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嗜盐芽孢杆菌果胶裂解酶的重组表达、性质表征及在低次烟叶提质中的应用
1
作者
汪季涛
王浩军
+5 位作者
边文杰
张福建
董洪旭
高丽伟
张鹏
沈忱
《中国烟草学报》
北大核心
2025年第4期90-100,共11页
为获得能够降低烟叶杂气、提升烟叶品质的微生物酶资源,以烟叶为材料筛选具有果胶裂解功能的细菌,使用毕赤酵母异源表达了该细菌的果胶裂解酶基因,研究了其酶学性质和对烟叶品质的影响。结果表明:筛选到一株产果胶裂解酶的细菌,经鉴定...
为获得能够降低烟叶杂气、提升烟叶品质的微生物酶资源,以烟叶为材料筛选具有果胶裂解功能的细菌,使用毕赤酵母异源表达了该细菌的果胶裂解酶基因,研究了其酶学性质和对烟叶品质的影响。结果表明:筛选到一株产果胶裂解酶的细菌,经鉴定为嗜盐芽孢杆菌(Bacillus halotolerans),将其果胶裂解酶PelHA重组于毕赤酵母细胞中进行表达;PelHA的最适反应温度为50℃,最适反应pH为10.0,在30℃~40℃、pH 9.0~11.5的范围内稳定性良好,1 mM Ca^(2+)可以显著激发PelHA的酶活力,而Cu^(2+)、Co^(2+)、Fe^(3+)、Mn^(2+)4种金属离子以及EDTA、SDS和β-巯基乙醇等化学试剂对PelHA有明显抑制作用;PelHA的Km和Vm分别为85.25 mg/mL、0.47μmol/mL/min;经PelHA处理的烟叶中酸类、醇类、酯类等香气总体含量上升,酚类物质和含氮杂环类物质总体含量减少。经PelHA处理烟叶的卷烟制品香气质量更为优越,杂气、刺激性减少,香气浓度、劲头增加。为实现烟叶用果胶裂解酶自主化打下基础。
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关键词
果胶裂解酶
嗜盐芽孢杆菌
重组表达
稳定性
香气
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职称材料
海洋来源嗜盐芽孢杆菌B7抗菌肽的分离及性质研究
2
作者
严鹤松
李婵娟
徐钊
《饲料研究》
2025年第14期113-118,共6页
试验旨在分离海洋来源嗜盐芽孢杆菌B7的抗菌肽,并探究其理化性质。通过硫酸铵盐析、凝胶过滤层析纯化获得目标抗菌肽,分析其理化性质、抗菌谱及作用机制。结果显示,嗜盐芽孢杆菌B7抗菌肽具有广泛的抗菌活性,对多种动物病原菌具有显著的...
试验旨在分离海洋来源嗜盐芽孢杆菌B7的抗菌肽,并探究其理化性质。通过硫酸铵盐析、凝胶过滤层析纯化获得目标抗菌肽,分析其理化性质、抗菌谱及作用机制。结果显示,嗜盐芽孢杆菌B7抗菌肽具有广泛的抗菌活性,对多种动物病原菌具有显著的抑制作用。嗜盐芽孢杆菌B7抗菌肽在pH值4.5~10.5内表现出较强的抑菌活性,100℃加热处理20 min后仍保留25%的活性;对胰蛋白酶和胃蛋白酶具有较高的耐受性,但对蛋白酶K较为敏感;对恶臭假单胞菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度分别为12.89和206.14 mg/L。透射电镜结果显示,嗜盐芽孢杆菌B7抗菌肽可破坏细菌的细胞壁和细胞膜的完整性,导致内容物泄漏。研究表明,海洋来源嗜盐芽孢杆菌B7抗菌肽的广谱性、pH值适应性、耐热性和蛋白酶耐受性符合饲料工业的需求。
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关键词
嗜盐芽孢杆菌
抗菌肽
分离纯化
理化性质
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职称材料
蓝色温和凝胶双向电泳用于分析嗜盐菌质膜蛋白复合物
被引量:
1
3
作者
刘晓宇
李亮
+2 位作者
赵昕
程彦伟
张炜
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2010年第5期558-567,共10页
为了揭示细胞对盐胁迫渗透适应的分子机制,以新鉴定的中度嗜盐芽孢杆菌Bacillussp.I121为实验材料,分析了该嗜盐菌质膜上的盐胁迫响应蛋白.为此,通过蓝色温和凝胶双向电泳(BN/SDS-PAGE)对纯化的质膜组分进行了差异蛋白质组学研究.经MALD...
