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我校研制的“口服重组幽门螺杆菌疫苗”获国家一类新药证书
1
《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第13期1308-1308,共1页
关键词 口服重组幽门螺杆菌疫苗 国家食品药品监督管理局 证书 新药 研制 幽门螺杆菌感染 新闻发布会 国家科技部
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BALB/c小鼠口服重组幽门螺杆菌热休克蛋白A疫苗的免疫应答 被引量：4
2
作者 郭鹰 邹全明 +4 位作者 朱永红 吴超 郭刚 毛旭虎 袁小澎 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第9期753-755,共3页
目的　评价重组热休克蛋白A (rHspA)作为幽门螺杆菌 (Hp)口服疫苗成分的效果。方法　采用重组Hp保护性抗原HspA与粘膜免疫佐剂 (霍乱毒素 ,CT ;大肠不耐热肠毒素B亚单位 ,LTB)共口服免疫BALB c小鼠 ,ELISA分析小鼠血清、胃肠粘液中IgG、... 目的　评价重组热休克蛋白A (rHspA)作为幽门螺杆菌 (Hp)口服疫苗成分的效果。方法　采用重组Hp保护性抗原HspA与粘膜免疫佐剂 (霍乱毒素 ,CT ;大肠不耐热肠毒素B亚单位 ,LTB)共口服免疫BALB c小鼠 ,ELISA分析小鼠血清、胃肠粘液中IgG、IgA抗体水平 ,体外培养脾淋巴细胞在Hp刺激下的增殖情况以及IL4、IFN γ的变化。结果　单纯口服rHspA组产生的抗体水平与对照组 (PBS)相差不显著 ,而rHspA +佐剂组与对照组相差非常显著。rHspA +佐剂组小鼠脾淋巴细胞体外培养 ,在Hp抗原刺激作用下出现明显的增殖反应 ;不加佐剂免疫组分泌IFN γ水平增加 ,IL 4水平未发现增加 ;而加佐剂免疫组除IFN γ水平增加外 ,IL 4水平也发现显著增加。结论　BALB 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 热休克蛋白A 口服疫苗 免疫应答
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微粒包裹型幽门螺杆菌疫苗口服诱导小鼠粘膜免疫应答的研究 被引量：97
3
作者 王缚鲲 任建敏 +3 位作者 邹全明 于长青 张卫军 曾浩 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2001年第3期10-12,共3页
幽门螺杆菌 (Helocobacterpylori,Hp)是慢性胃炎、消化性溃疡的主要病原菌 ,为分析Hp超声上清经微粒包裹后对小鼠的口服免疫效果 ,采用ELISA法检测血清、唾液、肠粘液的抗体改变情况 ,ELISPOT法分析派伊尔氏结 (PP结 )抗原特异性抗体形... 幽门螺杆菌 (Helocobacterpylori,Hp)是慢性胃炎、消化性溃疡的主要病原菌 ,为分析Hp超声上清经微粒包裹后对小鼠的口服免疫效果 ,采用ELISA法检测血清、唾液、肠粘液的抗体改变情况 ,ELISPOT法分析派伊尔氏结 (PP结 )抗原特异性抗体形成细胞 (ASC)的数量增减。发现微粒包裹型Hp疫苗免疫后可诱导较高的唾液sIgA水平和肠道sIgA反应 ,PP结抗原特异性抗体形成细胞 (ASC) 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 口服免疫 抗体分泌细胞 微粒包裹型疫苗 免疫应答
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幽门螺杆菌重组Bb-hpaA-vacA疫苗的构建 被引量：13
4
作者 王国富 高峰 吴利先 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期131-134,共4页
目的构建幽门螺杆菌(Hp)重组双歧杆菌(Bb)Bb-hpaA-vacA疫苗。方法通过PCR分别扩增hpaA和va-cA抗原编码基因,然后采用基因拼接法(gene SOEing)剪接hpaA和vacA,得到hpaA-vacA融合基因;将该融合基因定向克隆到大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达... 目的构建幽门螺杆菌(Hp)重组双歧杆菌(Bb)Bb-hpaA-vacA疫苗。方法通过PCR分别扩增hpaA和va-cA抗原编码基因,然后采用基因拼接法(gene SOEing)剪接hpaA和vacA,得到hpaA-vacA融合基因;将该融合基因定向克隆到大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-hpaA-vacA,电穿孔法将该质粒导入Bb,构建幽门螺杆菌重组hpaA-vacA疫苗,然后用SDS-PAGE和Western blotting鉴定表达的重组蛋白。结果 PCR成功扩增出分子量约为1 500bp的hpaA-vacA融合基因,双酶切证实hpaA-vacA融合基因成功插入pGEX-1λT中,并成功转化入双歧杆菌,而且重组蛋白能在双岐杆菌中得到正确表达,Western blotting显示重组蛋白具有免疫原性。结论成功构建螺杆菌rBb-hpaA-vacA疫苗,为该疫苗的进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 双歧杆菌 重组hpaA-vacA疫苗 构建
