 被引量:6
5
作者 马学玲 杜卫东 +1 位作者 阎惠平 张月娥 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第1期84-85,共2页
地高辛标记HBVDNA探针原位分子杂交技术马学玲,杜卫东,阎惠平,张月娥自1971年Combes首次报道乙型肝炎病毒相关性肾炎(HBVGN)以来[1],人们利用各种方法对HBVDNA及其相关蛋白在肾小球肾炎发病过程中... 地高辛标记HBVDNA探针原位分子杂交技术马学玲,杜卫东,阎惠平,张月娥自1971年Combes首次报道乙型肝炎病毒相关性肾炎(HBVGN)以来[1],人们利用各种方法对HBVDNA及其相关蛋白在肾小球肾炎发病过程中的作用进行了不断研究。近年有人推测... 展开更多
关键词 HBVGN 乙型肝炎病毒 地高辛 dna探针 切片 肾炎
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地高辛标记的DNA探针和ID-ELISA检测芜菁花叶病毒的比较 被引量:3
6
作者 邓晓东 刘志昕 +1 位作者 潘俊松 郑学勤 《热带作物学报》 CSCD 1997年第2期48-52,共5页
以克隆的芜菁花叶病毒(TurnipmosaicVitusTuMV)外壳蛋白基因的重组质粒PGT3为模板,用PCR的方法合成了长度为0.87kb的地高辛标记的双链DNA探针。用其进行了十字花科蔬菜病毒检测研究。在斑点杂交中,探针检测TuMVRNA的灵敏度为250pg... 以克隆的芜菁花叶病毒(TurnipmosaicVitusTuMV)外壳蛋白基因的重组质粒PGT3为模板,用PCR的方法合成了长度为0.87kb的地高辛标记的双链DNA探针。用其进行了十字花科蔬菜病毒检测研究。在斑点杂交中,探针检测TuMVRNA的灵敏度为250pg,相当于5ng的病毒,比ID-ELISA检测TuMV的灵敏度高6倍。 展开更多
关键词 芜菁 花叶病毒 地高辛标记 dna探针 ID-ELISA
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双峰驼线粒体DNA地高辛标记探针的制备及其应用 被引量:2
7
作者 权洁霞 韩建林 +3 位作者 门正明 张亚平 张国琪 鲁守玮 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 1997年第4期308-312,共5页
利用地高辛标记技术,对从双峰驼肝脏和肾脏提纯的线粒体DNA进行了标记,制成探针,并用它检测了包含于白细胞总DNA中的微量线粒体DNA。结果表明这一技术完全可以成功地用于微量线粒体DNARFLP的分析。
关键词 MTdna 地高辛标记 探针 双峰驼
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地高辛标记PPV-DNA-C及PUP重组质粒探针的比较研究 被引量:1
8
作者 侯喜林 甘孟侯 余丽芸 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 1997年第3期3-4,共2页
应用分子克隆技术制备的猪细小病毒复制型DNA的PstⅠ/HindⅢ双酶切片段C及被克隆到PUC19中的C片段形成的重组质粒PUP利用非放射性的地高辛标记后制备两种探针。分别对不同来源的猪细小病毒DNA及PUP重组质粒... 应用分子克隆技术制备的猪细小病毒复制型DNA的PstⅠ/HindⅢ双酶切片段C及被克隆到PUC19中的C片段形成的重组质粒PUP利用非放射性的地高辛标记后制备两种探针。分别对不同来源的猪细小病毒DNA及PUP重组质粒于硝酸纤维素膜上打点杂交,免疫呈色后均为阳性反应,而对照的猪瘟病毒、乙型脑炎病毒、伪狂犬病毒、PK-15细胞的核酸均为阴性反应。通过对已知量的PPV-DNA检测发现C探针及PUP探针的最低检出限量分别为40pgDNA和4pgDNA。 展开更多
关键词 重组质粒 核酸探针 地高辛标记
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地高辛标记DNA分子中W316bp特异片段成探针的研究 被引量:6
9
作者 张雅娟 蒋滢 +3 位作者 王尉平 汪成富 葛凤晨 张大隆 《中国养蜂》 2001年第4期10-11,23,共3页
以W (5’ CGGCCCCGGT 3’)为随机引物通过RAPD(RandomAmplifiedPolymorphicDNA) PCR扩增技术从高产王浆西蜂的不同三品系 (浙农大、平湖和萧山等意蜂 )的DNA分子中获得的共同特异W 3 1 6bp(bp ,basepair)片段 ,用非放射性标记物地高辛 ... 以W (5’ CGGCCCCGGT 3’)为随机引物通过RAPD(RandomAmplifiedPolymorphicDNA) PCR扩增技术从高产王浆西蜂的不同三品系 (浙农大、平湖和萧山等意蜂 )的DNA分子中获得的共同特异W 3 1 6bp(bp ,basepair)片段 ,用非放射性标记物地高辛 (digoxigenin ,DIG)使用随机引物标记法制备成DIG W 3 1 6bp探针。结果 :此探针可与高产王浆西蜂的DNA基因组及扩增产物分别进行斑点杂交。 展开更多
