海藻酸钠固定化重组川芎咖啡酸-3-O-甲基转移酶 被引量：1

1

作者 党湫菂 朱建全 +6 位作者 寸聪瑞 冯璐 毕宜颖 赵蕤 谭艳 周嘉裕 廖海 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期1294-1299,共6页

利用IPTG诱导含有川芎咖啡酸-3-O-甲基转移酶(LCCOMT)的大肠杆菌工程菌E.coli BL21(DE3)/pET28a-LCCOMT,经Ni^(2+)亲和层析、质谱鉴定获得纯化的LCCOMT。采用海藻酸钙凝胶包埋固定LCCOMT,单因素实验考察最佳固定化条件对固定化酶活力的... 利用IPTG诱导含有川芎咖啡酸-3-O-甲基转移酶(LCCOMT)的大肠杆菌工程菌E.coli BL21(DE3)/pET28a-LCCOMT,经Ni^(2+)亲和层析、质谱鉴定获得纯化的LCCOMT。采用海藻酸钙凝胶包埋固定LCCOMT,单因素实验考察最佳固定化条件对固定化酶活力的影响,并确定了固定化酶的最适温度、pH值、Km、Vmax与反应批次等酶学性质。确定的条件分别为海藻酸钠质量分数1.5%,CaCl_2浓度2.5 g/L,固定化时间2 h,载体与酶质量比40 000∶1。通过正交实验确定最终固定化条件为CaCl_2浓度2.5 g/L,海藻酸钠质量分数2.0%,固定化时间1 h,载体与酶质量分数35 000∶1时,固定化效果最好,此时相对酶活力为75.43%。固定化酶的最适催化温度为37℃、最适pH值为7.5,较游离酶分别增加0℃和0.5;Km、Vmax分别增高0.40和0.74;实验确定固定化酶的半衰期,连续使用6次,酶活力仍保留50%。 展开更多

关键词 海藻酸钠 咖啡酸-3-o-甲基转移酶 固定化

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烟草咖啡酸3-O-甲基转移酶生物信息学分析 被引量：1

2

作者 薛波 田熙 +4 位作者 徐成龙 杨彦明 王德勋 户艳霞 苏家恩 《天津农业科学》 CAS 2019年第5期5-8,共4页

烟草的抗性与其组织的木质素含量具有一定的关系,而咖啡酸3-O-甲基转移酶影响木质素的合成。为清楚地认识烟草咖啡酸3-O-甲基转移酶,本研究采用Interpro、NetPhos和TNT工具对烟草咖啡酸3-O-甲基转移酶成员的结构域、磷酸化位点和进化树... 烟草的抗性与其组织的木质素含量具有一定的关系,而咖啡酸3-O-甲基转移酶影响木质素的合成。为清楚地认识烟草咖啡酸3-O-甲基转移酶,本研究采用Interpro、NetPhos和TNT工具对烟草咖啡酸3-O-甲基转移酶成员的结构域、磷酸化位点和进化树进行分析。结果表明,烟草咖啡酸3-O-甲基转移酶具有相同的植物甲基转移酶二聚化结构域和O-甲基转移酶结构域,前者位于烟草咖啡酸3-O-甲基转移酶序列的第33～85位之间,后者位于序列的第128～358位之间;NtCOMT1和NtCOMT2的丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸数目较为相似,而NtCOMT3的磷酸化位点数目明显大于NtCOMT1和NtCOMT2的数目,且三者均以酪氨酸数目最少;NtCOMT3属于进化树的第一类,而NtCOMT1和NtCOMT2属于进化树的第二类,烟草与马铃薯的咖啡酸3-O-甲基转移酶进化程度较为相似。 展开更多

关键词 烟草 咖啡酸3-o-甲基转移酶 生物信息

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丹参咖啡酸-O-甲基转移酶基因(SmCOMT1)的克隆及其分析 被引量：10

3

作者 宋银 王东浩 +3 位作者 吴锦斌 周露 王国栋 王喆之 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期437-443,共7页

依据丹参转录组数据库得到的咖啡酸-O-甲基转移酶基因序列设计特异性引物,采用RT-PCR方法从丹参分离得到一个新的COMT基因,命名为SmCOMT1(GenBank注册号为JF693491)。该基因cDNA全长1 158 bp,包含一个长为1 095 bp的开放阅读框,编码364... 依据丹参转录组数据库得到的咖啡酸-O-甲基转移酶基因序列设计特异性引物,采用RT-PCR方法从丹参分离得到一个新的COMT基因,命名为SmCOMT1(GenBank注册号为JF693491)。该基因cDNA全长1 158 bp,包含一个长为1 095 bp的开放阅读框,编码364个氨基酸。SmCOMT1 gDNA序列长2 275 bp,包含4个外显子和3个内含子。序列分析结果表明,SmCOMT1编码的多肽具有COMT的序列保守元件,与同科植物罗勒COMT编码的多肽高度同源,同源性达到89%。系统进化树分析表明,SmCOMT1与双子叶植物的COMT亲缘关系较近。qRT-PCR结果表明,SmCOMT1基因在丹参不同组织器官中差异表达,其中茎中的表达量最高,并且其表达受茉莉酸甲酯和病原菌的诱导,显示SmCOMT1基因可能在植物防御反应中发挥作用。 展开更多