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重组幽门螺杆菌尿素酶B亚单位疫苗鼻腔免疫的实验研究 被引量：9
5
作者 高志刚 邹全明 +3 位作者 郭刚 郭桐生 曾韦锟 解庆华 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期68-70,共3页
目的:探讨基因工程疫苗Hp重组尿素酶B亚单位(rUreB)鼻腔接种的免疫效果。方法:以rUreB不同剂量或加不同佐剂滴鼻免疫BALB/c小鼠。末次免疫7 d后,收集血清及胃黏膜、小肠黏膜、鼻黏膜及气管黏膜冲洗液,用ELISA法检测抗rUreB特异性抗体。... 目的:探讨基因工程疫苗Hp重组尿素酶B亚单位(rUreB)鼻腔接种的免疫效果。方法:以rUreB不同剂量或加不同佐剂滴鼻免疫BALB/c小鼠。末次免疫7 d后,收集血清及胃黏膜、小肠黏膜、鼻黏膜及气管黏膜冲洗液,用ELISA法检测抗rUreB特异性抗体。结果:rUreB鼻腔免疫后各实验组血清特异性IgG及各黏膜冲洗液中特异性IgA的水平均明显增高,与对照组相比较差异显著(P<0.01)。20μg剂量组与10μg剂量组相比较,仅血清特异性IgG水平增高,其它黏膜特异性IgA的水平未见增高。大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)的佐剂效果较霍乱毒素B亚单位(CTB)强,卡泊波可增强鼻腔接种疫苗在胃黏膜洗液中的抗体应答水平。结论:CTB、LTB、卡泊波均可作为rUreB鼻腔黏膜接种的佐剂。HprUreB鼻黏膜接种,不仅可诱导血清特异性抗体反应,而且能引起多个黏膜部位的免疫应答,是一种方便、有效、廉价的免疫途径。 展开更多
关键词 重组幽门螺杆菌尿素酶B亚单位 疫苗 鼻腔免疫 实验研究
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幽门螺杆菌疫苗口服免疫小鼠后胃肠免疫应答研究 被引量：4
6
作者 于长青 邹全明 +2 位作者 王缚鲲 鲁东水 曾浩 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期195-197,共3页
为探讨Hp全菌抗原和粘膜佐剂LT口服免疫BALB/c小鼠后的胃肠免疫反应 ,采用ELISPOT和ELISA法检测免疫小鼠胃粘膜、派伊尔小结抗原特异性抗体形成细胞 (AFC)和小肠粘液sIgA。结果显示 ,免疫小鼠胃粘膜、派伊尔小结抗原特异性抗体形成细胞... 为探讨Hp全菌抗原和粘膜佐剂LT口服免疫BALB/c小鼠后的胃肠免疫反应 ,采用ELISPOT和ELISA法检测免疫小鼠胃粘膜、派伊尔小结抗原特异性抗体形成细胞 (AFC)和小肠粘液sIgA。结果显示 ,免疫小鼠胃粘膜、派伊尔小结抗原特异性抗体形成细胞数量明显增加 ,抗原 +佐剂组AFC数量高于单纯抗原免疫组和对照组 ,尤以sIgA AFC为甚 ;小肠粘液特异sIgA两免疫组均明显高于对照组。本研究结果表明 ,口服免疫可有效诱导胃肠道粘膜免疫 。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 佐剂 免疫 抗体形成细胞 胃肠免疫应答 疫苗
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幽门螺杆菌粘附素与大肠杆菌LtB融合疫苗的口服免疫与预防试验 被引量：4
7
作者 刘正祥 邹全明 +3 位作者 洪愉 郭桐生 郭鹰 曾韦锟 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第7期577-581,共5页
目的　观察幽门螺杆菌粘附素HpaA与大肠杆菌LtB融合蛋白质经口服免疫BALB/c小鼠后机体产生的免疫应答和蒙古沙鼠免疫预防作用。方法　用PCR方法扩增HpaA和LtB目的基因片段 ,将LtB与 pPIM质粒连接后 ,再与HpaA基因连接 ,转化大肠杆菌DH5... 目的　观察幽门螺杆菌粘附素HpaA与大肠杆菌LtB融合蛋白质经口服免疫BALB/c小鼠后机体产生的免疫应答和蒙古沙鼠免疫预防作用。方法　用PCR方法扩增HpaA和LtB目的基因片段 ,将LtB与 pPIM质粒连接后 ,再与HpaA基因连接 ,转化大肠杆菌DH5α ,经酶切获得含有ltB -hpaA的pPIM -ltB/hpaA融合质粒。将重组质粒转化E coliBL2 1(DE3) ,筛选获得重组工程菌 ,经发酵、包涵体提取 ,复性 ,纯化获得LtB -HpaA。