利用同位素标记相对和绝对定量技术筛查神经管畸形胚胎孕鼠血清差异蛋白质谱 被引量：2

1

作者 安东 袁正伟 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期315-319,323,共6页

目的筛查神经管畸形相关血清标记物,为阐明神经管畸形的发病机制提供理论依据。方法应用维甲酸在大鼠神经管闭合的关键期(孕10 d,E10)给药,建立脊柱裂大鼠模型,选取致畸早期孕11、13 d (E11、E13)显性脊柱裂胚胎孕鼠和正常胚胎孕鼠血清... 目的筛查神经管畸形相关血清标记物,为阐明神经管畸形的发病机制提供理论依据。方法应用维甲酸在大鼠神经管闭合的关键期(孕10 d,E10)给药,建立脊柱裂大鼠模型,选取致畸早期孕11、13 d (E11、E13)显性脊柱裂胚胎孕鼠和正常胚胎孕鼠血清各5例,应用同位素标记相对和绝对定量技术(iTRAQ)和液相色谱质谱鉴定技术分析2组蛋白质,定量信息以蛋白的丰度比差异倍数1.5倍以上(P <0.05)为差异蛋白质。结果质谱共得到谱图157 422张,鉴定出390种蛋白质,发现E11维甲酸致畸组与正常对照组差异蛋白40种,E13维甲酸致畸组与正常对照组差异蛋白26种。结论筛选出致畸早期大量神经管畸形和正常孕鼠血清差异蛋白,差异蛋白通过直接或间接相互作用,促进或抑制神经管畸形的发生与发展。 展开更多

关键词 神经管畸形 同位素标记相对和绝对定量技术 蛋白组学

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基于同位素标记相对和绝对定量技术研究藏香猪冷鲜肉冰温保鲜分子机制

2

作者 杨飞艳 辜雪冬 +3 位作者 孙术国 罗章 谢司伟 黄文阳 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第5期46-54,共9页

本研究基于同位素标记相对和绝对定量技术研究冰温-2℃和冷藏4℃条件下,藏香猪冷鲜肉蛋白质组变化及其与微生物指标(菌落总数)、理化品质(总挥发性盐基氮(total volatile base nitrogen,TVB-N)含量、弹性)、蛋白质二级结构(β-折叠和β... 本研究基于同位素标记相对和绝对定量技术研究冰温-2℃和冷藏4℃条件下,藏香猪冷鲜肉蛋白质组变化及其与微生物指标(菌落总数)、理化品质(总挥发性盐基氮(total volatile base nitrogen,TVB-N)含量、弹性)、蛋白质二级结构(β-折叠和β-转角相对含量)变化的关系。结果表明:与4℃贮藏条件相比,-2℃贮藏条件下猪肉菌落总数、TVB-N含量、弹性以及蛋白质二级结构变化速率相对较低。蛋白质组学分析结果表明,在-2℃和4℃贮藏条件下,猪肉中共179个蛋白发生了明显变化,其中,丰度显著差异蛋白143个。-2℃下16 d/0 d和4℃下16 d/0 d相比较有丰度差异蛋白97个,其中共有丰度差异蛋白61个。这些差异蛋白主要涉及结构蛋白、代谢酶、应激蛋白和钙调节蛋白等。差异表达蛋白的表达量与菌落总数、理化品质(TVB-N含量、弹性)、蛋白质二级结构(β-折叠和β-转角相对含量)之间的相关性分析表明,肌球蛋白、原肌球蛋白、钙蛋白酶抑制蛋白表达量均与肉弹性、β-折叠相对含量呈极显著正相关(P<0.01),与菌落总数、TVB-N含量、β-转角相对含量呈显著或极显著负相关(P<0.05,P<0.01),相对于这3类蛋白,热休克蛋白与肉理化品质、蛋白质二级结构呈现相反的相关关系。结论:冰温贮藏能有效抑制腐败微生物增殖和猪肉蛋白质降解,降低藏香猪冷鲜肉TVB-N含量和减少蛋白质二级结构变化,维持肉弹性,进而达到冷鲜肉贮藏保鲜效果。本研究为深入理解冰温保鲜的分子机制、合理设计冰温贮藏条件提供了参考。 展开更多

关键词 藏香猪肉 同位素标记相对和绝对定量 蛋白质组学 品质特征 相关性

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基于同位素相对标记与绝对定量技术结合质谱技术的幼年特发性关节炎血清蛋白质组学研究 被引量：1