关键词 丹参 咖啡酸-o-甲基转移酶 基因克隆 qRT—PCR

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绿竹咖啡酸-O-甲基转移酶基因(COMT)的克隆及相关分析 被引量：13

4

作者 李雪平 高志民 +4 位作者 彭镇华 岳永德 高健 蔡春菊 牟少华 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2007年第5期722-725,共4页

采用RT-PCR及RACE方法从绿竹中分离了COMT基因家族的一个基因,命名为BoCOMT1。BoCOMT1全长1 377 bp,编码一个361 aa的蛋白,估计分子量为39 kDa。BoCOMT1与小麦的TaCOMT、甘蔗的SoCOMT、玉米的ZmCOMT和毛白杨的PtCOMT的氨基酸序列比对结... 采用RT-PCR及RACE方法从绿竹中分离了COMT基因家族的一个基因,命名为BoCOMT1。BoCOMT1全长1 377 bp,编码一个361 aa的蛋白,估计分子量为39 kDa。BoCOMT1与小麦的TaCOMT、甘蔗的SoCOMT、玉米的ZmCOMT和毛白杨的PtCOMT的氨基酸序列比对结果表明,BoCOMT1与TaCOMT的氨基酸同源性最高,达到86.7%,系统进化树的分析表明,BoCOMT1与TaCOMT亲缘关系较近。RT-PCR结果显示,BoCOMT1在茎中的表达量约为叶中的2倍。 展开更多

关键词 绿竹 咖啡酸-0-甲基转移酶 克隆

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甲基转移酶样3对巨核细胞系花生四烯酸代谢通路的影响和机制

5

作者 张嘉祺 刘雯雯 +2 位作者 王茜婷 陈夏欢 刘梅林 《中国心血管杂志》 北大核心 2025年第1期75-85,共11页

目的探讨甲基转移酶样3(METTL3)对人成巨核细胞白血病细胞(MEG-01)花生四烯酸(AA)代谢通路的影响和相关机制。方法构建METTL3差异表达的MEG-01,分为正常对照(Blank)组、METTL3过表达(OE)组和过表达阴性对照(OE-NC)组、METTL3敲低(KD)组... 目的探讨甲基转移酶样3(METTL3)对人成巨核细胞白血病细胞(MEG-01)花生四烯酸(AA)代谢通路的影响和相关机制。方法构建METTL3差异表达的MEG-01,分为正常对照(Blank)组、METTL3过表达(OE)组和过表达阴性对照(OE-NC)组、METTL3敲低(KD)组和敲低阴性对照(KD-NC)组。采用定量聚合酶链反应(qPCR)法和免疫印迹(Western blot)法检测各组METTL3、YTH结构域家族蛋白(YTHDF1、YTHDF2)以及参与AA代谢的关键基因前列腺素内过氧化物合酶1/环氧合酶-1(PTGS1/COX-1)、前列腺素内过氧化物合酶2/环氧合酶-2(PTGS2/COX-2)、血栓素A合酶1(TBXAS1)、前列腺素I_(2)合酶(PTGIS)和前列腺素I_(2)受体(PTGIR)的表达量变化。采用酶联免疫吸附分析(ELISA)法测定细胞培养上清中AA代谢产物前列腺素H_(2)(PGH_(2))和血栓素B_(2)(TXB_(2))的水平。采用蛋白稳定性实验和RNA结合蛋白质免疫沉淀(RIP)实验验证YTHDF1与COX-1 mRNA的结合情况。结果qPCR和Western blot检测显示,OE组YTHDF1、PTGS1/COX-1的mRNA和蛋白水平较OE-NC组升高,KD组较KD-NC组降低(均为P<0.05)。ELISA测定显示,细胞培养上清中OE组PGH_(2)、TXB_(2)的含量高于OE-NC组,KD组TXB_(2)的含量低于KD-NC组(均为P<0.05)。蛋白稳定性实验和RIP实验证实,METTL3通过YTHDF1参与COX-1 mRNA的翻译调控。结论METTL3可能通过促进N6-甲基腺苷(m6A)修饰介导的COX-1 mRNA翻译效率,调控巨核细胞系的AA代谢通路。 展开更多

关键词 甲基转移酶样3 N6-甲基腺苷甲基化 MEG-01细胞 花生四烯酸 心血管疾病

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川芎咖啡酸-O-甲基转移酶基因的克隆及序列分析 被引量：3

6

作者 朱建全 向缅 +5 位作者 李洋洋 俞继华 张赶 王万军 廖海 周嘉裕 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1505-1509,共5页

克隆川芎(Ligusticum chuanxiong Hort)咖啡酸-O-甲基转移酶(COMT)基因并做序列分析。采用RT-PCR方法,以新鲜的川芎嫩叶c DNA为模板,克隆出川芎COMT基因的c DNA序列。此基因全长1328 bp,编码360个氨基酸。将得到的序列提交Gen Bank,序... 克隆川芎(Ligusticum chuanxiong Hort)咖啡酸-O-甲基转移酶(COMT)基因并做序列分析。采用RT-PCR方法,以新鲜的川芎嫩叶c DNA为模板,克隆出川芎COMT基因的c DNA序列。此基因全长1328 bp,编码360个氨基酸。将得到的序列提交Gen Bank,序列号为KU942388。此川芎COMT具有植物O-甲基转移酶家族特征性的功能结构域,与中粒咖啡、牵牛花COMT的氨基酸序列同源性分别为70%、69%,推测其能够催化咖啡酸的氧甲基化反应。该川芎COMT基因的成功克隆为下一步活性验证及利用生物技术来生产阿魏酸奠定坚实基础。 展开更多