BABL/c小鼠设正常对照组、单独rHpaA对照组、CT +HpaA实验组、融合蛋白LtB -HpaA组和rLtB +rHpaA实验组 ,免疫 4周后检测血清抗原特异性IgG、IgA和胃冲洗液、肠冲洗液中sIgA。蒙古沙鼠分 3个实验组 ,正常对照 (PBS)组 ,单独HpaA免疫组和LtB -HpaA组 ,免疫 4周 ,于末次免疫后 14天灌活力良好的H pyloriSS1活菌 ,1个月处死动物 ,采集标本 ,用细菌培养和病理切片检查评价蒙古沙鼠的免疫保护作用。结果　融合蛋白LtB -HpaA组及将CT和LtB作为外粘膜佐剂的CT +HpaA组和LtB +HpaA组中血清IgA和IgG、胃冲洗液和肠冲洗液中sIgA含量明显高于单独HpaA组和对照组 ,差异非常显著 (P <0 0 0 1)。蒙古沙鼠融合蛋白rLtB-HpaA组比单纯rHpaA组效果明显 (rLtB -HpaA组保护率为 80 % ,单独rHpaA为 2 0 % )。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 粘附素 大肠杆菌 LtB融合疫苗 口服免疫 预防试验 免疫应答
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幽门螺杆菌重组腺病毒双价疫苗的构建及免疫学评价 被引量：4
8
作者 刘秀丽 刘纯杰 +3 位作者 陶好霞 李淑琴 李勣 张兆山 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第8期716-721,共6页
幽门螺杆菌 (Hp)是导致胃炎、消化道溃疡和胃癌的的主要病原菌 .利用基因重组技术 ,成功将Hp的ureB和hspA基因融合 .将ureB hspA融合基因成功构建到腺病毒载体上 .检测结果表明 ,该重组腺病毒具有侵染真核细胞能力 ,且能在真核细胞中表... 幽门螺杆菌 (Hp)是导致胃炎、消化道溃疡和胃癌的的主要病原菌 .利用基因重组技术 ,成功将Hp的ureB和hspA基因融合 .将ureB hspA融合基因成功构建到腺病毒载体上 .检测结果表明 ,该重组腺病毒具有侵染真核细胞能力 ,且能在真核细胞中表达目标抗原 .以血清中IgG和新鲜粪便中sIgA ,评价其免疫效果 ,结果显示 。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 重组腺病毒 尿素酶B 热休克蛋白A 体液免疫 黏膜免疫反应
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多组分重组减毒沙门疫苗菌对幽门螺杆菌感染的免疫保护作用 被引量：5
9
作者 李国庆 陈旻湖 +4 位作者 焦志勇 陈洁 朱森林 陈为 胡品津 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第3期55-58,共4页
目的　利用人类幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)感染的小鼠模型研究多组分重组减毒沙门疫苗菌对幽门螺杆菌感染的免疫保护作用。方法　将二级C5 7BL/ 6小鼠随机分成 6组 ,通过灌胃方法分别给予生理盐水 (A组 )、PBS(B组 )、减毒鼠... 目的　利用人类幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)感染的小鼠模型研究多组分重组减毒沙门疫苗菌对幽门螺杆菌感染的免疫保护作用。方法　将二级C5 7BL/ 6小鼠随机分成 6组 ,通过灌胃方法分别给予生理盐水 (A组 )、PBS(B组 )、减毒鼠伤寒沙门菌SL32 6 1(C组 )、重组减毒鼠伤寒沙门菌pTrc99A -ureB +pGSTag -katA(D组 )、重组减毒鼠伤寒沙门菌pTrc99A -ureB +pTrc99A -HPaA(F组 )及重组减毒鼠伤寒沙门菌 pTrc99A -ureB +pGSTag -katA +pTrc99A -HPaA(F组 )。免疫后 4周 ,予Hp进行攻击 (A组不攻击 )。攻击菌量 10 7CFU/只 ,灌胃 2次 ,每日 1。再 4周后处死动物 ,取胃组织分别行尿素酶试验、改良Giemsa染色及定量细菌培养 ,观察Hp定植情况。行HE染色观察胃粘膜组织炎症情况。取脾组织行淋巴细胞增殖试验。结果　A组小鼠Hp定植密度为 0 ,B组为 9 4 9× 10 6CFU/ g胃组织 ,C组为 1 4 2× 10 6CFU/ g胃组织 ,D组、E组和F组小鼠分别为 2 92× 10 5CFU/g、5 5 1× 10 5CFU/g和 2 16× 10 5CFU/g胃组织 ,C组、D组、E组和F组与A组和B组相比定植密度均明显降低 (P <0 0 5 )。免疫组与对照组胃粘膜均无明显炎症反应。免疫组脾淋巴细胞增殖试验阳性。结论　口服多组分重组减毒沙门疫苗菌对小鼠Hp感染具有一定免? 展开更多
关键词 多组分重组 减毒沙门疫苗菌 幽门螺杆菌感染 免疫保护作用
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BalB/c小鼠口服重组幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的免疫应答 被引量：4
