烟草叶绿体转化载体的构建及转基因植株的获得 被引量：13

1

作者 邹竹荣 张中林 +2 位作者 山松 倪丕冲 沈桂芳 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期410-415,共6页

选择烟草叶绿体基因组同源片段rp12-trnH-psbA和trnK-ORF509A,及aadA抗壮观霉素基因,构建烟草叶绿体转化载体pTRZ。制备pTRZ DNA金粉子弹,通过基因枪轰击烟草幼苗叶片,经壮观霉素筛选获得了愈伤组织和转化再生植株。对烟草叶绿体转化植... 选择烟草叶绿体基因组同源片段rp12-trnH-psbA和trnK-ORF509A,及aadA抗壮观霉素基因,构建烟草叶绿体转化载体pTRZ。制备pTRZ DNA金粉子弹,通过基因枪轰击烟草幼苗叶片,经壮观霉素筛选获得了愈伤组织和转化再生植株。对烟草叶绿体转化植株进行PCR和Southern分析,结果证明其中No.13、16、23为整入了外源aadA的叶绿体转基因植株,同时其子代呈现壮观霉素抗性,aadA基因得到稳定遗传。 展开更多

关键词 烟草 叶绿体转化 载体 构建 转基因植株

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甜菜(Beta vulgaris L.)叶绿体转化体系建立及抗虫和抗除草剂植株的获得 被引量：7

2

作者 崔杰 李滨胜 +1 位作者 杨谦 程大友 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1437-1443,共7页

为建立外源基因甜菜叶绿体转化体系,利用分子生物学方法构建了包含有编码苏云金芽孢杆菌晶体蛋白基因Btcry1Ac和编码膦丝菌素乙酰转移酶基因bar的甜菜叶绿体转化载体pSKARBt/bar,以甜菜叶绿体基因组中atpB/rbcL做同源片段,以甜菜叶绿体... 为建立外源基因甜菜叶绿体转化体系,利用分子生物学方法构建了包含有编码苏云金芽孢杆菌晶体蛋白基因Btcry1Ac和编码膦丝菌素乙酰转移酶基因bar的甜菜叶绿体转化载体pSKARBt/bar,以甜菜叶绿体基因组中atpB/rbcL做同源片段,以甜菜叶绿体16S启动子和终止子为调控基因,以bar基因为筛选标记基因.基因枪法转化甜菜叶柄,经筛选获得抗性转基因植株.对转基因植株进行外源基因Btcry1Ac和bar的PCR检测、DNA印迹分析,结果表明:外源基因Btcry1Ac和bar确已导入到甜菜叶绿体基因组中.转基因植株除草剂抗性鉴定及其离体叶片虫试鉴定结果表明:转基因植株具有较强的杀虫活性和抗除草剂特性,表达了相应的蛋白质.研究结果还表明:bar基因在植物叶绿体转化中,既可以用作抗性基因,又可用作转化体筛选的标记基因.建立了甜菜叶绿体转化体系. 展开更多

关键词 甜菜 叶绿体转化 成基因 BAR基因 同质化

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GFP叶绿体转化烟草茎叶降解对土壤微生物数量及土壤酶活性的影响 被引量：5

3

作者 余建平 吕月萍 +2 位作者 刘佳莉 刘庆国 郭长虹 《农业环境科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期508-512,共5页