为了揭示细胞对盐胁迫渗透适应的分子机制,以新鉴定的中度嗜盐芽孢杆菌Bacillussp.I121为实验材料,分析了该嗜盐菌质膜上的盐胁迫响应蛋白.为此,通过蓝色温和凝胶双向电泳(BN/SDS-PAGE)对纯化的质膜组分进行了差异蛋白质组学研究.经MALDI-TOF/TOF质谱分析,鉴定了8个盐胁迫响应蛋白.盐胁迫诱导上调表达的蛋白质包括ABC型转运蛋白、3-磷酸甘油透性酶、嘧啶核苷转运蛋白和甲酸脱氢酶,下调表达的蛋白质包括琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase)铁硫亚基、黄素蛋白亚基、细胞色素b556亚基以及分子伴侣DnaJ的同源蛋白;酶活力测定结果表明胁迫条件下上述蛋白质的活性变化与表达量变化相一致.这些蛋白质中绝大多数属于高度疏水的跨膜蛋白,主要负责物质跨膜运输及能量代谢.上述结果表明,中度嗜盐菌Bacillus sp.I121可通过加快跨膜物质运输,同时抑制TCA循环完成盐胁迫条件下相容性溶质脯氨酸和四氢嘧啶的合成与积累.也进一步证明,蓝色温和凝胶双向电泳不仅可用于线粒体、叶绿体中蛋白质复合物的分析,也同样适用于细胞质膜上高度疏水蛋白复合物的比较研究.
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关键词
嗜盐芽孢杆菌
相容性溶质
质膜
蛋白质复合物
蓝色温和凝胶电泳
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职称材料
题名
嗜盐芽孢杆菌果胶裂解酶的重组表达、性质表征及在低次烟叶提质中的应用
1
作者
汪季涛
王浩军
边文杰
张福建
董洪旭
高丽伟
张鹏
沈忱
机构
安徽中烟工业有限责任公司
中国农业科学院烟草研究所
出处
《中国烟草学报》
北大核心
2025年第4期90-100,共11页
基金
中国烟草总公司重点研发项目“基于分子设计的烟草专用生物酶的定向改造及应用研究”(110202102018)
中国烟草总公司重大科技项目“基于多维宏组学技术的烟草功能微生物菌群开发及网络化机制解析”(110202201005-JY-05)
安徽中烟工业有限责任公司科技项目“片烟醇化核心微生物挖掘及在改善烟叶品质中的应用”(2022120)。
文摘
为获得能够降低烟叶杂气、提升烟叶品质的微生物酶资源,以烟叶为材料筛选具有果胶裂解功能的细菌,使用毕赤酵母异源表达了该细菌的果胶裂解酶基因,研究了其酶学性质和对烟叶品质的影响。结果表明:筛选到一株产果胶裂解酶的细菌,经鉴定为嗜盐芽孢杆菌(Bacillus halotolerans),将其果胶裂解酶PelHA重组于毕赤酵母细胞中进行表达;PelHA的最适反应温度为50℃,最适反应pH为10.0,在30℃~40℃、pH 9.0~11.5的范围内稳定性良好,1 mM Ca^(2+)可以显著激发PelHA的酶活力,而Cu^(2+)、Co^(2+)、Fe^(3+)、Mn^(2+)4种金属离子以及EDTA、SDS和β-巯基乙醇等化学试剂对PelHA有明显抑制作用;PelHA的Km和Vm分别为85.25 mg/mL、0.47μmol/mL/min;经PelHA处理的烟叶中酸类、醇类、酯类等香气总体含量上升,酚类物质和含氮杂环类物质总体含量减少。经PelHA处理烟叶的卷烟制品香气质量更为优越,杂气、刺激性减少,香气浓度、劲头增加。为实现烟叶用果胶裂解酶自主化打下基础。
关键词
果胶裂解酶
嗜盐芽孢杆菌
重组表达
稳定性
香气
Keywords
pectate lyase
Bacillus halotolerans
recombinant expression
stability
aromas
分类号
S572 [农业科学—烟草工业]
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职称材料
题名
海洋来源嗜盐芽孢杆菌B7抗菌肽的分离及性质研究
2
作者
严鹤松
李婵娟
徐钊
机构
湖北轻工职业技术学院轻化工程学院
出处
《饲料研究》
2025年第14期113-118,共6页
基金
湖北省自然科学基金(项目编号:2022CFB567)。
文摘