10
作者 毛旭虎 邹全明 +4 位作者 鲁东水 曾玮锟 郭刚 王毅超 解庆华 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期280-282,共3页
目的　评价重组尿素酶B亚单位 (rUreB)作为幽门螺杆菌 (Hp)口服疫苗成份的效果、探讨Hp的免疫保护机制。方法　采用重组Hp保护性抗原UreB与粘膜免疫佐剂霍乱毒素B亚单位 (CTB)共口服免疫BalB/c小鼠 ,ELISA分析血清、唾液和粪便、胃粘液... 目的　评价重组尿素酶B亚单位 (rUreB)作为幽门螺杆菌 (Hp)口服疫苗成份的效果、探讨Hp的免疫保护机制。方法　采用重组Hp保护性抗原UreB与粘膜免疫佐剂霍乱毒素B亚单位 (CTB)共口服免疫BalB/c小鼠 ,ELISA分析血清、唾液和粪便、胃粘液中IgG、IgA抗体水平 ,体外培养脾淋巴细胞在Hp刺激下的增殖情况及IL 4、IFN γ的变化。结果　BalB/c小鼠口服rUreB和CTB混合制剂能有效激发机体产生全身和局部特异性的体液免疫应答和细胞免疫应答。 展开更多
关键词 重组尿素酶B亚单位 免疫应答 幽门螺杆菌 BALB/C小鼠 免疫保护机制
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幽门螺杆菌重组蛋白脂质体疫苗免疫保护作用的动物实验研究 被引量：3
11
作者 黄文 李兆申 +3 位作者 白杨 王继德 张亚历 周殿元 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第10期978-985,共8页
探讨幽门螺杆菌重组蛋白脂质体疫苗的免疫预防作用及可能的免疫机制.用逆向蒸发法制备以卵磷脂和胆固醇为膜组分包裹的重组蛋白和/无免疫佐剂的口服疫苗,并用透射电镜测定其粒径.BALB/c小鼠分为6组,分别通过灌胃方法给予PBS、空白脂质体... 探讨幽门螺杆菌重组蛋白脂质体疫苗的免疫预防作用及可能的免疫机制.用逆向蒸发法制备以卵磷脂和胆固醇为膜组分包裹的重组蛋白和/无免疫佐剂的口服疫苗,并用透射电镜测定其粒径.BALB/c小鼠分为6组,分别通过灌胃方法给予PBS、空白脂质体、UreB重组蛋白+CT、脂质体包裹UreB重组蛋白、脂质体包裹UreB重组蛋白和CT、脂质体包裹(UreB+Kat+CT),每周1次共4次,末次攻击2周再用活幽门螺杆菌(Hp)攻击3次,5周后处死小鼠,行胃组织快速尿素酶试验、Hp的定植半定量、炎症程度及其炎症活动度的评分.RT-PCR检测小鼠脾淋巴细胞中γ-干扰素(INF-γ)和白细胞介素-4(IL-4)表达.脂质体疫苗电镜下负染,显示粒径为(0.7±0.2)μm.PBS组、空白脂质体组、UreB重组蛋白+CT组、脂质体包裹UreB重组蛋白组、脂质体包裹UreB重组蛋白和CT组、脂质体包裹(UreB+Kat+CT)组的免疫保护率分别为0(0/11)、0(0/11)、58.3%(7/12)、54.5%(6/11)、63.6%(7/11)、75.0%(9/12),UreB重组蛋白+CT组免疫保护率与脂质体包裹UreB重组蛋白组比较无显著性差异(P>0.05),脂质体包裹UreB重组蛋白+CT组免疫保护率与脂质体包裹(UreB+Kat+CT)组比较有显著性差异(P<0.05).各疫苗组Hp定植评分均明显低于PBS和脂质体对照组(P<0.01),且UreB+Kat双价疫苗组较三个单价疫苗组比较也有显著性差异(P<0.05).疫苗组不仅能降低Hp的定植,而且能减轻Hp造成的小鼠胃黏膜的局部慢性炎症反应(P<0.05),但各疫苗组间比较未见显著性差异(P>0.05).Hp攻击后,与对照组比较,各疫苗组脾淋巴细胞INF-γmRNA水平较低(P<0.05),而IL-4mRNA水平则较高(P<0.05),各疫苗组间比较未见显著性差异(P>0.05).研究表明,在小鼠Hp感染模型中脂质体能部分代替霍乱毒素的免疫佐剂作用,在Hp攻击后,未经免疫小鼠体内诱导以Th1为主应答,免疫小鼠体内则诱导以Th2为主的免疫应答. 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 尿素酶B亚单位 过氧化氢酶 疫苗 脂质体 免疫应答
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表达幽门螺杆菌外膜蛋白的重组耻垢分枝杆菌疫苗菌对小鼠的免疫保护作用 被引量：3
12
作者 向廷秀 谯敏 +3 位作者 姜政 陶小红 黄爱龙 王丕龙 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期694-696,722,共4页