3

作者 刘琴 孙红 +1 位作者 余东阳 胡红兵 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第20期2619-2623,共5页

目的应用同位素相对标记与绝对定量技术(iTRAQ)分析幼年特发性关节炎(JIA)患者与健康人群的血清差异蛋白。方法收集JIA患者血清18例、健康体检者20例、类风湿关节炎(RA)患者44例,采用iTRAQ标记联合纳升液相色谱-串联质谱筛选JIA患者的... 目的应用同位素相对标记与绝对定量技术(iTRAQ)分析幼年特发性关节炎(JIA)患者与健康人群的血清差异蛋白。方法收集JIA患者血清18例、健康体检者20例、类风湿关节炎(RA)患者44例,采用iTRAQ标记联合纳升液相色谱-串联质谱筛选JIA患者的差异蛋白,并进行生物信息学分析。结果相对于健康体检组,JIA组共鉴定差异蛋白106个,其中49个表达上调,57个表达下调;JIA组和RA组中有26个差异蛋白均表达上调,37个表达下调。通过GO富集分析和KEGG通路分析,结果表明血液凝溶系统、免疫系统、脂质代谢与JIA的发病机制密切相关。通过STRING分析得到研究JIA机制的PPI网络的关键节点AHSG、APOH、脂联素等多个候选蛋白。结论本研究分析了JIA患者的血清蛋白质组,为JIA的诊断、JIA发病机制的探讨提供了实验依据。 展开更多

关键词 幼年特发性关节炎 蛋白质组学 同位素相对标记与绝对定量技术 质谱技术

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基于稳定同位素标记的蛋白质组学定量方法研究进展 被引量：12

4

作者 周愿 单亦初 +1 位作者 张丽华 张玉奎 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期496-502,共7页

定量蛋白质组学已经成为后基因时代的重要研究方向之一。目前该领域的研究主要采用无标记定量方法和稳定同位素标记定量法。其中,基于稳定同位素标记的蛋白质组定量方法发展非常迅速,已为生命科学研究提供了重要的技术支撑。本文分析了... 定量蛋白质组学已经成为后基因时代的重要研究方向之一。目前该领域的研究主要采用无标记定量方法和稳定同位素标记定量法。其中,基于稳定同位素标记的蛋白质组定量方法发展非常迅速,已为生命科学研究提供了重要的技术支撑。本文分析了基于稳定同位素标记的蛋白质组学定量方法,包括相对定量方法和绝对定量方法,并对其发展进行了展望。 展开更多

关键词 定量蛋白质组学 稳定同位素标记 相对定量 绝对定量

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同位素标签技术在人肾小管上皮细胞蛋白质组学研究中的应用 被引量：1

5

作者 陈永熙 李娅 +5 位作者 张文 陈晓农 王伟铭 张群业 黄秋花 陈楠 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期513-516,共4页

目的建立并优化人肾小管上皮细胞蛋白质组学分析所需的相对和绝对定量的同位素标签试剂(iTRAQ)标记技术,为进一步研究奠定基础。方法将人肾小管上皮细胞株HK-2通过细胞裂解、丙酮沉淀、蛋白变性、还原及酶解,最后进行iTRAQ标记和质谱鉴... 目的建立并优化人肾小管上皮细胞蛋白质组学分析所需的相对和绝对定量的同位素标签试剂(iTRAQ)标记技术,为进一步研究奠定基础。方法将人肾小管上皮细胞株HK-2通过细胞裂解、丙酮沉淀、蛋白变性、还原及酶解,最后进行iTRAQ标记和质谱鉴定,研究iTRAQ在HK-2细胞的标记情况和蛋白质组学。结果通过质谱检测,检测到带有iTRAQ标记肽段。随机选取20个前体离子,通过3次重复试验,鉴定出iTRAQ标记多肽肽段分别为17、15和18个,标记效率在75.5%～90.0%,且组间标记效率差异无统计学意义(P>0.05)。结论iTRAQ可以在HK-2细胞中标记效果满意,且重复性较好,为进一步研究肾脏疾病的蛋白质组学奠定了基础。 展开更多

关键词 相对和绝对定量的同位素标签试剂 定量蛋白质组学 人肾小管上皮细胞

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基于生物质谱的蛋白质组学绝对定量方法研究进展 被引量：12

