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BiP表达下调改善双载体转断裂FⅧ基因的功效
1
作者
朱甫祥
刘泽隆
+2 位作者
缪静
屈慧鸽
迟晓艳
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第12期1161-1166,共6页
双载体转凝血Ⅷ因子(FⅧ)基因可作为一种转基因策略克服腺相关病毒(AAV)载体容量限制,但重链分泌的低效性影响转基因功效.为提高重链分泌,本文用RNA干扰技术下调内质网内蛋白伴侣分子免疫球蛋白重链结合蛋白(BiP)的表达,观察对HEK293细...
双载体转凝血Ⅷ因子(FⅧ)基因可作为一种转基因策略克服腺相关病毒(AAV)载体容量限制,但重链分泌的低效性影响转基因功效.为提高重链分泌,本文用RNA干扰技术下调内质网内蛋白伴侣分子免疫球蛋白重链结合蛋白(BiP)的表达,观察对HEK293细胞双载体共转FⅧ基因分泌重链和生物活性的影响.结果显示,RNA干扰可明显下调BiP表达,但不影响细胞生长;ELISA检测BiP下调细胞单独转重链基因时的重链分泌量为98±38 ng/mL,与轻链共转基因时显著升高到157±32 ng/mL,明显高于对照细胞单独转重链基因和共转重链和轻链基因的重链分泌量(分别为29±8 ng/mL和79±19 ng/mL);Cotest法检测显示,BiP下调细胞共转重链和轻链基因细胞分泌的凝血生物活性为0.73±0.23 IU/mL,明显高于对照细胞共转重链和轻链基因(0.39±0.07 IU/mL).结果表明,BiP表达下调通过促进重链分泌,可提高双载体共转FⅧ基因的功效,为进一步动物体内双AAV载体转FⅧ基因的甲型血友病基因治疗研究提供了实验依据.
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关键词
凝血Ⅷ因子
双载体转基因
免疫球蛋白重链结合蛋白
重链分泌
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职称材料
亮氨酸拉链提高小鼠血浆中剪接的凝血因子Ⅷ凝血活性
2
作者
朱甫祥
刘泽隆
+2 位作者
缪静
屈慧鸽
迟晓艳
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2012年第12期1220-1225,共6页
培养细胞实验表明,亮氨酸拉链通过改善内含肽(intein)的蛋白质剪接效率,提高双载体转B区缺失型凝血因子Ⅷ(BDD-FⅧ)基因细胞剪接FⅧ蛋白的分泌量和活性.本文从C57BL/6小鼠门静脉注射含亮氨酸拉链和Ssp DnaB内含肽融合的BDD-FⅧ的重链和...
培养细胞实验表明,亮氨酸拉链通过改善内含肽(intein)的蛋白质剪接效率,提高双载体转B区缺失型凝血因子Ⅷ(BDD-FⅧ)基因细胞剪接FⅧ蛋白的分泌量和活性.本文从C57BL/6小鼠门静脉注射含亮氨酸拉链和Ssp DnaB内含肽融合的BDD-FⅧ的重链和轻链基因双表达载体,48 h后,检测到血浆的重链分泌量和FⅧ活性分别为(298±67)μg/L和(1.15±0.29)U/mL,明显高于不含亮氨酸拉链的双载体转BDD-FⅧ基因对照小鼠((179±59)μg/L和(0.58±0.19)U/mL).结果表明,亮氨酸拉链通过改善蛋白质反式剪接,提高基于蛋白质剪接的双载体转BDD-FⅧ基因小鼠血浆的凝血活性,为进一步双腺相关病毒(AAV)载体转BDD-FⅧ基因的甲型血友病基因治疗研究提供了依据.
