去唾液酸糖蛋白受体特异性单链抗体的优化表达及亲和常数的测定 被引量：5

1

作者 王炜煜 易继林 +4 位作者 邓云华 司进 王从俊 李翔 曹利民 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期504-506,共3页

目的:表达及纯化抗去唾液酸糖蛋白受体(ASG-PR)的单链抗体的可溶性,并测定其亲和常数。方法:用噬菌体C1克隆感染E.coliHB2151,挑取单个菌落接种于2×TY培养基中,于37℃震荡培养过夜。将培养物作1∶100稀释并转种后,用终浓度为0.25、... 目的:表达及纯化抗去唾液酸糖蛋白受体(ASG-PR)的单链抗体的可溶性,并测定其亲和常数。方法:用噬菌体C1克隆感染E.coliHB2151,挑取单个菌落接种于2×TY培养基中,于37℃震荡培养过夜。将培养物作1∶100稀释并转种后,用终浓度为0.25、0.5、1.0mmol/L的IPTG,分别在37℃、25℃和20℃下诱导表达过夜。取其培养上清,用饱和硫酸铵沉淀后,以120g/LSDS-PAGE分析。另外,将饱和硫酸铵沉淀物用30mLPBS重新溶解、透析除盐后,用Ni2+螯合柱进行纯化,再以120g/LSDS-PAGE鉴定纯化scFvC1的纯度。用非竞争酶免疫法测定scFv的亲和常数。结果:用0.5mmol/LIPTG在25℃诱导过夜,表达的scFvC1的量较多,其相对分子质量(Mr)约为28000,以可溶性的形式存在于培养基中。通过Ni2+亲和柱纯化后scFvC1的纯度在95%以上,产量约为0.8mg/L。scFv的亲和常数为(2.31±0.36)×10-7mol/L。结论:以筛选的C1噬菌体感染E.coliHB2151后可表达低亲和力的可溶性scFv,对肝癌的基因治疗具有潜在的应用价值。 展开更多

关键词 去唾液酸糖蛋白受体 单链抗体 表达 亲和常数

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肝细胞表面去唾液酸糖蛋白受体的流式细胞分析 被引量：4

2

作者 李文新 张荣军 +2 位作者 谭成 陶永辉 金坚 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第4期394-397,共4页

建立肝细胞表面去唾液酸糖蛋白受体 (ASGPR)的流式细胞分析方法 (FCM ) ,对正常及损伤鼠肝细胞、肝癌细胞 (BEL 740 2 )表面的ASGPR作同步比较分析 .以异硫氰酸荧光素标记的新半乳糖白蛋白 (FITC NGA)为ASGPR的特异性配体 ,以培养的正... 建立肝细胞表面去唾液酸糖蛋白受体 (ASGPR)的流式细胞分析方法 (FCM ) ,对正常及损伤鼠肝细胞、肝癌细胞 (BEL 740 2 )表面的ASGPR作同步比较分析 .以异硫氰酸荧光素标记的新半乳糖白蛋白 (FITC NGA)为ASGPR的特异性配体 ,以培养的正常肝细胞 (L 0 2 )为靶细胞 ,建立肝细胞表面ASGPR的FCM .测定并计算正常及损伤鼠肝细胞 ,BEL 740 2细胞与同一浓度的FITC NGA同步反应后的平均荧光强度 (MIF)值 .FITC NGA与L 0 2细胞表面ASGPR趋近饱和结合的浓度为 0 4mg/L ,该浓度下正常及损伤鼠肝细胞 ,BEL 740 2细胞的MIF值分别为 2 2 8 7、 5 81、 1 13.该结合可以被至少 5 0倍于FITC NGA的NGA或10mmol/L的EDTA完全抑制 .FCM能够良好地揭示FITC NGA同ASGPR之间的受配体结合特性 .该方法证实BEL 740 2细胞表面几乎没有ASGPR ,损伤鼠肝细胞表面ASGPR的数量较正常鼠肝细胞显著减少 . 展开更多