6

作者 曹冬 张养军 钱小红 《质谱学报》 EI CAS CSCD 2008年第3期185-191,共7页

蛋白质组学定量方法包括相对定量和绝对定量两部分。相对定量蛋白质组学(也称比较蛋白质组学)是指对不同生理病理状态下细胞、组织或体液蛋白质表达量的相对变化进行比较分析;绝对定量蛋白质组学是测定细胞、组织或体液蛋白质组中每种... 蛋白质组学定量方法包括相对定量和绝对定量两部分。相对定量蛋白质组学(也称比较蛋白质组学)是指对不同生理病理状态下细胞、组织或体液蛋白质表达量的相对变化进行比较分析;绝对定量蛋白质组学是测定细胞、组织或体液蛋白质组中每种蛋白质的绝对量或浓度。目前蛋白质组学的绝对定量方法主要有基于内标法的蛋白质组学绝对定量方法和基于质谱数据统计分析的非标记方法。蛋白质组学定量的信息可以帮助了解蛋白质在相互作用网络中所起的作用;通过对临床生物标记物绝对量的分析,可以帮助直观地判断疾病的发生和发展过程,这对于临床诊断和疾病治疗都具有现实的指导意义。 展开更多

关键词 定量蛋白质组 绝对定量 同位素标记法 非标记定量法 生物质谱

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iTRAQ多重化学标记串联质谱技术在生命科学领域中的应用 被引量：3

7

作者 白龙 乌日罕 孟永梅 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2017年第5期1155-1157,共3页

同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)技术—利用多种同位素试剂标记蛋白多肽N末端或赖氨酸侧链基团,经高精度质谱仪串联分析,可同时比较多达8种样品之间的蛋白表达量,是近年来定量... 同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)技术—利用多种同位素试剂标记蛋白多肽N末端或赖氨酸侧链基团,经高精度质谱仪串联分析,可同时比较多达8种样品之间的蛋白表达量,是近年来定量蛋白质组学常用的高通量筛选技术,正迅速被广大学者所接受。主要从iTRAQ实验技术概要、iTRAQ多重化学标记串联质谱技术在生命科学领域中的应用、问题与展望等三个方面进行简要总结。 展开更多

关键词 相对和绝对定量同位素标记(iTRAQ)技术 生命科学

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激光捕获显微切割技术纯化的人支气管上皮癌变各阶段组织的定量蛋白质组学研究 被引量：1

8

作者 曾谷清 程爱兰 +4 位作者 易红 李茂玉 李国庆 李建玲 廖力 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2013年第6期538-547,共10页

为分析支气管上皮癌变进程中的差异表达蛋白质,筛选肺鳞癌早期诊断标志物,以人支气管上皮癌变各阶段组织为研究对象,先采用激光捕获显微切割技术(LCM)纯化人正常支气管上皮组织、鳞状化生、不典型增生、原位癌、浸润性肺鳞癌组织,再用... 为分析支气管上皮癌变进程中的差异表达蛋白质,筛选肺鳞癌早期诊断标志物,以人支气管上皮癌变各阶段组织为研究对象,先采用激光捕获显微切割技术(LCM)纯化人正常支气管上皮组织、鳞状化生、不典型增生、原位癌、浸润性肺鳞癌组织,再用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术结合二维液相色谱串联质谱(2D LC-MS/MS)鉴定支气管上皮癌变进程中各阶段的差异表达蛋白质.结果共鉴定了1 036个蛋白质,筛选出102个与人支气管上皮癌变相关的差异蛋白质,在这些差异蛋白质中,有的在支气管上皮癌变过程中进行性上调,有的在支气管上皮癌变过程中进行性下调,有的呈阶段特异性改变.功能分析表明,这些差异蛋白质涉及代谢、细胞凋亡、增殖、分化、信号传导、转录、翻译、细胞黏附、免疫反应与发育等.Western blotting及免疫组织化学技术验证了其中2个差异蛋白(S100A9和CKB)的表达,证实了定量蛋白质组学结果的可靠性.研究结果提示:这些差异表达蛋白质与支气管上皮癌变相关,并可成为肺鳞癌的早期诊断标志物,进一步研究差异蛋白质的生物学功能,将有助于阐明支气管上皮的癌变机制,从而为肺鳞癌的早期诊断与发病机制研究提供新思路. 展开更多

关键词 人支气管上皮癌变 肺鳞癌 生物标志物 激光捕获显微切割技术 同位素标记相对和绝对定量

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iTRAQ多重化学标记串联质谱技术在蛋白质组学中的应用 被引量：6