关键词 川芎 咖啡酸-o-甲基转移酶 克隆 序列分析

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甲基转移酶3对人脑血管平滑肌细胞基因表达及增殖和迁移功能的影响

7

作者 孟晨曦 孙洪英 +3 位作者 张佳 毛戬 杨阳 策乐木格 《中国卒中杂志》 北大核心 2025年第1期104-111,共8页

目的探究甲基转移酶3(methyltransferase3,METTL3)对人脑血管平滑肌细胞(humanbrain vascular smooth muscle cells,HBVSMC)基因表达以及增殖和迁移功能的影响。方法采用小干扰RNA(smallinterferingRNA,shRNA)干扰技术,构建METTL3基因... 目的探究甲基转移酶3(methyltransferase3,METTL3)对人脑血管平滑肌细胞(humanbrain vascular smooth muscle cells,HBVSMC)基因表达以及增殖和迁移功能的影响。方法采用小干扰RNA(smallinterferingRNA,shRNA)干扰技术,构建METTL3基因干扰载体并通过腺病毒感染HBVSMC,依据感染情况将其分为空白组(无病毒感染)、对照组(空载病毒感染)和干扰组(METTL3-shRNA病毒感染)。使用逆转录实时定量PCR(real-timereversetranscriptionalPCR,RT-qPCR)检测各组细胞脑小血管病相关基因锌指蛋白395(zincfingerprotein395,ZNF395)、锌指蛋白548(zinc finger protein 548,ZNF548)、DIS3样外泌体3’-5’核糖核酸外切酶(DIS3-like exosome3’-5’exonuclease,DIS3L)、白细胞介素增强子结合因子3(interleukinenhancerbindingfactor3,ILF3)和G蛋白偶联受体107(Gprotein-coupledreceptor107,GPR107)的mRNA表达水平,通过RNA甲基化免疫共沉淀(methylatedRNAimmunoprecipitation,MeRIP)技术检测以上基因mRNA的N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)修饰水平,利用细胞计数试剂盒8(cellcountingkit8,CCK8)、Transwell小室实验检测各组HBVSMC的增殖和迁移能力。结果与空白组相比,对照组细胞各基因的mRNA相对表达水平未发生明显改变。与对照组相比,干扰组细胞ZNF395(P=0.02)、ZNF548(P=0.03)、DIS3L(P=0.02)和GPR107(P<0.01)的mRNA相对表达水平,以及ZNF395(P<0.01)和ZNF548(P<0.01)的m6A修饰水平均降低。与对照组相比,干扰组HBVSMC的增殖和迁移能力明显增强。结论在HBVSMC中干扰METTL3基因表达可能通过下调靶基因ZNF395和ZNF548mRNA的m6A修饰水平进而增强HBVSMC的增殖和迁移能力。 展开更多

关键词 甲基转移酶3 人脑血管平滑肌细胞 N6-甲基腺苷 增殖 迁移

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日本落叶松咖啡酸-O-甲基转移酶基因LkCOMT的克隆及单核苷酸多态性分析 被引量：2

8

作者 易敏 张守攻 +1 位作者 谢允慧 孙晓梅 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2013年第F10期52-59,共8页

依据日本落叶松转录组数据库检测到的咖啡酸-O-甲基转移酶（COMT）基因ESTs序列设计引物，分离得到一个编码该酶的新基因。其cDNA克隆全长为1350bp，包含长度为1092bp的开放阅读框，可编码364个氨基酸残基。序列分析显示，所推导的蛋白... 依据日本落叶松转录组数据库检测到的咖啡酸-O-甲基转移酶（COMT）基因ESTs序列设计引物，分离得到一个编码该酶的新基因。其cDNA克隆全长为1350bp，包含长度为1092bp的开放阅读框，可编码364个氨基酸残基。序列分析显示，所推导的蛋白质氨基酸序列包含COMT基因5个所特有的保守元件，与海岸松PpCOMT的蛋白质氨基酸序列同源性达94％。在此基础上，利用DnaSP5．0软件对日本落叶松加株基因型个体的LkCOMT序列进行了单核苷酸多样性SNPs分析，共检测到92个SNP位点，SNP发生频率为1／17bp，多样性指数1T，为0．00780。在这些SNPs中，65个属于转换，27个属于颠换。在外显子区域，共检测到58个SNP位点，其中37个为错义突变，21个为同义突变。研究结果为Et本落叶松基因标记辅助育种提供了理论基础。 展开更多

关键词 日本落叶松 咖啡酸-o-甲基转移酶基因 基因克隆 单核苷酸多态性

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半乳糖-3-O-磺酰基转移酶-2与肿瘤转移关系的研究 被引量：2

9

作者 石必枝 耿飞 +2 位作者 胡萍 何培洁 吴兴中 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第7期642-648,共7页