为研究含pLAO的重组耻垢分枝杆菌疫苗(Recombinant Mycobacterium smegmatis,rM.S)对小鼠的保护作用。将重组耻垢分枝杆菌疫苗pLAO(MS)2×107灌胃免疫接种BALB/c小鼠,同时设PBS组、耻垢分枝杆菌空菌组,免疫4周后,各组处死一批小鼠,... 为研究含pLAO的重组耻垢分枝杆菌疫苗(Recombinant Mycobacterium smegmatis,rM.S)对小鼠的保护作用。将重组耻垢分枝杆菌疫苗pLAO(MS)2×107灌胃免疫接种BALB/c小鼠,同时设PBS组、耻垢分枝杆菌空菌组,免疫4周后,各组处死一批小鼠,取胃组织待用;余下的小鼠用幽门螺杆菌标准株(Helicobacter pylori SS1,Hp SS1)攻击2次,4周后处死小鼠,进行胃组织快速尿素酶试验、Hp培养、炎症程度及其炎症活动度评分,以评价疫苗对胃黏膜Hp感染的免疫保护作用,ELISA检测Hp特异性血清IgG和IgA水平。结果表明疫苗组Hp定植评分均明显低于PBS组和空菌组,疫苗组不仅可以降低Hp的定植,而且能减轻Hp造成的小鼠胃黏膜的局部慢性炎症反应。免疫后BALB/c小鼠特异性抗体显示rM.S疫苗诱导的Hp特异性血清IgG、IgA水平都升高。因此rM.S疫苗经灌胃接种BLAB/c小鼠能降低Hp定植,减轻胃黏膜的炎症反应,对Hp感染有明显的预防保护作用。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 重组耻垢分枝杆菌疫苗
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重组幽门螺杆菌疫苗免疫保护作用与免疫后胃炎 被引量：3
13
作者 陈洁 陈旻湖 +5 位作者 廖文俊 于君 梁伟强 陈为 胡品津 沈祖尧 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期411-415,420,共6页
目的:研究以减毒鼠伤寒沙门菌为载体构建的幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)疫苗的免疫保护机制。方法:将表达不同Hp抗原的减毒鼠伤寒沙门菌(Salmonellatyphimurium)分别免疫小鼠,免疫4周后以Hp攻击;在攻击前及攻击后5周分批处死小鼠... 目的:研究以减毒鼠伤寒沙门菌为载体构建的幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)疫苗的免疫保护机制。方法:将表达不同Hp抗原的减毒鼠伤寒沙门菌(Salmonellatyphimurium)分别免疫小鼠,免疫4周后以Hp攻击;在攻击前及攻击后5周分批处死小鼠,比较各组小鼠Hp定植密度及各项免疫指标的变化。结果:(1)和NS(Normalsalin,NS)对照组相比各免疫组的Hp定植密度显著下降。(2)和NS组相比攻击前后各免疫组血清IgG2a和胃黏膜Th1型细胞因子表达显著升高。(3)和NS组相比攻击后免疫组鼠胃黏膜出现明显的炎症反应。结论:以减毒鼠伤寒沙门菌为载体构建的重组幽门螺杆菌疫苗在小鼠体内诱导出以Th1反应为主并伴随免疫后胃炎的保护性免疫应答。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 鼠伤寒沙门氏菌 疫苗 Th1型免疫应答 免疫后胃炎
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幽门螺杆菌内置佐剂UreB和HpaA双价重组疫苗对实验感染小鼠的免疫保护作用 被引量：5
14
作者 毛亚飞 严杰 徐颺 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2005年第5期405-411,共7页
目的:了解内置重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(rLTB)佐剂、幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)尿素酶B亚单位(rUreB)和黏附素(rHpaA)双价基因工程疫苗对Hp SS1株感染BALB/c小鼠的保护作用及其机制.方法:采用NTA-Ni亲和层析法分别收集... 目的:了解内置重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(rLTB)佐剂、幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)尿素酶B亚单位(rUreB)和黏附素(rHpaA)双价基因工程疫苗对Hp SS1株感染BALB/c小鼠的保护作用及其机制.方法:采用NTA-Ni亲和层析法分别收集rUreB、rHpaA、rLTB-rUreB-rHpaA、重组大肠杆菌不耐热肠毒素A亚单位突变体(rLTKA63)、rLTB和霍乱肠毒素B亚单位(rCTB).用Western blot检测各重组蛋白抗原的免疫反应性.用GM1-ELISA检测rLTB、rCTB、rLTB-rUreB-rHpaA的佐剂活性.建立Hp SS1株感染BALB/c小鼠模型,检测不同组合抗原和佐剂的免疫保护效果.采用分离培养和镀银染色法检查感染小鼠胃窦组织中的Hp.建立ELISA,检测免疫小鼠特异性胃液S-IgA和血清IgA.结果:rUreB、rHpaA和rLTB-rUreB-rHpaA可被兔抗Hp全菌抗体识别,并与牛GM1结合.