9

作者 韩额尔德木图 孟永梅 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2016年第4期795-798,I0003,共5页

i TRAQTM是2004年美国应用生物系统公司(Applied Biosystems Incorporation,ABI)最新推出的一种多肽体外标记试剂,该技术可对复杂样本、细胞器、细胞裂解液等样本进行相对和绝对定量研究,具有较好的定量效果、较高的重复性,并且弥补了D... i TRAQTM是2004年美国应用生物系统公司(Applied Biosystems Incorporation,ABI)最新推出的一种多肽体外标记试剂,该技术可对复杂样本、细胞器、细胞裂解液等样本进行相对和绝对定量研究,具有较好的定量效果、较高的重复性,并且弥补了DIGE及ICAT的不足,正迅速被广大学者所接受。主要从i TRAQ实验原理、实验流程、i TRAQ与其他定量蛋白质组学方法的比较等3个方面进行简要总结。 展开更多

关键词 相对和绝对定量同位素标记(iTRAQ)技术 蛋白质组学

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蛋白质组学实验技术及其应用 被引量：25

10

作者 赵静 王宏伟 +1 位作者 田二杰 周变华 《动物医学进展》 北大核心 2015年第1期116-120,共5页

蛋白质组学是以蛋白质组为研究对象,从整体、动态和定量的角度去研究基因的功能,是后基因组计划的一个重要组成部分。与基因组学相比,蛋白质组学更能从细胞和生命的整体水平上阐明生命现象的本质和活动规律,因此受到了各国学者的高度重... 蛋白质组学是以蛋白质组为研究对象,从整体、动态和定量的角度去研究基因的功能,是后基因组计划的一个重要组成部分。与基因组学相比,蛋白质组学更能从细胞和生命的整体水平上阐明生命现象的本质和活动规律,因此受到了各国学者的高度重视。蛋白组学的发展离不开其相关实验技术的突飞猛进,这些技术不仅可以进行蛋白质的分离和鉴定,还可以进行目的蛋白的筛选和样品的分析,为生命科学领域相关研究提供了新的思路和解决办法。论文主要综述了包括双向电泳、免疫共沉淀、酵母双杂交、蛋白质芯片及同位素标记相对和绝对定量技术等蛋白质组学实验技术的原理及特点,并概述了这些技术在生命科学中的重要应用。 展开更多

关键词 蛋白质组学 双向电泳 酵母双杂交 免疫共沉淀 蛋白质芯片 同位素标记相对和绝对定量技术

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应用iTRAQ技术筛选先天性心脏畸形胎儿母亲血清差异表达蛋白 被引量：6

11

作者 陈骊珠 马巍 +1 位作者 张墨 袁正伟 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期510-514,518,共6页

目的筛选先天性心脏畸形(CHD)母体血清差异表达蛋白质,明确和CHD相关的候选标志物。方法收集40例CHD胎儿(实验组)母亲血清和10例正常胎儿(对照组)母亲血清,其中实验组包括法洛氏四联征10例,室间隔缺损10例,共同动脉干10例,其他少见先天... 目的筛选先天性心脏畸形(CHD)母体血清差异表达蛋白质,明确和CHD相关的候选标志物。方法收集40例CHD胎儿(实验组)母亲血清和10例正常胎儿(对照组)母亲血清,其中实验组包括法洛氏四联征10例,室间隔缺损10例,共同动脉干10例,其他少见先天性心脏畸形10例。每组10例标本等体积混合后,应用同位素标记相对和绝对定量技术(iTRAQ)对蛋白质进行鉴定和相对定量。结果孕妇外周血血清中共鉴定到蛋白质606个,实验组与对照组差异达到1.5倍以上的蛋白质47个,其中23个在实验组中上调,24个在实验组中下调。结论基于i TRAQ技术的蛋白质组学方法能鉴定出多种CHD相关的差异蛋白,CHD发生是一个多种蛋白质分子参与的结果。 展开更多

关键词 同位素标记相对和绝对定量技术 先天性心脏畸形 蛋白质组学 血清标志物 产前诊断

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应用iTRAQ-HPLC-MS技术筛选奶牛脂肪肝病尿液蛋白标志物 被引量：4

12

作者 孙雨航 夏成 +2 位作者 舒适 孙玲伟 徐闯 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期844-852,共9页