半乳糖-3-O-磺酰基转移酶-2(GP3ST)是一个新近克隆的磺酰基转移酶,其生物学功能还不明确.GP3ST在肿瘤细胞和肿瘤组织中差异性表达,以及催化所形成的磺酰化糖链与肿瘤转移潜能密切相关,是首次研究报道.在高转移潜能的肿瘤细胞中,GP3ST及... 半乳糖-3-O-磺酰基转移酶-2(GP3ST)是一个新近克隆的磺酰基转移酶,其生物学功能还不明确.GP3ST在肿瘤细胞和肿瘤组织中差异性表达,以及催化所形成的磺酰化糖链与肿瘤转移潜能密切相关,是首次研究报道.在高转移潜能的肿瘤细胞中,GP3ST及其产物的表达明显高于低转移潜能的细胞,在伴有淋巴结转移的喉癌组织中,GP3ST的高表达率也明显高于无淋巴结转移的喉癌组织(P<0.05),而且在喉癌组织中的表达也明显高于相对应的癌周组织.利用RNAi技术下调肝癌细胞SMMC7721中GP3ST的表达,观察到稳定转染RNAi/GP3ST的细胞形态发生明显的改变,由多边形转变为近似梭形,与TNF-α刺激后的HUVEC和sL-选凝蛋白的黏附能力下降.进一步研究表明,GP3ST表达的下降能抑制细胞中的整合蛋白αV亚基的表达,而β3亚基表达无改变,同时在高转移细胞株中αV的表达也明显高于低转移细胞株,与GP3ST表达的差异性相一致.上述结果充分说明GP3ST催化合成的糖链可通过调节肿瘤细胞的黏附性和影响整合蛋白αV亚基的表达参与肿瘤转移. 展开更多

关键词 半乳糖-3-o-磺酰基转移酶-2 磺酰化糖链 肿瘤转移

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甲基转移酶样3通过调控MYC的N6-甲基腺苷水平促进急性髓系白血病细胞的增殖 被引量：5

10

作者 王小爽 何金蓉 +1 位作者 于姗 余佳 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期308-314,共7页

目的探讨甲基转移酶样3(METTL3)在急性髓系白血病(AML)细胞增殖中的功能和调控机制。方法通过基因表达汇编数据集检索METTL3在AML患者中的表达情况及METTL3在成体造血干/祖细胞髓系分化中的表达情况;在MOLM13细胞中利用慢病毒转导的方... 目的探讨甲基转移酶样3(METTL3)在急性髓系白血病(AML)细胞增殖中的功能和调控机制。方法通过基因表达汇编数据集检索METTL3在AML患者中的表达情况及METTL3在成体造血干/祖细胞髓系分化中的表达情况;在MOLM13细胞中利用慢病毒转导的方式抑制METTL3的内源表达,检测细胞增殖情况,总mRNA的N6-甲基腺苷(m6A)水平,采用基因特异的m6A RNA免疫共沉淀检测MYC mRNA上的m6A水平,并进一步检测MYC mRNA和蛋白的表达水平。结果与正常对照相比,METTL3在AML-M5型患者中有上调趋势;幼稚细胞中的METTL3相对表达量显著高于成熟的单核细胞(t=4.504,P=0.0098)。抑制内源METTL3的表达后,MOLM13细胞增殖减缓(P<0.001),MOLM13细胞总mRNA的m6A水平降低(t=3.606,P=0.042),MYC上特异的m6A水平显著降低(P<0.01),MYC的表达显著减少(P<0.01)。结论 METTL3在MOLM13细胞中可通过增加MYC的表达水平而发挥原癌基因的功能。 展开更多

关键词 甲基转移酶样3 N6-甲基腺苷 急性髓系白血病 增殖 MYC

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甲基转移酶3调控pri-miR-21甲基化修饰在糖尿病肾病肾脏纤维化中的作用 被引量：2

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作者 吴佳晋 钟晨 +3 位作者 李大伟 陈若洋 瞿俊文 张明 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期1-7,共7页

目的·探讨甲基转移酶3(methyltransferase like 3,METTL3)调控pri-miR-21的N^(6)-甲基腺苷(N^(6)-methyladenosine,m^(6)A)甲基化修饰在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)小鼠肾脏纤维化发病机制中的作用。方法·采用8周龄... 目的·探讨甲基转移酶3(methyltransferase like 3,METTL3)调控pri-miR-21的N^(6)-甲基腺苷(N^(6)-methyladenosine,m^(6)A)甲基化修饰在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)小鼠肾脏纤维化发病机制中的作用。方法·采用8周龄雄性db/db小鼠作为DN模型小鼠,db/m小鼠作为对照,同时按照是否经尾静脉注射S-腺苷高半胱氨酸水解酶抑制剂3-脱氮腺苷(3-deazaadenosine,DAA),共随机分为4组(5只/组),分别为db/m组、db/db组、db/m+DAA组和db/db+DAA组;8周龄开始注射DAA,注射1次/5 d,共注射8次。DAA干预结束后继续饲养小鼠至19周龄,收取各组小鼠血、尿、肾脏组织标本。检测血糖、血肌酐、尿白蛋白肌酐比(albumin-to-creatinine ratio,ACR),肾脏行苏木精-伊红(H-E)染色、Masson染色及天狼星红染色观察病理变化;试剂盒检测肾脏总RNA中m^(6)A的甲基化水平;Western blotting检测肾脏METTL3及纤维化相关蛋白表达;实时定量PCR检测肾脏总pri-miR-21和成熟miR-21;使用免疫磁珠富集肾脏组织中m^(6)A甲基化RNA,并通过PCR检测其中m^(6)A甲基化的pri-miR-21。结果·相较于db/m组,db/db组小鼠血糖,血肌酐,ACR,肾脏METTL3、m^(6)A甲基化修饰水平、纤维化相关蛋白、总pri-miR-21、m^(6)A甲基化pri-miR-21和成熟miR-21表达水平均显著增加(均P<0.05),小鼠肾脏系膜基质增多、肾小球基底膜增厚、胶原纤维累积显著增加。相较于db/db组,db/db+DAA组血糖,血肌酐,ACR,肾脏m^(6)A甲基化修饰水平、纤维化相关蛋白、m^(6)A甲基化pri-miR-21和成熟miR-21表达水平均显著下降(均P<0.05),总pri-miR-21表达水平显著升高(P=0.000),METTL3蛋白表达水平未见显著变化,小鼠肾脏损伤及纤维化程度显著减轻。结论·pri-miR-21的m^(6)A甲基化修饰促进miR-21成熟,进而促进DN小鼠肾脏纤维化的发生发展;抑制METTL3可通过调控pri-miR-21的m^(6)A甲基化修饰抑制DN小鼠肾脏纤维化。 展开更多