单用rUreB或rHpaA 免疫小鼠,其保护率低于70%;若与rLTB或rCTB合用,其保护率可增至75.0%～83.3%.在不同抗原及佐剂组合中,rLTB-rUreB-rHpaA保护率达100%,其次为rHpaA+rUreB+rCTB+rLTKA63(91.7%)和rUreB+rHpaA+rLTB(90.9%).rLTB和rCTB均有明显的诱生免疫小鼠特异性血清IgA和胃液S-IgA作用,但前者诱生S-IgA的能力强于后者.特异性血清IgA,尤其是胃液S-IgA的阳性率与小鼠免疫保护率基本吻合,rLTB-rUreB-rHpaA免疫小鼠rUreB 和rHpaA 特异性S-IgA阳性率分别高达100%和91.7%.结论:rUreB和rHpaA有良好的免疫反应性和抗原性,rLTB和rCTB有黏膜免疫佐剂活性.内置佐剂UreB和HpaA双价重组疫苗对小鼠高保护率与使用高剂量rLTB、抗原分子量增大和局部高水平特异性S-IgA抗体有关. 展开更多
关键词 螺杆菌 幽门/免疫学 IGA 重组 遗传 免疫疗法 螺杆菌感染/预防和控制 IGA 分泌/分析 尿素酶/生物合成 细胞黏附
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减毒鼠伤寒杆菌为载体的幽门螺杆菌尿素酶口服疫苗的制备
15
作者 刘晓峰 胡家露 +2 位作者 张霞 权启镇 樊代明 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第7期633-635,共3页
构建能表达幽门螺杆菌 (H .pylori)尿素酶B亚单位 (UreB)的重组减毒鼠伤寒杆菌SL3 2 61/ pTC0 1 UreB ,Westernblot检测UreB的表达。将SL3 2 61/pTC0 1 UreB口服免疫BALB/c小鼠 ,12周后检测肠液和血清中的特异性抗体反应及脾细胞培养液... 构建能表达幽门螺杆菌 (H .pylori)尿素酶B亚单位 (UreB)的重组减毒鼠伤寒杆菌SL3 2 61/ pTC0 1 UreB ,Westernblot检测UreB的表达。将SL3 2 61/pTC0 1 UreB口服免疫BALB/c小鼠 ,12周后检测肠液和血清中的特异性抗体反应及脾细胞培养液上清中的IFN γ和IL 10含量。结果显示 ,减毒鼠伤寒杆菌SL3 2 61/pTC0 1 UreB能表达约 61kD的蛋白 ,与H .pyloriUreB亚单位相符 ,具有抗原性。口服免疫小鼠后 ,疫苗组小鼠的肠液和血清中可分别检测到针对UreB的特异性IgA和IgG抗体 ,小鼠脾细胞培养上清中的IFN γ和IL 10的含量亦明显升高。病理学检查显示疫苗组小鼠较对照组小鼠胃粘膜炎症指数无差异。提示表达H .pyloriUreB的减毒鼠伤寒杆菌SL3 2 61/pTC0 1 UreB有望用作抗H .pylori感染的口服疫苗 ,其防治H . 展开更多
关键词 螺杆菌 幽门 尿素酶 沙门氏菌 鼠伤寒 疫苗
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表达幽门螺杆菌hpaA重组减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建和鉴定 被引量：6
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作者 朱森林 陈旻湖 +2 位作者 廖文俊 陈洁 胡品津 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期148-151,共4页
目的 :构建表达幽门螺杆菌 (H pylori)hpaA的重组减毒鼠伤寒沙门氏疫苗菌。方法 :用基因工程的方法将hpaA基因克隆入原核表达质粒pTrc99A ,并进行了基因测序。重组质粒经鉴定后再导入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL32 6 1,提取重组疫苗菌质粒 ,PC... 目的 :构建表达幽门螺杆菌 (H pylori)hpaA的重组减毒鼠伤寒沙门氏疫苗菌。方法 :用基因工程的方法将hpaA基因克隆入原核表达质粒pTrc99A ,并进行了基因测序。重组质粒经鉴定后再导入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL32 6 1,提取重组疫苗菌质粒 ,PCR和酶切鉴定 ,筛选阳性克隆。用SDS PAGE电泳和Westernblot进行HpaA表达和鉴定。结果 :经PCR和酶切证实 ,构建了含hpaA的重组原核表达质粒pTrc99A hpaA ,并将后者成功转化了减毒鼠伤寒沙门氏菌。HpaA能在疫苗菌中以二聚体形式表达 ,HpaA量约占全菌体蛋白量的 17% ,Westernblot证实其有免疫原性。结论 :构建了表达H pylorihpaA的重组减毒鼠伤寒沙门氏疫苗菌 ,为探索制备H 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 HPAA基因 鼠伤寒沙门氏菌 疫苗 重组