以GFP叶绿体转基因烟草及对照烟草(非转基因烟草)为材料,在实验室条件下研究了叶绿体转基因烟草及对照烟草(非转基因烟草)在茎叶降解过程中及完全降解后对土壤微生物主要类群(细菌、真菌、放线菌)的影响,并对相关的土壤酶活性进行了分... 以GFP叶绿体转基因烟草及对照烟草(非转基因烟草)为材料,在实验室条件下研究了叶绿体转基因烟草及对照烟草(非转基因烟草)在茎叶降解过程中及完全降解后对土壤微生物主要类群(细菌、真菌、放线菌)的影响,并对相关的土壤酶活性进行了分析。结果表明,在烟草茎叶降解过程中及完全降解后:(1)叶绿体转基因烟草及对照烟草(非转基因烟草)对微生物的数量影响不显著;(2)土壤微生物总量相比为细菌>放线菌>真菌;(3)叶绿体转基因烟草茎叶降解对土壤酶活性没有显著影响;(4)GFP基因没有水平转移到土壤微生物基因组中。以上结果显示GFP叶绿体转化烟草茎叶降解对土壤微生物数量及土壤酶活性没有显著的影响。 展开更多

关键词 叶绿体转化烟草 根际微生物 茎叶降解 GFP基因 土壤酶

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叶绿体转化体系研究进展 被引量：6

4

作者 王金辉 李轶女 +3 位作者 倪丕冲 王国增 张志芳 沈桂芳 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期1-6,共6页

叶绿体转化具有表达效率高,安全性高,遗传稳定,以及多基因可以同时转化等特点。真核或原核的外源基因都能在叶绿体中进行成功表达,至少有20种植物成功的进行了叶绿体转化。叶绿体作为生物反应器具有广阔的应用前景。

关键词 叶绿体转化 物种 叶绿体 生物反应器

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叶绿体转化及其应用于作物改良研究的最新进展 被引量：7

5

作者 巩智刚 周海鹏 +2 位作者 徐芳 韩晓玲 王玉华 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期288-294,共7页

农杆菌介导的核基因转化技术已普遍应用于作物改良和分子育种方面,而其不可避免的转基因沉默现象和生物安全问题是科研工作者和广大民众关注的焦点,进而成为基因工程技术广泛应用的主要限制因素。叶绿体遗传转化技术因具有核转化不可比... 农杆菌介导的核基因转化技术已普遍应用于作物改良和分子育种方面,而其不可避免的转基因沉默现象和生物安全问题是科研工作者和广大民众关注的焦点,进而成为基因工程技术广泛应用的主要限制因素。叶绿体遗传转化技术因具有核转化不可比拟的独特优势,成为植物基因工程发展的新方向和科研工作者研究的热点之一,通过该技术有望培育出真正生物安全的转基因作物新品种。本文围绕叶绿体转化的原理、方法、筛选标记及其应用等方面进行阐述,着重介绍其在作物改良方面研究的最新进展,并对存在问题及应用前景进行了展望。 展开更多

关键词 叶绿体转化 基因工程 作物改良

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将IL-2基因构建到叶绿体转化载体并转入烟草 被引量：2

6

作者 黄益洪 刘蔼民 +5 位作者 汤日圣 张大栋 童红玉 朱鑫泉 沙钟瑞 吴光南 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2006年第4期379-383,共5页

以人白细胞介素2（IL-2）基因为目的基因，烟草accD和ORF184同源序列为侧翼引导序列构建成烟草叶绿体转化载体pAIL。以火烟草NC89为转化受体，通过基因枪方法对烟草叶片进行轰击转化。轰击参数为：每枪0．6μm的金粉300～500μg，轰击距... 以人白细胞介素2（IL-2）基因为目的基因，烟草accD和ORF184同源序列为侧翼引导序列构建成烟草叶绿体转化载体pAIL。以火烟草NC89为转化受体，通过基因枪方法对烟草叶片进行轰击转化。轰击参数为：每枪0．6μm的金粉300～500μg，轰击距离6cm，真空度9．48×10^4Pa。在500mg/L的壮观霉素筛选眶下，经约30d的筛选分化，逐渐产牛绿色的抗壮观霉素芽或愈伤，目前已获得31株（丛）抗性芽及8块抗性愈伤。用IL-2基因的PCR引物对4株较大的小苗进行检测，初步证明3株为转基因植株。 展开更多