应用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术筛选并鉴定脂肪肝病奶牛尿液中的差异表达蛋白,为诊断奶牛脂肪肝病提供新的生物标志物。收集40头奶牛的尿液,分为脂肪肝病组A1、A2和健康对照组B1、B2,每组各10头奶牛。组内每10个样品等量混合... 应用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术筛选并鉴定脂肪肝病奶牛尿液中的差异表达蛋白,为诊断奶牛脂肪肝病提供新的生物标志物。收集40头奶牛的尿液,分为脂肪肝病组A1、A2和健康对照组B1、B2,每组各10头奶牛。组内每10个样品等量混合后进行试验,将符合要求的样品进行iTRAQ标记后利用高效液相色谱法层析,经串联质谱鉴定。共筛选出110个差异表达蛋白,其中50个表达下调,60个表达上调;通过生物信息学分析得到了4个关键性蛋白:玻连蛋白(Vitronectin,VTN)、脂质运载蛋白(Lipocalin,LCN2)、凝血酶原(Prothrombin,F2)和丛集素(Clusterin,CLU)。本试验成功筛选出脂肪肝病奶牛尿液中的差异表达蛋白,并鉴定出其中4种与奶牛脂肪肝病存在密切关系的关键性调节因子,如能进一步证实为奶牛脂肪肝病的重要生物标志物,将会为奶牛脂肪肝病的早期检测和诊断提供新的方法。 展开更多

关键词 同位素标记相对和绝对定量技术 差异表达蛋白 奶牛脂肪肝病 蛋白标志物

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苦马豆素对家兔脾脏免疫功能及代谢的影响

13

作者 赵金香 陶大勇 +3 位作者 杜国丰 张家鸣 沈佳宜 矫继峰 《动物医学进展》 北大核心 2025年第1期74-80,共7页

为了探讨苦马豆素通过消化系统对家兔脾脏免疫功能和代谢的影响,将体重为(1.9±0.12)kg的24只家兔随机分成对照组与试验组,每组雌、雄各半。试验组家兔饲喂含有小花棘豆的自制颗粒饲料,饲喂苦马豆素剂量为2 mg/(kg·d),对照组... 为了探讨苦马豆素通过消化系统对家兔脾脏免疫功能和代谢的影响,将体重为(1.9±0.12)kg的24只家兔随机分成对照组与试验组,每组雌、雄各半。试验组家兔饲喂含有小花棘豆的自制颗粒饲料,饲喂苦马豆素剂量为2 mg/(kg·d),对照组家兔饲喂自制颗粒饲料中不含小花棘豆。所有家兔单笼饲养,自由饮水,每天观测并记录家兔的健康状态。在试验的第60天,采取所有家兔脾脏,对脾脏进行基于iTRAQ的定量蛋白质组学分析、生物信息学分析及关键蛋白质的Western blot验证。结果显示,所有试验组家兔均呈现明显的中毒现象。与对照组相比,共鉴定出315个与新陈代谢(81%)及免疫相关(15%)的差异表达蛋白质(>1.5倍或<1/1.5倍)。而且,苦马豆素中毒家兔脾脏细胞分解代谢处于激活状态,但其免疫反应处于抑制状态。说明苦马豆素抑制了家兔脾脏的免疫功能,激活了脾脏组织的分解代谢。 展开更多

关键词 苦马豆素 小花棘豆 脾脏 同位素标记的相对和绝对定量技术 蛋白质组 免疫 家兔

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基于iTRAQ技术的猪精子释放蛋白Transwell小室分离及差异性分析 被引量：4

14

作者 葛晨玲 李珣 +5 位作者 王晓晔 梁莹莹 陈志英 杜倩 唐胤晟 胡传活 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期29-37,共9页

【目的】探索分离猪附睾头部精子释放蛋白的新方法,确定释放蛋白的功能特点及信号通路。【方法】利用Transwell小室独特的共培养系统,充分利用0.4μm聚碳酸酯膜分离精子释放的蛋白。使用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术分析释放的... 【目的】探索分离猪附睾头部精子释放蛋白的新方法,确定释放蛋白的功能特点及信号通路。【方法】利用Transwell小室独特的共培养系统,充分利用0.4μm聚碳酸酯膜分离精子释放的蛋白。使用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术分析释放的蛋白,对鉴定到的差异蛋白,使用GO数据库描述蛋白功能,运用KEGG数据库Pathway分析,确定差异蛋白最主要的生化代谢途径和信号转导途径,同时用IPR数据库对差异蛋白的结构域进行非冗余分析。【结果】Transwell小室上、下室共鉴定到542种蛋白,其中,464种蛋白表达量显著上调,78种蛋白表达量显著下调。差异蛋白主要参与跨膜转运、离子运输、ATP合成等生物过程。差异蛋白主要参与的信号通路为醛固酮调节的钠盐吸收、囊泡转运、EGFR酪氨酸激酶抑制等。硫氧还蛋白、半乳糖、糖苷水解酶等构成差异蛋白的主要结构域,为蛋白发挥作用提供结构基础。【结论】Transwell小室分离蛋白的方法切实有效,iTRAQ技术在附睾头部精子释放蛋白中成功鉴定出差异蛋白,差异性分析及功能注释为探究差异蛋白参与的生命活动及功能奠定了基础。 展开更多