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表达幽门螺杆菌NAP蛋白的减毒沙门疫苗菌株预防幽门螺杆菌感染 被引量：5
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作者 焦志勇 陈旻湖 +4 位作者 朱森林 陈洁 李国庆 陈为 胡品津 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期629-632,共4页
目的建立表达幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)中性粒细胞活化蛋白(Hp-NAP)的减毒沙门疫苗菌,并利用人类幽门螺杆菌感染的小鼠模型研究疫苗菌对Hp感染的免疫保护作用。方法利用分子克隆技术构建携带Hp-NAP基因的重组原核表达质粒pTrc9... 目的建立表达幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)中性粒细胞活化蛋白(Hp-NAP)的减毒沙门疫苗菌,并利用人类幽门螺杆菌感染的小鼠模型研究疫苗菌对Hp感染的免疫保护作用。方法利用分子克隆技术构建携带Hp-NAP基因的重组原核表达质粒pTrc99A-NAP,经PCR及酶切鉴定后测定其基因序列,并与美国国立医学图书馆基因文库中相关序列的同源性进行比较。重组质粒pTrc99A-NAP转化减毒伤寒沙门菌SL3261,培养后筛选阳性菌落,抽提质粒进行PCR及酶切鉴定。表达的Hp-NAP蛋白用SDS-PAGE和West-blotting进行鉴定,用薄层扫描分析蛋白含量。C57BL/6小鼠随机分成4组,分别灌胃给予生理盐水(A组)、减毒鼠伤寒沙门菌SL3261(B组)、携带pTrc99A的SL326组(C组)、携带pTrc99A-NAP的SL326组重(D组)。免疫后4周,予Hp攻击,攻击菌量107CFU/只,灌胃2次,每日1次。攻击4周后处死动物,取胃组织分别行改良Giemsa染色及定量细菌培养,观察Hp定植情况。结果核苷酸序列测定及同源性分析证实,克隆的Hp-NAP基因与GenBank中相关序列的同源性为98%(397/402),氨基酸序列的同源性为98%(131/133)。pTrc99A-NAP转化的减毒沙门菌,可表达Mr约15000的Hp-NAP蛋白,表达量约占菌体蛋白量的37·5%;表达的新生蛋白能与小鼠抗Hp血清特异性反应,具有良好的免疫原性。同空白对照组、SL3261组和SL3261(pTrc99A)组相比,表达Hp-NAP的疫苗株组实验动物的胃组织Hp定植密度明显下降(P<0·05)。结论成功构建表达Hp-NAP的减毒沙门疫苗菌;重组疫苗菌对小鼠Hp感染具有一定免疫预防作用,可作为未来多组分重组减毒沙门疫苗菌的侯选菌株之一。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 Hp-NAP 减毒伤寒沙门菌 疫苗 免疫
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幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白DNA疫苗的构建及其免疫保护作用 被引量：4
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作者 孙波 杨骅 +3 位作者 满晓华 李兆申 屠振兴 龚燕芳 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第8期842-845,共4页
目的:构建携带幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白(Hp neutrophil-activating protein,Hp-NAP)基因(napA)活减毒鼠伤寒沙门菌重组DNA疫苗,初步观察其对慢性Hp感染的免疫保护作用。方法:应用基因工程技术扩增全长napA,测序并经同源性分析后,... 目的:构建携带幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白(Hp neutrophil-activating protein,Hp-NAP)基因(napA)活减毒鼠伤寒沙门菌重组DNA疫苗,初步观察其对慢性Hp感染的免疫保护作用。方法:应用基因工程技术扩增全长napA,测序并经同源性分析后,将其亚克隆入真核表达载体pIRES,鉴定正确后将重组质粒转化活减毒鼠伤寒沙门菌构建Hp-NAP口服DNA疫苗。口服Hp-SS1建立SS1长期感染小鼠模型,30周后随机均分为3组,每组各5只。治疗组予10 9 cfu／0.4 ml疫苗菌灌胃,1次／周×3周;2个对照组分别予等体积生理盐水或空白质粒。末次免疫4周后行快速尿素酶检测,ELISA测定血清抗体效价。结果:重组真核表达质粒pIRES-napA成功转化活减毒鼠伤寒沙门菌SL7207;所克隆napA与GenBank中SS1-napA核苷酸和蛋白质的同源性均>98％。免疫后4周治疗组75％(3／4)小鼠快速尿素酶检测阴性,对照组均阳性,差异显著(P<0.05);治疗组血清抗Hp-NAP抗体效价明显升高。结论:成功构建了具有较好免疫保护作用的Hp-NAP口服重组DNA疫苗,为进一步研制多价抗Hp核酸疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 螺杆菌 幽门 中性粒细胞激活蛋白 疫苗 DNA