关键词 烟草 叶绿体转化 壮观霉素 人白细胞介素2基因

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杜氏盐藻叶绿体转化载体pchlN-CAT-BAR的构建 被引量：1

7

作者 曾磊 潘卫东 +1 位作者 王翠 薛乐勋 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2010年第6期897-901,共5页

目的:利用同源重组方法将外源选择标记基因转入杜氏盐藻叶绿体中并表达。方法:以光非依赖性的原叶绿素酸酯还原酶chlN基因为同源片段,以氯霉素乙酰转移酶(cat)基因和除草剂草丁膦(PPT)抗性bar基因为选择标记,构建盐藻叶绿体转化载体pchl... 目的:利用同源重组方法将外源选择标记基因转入杜氏盐藻叶绿体中并表达。方法:以光非依赖性的原叶绿素酸酯还原酶chlN基因为同源片段,以氯霉素乙酰转移酶(cat)基因和除草剂草丁膦(PPT)抗性bar基因为选择标记,构建盐藻叶绿体转化载体pchlN-CAT-BAR,并通过基因枪法转入野生型盐藻细胞,筛选转化藻株。对转化株和野生对照组的细胞计数结果进行统计学分析。结果:在200mg/L氯霉素的选择下,野生型盐藻12d左右死亡,转化藻仍正常生长,再经4mg/LPPT继代筛选3～5代,得到表达氯霉素和PPT抗性的盐藻转化株。盐藻转化株和野生株1个月内藻株生长差异有统计学意义(P<0.05)。结论:以chlN基因作为同源片段构建盐藻叶绿体转化载体是可行的。 展开更多

关键词 杜氏盐藻 叶绿体转化 chlN基因

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aadA叶绿体转化烟草对根际微土壤生物的影响

8

作者 郭长虹 刘庆国 +3 位作者 刘佳莉 束永俊 吕月萍 余建平 《哈尔滨工业大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第4期141-144,共4页

为研究叶绿体转基因烟草对土壤根际微生物的影响,以aadA叶绿体转基因烟草和对照烟草为实验材料,对苗期、花期、成熟期烟草根际细菌、放线菌及真菌的菌落数进行统计,利用Biolog法分析微生物群落功能多样性.结果表明:在相同生育期,aadA叶... 为研究叶绿体转基因烟草对土壤根际微生物的影响,以aadA叶绿体转基因烟草和对照烟草为实验材料,对苗期、花期、成熟期烟草根际细菌、放线菌及真菌的菌落数进行统计,利用Biolog法分析微生物群落功能多样性.结果表明:在相同生育期,aadA叶绿体转基因烟草与对照烟草相比,根际土壤细菌、放线菌及真菌数量均无显著差异;根际土壤微生物群落的代谢相似,转基因烟草对微生物群落功能的影响不显著.aadA叶绿体转基因烟草没有对土壤微生物数量和功能多样性产生显著的影响. 展开更多

关键词 叶绿体转化烟草 根际微生物 Biolog法 aadA基因

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叶绿体转化三角褐指藻表达外源蛋白 被引量：3

9

作者 朱聪聪 张乃升 +4 位作者 谢伟红 牛莹芳 杨维东 刘洁生 李宏业 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期267-272,共6页

为建立三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)叶绿体表达体系,从其叶绿体基因组中克隆了rns-trnI、trnA-rnl序列作为遗传转化同源重组序列,并以氯霉素抗性基因(CAT)表达盒作为筛选标记,以及绿色荧光蛋白基因(GFP)表达盒作为报告基因。... 为建立三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)叶绿体表达体系,从其叶绿体基因组中克隆了rns-trnI、trnA-rnl序列作为遗传转化同源重组序列,并以氯霉素抗性基因(CAT)表达盒作为筛选标记,以及绿色荧光蛋白基因(GFP)表达盒作为报告基因。以TA克隆载体pMD19-T为基础,将CAT表达盒以及GFP表达盒连接到rns-trnI/trnA-rnl两个同源重组片段之间,构建得到含有报告基因GFP表达盒的三角褐指藻叶绿体表达载体,利用电穿孔法将载体导入三角褐指藻叶绿体。对转化藻进行抗性筛选以及报告基因的检测,结果表明,外源基因CAT在转化藻中得到表达并提供抗性,报告基因GFP成功地在叶绿体中表达。 展开更多

