晚期糖基化终产物受体(the receptor for advanced gly-cation end products,RAGE)属于免疫球蛋白家族。在中枢神经系统,RAGE主要在神经元、小胶质细胞及血管内皮细胞上表达。阿尔采末病(Alzheimers disease,AD)人脑中RAGE的表达可被β...晚期糖基化终产物受体(the receptor for advanced gly-cation end products,RAGE)属于免疫球蛋白家族。在中枢神经系统,RAGE主要在神经元、小胶质细胞及血管内皮细胞上表达。阿尔采末病(Alzheimers disease,AD)人脑中RAGE的表达可被β淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)上调,上调的RAGE进一步促进了AD的发展。神经元、小胶质细胞和血管内皮细胞膜上RAGE和Aβ结合,引起神经元毒性、持久性的炎症反应、血管功能紊乱。对RAGE-Aβ作用机制的深入理解,可为AD的临床治疗提供理论基础。展开更多
目的观察在体大鼠心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)及离体培养心肌细胞单纯缺氧(hypoxia,H)或缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤时,血浆或培养基中可溶性糖基化终末产物受体(soluble receptor for advanced glycation...目的观察在体大鼠心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)及离体培养心肌细胞单纯缺氧(hypoxia,H)或缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤时,血浆或培养基中可溶性糖基化终末产物受体(soluble receptor for advanced glycationend-products,sRAGE)含量的变化,了解缺血/再灌注对内源性sRAGE的影响。方法采取结扎冠状动脉左前降支的方法复制在体大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型,分别测定缺血前10 min(BI-10)、缺血45 min时(I-45)、再灌注60 min时(R-60)、再灌注120min时(R-120)和再灌注180 min时(R-180)的左室功能指标,包括心率(heart rate,HR)、左室收缩末压(left ventricular end systolicpressure,LVESP)、左室内压最大上升/下降速率(the maximum rate change of left ventricular pressure,±LVdp/dtmax);采用TTC染色法测定心肌梗死范围;采用酶联试剂盒测定血浆sRAGE浓度。培养乳鼠心肌细胞,复制缺氧/复氧损伤(H/R)模型,测定培养基sRAGE浓度和应用比色法测定乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活力。结果与假手术(sham)组相比较,I/R组I-45、R-60、R-120、R-180各时间点的HR、LVESP、±LVdp/dtmax均降低;在I/R组内,与BI-10相比,I-45、R-60、R-120、R-180各时点的sRAGE含量均降低。与control组相比,离体心肌细胞H(H/R)组的sRAGE含量差异无统计学意义。结论 I/R损伤血浆sRAGE含量降低,这可能与心肌缺血/再灌注损伤有关;而内源性sRAGE改变可能不是心肌细胞源性的。展开更多
目的糖尿病患者结肠癌的发病率显著高于非糖尿病人群,晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)在糖尿病患者体内生成明显增多。文中观察AGEs对人结肠癌细胞SW-480增殖的影响及其机制。方法体外培养人结肠癌细胞SW-480,...目的糖尿病患者结肠癌的发病率显著高于非糖尿病人群,晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)在糖尿病患者体内生成明显增多。文中观察AGEs对人结肠癌细胞SW-480增殖的影响及其机制。方法体外培养人结肠癌细胞SW-480,以终浓度分别为100μg/ml、200μg/ml、500μg/ml的AGE-BSA处理细胞24h,并设正常对照组和BSA对照组进行比较。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测SW-480细胞活力,利用流式细胞术检测细胞周期的改变,实时荧光定量PCR测定晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)mRNA、细胞周期素D1(cyclin D1)mRNA的表达。结果①MTT结果示100μg/ml、200μg/ml、500μg/mlAGE-BSA作用SW-480细胞24 h后可以显著促进细胞增殖(P<0.05),并呈浓度依赖性。②流式细胞术结果示200μg/mlAGE-BSA干预组24 h后可以减少SW-480细胞G1期百分率,同时增加S期百分率,与正常对照组比较具有统计学差异(P<0.05)。③实时荧光定量PCR结果示与正常对照组相比,200μg/mlAGE-BSA干预后可以上调RAGEmRNA和cyclin D1 mRNA的表达(P<0.05)。结论 AGEs能促进SW-480细胞的增殖,其机制可能与上调RAGEmRNA和cyclin D1 mRNA的表达,加速细胞G1期向S期转换相关。展开更多