关键词 地高辛标记 高产王浆西蜂 dna探针 分子杂交 品系鉴定
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用~3H和地高辛配基标记TNF—α cDNA探针进行原位杂交的比较 被引量:1
10
作者 刘天菊 司履生 杨居祥 《西安医科大学学报》 CSCD 1992年第3期209-211,共3页
用~3H和地高辛配基标记肿瘤坏死因子-αcDNA探针以及原位杂文技术检测33例子宫颈癌和28例阴道尖锐湿疣活检标本中的TNF mRNA。结果表明,两种标记探针原位杂交结果基本一致,~3H标记探针敏感性稍高于地高辛配基标记探针。但放射性核素探... 用~3H和地高辛配基标记肿瘤坏死因子-αcDNA探针以及原位杂文技术检测33例子宫颈癌和28例阴道尖锐湿疣活检标本中的TNF mRNA。结果表明,两种标记探针原位杂交结果基本一致,~3H标记探针敏感性稍高于地高辛配基标记探针。但放射性核素探针的固有缺点及非同位素探针的安全、快速、方便使非同位素探针有着日益广泛的应用前景。 展开更多
关键词 标记探针 地高辛配基 免疫诊断
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地高辛素标记乙型肝炎病毒DNA探针的制备及应用 被引量:1
11
作者 吕凌 彭文伟 +2 位作者 姚集鲁 郑锡澄 徐林 《中山医科大学学报》 CSCD 1991年第2期90-94,共5页
采用随机引物法以地高辛素标记的脱氧尿嘧啶核苷三磷酸(dig-II-dUTP)标记克隆的乙型肝炎病毒(HBV)DNA adw/pAM6,制得高特异性和高敏感性的HBV DNA探针。用于斑点杂交检测HBV DNA,最大敏感度为0.lpg。用于检测HBsAg阳性血清,HBV DNA阳性... 采用随机引物法以地高辛素标记的脱氧尿嘧啶核苷三磷酸(dig-II-dUTP)标记克隆的乙型肝炎病毒(HBV)DNA adw/pAM6,制得高特异性和高敏感性的HBV DNA探针。用于斑点杂交检测HBV DNA,最大敏感度为0.lpg。用于检测HBsAg阳性血清,HBV DNA阳性率为82.7%(91/110),与市售同类药盒相比,阴阳结果一致,与缺口翻译的生物索探针相比,检出率有显著提高(P<0.01)。用于肝癌组织与血清HBV DNA研究,与既往用~32P探针所得结果相符。该探针操作简单、使用方便、出结果快速、价格便宜又无需特殊设备,故适于在临床单位尤其是基层医疗单位应用推广。 展开更多
关键词 地高辛 乙肝病毒 dna探针
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地高辛标记的DNA探针检测核酸疫苗中宿主菌基因组DNA的含量
12
作者 贺艳 施柯 孙树汉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第8期902-903,共2页
将合成的引物与宿主菌的染色体模板 DNA进行 PCR扩增的核糖体 DNA片段 ,以地高辛进行标记 ,与待测 DNA样品进行点杂交 ,确定制备的乙肝 DNA疫苗中其宿主菌基因组含量 <15 ng/μg质粒 DNA。这提示地高辛标记的探针用于检测基因组 DNA... 将合成的引物与宿主菌的染色体模板 DNA进行 PCR扩增的核糖体 DNA片段 ,以地高辛进行标记 ,与待测 DNA样品进行点杂交 ,确定制备的乙肝 DNA疫苗中其宿主菌基因组含量 <15 ng/μg质粒 DNA。这提示地高辛标记的探针用于检测基因组 DNA的方法灵敏。 展开更多
关键词 地高辛标记 dna探针 核酸疫苗 宿主菌 基因组 dna含量 乙肝 dna疫苗制品
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用地高辛配基标记DNA探针及其应用
13
作者 刘国仰 刘妙良 +1 位作者 刘翀 程在玉 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 1992年第6期451-455,共5页
核酸杂交技术中,同位素标记DNA探针是最常用的技术,其优越性是检测灵敏度高,但同时有很多缺点。80年代初,Langer等开始用生物素标记多核苷酸探针。随着方法的不断完善,近年来已用于基因诊断、定位及表达等研究。本文报道一种新的非同位... 核酸杂交技术中,同位素标记DNA探针是最常用的技术,其优越性是检测灵敏度高,但同时有很多缺点。80年代初,Langer等开始用生物素标记多核苷酸探针。随着方法的不断完善,近年来已用于基因诊断、定位及表达等研究。本文报道一种新的非同位素标记技术,即用地高辛配基(digoxigenin-dUTP)标记DNA探针,其原理是具有类固醇半抗原性质的地高辛配基,通过随机引物(random pr-imer法)掺入到DNA上,与靶DNA进行碱基互补同源序列结合形成杂交产物。 展开更多