关键词 附睾 Transwell小室 同位素标记相对和绝对定量技术 差异蛋白

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基于iTRAQ技术筛选肝癌转移相关差异蛋白 被引量：2

15

作者 宋琳岚 杨敏 +4 位作者 蒋小燕 陈瑜 汤慧 颜亮 廖勇 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期983-989,共7页

目的:通过对不同转移潜能的肝癌细胞系的差异蛋白组学研究,以筛选鉴定出与肝癌转移相关的差异表达蛋白。方法:3株具有相同遗传背景、不同转移潜能的肝癌细胞系MHCC97-L、MHCC97-H及HCCLM3作为研究材料,经过收集胞质蛋白,浓缩、酶解、脱... 目的:通过对不同转移潜能的肝癌细胞系的差异蛋白组学研究,以筛选鉴定出与肝癌转移相关的差异表达蛋白。方法:3株具有相同遗传背景、不同转移潜能的肝癌细胞系MHCC97-L、MHCC97-H及HCCLM3作为研究材料,经过收集胞质蛋白,浓缩、酶解、脱盐并用同位素标记相对和绝对定量技术(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)对其进行标记,应用二维液相色谱串联质谱技术对肽段进行鉴定,得到的结果与数据库进行比对,对蛋白进行注释。基于Web Gestalt数据库对差异表达的蛋白进行GO(gene ontology)功能分析和通路分析以筛选与肝癌转移相关的目标蛋白。并用Western blot对3个关键蛋白(PLEC、SHMT2、LDHA)进行验证。结果:经过iTRAQ标记并质谱检测分析,共发现鉴定1 170个蛋白,其中在L/H(MHCC97-L/MHCC9-H)组鉴定发现47个差异表达蛋白,在M/H(HCCLM3/MHCC97-H)组鉴定发现65个差异表达蛋白。生物信息学分析显示L/H和M/H组差异表达的蛋白主要参与酶催化和细胞间粘附及细胞代谢的过程。应用Western blot在蛋白水平上的验证,PLEC在高转移细胞株MHCC97-H和HCCLM3中表达上调,SHMT2在HCCLM3中表达上调,LDHA在MHCC97-H中表达上调。结论:在本研究中应用iTRAQ标记高通量的蛋白质组学技术对3株不同转移潜能的肝癌细胞系的差异表达蛋白进行检测和鉴定分析,发现PLEC和SHMT2蛋白是两种新的与肝癌转移可能相关的蛋白。 展开更多

关键词 肝细胞性肝癌 蛋白组学 同位素标记相对和绝对定量技术 转移

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基于iTRAQ技术的碘难治型甲状腺癌与分化型甲状腺癌的比较蛋白质组学研究 被引量：1

16

作者 李运洁 黄鑫 +1 位作者 邓婕 段东 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第24期2425-2429,共5页

目的寻找碘难治型甲状腺癌和分化型甲状腺癌之间的差异蛋白,探讨碘难治型甲状腺癌发生的机制,探索可能的核素分子治疗靶点。方法收集2018年6月至2019年3月本科收治的碘难治型甲状腺癌和分化型甲状腺癌患者颈部转移淋巴结各3例,利用iTRA... 目的寻找碘难治型甲状腺癌和分化型甲状腺癌之间的差异蛋白,探讨碘难治型甲状腺癌发生的机制,探索可能的核素分子治疗靶点。方法收集2018年6月至2019年3月本科收治的碘难治型甲状腺癌和分化型甲状腺癌患者颈部转移淋巴结各3例,利用iTRAQ技术联合质谱分析得到差异蛋白,并通过生物信息学方法对差异蛋白进行GO功能注释、KEGG通路分析,并利用TCGA、TCPA数据库对部分差异蛋白进行验证。结果鉴定得到的差异蛋白共665个,其中显著上调的蛋白327个,显著下调的蛋白338个。ECM1、CHI3L1、LAMA5、14-3-3 eta、CDC42、RAC2、MYL9等差异蛋白广泛参与肿瘤血管生成、侵袭转移及细胞失分化过程。同时,差异蛋白富集于包括代谢通路、黏着斑及其他多条信号通路。结论碘难治型甲状腺癌和分化型甲状腺癌的差异蛋白较多,其主要功能涉及调节转运体活性及酶活性等,参与细胞代谢等多个生物过程。ECM1、CHI3L1及CDC42通过与MAPK通路中部分蛋白相互作用促进肿瘤发展,可能成为核素治疗的潜在靶点。 展开更多