关键词 糖尿病肾病 肾脏纤维化 N^(6)-甲基腺苷 甲基转移酶3 pri-miR-21 MIR-21

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METTL3介导的m^(6)A修饰调控miR-1224-5p在前列腺癌细胞增殖和迁移中的作用

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作者 胡东来 赵梓岐 楚元奎 《中国肿瘤生物治疗杂志》 北大核心 2025年第1期64-72,共9页

目的:探究miR-1224-5p在前列腺癌细胞增殖、迁移与凋亡中的生物学作用及其表达调控机制。方法:选用人前列腺癌细胞PC3、DU145、LNCaP、22Rv1和正常前列腺上皮细胞RWPE-1,利用qPCR法检测miR-1224-5p在前列腺癌细胞中的表达。使用脂质体... 目的:探究miR-1224-5p在前列腺癌细胞增殖、迁移与凋亡中的生物学作用及其表达调控机制。方法:选用人前列腺癌细胞PC3、DU145、LNCaP、22Rv1和正常前列腺上皮细胞RWPE-1,利用qPCR法检测miR-1224-5p在前列腺癌细胞中的表达。使用脂质体转染技术分别将miR-1224-5p模拟物(mimic)、抑制剂(inhibitor)及相应的阴性对照(NC)质粒转染至PC3和DU145细胞中,qPCR法验证转染效率,采用CCK-8实验、平板克隆形成实验、划痕愈合实验和流式细胞术分别检测转染miR-1224-5p mimic与inhibitor对细胞增殖、迁移和凋亡的影响。借助SRAMP网站预测pri-miR-1224-5p序列中潜在的N6-甲基腺苷(m^(6)A)修饰位点,通过甲基化RNA免疫沉淀实验(MeRIP)验证预测结果,qPCR法检测m^(6)A修饰关键调控分子甲基转移酶3(METTL3)在前列腺癌细胞中的表达,CCK-8实验和Transwell实验分别检测转染METTL3 siRNA对PC3和DU145细胞增殖和迁移的影响,qPCR法和MeRIP检测METTL3介导的m^(6)A修饰对miR-1224-5p表达的调控作用。结果:miR-1224-5p在前列腺癌细胞中均呈高表达(均P<0.01)。转染miR-1224-5p mimic能够促进PC3和DU145细胞增殖、迁移并抑制细胞凋亡(P<0.05或P<0.01),转染miR-1224-5pinhibitor能够抑制PC3和DU145细胞增殖、迁移并诱导细胞凋亡(P<0.05或P<0.01)。pri-miR-1224-5p具有m^(6)A修饰位点;METTL3在前列腺癌细胞中均呈高表达(均P<0.01),转染METTL3 siRNA能够抑制PC3和DU145细胞的增殖和迁移(均P<0.01);METTL3介导的m^(6)A修饰能够调控miR-1224-5p的表达。结论:miR-1224-5p受METTL3介导的m^(6)A修饰调控,从而在前列腺癌细胞中呈高表达,下调miR-1224-5p能够抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移并诱导细胞凋亡。 展开更多

关键词 前列腺癌 miR-1224-5p N^(6)-甲基腺苷 甲基转移酶3 增殖 迁移 凋亡

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METTL3通过m6A甲基化修饰影响葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、迁移和侵袭

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作者 王美岚 赵天齐 +2 位作者 师齐 郝莉莉 刘莲 《中山大学学报(医学科学版)》 北大核心 2025年第4期628-638,共11页