关键词 地高辛 dna探针 标记 基因诊断
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用地高辛素标记的核酸探针检测肺炎患儿咽拭标本中腺病毒DNA
14
作者 史金阳 刘兰青 +1 位作者 吕绳敏 金红 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 1995年第3期290-291,共2页
用地高辛素标记的核酸探针检测肺炎患儿咽拭标本中腺病毒DNA史金阳,刘兰青,吕绳敏,金红(第二临床学院病毒室)关键词腺病毒;地高辛素;斑点杂交人类腺病毒(AdV)是我国婴幼儿病毒性肺炎的主要病原之一,建立一种快速敏感的... 用地高辛素标记的核酸探针检测肺炎患儿咽拭标本中腺病毒DNA史金阳,刘兰青,吕绳敏,金红(第二临床学院病毒室)关键词腺病毒;地高辛素;斑点杂交人类腺病毒(AdV)是我国婴幼儿病毒性肺炎的主要病原之一,建立一种快速敏感的病原检测方法对临床工作极为重要。核... 展开更多
关键词 肺炎 腺病毒 斑点杂交 地高辛 核酸探针 标记
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用地高辛标记的核酸探针检测猪伪狂犬病毒野毒感染的研究 被引量:12
15
作者 刘志杰 任慧英 +4 位作者 温建新 刘文华 邹玲 韩先杰 魏笑笑 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1621-1624,共4页
利用PCR技术从带有伪狂犬病毒(PRV)gE基因的重组质粒pMD18-T-gE中扩增回收约304 bp大小的片段,并制备出地高辛标记的gE基因核酸探针。特异性检测结果表明,该探针能与重组质粒DNA发生特异性杂交,而与对照的PRV Bartha-k61株疫苗毒DNA、... 利用PCR技术从带有伪狂犬病毒(PRV)gE基因的重组质粒pMD18-T-gE中扩增回收约304 bp大小的片段,并制备出地高辛标记的gE基因核酸探针。特异性检测结果表明,该探针能与重组质粒DNA发生特异性杂交,而与对照的PRV Bartha-k61株疫苗毒DNA、猪细小病毒(PPV)DNA、猪圆环病毒(PCV)DNA、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)cDNA、猪瘟病毒(CSFV)cDNA的杂交反应均为阴性;敏感性检测结果表明,该探针对PRV野毒的最低检出量为4 pg。应用该探针对11份繁殖障碍病料进行了杂交检测,共检出4份阳性病料,该结果与PCR检测结果一致,表明该核酸探针可用于猪伪狂犬病野毒感染的临床诊断。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 GE基因 地高辛标记探针 斑点杂交 野毒株
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基于纳米金胶标记DNA探针的电化学DNA传感器研究 被引量:17
16
作者 蔡宏 王延琴 +1 位作者 何品刚 方禹之 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2003年第8期1390-1394,共5页
以纳米金胶为标记物 ,将其标记于人工合成的 5 -端巯基修饰的寡聚核苷酸片段上 ,制成了具有电化学活性的金胶标记 DNA电化学探针 ;在一定条件下 ,使其与固定在玻碳电极表面的靶序列进行杂交反应 ,利用 ss DNA与其互补链杂交的高度序... 以纳米金胶为标记物 ,将其标记于人工合成的 5 -端巯基修饰的寡聚核苷酸片段上 ,制成了具有电化学活性的金胶标记 DNA电化学探针 ;在一定条件下 ,使其与固定在玻碳电极表面的靶序列进行杂交反应 ,利用 ss DNA与其互补链杂交的高度序列选择性和极强的分子识别能力 ,以及纳米金胶的电化学活性 ,实现对特定序列 DNA片段的电化学检测以及对 DNA碱基突变的识别 . 展开更多
关键词 纳米金胶 标记 dna探针 电化学dna传感器 杂交反应 生物传感器
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热启动PCR快速制备地高辛标记探针 被引量:7
17
作者 李立家 张锡元 姜海波 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1994年第6期557-558,共2页
介绍了一种在热启动PCR中,以Dig-11-dUTP部分代替dTTP,从少量基因组DNA中快速制备大量的地高辛标记的探针的方法,此探针灵敏度达0.03pg,并只和相关的DNA特异杂交。