关键词 碘难治型甲状腺癌 蛋白质组学 同位素标记相对和绝对定量技术

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iTRAQ技术及其在蛋白质组学中的应用 被引量：63

17

作者 谢秀枝 王欣 +3 位作者 刘丽华 董世雷 皮雄娥 刘伟 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期616-621,共6页

近年来随着蛋白质组学的迅速发展,其相应的方法学研究也取得了巨大的进步,一系列新技术融入了蛋白质组学研究中,极大地促进了这门学科的发展.相对和绝对定量同位素标记(iTRAQ)技术与高度敏感性和准确性的串联质谱及多维液相色谱联用技... 近年来随着蛋白质组学的迅速发展,其相应的方法学研究也取得了巨大的进步,一系列新技术融入了蛋白质组学研究中,极大地促进了这门学科的发展.相对和绝对定量同位素标记(iTRAQ)技术与高度敏感性和准确性的串联质谱及多维液相色谱联用技术已成为蛋白质定性和定量研究的主要工具之一.该技术可对复杂样本、细胞器、细胞裂解液等样本进行相对和绝对定量研究,具有较好的定量效果、较高的重复性.由于其能够同时对多达8种样品进行标记分析,故在生命科学的各个领域得到了广泛的应用.本文对iTRAQ的原理、实验流程、优缺点及近几年的应用进展进行综述. 展开更多

关键词 相对和绝对定量同位素标记(iTRAQ)技术 蛋白质组学 串联质谱 多维液相色谱 生物标记物

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利用转录组及iTRAQ技术筛选高油酸油菜抗病相关基因 被引量：4

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作者 张振乾 肖钢 +5 位作者 官春云 邬贤梦 熊兴华 李云昌 胡琼 陈社员 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2015年第5期16-24,共9页

高油酸油菜和低油酸油菜对菌核病的抗性存在显著差异,为了弄清其分子机理,以一组高油酸油菜近等基因系自交授粉后20-35 d的种子为材料,分别进行转录组和同位素相对标记与绝对定量技术分析。分析了与抗病相关的氧化磷酸化、植物激素信号... 高油酸油菜和低油酸油菜对菌核病的抗性存在显著差异,为了弄清其分子机理,以一组高油酸油菜近等基因系自交授粉后20-35 d的种子为材料,分别进行转录组和同位素相对标记与绝对定量技术分析。分析了与抗病相关的氧化磷酸化、植物激素信号转导通路和植物病原体互作3个分类,将注释的基因和蛋白进行关联,并对其中可能与抗病相关的基因进行定量PCR验证。结合前人研究发现,基因表达或蛋白表达发生显著变化的基因gi｜260505503（多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白）、gi｜226346102（HSR203J类蛋白）、gi｜470103214（钙调蛋白类）与抗病相关;而gi｜297843222（结合蛋白）、gi｜18397961（2-铁,2-硫-铁氧化还原类蛋白）、gi｜196052306（还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚基）、gi｜18423437（还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶（辅酶）1α-复形5）和gi｜297794581（激酶家族蛋白）等基因差异显著。 展开更多

关键词 菌核病 高油酸油菜 转录组 同位素相对标记与绝对定量技术 定量PCR

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基于iTRAQ技术的黄连解毒汤对自发性高血压大鼠主动脉差异蛋白的研究 被引量：4

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作者 马晓聪 郑景辉 +3 位作者 赵媚 蔡涛 黄婕 岳桂华 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2019年第9期2109-2112,2311,共5页