目的构建晚期糖基化终产物受体(receptor for ad-vanced glycation end-product,RAGE)胞外段基因的原核表达载体并诱导表达,应用噬菌体展示技术筛选其相互作用蛋白。方法用RT-PCR方法扩增人RAGE胞外段cDNA,构建于原核表达载体pET14b,转...目的构建晚期糖基化终产物受体(receptor for ad-vanced glycation end-product,RAGE)胞外段基因的原核表达载体并诱导表达,应用噬菌体展示技术筛选其相互作用蛋白。方法用RT-PCR方法扩增人RAGE胞外段cDNA,构建于原核表达载体pET14b,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导RAGE胞外段融合蛋白表达,用Ni2+-NTA亲和层析柱进行纯化并行Western blot鉴定。以重组RAGE胞外段蛋白为靶分子,进行3轮噬菌体展示环七肽库的筛选,从第3轮洗脱物中随机挑选分隔良好的噬菌体克隆扩增后进行ELISA鉴定。对获得的阳性噬菌体克隆分别进行扩增、纯化,提取DNA测序后翻译为氨基酸序列,用BLAST软件搜索Gen-Bank中的同源序列。结果成功构建并表达、纯化了RAGE胞外段融合蛋白。经过3轮筛选后,随机挑取的24个噬菌体克隆中11个可与RAGE胞外段结合。对11个噬菌体测序后用BLAST软件搜索同源序列,得到14个编码蛋白。结论应用噬菌体展示技术筛选到与RAGE胞外段相互作用的蛋白,为进一步研究其功能和作用机制提供新线索。展开更多
文摘晚期糖基化终产物受体(the receptor for advanced gly-cation end products,RAGE)属于免疫球蛋白家族。在中枢神经系统,RAGE主要在神经元、小胶质细胞及血管内皮细胞上表达。阿尔采末病(Alzheimers disease,AD)人脑中RAGE的表达可被β淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)上调,上调的RAGE进一步促进了AD的发展。神经元、小胶质细胞和血管内皮细胞膜上RAGE和Aβ结合,引起神经元毒性、持久性的炎症反应、血管功能紊乱。对RAGE-Aβ作用机制的深入理解,可为AD的临床治疗提供理论基础。
文摘目的观察在体大鼠心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)及离体培养心肌细胞单纯缺氧(hypoxia,H)或缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤时,血浆或培养基中可溶性糖基化终末产物受体(soluble receptor for advanced glycationend-products,sRAGE)含量的变化,了解缺血/再灌注对内源性sRAGE的影响。方法采取结扎冠状动脉左前降支的方法复制在体大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型,分别测定缺血前10 min(BI-10)、缺血45 min时(I-45)、再灌注60 min时(R-60)、再灌注120min时(R-120)和再灌注180 min时(R-180)的左室功能指标,包括心率(heart rate,HR)、左室收缩末压(left ventricular end systolicpressure,LVESP)、左室内压最大上升/下降速率(the maximum rate change of left ventricular pressure,±LVdp/dtmax);采用TTC染色法测定心肌梗死范围;采用酶联试剂盒测定血浆sRAGE浓度。培养乳鼠心肌细胞,复制缺氧/复氧损伤(H/R)模型,测定培养基sRAGE浓度和应用比色法测定乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活力。结果与假手术(sham)组相比较,I/R组I-45、R-60、R-120、R-180各时间点的HR、LVESP、±LVdp/dtmax均降低;在I/R组内,与BI-10相比,I-45、R-60、R-120、R-180各时点的sRAGE含量均降低。与control组相比,离体心肌细胞H(H/R)组的sRAGE含量差异无统计学意义。结论 I/R损伤血浆sRAGE含量降低,这可能与心肌缺血/再灌注损伤有关;而内源性sRAGE改变可能不是心肌细胞源性的。