关键词 基因组 dna 地高辛 标记 探针 聚合酶链反应
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用地高辛标记核酸探针检测鹅细小病毒的研究 被引量:14
18
作者 布日额 王君伟 +2 位作者 吴金花 孙红梅 Ulrich Neumann 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期102-105,共4页
从带有鹅细小病毒(GPV)NS1基因的重组质粒pMD18T NS1用限制性内切酶EcoRI和BamHI双酶切回收1880bp大小片段,并制备出地高辛标记的GPV核酸探针。其标记效率达到0 01pg/μl。特异性检测结果表明,该探针能与GPV不同毒株核酸发生特异性杂交... 从带有鹅细小病毒(GPV)NS1基因的重组质粒pMD18T NS1用限制性内切酶EcoRI和BamHI双酶切回收1880bp大小片段,并制备出地高辛标记的GPV核酸探针。其标记效率达到0 01pg/μl。特异性检测结果表明,该探针能与GPV不同毒株核酸发生特异性杂交,而与对照的DPV、GPPV等病毒的核酸杂交反应均为阴性;敏感性检测结果表明,该探针对GPV的最低检出量为0 0224pg。该探针对不同方法处理的GPV感染病料进行检测,均出现杂交阳性。表明所研制的标记探针用于GPV的检测是可行的。 展开更多
关键词 地高辛标记 核酸探针 检测技术 鹅细小病毒 GPV检测
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二茂铁标记DNA电化学探针的研制及性质研究 被引量:16
19
作者 徐春 蔡宏 +1 位作者 何品刚 方禹之 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2001年第9期1493-1495,共3页
以乙基 -( 3-二甲基丙基 )碳化二亚胺盐酸盐 ( EDC)为偶联活化剂 ,利用缩合反应分别将电化学活性物质氨基二茂铁 ( Aminoferrocene,AFC)和醛基二茂铁 ( Ferrocenecarboxaldehyde,FCA)成功地标记在变性小牛胸腺 DNA片段上 ,制备成二茂铁... 以乙基 -( 3-二甲基丙基 )碳化二亚胺盐酸盐 ( EDC)为偶联活化剂 ,利用缩合反应分别将电化学活性物质氨基二茂铁 ( Aminoferrocene,AFC)和醛基二茂铁 ( Ferrocenecarboxaldehyde,FCA)成功地标记在变性小牛胸腺 DNA片段上 ,制备成二茂铁标记 DNA探针 .分别采用电化学、紫外、红外光谱等方法研究了二茂铁标记 DNA探针的性质 ,计算了二茂铁的标记效率 ,变性小牛胸腺 DNA的反应效率以及二茂铁化合物与变性小牛胸腺 DNA的反应比率 .实验表明 ,氨基二茂铁和醛基二茂铁与 DNA上的磷酸基是以 1∶ 1比率进行的反应 ,该标记反应不影响 DNA链碱基的紫外吸收 ,二茂铁标记 DNA探针在石墨电极上有良好的电化学响应 .将制备好的二茂铁标记 DNA电化学探针置于冰箱中冷冻 (温度低于 -1 5℃ )保存 3个月后用于测定 ,峰电流仅下降 1 . 展开更多
关键词 二茂铁 标记反应 dna电化学探针 dna 分子识别 检测 制备 EDC 偶联活化剂 结构分析
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溴化乙锭标记DNA电化学探针的研究 被引量:19
20
作者 徐春 何品刚 方禹之 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2000年第8期1187-1190,共4页
以乙基 -( 3 -二甲基丙基 )碳化二亚胺盐酸盐 ( EDC)为偶联活化剂 ,将电化学活性物质溴化乙锭( Ethidium bromide,EB)成功地标记在人工合成的含有 2 1个碱基的寡聚 DNA片段上 ,制备成 EB标记 DNA探针 ;用电化学方法将待测样品 DNA片段... 以乙基 -( 3 -二甲基丙基 )碳化二亚胺盐酸盐 ( EDC)为偶联活化剂 ,将电化学活性物质溴化乙锭( Ethidium bromide,EB)成功地标记在人工合成的含有 2 1个碱基的寡聚 DNA片段上 ,制备成 EB标记 DNA探针 ;用电化学方法将待测样品 DNA片段固定在石墨电极表面 ,在一定的温度、p H值和离子强度条件下与EB标记 DNA探针进行杂交反应 ,从而对靶序列 DNA片段进行识别和测定 .此外 ,还讨论了该探针的电化学性质、荧光光谱、待测 DNA片段在石墨电极表面的电化学固定、 DNA链碱基长度对 EB标记 DNA电化学探针的影响以及探针的选择性、重现性和寿命 。 展开更多
关键词 溴化乙锭 电化学标记 dna探针 dna片段识别
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