【目的】探讨METTL3对葡萄膜黑色素瘤细胞的恶性生物学行为影响,并验证其是否和N6-甲基腺苷(m6A)甲基化相关。【方法】用慢病毒转染构建敲低、过表达METTL3以及点突变m6A相关催化位点的葡萄膜黑色素瘤细胞模型,通过Transwell了解细胞迁... 【目的】探讨METTL3对葡萄膜黑色素瘤细胞的恶性生物学行为影响,并验证其是否和N6-甲基腺苷(m6A)甲基化相关。【方法】用慢病毒转染构建敲低、过表达METTL3以及点突变m6A相关催化位点的葡萄膜黑色素瘤细胞模型,通过Transwell了解细胞迁移、侵袭情况,利用CCK-8检测细胞增殖能力,流式细胞仪分析细胞凋亡及周期的变化。【结果】敲低METTL3的C918和MUM-2B细胞在增殖、迁移和侵袭能力方面明显下降(P<0.001),细胞凋亡率增加,两种细胞中G1期的比例显著上升,而S期细胞的比例显著下降;过表达METTL3的C918和MUM-2B细胞在增殖、迁移和侵袭能力方面明显增强(P<0.001),细胞凋亡率减少;C918细胞中处于G1期的细胞比例显著下降,而S期细胞的比例显著上升;MUM-2B细胞周期的比例没有明显变化;点突变m6A相关催化位点后细胞的增殖、迁移和侵袭能力下降,细胞凋亡率增加;MUM-2B细胞中G1期细胞的百分比显著提高,S期细胞的百分比显著下降,G2期细胞的百分比稍下降;C918细胞中G1期细胞的百分比显著提高,S期和G2期细胞比例无明显变化。【结论】葡萄膜黑色素瘤细胞的增殖、侵袭和转移能力与METTL3的表达呈正相关,细胞凋亡率与METTL3的表达呈负相关;METTL3含量的变化对不同细胞的周期干扰不一;METTL3对葡萄膜黑色素瘤细胞的增殖、迁移和侵袭的相关影响和m6A甲基化修饰相关。 展开更多

关键词 葡萄膜黑色素瘤 甲基转移酶样蛋白3 N6-甲基腺苷 增殖 侵袭

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甲基转移酶3在肝细胞癌中的研究进展 被引量：1

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作者 王朔 柯炜炜 卢再鸣 《中国医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第1期86-89,93,共5页

肝细胞癌(HCC)是最常见的恶性肿瘤之一,居癌症发病率第四位,是全球第二大癌症死亡原因。N6-甲基腺嘌呤(m6A)甲基化是信使RNA(mRNA)最普遍的修饰,而甲基转移酶3(METTL3)是m6A RNA甲基化的核心酶。作为致癌基因,METTL3在HCC中多处于过表... 肝细胞癌(HCC)是最常见的恶性肿瘤之一,居癌症发病率第四位,是全球第二大癌症死亡原因。N6-甲基腺嘌呤(m6A)甲基化是信使RNA(mRNA)最普遍的修饰,而甲基转移酶3(METTL3)是m6A RNA甲基化的核心酶。作为致癌基因,METTL3在HCC中多处于过表达状态。METTL3的过表达可增强HCC的增殖、侵袭及转移能力,降低患者的预后水平。此外,METTL3介导不同基因表达也为HCC的治疗提供诸多靶点。本文对近十年来METTL3在HCC中的研究进展进行综述,系统分析METTL3在HCC发生、治疗及预后中的作用,以期为HCC的治疗提供新的思路及方案。 展开更多

关键词 甲基转移酶3 N6-甲基腺苷 肝细胞癌 基因表达调控 信号通路

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脂多糖诱导人和小鼠肠上皮细胞炎症并上调细胞甲基转移酶样蛋白3(METTL3)和METTL14表达 被引量：1

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作者 丁汝昕 李瑞凯 +2 位作者 刘俊丽 张健 韩继明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期308-315,共8页

目的探讨N_(6)-甲基腺苷(m^(6)A)修饰在HIEC-6人肠上皮细胞与MODE-K小鼠肠上皮细胞炎性状态下的变化。方法采用不同剂量的脂多糖(LPS)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激HIEC-6细胞与MODE-K细胞10 h或相同剂量... 目的探讨N_(6)-甲基腺苷(m^(6)A)修饰在HIEC-6人肠上皮细胞与MODE-K小鼠肠上皮细胞炎性状态下的变化。方法采用不同剂量的脂多糖(LPS)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激HIEC-6细胞与MODE-K细胞10 h或相同剂量LPS、IL-1β、IL-6、TNF-α分别刺激HIEC-6细胞与MODE-K细胞(0、3、6、12、24)h。实时定量PCR检测细胞炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达;实时定量PCR和Western blot法分别检测m^(6)A修饰相关分子甲基转移酶样蛋白3(METTL3)、METTL14、METTL16、Wilms瘤1相关蛋白(WTAP)、烷基化修复同源蛋白5(ALKBH5)、脂肪量和肥胖相关蛋白(FTO)、YTH结构域蛋白1(YTHDC1)、YTHDC2的mRNA和蛋白表达。结果与对照组相比,HIEC-6细胞与MODE-K细胞在LPS诱导的时间依赖与剂量依赖模型中IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达水平增高,并同步上调METTL3和METTL14 mRNA与蛋白水平。结论LPS可以诱导肠上皮细胞出现炎症反应,并上调肠上皮细胞中METTL3和METTL14的表达。 展开更多

关键词 炎症性肠病(IBD) N_(6)-甲基腺苷(m^(6)A) 甲基转移酶样蛋白3(METTL3) METTL14

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组蛋白赖氨酸甲基转移酶2D调控H9c2细胞中HIF-1α/VEGF通路(英文) 被引量：1

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作者 王燕 刘淑宝 +1 位作者 张文菁 朱冰梅 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期190-196,共7页