关键词 肝细胞 去唾液酸糖蛋白受体 流式细胞分析

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去唾液酸糖蛋白受体介导的肝脏靶向性研究进展 被引量：9

3

作者 徐文 殷正丰 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期1002-1005,共4页

去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor,ASGPR)又称半乳糖受体,主要表达于哺乳动物肝窦状隙的肝实质细胞表面,参与多种生理功能。多年来ASGPR一直被用于介导药物和基因的肝靶向递送以及肝脏成像等方面的研究,目前已取得许多... 去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor,ASGPR)又称半乳糖受体,主要表达于哺乳动物肝窦状隙的肝实质细胞表面,参与多种生理功能。多年来ASGPR一直被用于介导药物和基因的肝靶向递送以及肝脏成像等方面的研究,目前已取得许多进展。ASGPR介导的药物肝靶向递送研究主要集中在抗肿瘤药物、降胆固醇药物等。基因肝靶向递送多见于反义药物。肝脏成像研究包括评价肝脏功能、鉴别肝细胞肝癌和肿瘤肝转移灶等。近年来ASGPR的靶向性应用研究还进一步扩展到肝细胞立体培养、肝细胞筛选及肝细胞移植等领域。本文就这些内容作一综述。 展开更多

关键词 肝细胞 去唾液酸糖蛋白受体 药物释放系统 基因打靶

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去唾液酸糖蛋白受体与慢性肝病自身免疫 被引量：2

4

作者 刘海英 仲人前 孔宪涛 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第8期585-587,共3页

关键词 去唾液酸糖蛋白受体 慢性肝病 自身免疫 树突状细胞

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中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体糖基结合域的原核表达与多克隆抗体的制备 被引量：1

5

作者 杨燕 黄凰 +4 位作者 刘慎沛 张振华 王宝菊 田拥军 杨东亮 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期443-447,459,共6页

目的:构建中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)H1和H2亚基糖基识别域(CRD)的原核表达质粒,体外表达纯化后制备多克隆抗体。方法:RT-PCR扩增出中国旱獭肝组织中ASGPR CRDH1和CRDH2 cDNA,将其克隆至原核表达载体pRSET-B中,在大肠杆菌BL21(D... 目的:构建中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)H1和H2亚基糖基识别域(CRD)的原核表达质粒,体外表达纯化后制备多克隆抗体。方法:RT-PCR扩增出中国旱獭肝组织中ASGPR CRDH1和CRDH2 cDNA,将其克隆至原核表达载体pRSET-B中,在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS内诱导表达。用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,并采用酶联免疫吸附试验、Western blot及免疫组织化学检测抗体的灵敏度和特异性。结果:成功构建了中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体H1和H2亚基糖基识别域原核表达质粒pRSET-B.CRDH1和pRSET-B.CRDH2,目的蛋白可以高效表达,用其免疫BALB/c小鼠获得了高效价的特异性多克隆抗体。结论:首次成功表达了中国旱獭去唾液酸糖蛋白受体H1和H2亚基糖基识别域多肽,且纯度高,免疫原性强,用其免疫小鼠获得的多克隆抗体特异性好、效价高,为在HBV感染模型-中国旱獭体内进行肝脏疾病的靶向治疗奠定了实验基础。 展开更多

关键词 去唾液酸糖蛋白受体 中国旱獭 多克隆抗体 靶向治疗

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去唾液酸糖蛋白受体H1亚基的原核表达及多克隆抗体的制备

6

作者 王炜煜 易继林 +3 位作者 王健 司进 朱荫昌 曹利 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期465-468,共4页

目的在原核系统中表达并纯化去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)H1亚基,制备兔抗人ASGPR1多克隆抗体。方法以质粒pEA1为模板,设计引物,将聚合酶链反应(PCR)扩增产物H1基因克隆到原核表达载体pET-32c中。接种含H1/pET-32c的菌株BL21单菌落至LB肉... 目的在原核系统中表达并纯化去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)H1亚基,制备兔抗人ASGPR1多克隆抗体。方法以质粒pEA1为模板,设计引物,将聚合酶链反应(PCR)扩增产物H1基因克隆到原核表达载体pET-32c中。接种含H1/pET-32c的菌株BL21单菌落至LB肉汤中,1∶100稀释转种后用1 mmol/L终浓度的异丙基硫代-β-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物用Ni2+螯合柱亲和纯化,用纯化的ASGPR1免疫新西兰兔制备多克隆抗体。结果H1/pET-32c在原核系统中成功表达和纯化出约50.3 kD大小的融合蛋白,用纯化的H1成功制备了兔抗人H1多克隆抗体,并用6His-H1和GST-H1重组蛋白进行免疫印迹技术(Western blot)分析,证实了抗体的正确性。结论应用多克隆抗体可以检测体内外ASGPR H1亚基基因的表达,为临床上测定血清可溶性ASGPR奠定基础。 展开更多

关键词 去唾液酸糖蛋白受体 原核表达 蛋白纯化 抗体

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人去唾液酸糖蛋白受体单克隆抗体制备及其初步应用 被引量：2