关键词 三角褐指藻 叶绿体转化 同源重组 电穿孔法

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叶绿体转化素对西瓜育苗控高及缓苗的影响

10

作者 庞法松 王光锋 +3 位作者 甘良 孙志伟 孙利利 徐志豪 《浙江农业科学》 2017年第2期218-220,223,共4页

通过西瓜幼苗叶面喷施不同浓度叶绿体转化素,分析叶绿体转化素对西瓜幼苗茎粗、株高、第2片真叶大小及移栽后开花结果的影响。结果表明,利用0.50 g·L^(-1)叶绿体转化素比多效唑5 mg·L^(-1)有更好的控制穴盘西瓜苗徒长的效果,... 通过西瓜幼苗叶面喷施不同浓度叶绿体转化素,分析叶绿体转化素对西瓜幼苗茎粗、株高、第2片真叶大小及移栽后开花结果的影响。结果表明,利用0.50 g·L^(-1)叶绿体转化素比多效唑5 mg·L^(-1)有更好的控制穴盘西瓜苗徒长的效果,使叶片明显增厚变硬,叶色更浓绿,且移栽后对植株缓苗和果实的品质均没有影响,产量也更高。 展开更多

关键词 叶绿体转化素 西瓜育苗 控高

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杜氏盐藻叶绿体转化载体pUC-chlN 1622-CAT的构建

11

作者 张汇征 崔柳青 +1 位作者 潘卫东 薛乐勋 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2013年第1期20-24,共5页

目的:构建杜氏盐藻叶绿体转化载体pUC-chlN1622-氯霉素乙酰转移酶(CAT)。方法:以光非依赖性的原叶绿素酸酯还原酶chlN基因为同源片段,以CAT抗性基因为选择标记,构建盐藻叶绿体转化载体pUC-chlN1622-CAT,并通过电击法转入野生型盐藻细胞... 目的:构建杜氏盐藻叶绿体转化载体pUC-chlN1622-氯霉素乙酰转移酶(CAT)。方法:以光非依赖性的原叶绿素酸酯还原酶chlN基因为同源片段,以CAT抗性基因为选择标记,构建盐藻叶绿体转化载体pUC-chlN1622-CAT,并通过电击法转入野生型盐藻细胞,筛选转化藻株。结果:在氯霉素浓度为300mg/L的选择压力下,野生型盐藻10d左右死亡,转化藻仍正常生长,得到表达氯霉素抗性的盐藻转化株。结论:以chlN基因作为同源片段构建盐藻叶绿体转化载体是可行的。 展开更多

关键词 杜氏盐藻 叶绿体转化 chlN基因

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油菜叶绿体定点转化载体的构建及其杀虫性 被引量：14

12

作者 侯丙凯 张中林 +3 位作者 周奕华 章银梅 沈桂芳 陈正华 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2000年第7期5-11,共7页

首先从油菜叶绿体基因组克隆得到包含rps7基因在内的 1.0kbDNA片段和包含ndhB基因在内的 2 .4kbDNA片段 ,同时从苏云金芽孢杆菌质粒上克隆得到一个全长 3.5kb的Bt杀虫蛋白基因cry1Aa。然后以rps7和ndhB基因作为同源重组片段 ,成功构建... 首先从油菜叶绿体基因组克隆得到包含rps7基因在内的 1.0kbDNA片段和包含ndhB基因在内的 2 .4kbDNA片段 ,同时从苏云金芽孢杆菌质粒上克隆得到一个全长 3.5kb的Bt杀虫蛋白基因cry1Aa。然后以rps7和ndhB基因作为同源重组片段 ,成功构建了包含Bt杀虫蛋白基因和aadA抗壮观霉素基因的油菜叶绿体定点转化载体 ,并对克隆菌体总蛋白进行了生物杀虫试验。结果表明 ,Bt杀虫蛋白基因能够得到表达 ,并且对棉铃虫幼虫有很强的毒杀作用。含抗虫基因的油菜叶绿体转化载体的构建在国内外为首次报告 。 展开更多