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关键词
B区缺失型凝血Ⅷ因子
亮氨酸拉链
双载体转基因
蛋白质反式剪接
血浆凝血活性
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职称材料
题名
BiP表达下调改善双载体转断裂FⅧ基因的功效
1
作者
朱甫祥
刘泽隆
缪静
屈慧鸽
迟晓艳
机构
鲁东大学生命科学学院
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第12期1161-1166,共6页
基金
山东省自然科学基金(No.ZR2010CM061)
烟台市科技计划项目(No.2008152)
教育部留学回国人员科研启动基金(No.20071108)~~
文摘
双载体转凝血Ⅷ因子(FⅧ)基因可作为一种转基因策略克服腺相关病毒(AAV)载体容量限制,但重链分泌的低效性影响转基因功效.为提高重链分泌,本文用RNA干扰技术下调内质网内蛋白伴侣分子免疫球蛋白重链结合蛋白(BiP)的表达,观察对HEK293细胞双载体共转FⅧ基因分泌重链和生物活性的影响.结果显示,RNA干扰可明显下调BiP表达,但不影响细胞生长;ELISA检测BiP下调细胞单独转重链基因时的重链分泌量为98±38 ng/mL,与轻链共转基因时显著升高到157±32 ng/mL,明显高于对照细胞单独转重链基因和共转重链和轻链基因的重链分泌量(分别为29±8 ng/mL和79±19 ng/mL);Cotest法检测显示,BiP下调细胞共转重链和轻链基因细胞分泌的凝血生物活性为0.73±0.23 IU/mL,明显高于对照细胞共转重链和轻链基因(0.39±0.07 IU/mL).结果表明,BiP表达下调通过促进重链分泌,可提高双载体共转FⅧ基因的功效,为进一步动物体内双AAV载体转FⅧ基因的甲型血友病基因治疗研究提供了实验依据.
关键词
凝血Ⅷ因子
双载体转基因
免疫球蛋白重链结合蛋白
重链分泌
Keywords
coagulation factor Ⅷ
dual-vector gene delivery
immunoglobulin heavy-chain binding protein（BiP）
heavy chain secretion
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
亮氨酸拉链提高小鼠血浆中剪接的凝血因子Ⅷ凝血活性
2
作者
朱甫祥
刘泽隆
缪静
屈慧鸽
迟晓艳
机构
鲁东大学生命科学学院
出处
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2012年第12期1220-1225,共6页
基金
山东省自然科学基金(ZR2010CM061)
烟台市科技计划项目(2008152)
+1 种基金
教育部留学回国人员科研启动基金(20071108)
鲁东大学学科建设经费资助项目~~
文摘
培养细胞实验表明,亮氨酸拉链通过改善内含肽(intein)的蛋白质剪接效率,提高双载体转B区缺失型凝血因子Ⅷ(BDD-FⅧ)基因细胞剪接FⅧ蛋白的分泌量和活性.本文从C57BL/6小鼠门静脉注射含亮氨酸拉链和Ssp DnaB内含肽融合的BDD-FⅧ的重链和轻链基因双表达载体,48 h后,检测到血浆的重链分泌量和FⅧ活性分别为(298±67)μg/L和(1.15±0.29)U/mL,明显高于不含亮氨酸拉链的双载体转BDD-FⅧ基因对照小鼠((179±59)μg/L和(0.58±0.19)U/mL).结果表明,亮氨酸拉链通过改善蛋白质反式剪接,提高基于蛋白质剪接的双载体转BDD-FⅧ基因小鼠血浆的凝血活性,为进一步双腺相关病毒(AAV)载体转BDD-FⅧ基因的甲型血友病基因治疗研究提供了依据.
关键词
B区缺失型凝血Ⅷ因子
亮氨酸拉链
双载体转基因
蛋白质反式剪接
血浆凝血活性
Keywords
B-domain-deleted coagulation factor VIU, leucine zippers, dual-vector gene delivery, protein tram-splicing, plasma coagulation activity
分类号
Q5 [生物学—生物化学]
Q7 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
BiP表达下调改善双载体转断裂FⅧ基因的功效
朱甫祥
刘泽隆
缪静
屈慧鸽
迟晓艳
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
0
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职称材料
2
亮氨酸拉链提高小鼠血浆中剪接的凝血因子Ⅷ凝血活性
朱甫祥
刘泽隆
缪静
屈慧鸽
迟晓艳
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2012
0
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职称材料
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