目的:基于iTRAQ技术分析黄连解毒汤对自发性高血压大鼠主动脉的作用蛋白,对差异蛋白进行鉴定和生物信息学分析,探讨黄连解毒汤对自发性高血压大鼠主动脉的作用机制。方法:大鼠随机分为模型组和黄连解毒汤组,分别给予相应干预后取大鼠的... 目的:基于iTRAQ技术分析黄连解毒汤对自发性高血压大鼠主动脉的作用蛋白,对差异蛋白进行鉴定和生物信息学分析,探讨黄连解毒汤对自发性高血压大鼠主动脉的作用机制。方法:大鼠随机分为模型组和黄连解毒汤组,分别给予相应干预后取大鼠的主动脉组织。通过iTRAQ方法分析得到差异蛋白,将相关的差异蛋白基因通过DAVID数据库搜索结合GO数据库搜索进行功能注释和富集分析,采用KEGG数据库进行信号转导通路分析,STRING数据库进行蛋白质相互作用分析。结果:共鉴定出56种差异蛋白,生物信息学分析发现,差异蛋白主要参与了26种生物学过程、20种细胞组分、15种分子途径,差异蛋白参与4条信号转导通路,差异蛋白基因的功能主要包括ATP能量代谢、氧气转运、线粒体质子转运ATP合酶,差异蛋白主要富集在氧化磷酸化信号通路上。结论:黄连解毒汤可能通过上调ATP合酶基因蛋白Q6PDU7,P19511,D3ZAF6促进线粒体氧化磷酸化功能达到保护血管的作用。 展开更多

关键词 黄连解毒汤 自发性高血压大鼠 主动脉 同位素相对和绝对定量 生物信息学

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基于iTRAQ技术的采后乙烯利和1-甲基环丙烯处理对茭白线粒体蛋白质表达谱的影响

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作者 江凯 罗海波 +4 位作者 姜丽 周涛 陶明煊 王韦华 郁志芳 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第1期173-181,共9页

利用同位素标记相对和绝对定量(i TRAQ)标记结合二维液相色谱-串联质谱(2D-LC-MS/MS)技术,探索乙烯利(ETH)和1-甲基环丙烯(1-MCP)处理对茭白采后贮藏期间线粒体蛋白质表达谱的影响。共鉴定到1 908个特征肽段≥2的可信蛋白质,与贮藏0 d相... 利用同位素标记相对和绝对定量(i TRAQ)标记结合二维液相色谱-串联质谱(2D-LC-MS/MS)技术,探索乙烯利(ETH)和1-甲基环丙烯(1-MCP)处理对茭白采后贮藏期间线粒体蛋白质表达谱的影响。共鉴定到1 908个特征肽段≥2的可信蛋白质,与贮藏0 d相比,对照、ETH和1-MCP处理的茭白贮藏3 d和6 d共有315个蛋白质具有2. 0倍以上显著差异(P<0. 05)。基因本体(GO)分子功能分析和KEGG通路分析结果显示,茭白采后贮藏3d,代谢途径、次生代谢产物生物合成、氨基酸生物合成、抗菌物质生物合成、碳代谢、光合作用中的碳固定、2-酮酸代谢、精氨酸生物合成、α-亚麻酸代谢、二羧酸代谢相关蛋白质显著富集;贮藏6 d,光合作用中的碳固定、α-亚麻酸代谢和二羧酸代谢途径减弱,丙氨酸-天冬氨酸-谷氨酸代谢、缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸降解和磷酸戊糖途径相关蛋白质显著富集。ETH处理后贮藏3 d,氧化磷酸化以及甘氨酸-丝氨酸-苏氨酸代谢相关蛋白质显著富集;贮藏6 d,丙氨酸-天冬氨酸-谷氨酸代谢、磷酸戊糖途径以及苯丙氨酸-酪氨酸-色氨酸生物合成代谢途径相关蛋白质显著富集。1-MCP处理后贮藏3 d,三羧酸循环、丙氨酸-天冬氨酸-谷氨酸代谢、缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸降解途径相关蛋白质显著富集;贮藏6 d,磷酸戊糖途径、C5支链二元酸代谢、缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸降解、丙氨酸-天冬氨酸-谷氨酸代谢途径相关蛋白质显著富集。以上结果表明,代谢途径、次生代谢产物生物合成、氨基酸生物合成、抗菌物质生物合成、碳代谢、光合作用中的碳固定、2-酮酸代谢、精氨酸生物合成、α-亚麻酸代谢和二羧酸代谢途径等可能与茭白采后衰老有关,三羧酸循环、氧化磷酸化、磷酸戊糖途径、C5支链酸代谢及相关氨基酸代谢途径可能在茭白采后衰老中发挥重要作用。 展开更多

关键词 茭白 线粒体 同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ) 生物信息学 衰老

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