关键词 油菜 叶绿体转化 载体构建 杀虫试验

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用于叶绿体基因组转化的马铃薯高效再生体系的建立 被引量：5

13

作者 丁玉梅 杨正安 +3 位作者 吴毅歆 周晓罡 张绍松 孙茂林 《西南农业学报》 CSCD 2006年第B09期98-102,共5页

云南马铃薯不同品种、不同外植体类型的植株再生能力差异极大。阿诗洋芋、K-18、287、丽薯3号、丽薯4号和紫依的分化率较低，在0-27．8％。多数品种带叶柄的叶片再生能力大于叶盘，茎段分化率最低。会-2是最易诱导植株再生的品种，不同... 云南马铃薯不同品种、不同外植体类型的植株再生能力差异极大。阿诗洋芋、K-18、287、丽薯3号、丽薯4号和紫依的分化率较低，在0-27．8％。多数品种带叶柄的叶片再生能力大于叶盘，茎段分化率最低。会-2是最易诱导植株再生的品种，不同外植体的分化率在20．8％-92．2％，叶盘分化率最高，达92．9％，且平均分化芽数达8．2个，适合于会-2的壮观霉素浓度为100mg／L。筛选出了用于叶绿体转化的马铃薯会-2的高效再生体系和壮观霉素浓度，为Bt基因导入马铃薯叶绿体基因组奠定了基础。 展开更多

关键词 马铃薯 植株再生 叶绿体转化 外植体

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苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白基因克隆及油菜叶绿体遗传转化研究 被引量：30

14

作者 侯丙凯 陈正华 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期39-40,共2页

关键词 苏云金芽孢杆菌 油菜 杀虫晶体蛋白基因 叶绿体转化

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Bt基因转入烟草叶绿体获得转化植株的研究 被引量：4

15

作者 丁玉梅 杨正安 +2 位作者 周晓罡 张绍松 孙茂林 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第S1期189-192,共4页

构建了苏云金杆菌晶体毒蛋白基因Cry1Ab的烟草叶绿体表达载体pCTBt,该载体以烟草叶绿体基因组trnI-trnA为同源重组片段,含有壮观霉素抗性筛选标记基因aadA、质体特异性启动子Prrn和终止子TpsbA.利用基因枪转化法,将pCTBt导入栽培烟草红... 构建了苏云金杆菌晶体毒蛋白基因Cry1Ab的烟草叶绿体表达载体pCTBt,该载体以烟草叶绿体基因组trnI-trnA为同源重组片段,含有壮观霉素抗性筛选标记基因aadA、质体特异性启动子Prrn和终止子TpsbA.利用基因枪转化法,将pCTBt导入栽培烟草红花大金元叶绿体,经过4次继代筛选,获得9个抗壮观霉素的转化株系,转化频率为0.3～0.6株/枪,其中有5个株系PCR检测结果为阳性,初步确定Cry1Ab基因已整合到烟草叶绿体中.转基因烟草抗斜纹夜蛾试验表明,幼虫死亡率为10%～75%,转基因烟草植株具有较好的杀虫活性. 展开更多

关键词 CRY1AB基因 烟草 叶绿体转化 转基因植株

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phaG和phaC基因在烟草叶绿体中的转化及其遗传分析 被引量：1

16

作者 王玉华 吴忠义 +3 位作者 张秀海 王永勤 黄丛林 贾敬芬 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1949-1957,共9页

