目的建立一种双重实时荧光定量PCR检测转基因植物中常用调控元件pCaMV35S和tNOS。方法通过扩增多个植物DNA来测定所建立的反应系统的特异性,将转基因棉花的模板DNA稀释5个梯度,检测此方法检出限(limit of detection,LOD),建立标准曲线...目的建立一种双重实时荧光定量PCR检测转基因植物中常用调控元件pCaMV35S和tNOS。方法通过扩增多个植物DNA来测定所建立的反应系统的特异性,将转基因棉花的模板DNA稀释5个梯度,检测此方法检出限(limit of detection,LOD),建立标准曲线判断该方法的定量能力,通过相对模拟掺假试验测定方法的灵敏度。结果特异性试验的检测结果显示此系统具备较强的特异性,能够区分含有上述两种调控元件的转基因植物和非转基因植物。此方法中,pCaMV35S基因的检测限为1 ng,tNOS基因的检测限为10 ng。依托此方法建立的标准曲线的扩增效率分别为96%和87%,r2均大于0.99,方法具有较好地定量能力,相对灵敏度达到1%,满足混合样品中转基因成分的检测要求。结论建立的双重实时荧光PCR方法表现出较强的特异性和较高的灵敏度,有高通量、低成本以及定量检测的能力。展开更多
文摘目的建立一种双重实时荧光定量PCR检测转基因植物中常用调控元件pCaMV35S和tNOS。方法通过扩增多个植物DNA来测定所建立的反应系统的特异性,将转基因棉花的模板DNA稀释5个梯度,检测此方法检出限(limit of detection,LOD),建立标准曲线判断该方法的定量能力,通过相对模拟掺假试验测定方法的灵敏度。结果特异性试验的检测结果显示此系统具备较强的特异性,能够区分含有上述两种调控元件的转基因植物和非转基因植物。此方法中,pCaMV35S基因的检测限为1 ng,tNOS基因的检测限为10 ng。依托此方法建立的标准曲线的扩增效率分别为96%和87%,r2均大于0.99,方法具有较好地定量能力,相对灵敏度达到1%,满足混合样品中转基因成分的检测要求。结论建立的双重实时荧光PCR方法表现出较强的特异性和较高的灵敏度,有高通量、低成本以及定量检测的能力。