组蛋白赖氨酸甲基转移酶2D(histone-lysine N-methyltransferase 2D,KMT2D)作为主要的组蛋白3第4位赖氨酸(H3K4)甲基转移酶,在调控胚胎发育、组织分化、代谢和肿瘤抑制方面发挥重要作用。在小鼠体内,敲除Kmt2d会导致严重的心脏发育缺陷... 组蛋白赖氨酸甲基转移酶2D(histone-lysine N-methyltransferase 2D,KMT2D)作为主要的组蛋白3第4位赖氨酸(H3K4)甲基转移酶,在调控胚胎发育、组织分化、代谢和肿瘤抑制方面发挥重要作用。在小鼠体内,敲除Kmt2d会导致严重的心脏发育缺陷最终造成胚胎期死亡。低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)作为调节细胞应对低氧的关键转录因子,能够调控多种下游基因转录。有相关研究揭示,表观遗传调控者能够调节HIF-1α的稳定性和活性。同样,作为表观遗传调控者的组蛋白甲基转移酶KMT2D是否参与低氧条件下HIF-1α对下游基因的调控,目前仍未知。在本研究中,观察在Kmt2d正常或缺乏的情况下,心肌细胞H9c2对低氧环境的应答反应。结果显示,与常氧条件相比,低氧状态下HIF-1α、组蛋白乙酰化酶P300、KMT2D及其介导的H3K4一甲基化(H3K4 mono-methylation,H3K4me1)的蛋白质水平增加(P<0.05);HIF-1α下游基因血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,Vegf)的mRNA表达水平明显上调(P<0.01)。染色质免疫共沉淀实验(chromatin immunoprecipitation assay,ChIP-qPCR)检测结果显示,H3K4me1和组蛋白3第27位赖氨酸乙酰化(histone 3 lysine 27 acetylation,H3K27ac)在Vegf基因启动子区域的结合丰度明显增加(P<0.05)。低氧条件下沉默Kmt2d之后,H3K4me1蛋白水平和Vegf的mRNA表达下降(P<0.05)。本研究表明,低氧条件下KMT2D参与调控HIF-1α和下游基因Vegf的表达。 展开更多

关键词 组蛋白赖氨酸甲基转移酶2D 组蛋白H3K4一甲基化 低氧 低氧诱导因子-1α/血管内皮生长因子

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番红菌素中碳甲基转移酶(SfcF)的表达纯化及酶活性的检测 被引量：1

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作者 郭建平 唐满成 李凯 《东华大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期202-206,213,共6页

研究了番红菌素生物合成过程中的一个碳甲基转移酶(SfcF)的酶活反应时间曲线和动力学参数,并证明了其催化功能.通过镍柱亲和层析纯化得到碳甲基转移酶,用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定其分子量大小后,以酪氨酸(Tyr)为底物,采用高效... 研究了番红菌素生物合成过程中的一个碳甲基转移酶(SfcF)的酶活反应时间曲线和动力学参数,并证明了其催化功能.通过镍柱亲和层析纯化得到碳甲基转移酶,用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定其分子量大小后,以酪氨酸(Tyr)为底物,采用高效液相色谱法(HPLC)检测碳甲基转移酶的生物催化活性并分析得到其酶动力学数据.在碳甲基转移酶的生物催化作用下,可实现酪氨酸羟基邻位碳的甲基化,得到3甲基酪氨酸.通过时间曲线的测定,发现反应时间在50min以内,酪氨酸浓度低于400μmol/L时,底物的转化率与时间呈线性变化.通过碳甲基转移酶的活性检测和动力学常数的测定,为深入研究番红菌素的生物合成机制奠定了基础,并为其结构类似物ET-743(成药)的合成研究提供有益参考. 展开更多

关键词 生物催化 番红菌素 甲基转移酶 酪氨酸 3-甲基酪氨酸

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S-腺苷-L-甲硫氨酸依赖的3-氨基-3-羧基丙基利用酶研究进展

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作者 何家乐 董敏 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期56-70,共15页

S-腺苷-L-甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAM)是生物体内重要的辅因子。SAM的结构中具有3个不稳定的C-S键,不同的SAM依赖酶能够选择性地切割其中不同的C-S键来催化各种类型的反应。其中,利用SAM甲基部分的甲基转移酶和腺苷部分的SA... S-腺苷-L-甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAM)是生物体内重要的辅因子。SAM的结构中具有3个不稳定的C-S键,不同的SAM依赖酶能够选择性地切割其中不同的C-S键来催化各种类型的反应。其中,利用SAM甲基部分的甲基转移酶和腺苷部分的SAM自由基酶被广泛研究。UniProt数据库中保存了超过1800000条SAM依赖的甲基转移酶序列;SAM自由基酶也已经成为最大的酶家族之一,数目超过700000个。但利用SAM中3-氨基-3羧基丙基(3-amino-3-carboxypropyl,ACP)的酶却报道相对较少,本文对目前这一类酶的研究进行分类介绍,并对这一领域未来研究方向进行展望。 展开更多

关键词 S-腺苷-L-甲硫氨酸 3-氨基-3-羧基丙基 反应机制 甲基转移酶 非经典SAM自由基酶

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棉花甲基化酶基因COMT和CCoAOMT的组织特异性表达分析 被引量：11