中长链羟基脂肪酸聚酯(medium-chain-length-PHAs,mcl-PHAs)属于微生物聚酯。羟酰-CoA-ACP-转移酶和II型PHA合酶是mcl-PHAs生物合成途径中的两个关键酶。将编码羟酰-CoA-ACP-转移酶的基因phaG与水稻叶绿体psbA基因的启动子和终止子连接... 中长链羟基脂肪酸聚酯(medium-chain-length-PHAs,mcl-PHAs)属于微生物聚酯。羟酰-CoA-ACP-转移酶和II型PHA合酶是mcl-PHAs生物合成途径中的两个关键酶。将编码羟酰-CoA-ACP-转移酶的基因phaG与水稻叶绿体psbA基因的启动子和终止子连接构建表达盒RpsbA-pro-phaG-RpsbA-ter,将II型PHA合酶的基因phaC与水稻叶绿体16SrRNA基因的强启动子Prrn及rbcL基因的终止子连接构建表达盒prrn-phaC-RrbcL-ter,连同壮观霉素抗性基因aadA表达盒prrn-aadA-TpsbA-ter一起克隆进烟草叶绿体基因组同源片段rbcL和accD之间,得到烟草叶绿体表达载体pTGC。用包裹有质粒pTGC的金粉子弹轰击烟草无菌苗叶片,经壮观霉素筛选后获得6株叶绿体型转基因植株。对T0代和T1代转基因植株进行PCR检测和Southern blot分析表明,外源基因已整合进烟草叶绿体基因组中,且T1代转基因植株已同质化。RT-PCR分析结果证实外源基因已在转录水平上表达。转基因植株的自交及正反交结果表明,外源基因在转基因后代中能够稳定遗传,遗传方式遵循母性遗传规律,不存在转基因的花粉漂移现象。 展开更多

关键词 烟草 叶绿体转化 phaG和phaC 遗传分析

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两段杨树叶绿体DNA片段的克隆及叶绿体定点转化载体的构建 被引量：3

17

作者 周奕华 石东乔 +6 位作者 侯丙凯 肖宇红 张中林 张丽华 沈桂芳 胡赞民 陈正华 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2001年第9期6-12,共7页

利用PCR方法 ,从毛白杨 (PopulustomentosaC .)叶绿体基因组中克隆了 1.7kb和 1.6kb的相邻DNA片段 ,对其进行序列分析表明 ,扩增片段分别具有 176 6个和 16 0 1个核苷酸 ,前者包括 3’rps12 ,rps7基因的编码区及其边界序列 ,后者包含ndh... 利用PCR方法 ,从毛白杨 (PopulustomentosaC .)叶绿体基因组中克隆了 1.7kb和 1.6kb的相邻DNA片段 ,对其进行序列分析表明 ,扩增片段分别具有 176 6个和 16 0 1个核苷酸 ,前者包括 3’rps12 ,rps7基因的编码区及其边界序列 ,后者包含ndhB基因的第一外显子和内含子。本文还构建了杨树这两个片段的限制酶切图谱 ,并以这两个相邻片段为同源重组片段 ,分别将绿色荧光蛋白 (GFP)基因和苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白 (Bt)基因 ,及其原核表达框插入其间 ,构建了杨树叶绿体定点转化载体pPZG和 pPZB。这两个特异性载体将定位整合到杨树叶绿体基因组中反向重复区的rps7和ndhB基因的间隔区 ,并高效表达GFP和Bt基因。迄今为止 ,本文所报道的内容在国内。 展开更多

关键词 杨树 叶绿体定点转化 绿化荧光蛋白基因 苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白基因 植物基因工程 基因克隆 载体构建 遗传改良

