摘要
为了探索茄子Solanum melongena L.的基因表达模式,利用qRT-PCR方法分析了茄子ACT、EF1α、TUA、TUB、GAPDH、eIF、UBQ、UBI3、PP2A、CYP、RPL28、L25、SAND、TBP、DNAJ、APRT、EXP、CAC、HSP20和CysPro 20个候选内参基因mRNA的表达差异情况,并运用GeNorm、NormFinder和BestKeeper 3种计算方法评价茄子20个候选内参基因在低温、弱光、低温弱光叶片样品中的表达稳定性。结果表明:茄子20个候选内参基因荧光定量引物扩增效率(E)数值在96.8%~117.6%,相关系数(R^(2))介于0.9688~0.9999,扩增效率良好,扩增反应具有高度的专一性,引物能特异性扩增,特异性好,均为单峰,样品间扩增曲线重复性强,可用于qRT-PCR扩增。茄子20个候选内参基因C_(T)值表达丰度分析,发现茄子20个候选内参基因平均CT值在19.76~31.20。3种计算方法的综合评价分析结果显示,TBP基因在所有样本中为最稳定的内参基因。研究可为茄子低温、弱光和低温弱光胁迫下基因特异性表达研究提供了合适的内参基因。
In order to explore the gene expression pattern of Solanum melongena L.,the qRT-PCR method was used to analyze the expression differences of mRNA in the 20 candidate reference genes of eggplant,including ACT,EF1α,TUA,TUB,GAPDH,eIF,UBQ,UBI3,PP2A,CYP,RPL28,L25,SAND,TBP,DNAJ,APRT,EXP,CAC,HSP20 and CysPro.The three calculation methods,including GeNorm,NormFinder and BestKeeper,were used to evaluate the expression stability of 20 candidate reference genes in eggplant samples at low temperature,weak light and low temperature and weak light stress.The results showed that the fluorescence quantitative primer amplification efficiency(E)values of 20 candidate reference genes in eggplant ranged from 96.8%to 117.6%,and the correlation coefficient(R^(2))was between 0.9688−0.9999,indicating that the amplification efficiency was good,and the amplified reaction was highly specific.The primers could be specifically amplified,with good specificity,all of which were unimodal.The amplification curves among the samples had strong repeatability,which could be used for qRT-PCR amplification.By analyzing the expression abundance of C_(T)values of 20 candidate reference genes in eggplant,it was found that the average C_(T)values of 20 candidate reference genes in eggplant ranged from 19.76 to 31.20.The comprehensive evaluation results of the three calculation methods showed that the TBP gene was the most stable reference gene in all the samples.The study could provide a suitable reference gene for the study of gene-specific expression in eggplant under low temperature stress,weak light stress and low temperature and weak light stress.
作者
林珲
裘波音
朱海生
温庆放
LIN Hui;QIU Bo-yin;ZHU Hai-sheng;WEN Qing-fang(Fujian Key Laboratory of Vegetable Genetics and Breeding/Fujian Engineering Research Center for Vegetables/Crops Research Institute,Fujian Academy of Agricultural Sciences,Fuzhou,Fujian 350013,China)
出处
《福建农业科技》
CAS
2024年第8期1-15,共15页
Fujian Agricultural Science and Technology
基金
福建省科技计划省属公益类项目(2021R1031003)
国家大宗蔬菜产业技术体系福州综合试验站项目(CARS-23-G-53)
福建省种业创新与产业化工程项目(zycxny2021009)
福建省农业科学院科技创新平台专项(CXPT202001)
福建省农业科学院蔬菜遗传育种科技创新团队(CXTD2021038)。
关键词
茄子
内参基因
实时荧光定量PCR
标准化
基因表达
Eggplant(Solanum melongena L.)
Reference gene
Quantitative real-time PCR
Standardization
Gene expression
作者简介
林珲,女,1981年生,硕士,副研究员,主要从事蔬菜生物技术与育种研究;通信作者:朱海生,男,1978年生,博士,研究员,主要从事蔬菜种质资源与遗传育种研究,E-mail:zhs0246@163.com;通信作者:温庆放,1965年生,二级研究员,福建省百千万人才,福建省农业科学院作物研究所党支部书记、所长,主要从事蔬菜育种与栽培研究。主持或参与了多项国家科技计划、福建省重大科技专项、福建省种业产业化工程项目等蔬菜重大科技项目,获福建省科技进步奖二等奖2项(排名第1)、三等奖1项(排名第1),参与获得福建省科技进步奖一等奖1项(排名第5)、二等奖3项(排名分列为2、3、6名),主持或参与育成蔬菜品种20多个通过国家品种登记或省认(鉴)定,授权国家发明专利5件,发表论文130多篇,其中SCI收录8篇,编著出版蔬菜专著7部。现任或兼任国家大宗蔬菜产业技术体系福州综合试验站站长、福建省蔬菜遗传育种重点实验室主任、福建省蔬菜工程技术研究中心主任、福建省园艺学会副理事长,E-mail:fjvrc@163.com。