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幽门螺杆菌HpaA减毒鼠伤寒沙门菌核酸疫苗的构建及免疫原性检测 被引量：4
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作者 徐灿 李兆申 +6 位作者 屠振兴 杜奕奇 孙波 杨哗 龚燕芳 金晶 许国铭 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第8期667-669,673,共4页
目的　构建含幽门螺杆菌 (H .pylori)hpaA基因的重组减毒鼠伤寒沙门菌核酸疫苗。方法　应用PCR方法从H .pylori标准菌株基因组DNA中扩增hpaA基因 ,克隆入 pUCmT载体 ,检测hpaA基因序列 ,经过酶切、连接反应将其克隆入真核表达载体pIRES... 目的　构建含幽门螺杆菌 (H .pylori)hpaA基因的重组减毒鼠伤寒沙门菌核酸疫苗。方法　应用PCR方法从H .pylori标准菌株基因组DNA中扩增hpaA基因 ,克隆入 pUCmT载体 ,检测hpaA基因序列 ,经过酶切、连接反应将其克隆入真核表达载体pIRES,转入大肠杆菌 ,筛选阳性克隆 ,通过PCR和酶切反应鉴定。重组载体pIRES hpaA转化入减毒鼠伤寒沙门菌LB5 0 0 0 ,抽提质粒 ,再转化入SL72 0 7,反复传代 ,鉴定重组核酸疫苗菌的稳定性。重组载体pIRES hpaA通过脂质体法转染COS 7细胞 ,SDS PAGE及Western印迹法检测pIRES hpaA表达HpaA蛋白的免疫原性。结果　成功扩增出长约 75 0bp的hpaA基因 ,测序结果表明扩增出的hpaA基因与H .pylorihpaA序列一致 ,PCR和酶切鉴定结果证实hpaA基因克隆入真核表达载体pIRES,成功构建了含hpaA基因的幽门螺杆菌核酸疫苗pIRES hpaA ,并成功构建了幽门螺杆菌hpaA基因的减毒鼠伤寒沙门菌核酸疫苗 ,重组核酸疫苗稳定 ,Western印迹法检测到了特异性的蛋白条带。结论　构建了具有免疫反应性的H .pylorihpaA减毒鼠伤寒沙门菌核酸疫苗 ,为进一步探索其免疫作用奠定了基础。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 疫苗 载体 鼠伤寒沙门菌
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幽门螺杆菌热休克蛋白60脂质体疫苗的制备及其免疫预防作用 被引量：7
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作者 黄文 白杨 +4 位作者 王继德 武金宝 李国锋 张卫民 周殿元 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第5期531-534,共4页
目的探讨制备脂质体包裹重组幽门螺杆菌(Hp)热休克蛋白60(Hsp60)口服疫苗的方法,并用Hp感染的小鼠模型评价其在预防Hp感染中的作用。方法将PET-22(+)/Hsp60在BL21(DE3)大肠杆菌表达,Ni-NTA琼脂糖树脂纯化Hsp60重组蛋白,用薄膜分散法制... 目的探讨制备脂质体包裹重组幽门螺杆菌(Hp)热休克蛋白60(Hsp60)口服疫苗的方法,并用Hp感染的小鼠模型评价其在预防Hp感染中的作用。方法将PET-22(+)/Hsp60在BL21(DE3)大肠杆菌表达,Ni-NTA琼脂糖树脂纯化Hsp60重组蛋白,用薄膜分散法制备以卵磷脂和胆固醇为膜组分包裹的Hsp60重组蛋白口服疫苗,并用透射电镜测定其粒径。75只BALB/C小鼠分为5组,分别通过灌胃方法给予PBS、空白脂质体、Hsp60重组蛋白+霍乱霉素(CT)、脂质体包裹Hsp60重组蛋白、脂质体包裹Hsp60重组蛋白+CT,每周1次共4次,末次攻击2周再用活Hp攻击3次,3周后处死小鼠,行胃组织快速尿素酶试验、Hp的定植半定量、炎症程度及其炎症活动度的评分。结果可溶性表达产物占全菌总蛋白的27%,经纯化获得纯度为95%的重组蛋白,制备的脂质体粒径为(0.7±0.4)μm。PBS组和空白脂质体组保护率均为0,而Hsp60重组蛋白+CT组、脂质体包裹Hsp60重组蛋白组、脂质体包裹Hsp60重组蛋白+CT组的保护率分别为73.3%、66.7%和86.7%,且均能使免疫小鼠胃粘膜Hp感染数目明显减少,炎症反应减轻。结论口服脂质体能分地代替免疫佐剂,作为Hp疫苗的免疫佐剂,将具有广泛的应用前景。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 热休克蛋白60 疫苗 脂质体
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