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叶绿体遗传转化系统及其应用进展 被引量：3

18

作者 刘佳音 李儒剑 +4 位作者 齐双慧 孙艳君 尹晓佳 米铁柱 李继明 《安徽农业科学》 CAS 2020年第6期16-19,共4页

叶绿体遗传转化系统是独立于细胞核遗传转化系统之外的转化系统,为植物导入外源基因提供了新的途径。叶绿体转化具有细胞核转化所没有的优点,随着叶绿体遗传转化技术的发展及应用,其优越性也逐渐得到认同。从叶绿体转化系统的原理、发... 叶绿体遗传转化系统是独立于细胞核遗传转化系统之外的转化系统,为植物导入外源基因提供了新的途径。叶绿体转化具有细胞核转化所没有的优点,随着叶绿体遗传转化技术的发展及应用,其优越性也逐渐得到认同。从叶绿体转化系统的原理、发展历程、特点以及叶绿体转化的方法及其应用领域等方面进行总结,并对其未来的研究进行展望。 展开更多

关键词 叶绿体遗传转化 基因枪 母系遗传 定点整合

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丙肝病毒融合抗原基因NS_3-C定点整合入衣藻叶绿体基因组的研究 被引量：21

19

作者 张中林 山松 +4 位作者 陈曦 苏宁 吴祥甫 钱凯先 沈桂芳 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 1999年第6期1-6,共6页

用ＰＣＲ 方法从丙型肝炎病毒（ＨＣＶ） ｃＤＮＡ 文库中克隆了两段ＤＮＡ 片段，即ＨＣＶ 基因组非结构ＮＳ３区抗原基因（约０．７ ｋｂ）和核心抗原Ｃ区抗原基因（约０．６ ｋｂ）的ｃＤＮＡ 片段。在两段ｃＤＮＡ 间加入连接肽Ｓ... 用ＰＣＲ 方法从丙型肝炎病毒（ＨＣＶ） ｃＤＮＡ 文库中克隆了两段ＤＮＡ 片段，即ＨＣＶ 基因组非结构ＮＳ３区抗原基因（约０．７ ｋｂ）和核心抗原Ｃ区抗原基因（约０．６ ｋｂ）的ｃＤＮＡ 片段。在两段ｃＤＮＡ 间加入连接肽Ｓｅｒ－ Ｐｒｏ－ Ｇｌｙ－ Ｓｅｒ 的密码子序列，构建成融合抗原基因ＮＳ３－ Ｃ。将该融合基因与衣藻叶绿体基因ａｔｐＡ 的启动子和ｒｂｃＬ 基因的３′末端连接，得到丙肝病毒融合抗原基因ＮＳ３－ Ｃ表达盒，再将该表达盒与选择标记基因ａａｄＡ 表达盒和衣藻叶绿体基因组同源片段连接，构建成衣藻叶绿体转化载体ｐＳＳ６。基因枪法转化衣藻叶绿体，经壮观霉素筛选获得转化再生的单藻落，对转基因衣藻的ＰＣＲ 和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交分析表明，融合抗原基因ＮＳ３－ Ｃ已整合到衣藻叶绿体基因组中。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 基因融合 叶绿体转化 aadA基因 衣藻

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叶绿体基因工程简介 被引量：23

20

作者 李宏韬 赵淑青 +1 位作者 赵彦修 张慧 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期495-498,共4页

叶绿体是植物细胞中一种特殊的细胞器。自1988年开始,人们认识到叶绿体在植物基因工程中的特殊地位。叶绿体基因工程的特点,特别是其高效表达和安全性,使其受到越来越多的重视,本文对叶绿体转化作了较为全面的介绍,包括其优势、方法、... 叶绿体是植物细胞中一种特殊的细胞器。自1988年开始,人们认识到叶绿体在植物基因工程中的特殊地位。叶绿体基因工程的特点,特别是其高效表达和安全性,使其受到越来越多的重视,本文对叶绿体转化作了较为全面的介绍,包括其优势、方法、用途及不足等内容。 展开更多

关键词 植物基因组工程 核转化 叶绿体 叶绿体转化 叶绿体基因组

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