试验旨在分离海洋来源嗜盐芽孢杆菌B7的抗菌肽,并探究其理化性质。通过硫酸铵盐析、凝胶过滤层析纯化获得目标抗菌肽,分析其理化性质、抗菌谱及作用机制。结果显示,嗜盐芽孢杆菌B7抗菌肽具有广泛的抗菌活性,对多种动物病原菌具有显著的抑制作用。嗜盐芽孢杆菌B7抗菌肽在pH值4.5~10.5内表现出较强的抑菌活性,100℃加热处理20 min后仍保留25%的活性;对胰蛋白酶和胃蛋白酶具有较高的耐受性,但对蛋白酶K较为敏感;对恶臭假单胞菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度分别为12.89和206.14 mg/L。透射电镜结果显示,嗜盐芽孢杆菌B7抗菌肽可破坏细菌的细胞壁和细胞膜的完整性,导致内容物泄漏。研究表明,海洋来源嗜盐芽孢杆菌B7抗菌肽的广谱性、pH值适应性、耐热性和蛋白酶耐受性符合饲料工业的需求。
关键词
嗜盐芽孢杆菌
抗菌肽
分离纯化
理化性质
Keywords
Bacillus halotolerans
antimicrobial peptides
isolation and purification
physicochemical properties
分类号
S816.7 [农业科学]
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职称材料
题名
蓝色温和凝胶双向电泳用于分析嗜盐菌质膜蛋白复合物
被引量:
1
3
作者
刘晓宇
李亮
赵昕
程彦伟
张炜
机构
南京农业大学生命科学学院生物化学与分子生物学系
南京农业大学GE Healthcare Biosciences蛋白质组学合作示范实验室
出处
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2010年第5期558-567,共10页
基金
国家自然科学基金(30771300)
国家高技术研究发展计划(863)(2007AA10Z114)资助项目~~
文摘
为了揭示细胞对盐胁迫渗透适应的分子机制,以新鉴定的中度嗜盐芽孢杆菌Bacillussp.I121为实验材料,分析了该嗜盐菌质膜上的盐胁迫响应蛋白.为此,通过蓝色温和凝胶双向电泳(BN/SDS-PAGE)对纯化的质膜组分进行了差异蛋白质组学研究.经MALDI-TOF/TOF质谱分析,鉴定了8个盐胁迫响应蛋白.盐胁迫诱导上调表达的蛋白质包括ABC型转运蛋白、3-磷酸甘油透性酶、嘧啶核苷转运蛋白和甲酸脱氢酶,下调表达的蛋白质包括琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase)铁硫亚基、黄素蛋白亚基、细胞色素b556亚基以及分子伴侣DnaJ的同源蛋白;酶活力测定结果表明胁迫条件下上述蛋白质的活性变化与表达量变化相一致.这些蛋白质中绝大多数属于高度疏水的跨膜蛋白,主要负责物质跨膜运输及能量代谢.上述结果表明,中度嗜盐菌Bacillus sp.I121可通过加快跨膜物质运输,同时抑制TCA循环完成盐胁迫条件下相容性溶质脯氨酸和四氢嘧啶的合成与积累.也进一步证明,蓝色温和凝胶双向电泳不仅可用于线粒体、叶绿体中蛋白质复合物的分析,也同样适用于细胞质膜上高度疏水蛋白复合物的比较研究.
关键词
嗜盐芽孢杆菌
相容性溶质
质膜
蛋白质复合物
蓝色温和凝胶电泳
Keywords
halophilic Bacillus
compatible solute
plasma membrane
protein complex
blue native gel electrophoresis
分类号
Q936 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
嗜盐芽孢杆菌果胶裂解酶的重组表达、性质表征及在低次烟叶提质中的应用
汪季涛
王浩军
边文杰
张福建
董洪旭
高丽伟
张鹏
沈忱
《中国烟草学报》
北大核心
2025
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
海洋来源嗜盐芽孢杆菌B7抗菌肽的分离及性质研究
严鹤松
李婵娟
徐钊
《饲料研究》
2025
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
蓝色温和凝胶双向电泳用于分析嗜盐菌质膜蛋白复合物
刘晓宇
李亮
赵昕
程彦伟
张炜
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2010
1
在线阅读
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职称材料
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