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作者 吕萌 倪志勇 +3 位作者 王娟 李波 罗淑萍 范玲 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期713-719,共7页

本研究利用半定量RT-PCR分析方法探索了陆地棉(Gossypium hirsutum L.)木质素合成途径中甲基化酶基因家族COMT和CCoAOMT在不同组织和不同发育时期纤维中的表达情况。结果表明COMT1,COMT2,COMT3和CCoAOMT1,CCoAOMT2在棉花的7个组织器官(... 本研究利用半定量RT-PCR分析方法探索了陆地棉(Gossypium hirsutum L.)木质素合成途径中甲基化酶基因家族COMT和CCoAOMT在不同组织和不同发育时期纤维中的表达情况。结果表明COMT1,COMT2,COMT3和CCoAOMT1,CCoAOMT2在棉花的7个组织器官(根、茎、叶、子叶、花瓣、雄蕊、胚珠)中都有表达,其中COMT1和CCoAOMT1在各组织中的表达趋势类似,COMT2,COMT3和CCoAOMT2表达趋势各异。在5～25d的棉纤维发育过程中,COMT1和COMT3表达稳定,COMT2表达量逐渐增加。而CCoAOMT基因家族的2个基因的表达量变化相对明显,CCoAOMT1在25d出现表达高峰,CCoAOMT2则在10d和15d呈现高表达量。本研究表明甲基化酶基因家族COMT和CCoAOMT在棉花的根,茎等维管组织中具有相对一致的高表达量,而在其他组织和发育纤维中则呈现出明显的组织特异性和纤维发育时期特异性。 展开更多

关键词 陆地棉 咖啡酸-o-甲基转移酶(COMT) 咖啡酰辅酶A-o-甲基转移酶(CCoAOMT) 反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR) 组织特异性表达

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METTL3介导m6A修饰长链非编码RNA THAP7-AS1表达上调促进肺癌发生的作用及机制研究

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作者 张瑜 王彦宏 刘美 《中国肺癌杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期919-933,共15页

背景与目的肺癌是对人类健康的一大威胁,有关肺癌发生发展的分子机制复杂且知之尚少,探索与肺癌发展相关的分子标志物有利于提高早期诊断和治疗的效果。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)THAP7-AS1已知在胃癌中高表达,但在其... 背景与目的肺癌是对人类健康的一大威胁,有关肺癌发生发展的分子机制复杂且知之尚少,探索与肺癌发展相关的分子标志物有利于提高早期诊断和治疗的效果。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)THAP7-AS1已知在胃癌中高表达,但在其他癌症中研究较少。本研究旨在探究甲基转移酶样3(methyltransferase-like 3,METTL3)介导N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)修饰lncRNA THAP7-AS1表达上调促进肺癌发生的作用及机制。方法收集120例肺癌与对应癌旁组织样本,lncRNA微阵列分析差异表达的lncRNA,实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测肺癌、癌旁组织、肺癌细胞系THAP7-AS1表达,分析THAP7-AS1对肺癌的诊断价值以及其表达水平与肺癌患者生存率、临床病理特征的关系。通过生物信息学分析、甲基化RNA免疫共沉淀(methylated RNA immunoprecipitation,meRIP)、RNA pulldown实验、RIP实验探究THAP7-AS1的分子调节机制;通过MTS、克隆形成、划痕、Transwell、体内异种移植实验测定各组SPC-A-1、NCI-H1299细胞增殖、迁移、侵袭、成瘤能力,Western blot检测磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(phosphoinositide 3-kinase/protein kenase B,PI3K/AKT)信号通路蛋白表达。结果肺癌组织、细胞系THAP7-AS1表达升高(P<0.05),对肺癌具有一定的诊断价值[曲线下面积(area under the curve,AUC)=0.737],其表达水平与患者总生存率、肿瘤大小、肿瘤原发灶-淋巴结-转移(tumor-node-metastasis,TNM)分期、淋巴结转移相关(P<0.05)。METTL3介导的m6A修饰能够增强THAP7-AS1表达。与SPC-A-1、NCI-H1299细胞NC组、sh-NC组相比,THAP7-AS1组增殖、迁移、侵袭能力提高(P<0.05),移植瘤体积、质量增大(P<0.05),sh-THAP7-AS1组增殖、迁移、侵袭能力下降(P<0.05)。THAP7-AS1与Cullin蛋白4B(Cullin 4B,CUL4B)存在特异结合。与SPC-A-1、NCI-H1299细胞Vector组相比,THAP7-AS1组增殖、迁移、侵袭能力、磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶催化亚基α(phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit alpha,PI3KCA)、磷脂酰肌醇-3激酶催化亚基δ(phosphoinositide-3 kinase-catalytic subunit delta,PI3KCD)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(phospho-phosphatidylinositol 3-kinase,p-PI3K)、磷酸蛋白激酶B(phospho-protein kinase B,p-AKT)、磷酸哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphomammalian target of rapamycin,p-mTOR)表达水平升高(P<0.05)。结论LncRNA THAP7-AS1通过METTL3介导的m6A修饰稳定表达,与CUL4B结合激活PI3K/AKT信号通路,促进肺癌发生发展。 展开更多

关键词 甲基转移酶样3 N6-甲基腺苷 长链非编码RNA THAP7-AS1 肺肿瘤 增殖

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