7

作者 李军 陈磊 +3 位作者 孙斌 张妤 钱海华 殷正丰 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1055-1060,共6页

目的制备人去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)的小鼠单克隆抗体,并应用该抗体检测ASGPR在细胞系和组织中的表达。方法对ASGPR H1大亚基进行序列分析,选取ASGPR1全长序列制备免疫原。通过RT-PCR合成ASGPR1cDNA,构建ASGPR1表达重组载体,在E.coli ... 目的制备人去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)的小鼠单克隆抗体,并应用该抗体检测ASGPR在细胞系和组织中的表达。方法对ASGPR H1大亚基进行序列分析,选取ASGPR1全长序列制备免疫原。通过RT-PCR合成ASGPR1cDNA,构建ASGPR1表达重组载体,在E.coli BL21中表达后纯化,获得目的抗原。应用传统融合杂交瘤技术制备小鼠单克隆抗体,常规检测单抗亚类和效价,竞争抑制实验鉴定单抗特异性。用流式细胞术和免疫组织化学法分别检测ASGPR在多种肝源性与非肝源性细胞系以及多种肝组织中的表达。结果制备的单克隆抗体亚型为IgG1,效价达112 800。竞争抑制实验结果显示该单抗具有很好的ASGPR结合特异性,而且识别的肽段位于ASGPR胞外段。流式细胞术检测结果显示,ASGPR不同程度地表达于肝源性细胞系,但不表达于非肝源性细胞系。免疫组织化学检测结果显示,ASGPR专一性表达于正常肝组织和肝癌组织,在肝癌组织的表达与分化程度有关,高分化肝癌中的阳性率高于低分化肝癌(75.0%vs 28.6%,P<0.05)。结论成功制备高特异性人ASGPR小鼠单克隆抗体,适用于用流式细胞术和免疫组织化学法检测ASGPR表达,可用于临床病理鉴定原发性肝癌与转移性肝癌。 展开更多

关键词 去唾液酸糖蛋白受体 单克隆抗体 肝肿瘤 流式细胞术 免疫组织化学

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去唾液酸糖蛋白受体及其在药物肝靶向递送中的应用 被引量：14

8

作者 黄渊余 梁子才 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2015年第6期501-510,共10页

去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)是肝细胞特异性表达的受体,且是一种高效的内吞型受体,去唾液酸糖蛋白、半乳糖、半乳糖胺、N-乙酰半乳糖胺等糖分子对其有高亲和性.该综述回顾了ASGPR的发现历程、结构特征、生物学功能、表达模式、胞吞特点.... 去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)是肝细胞特异性表达的受体,且是一种高效的内吞型受体,去唾液酸糖蛋白、半乳糖、半乳糖胺、N-乙酰半乳糖胺等糖分子对其有高亲和性.该综述回顾了ASGPR的发现历程、结构特征、生物学功能、表达模式、胞吞特点.总结了影响ASGPR与其配体亲和、介导胞吞的影响因素(包括配体类型、触角数量、空间距离与颗粒粒径).概述了早期ASGPR与其特异性配体在药物递送中的应用.最后介绍了最近利用N-乙酰半乳糖胺的缀合或修饰来实现肝靶向核酸药物递送的研究进展. 展开更多

关键词 去唾液酸糖蛋白受体 N-乙酰半乳糖胺 药物递送 肝靶向 小干扰RNA 反义核酸

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去唾液酸糖蛋白受体介导的肝肿瘤靶向载药系统研究进展 被引量：2

9

作者 高媛悦 刘爱赟 +1 位作者 沈佳佳 丁娅 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期537-542,共6页

去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor,ASGPR)是一种主要表达在肝窦状隙和基底外侧细胞表面的受体,它能专一性识别、结合并内吞末端具有半乳糖或乙酰氨基半乳糖残基的去唾液酸糖蛋白类物质。基于这一特性,ASGPR受体介导的肝... 去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor,ASGPR)是一种主要表达在肝窦状隙和基底外侧细胞表面的受体,它能专一性识别、结合并内吞末端具有半乳糖或乙酰氨基半乳糖残基的去唾液酸糖蛋白类物质。基于这一特性,ASGPR受体介导的肝肿瘤靶向治疗引起了研究者们的广泛关注。本文从糖基化前药、小分子纳米药物载体和糖基化基因复合物3个方面对近3年来该领域的最新研究进展进行综述。 展开更多

关键词 去唾液酸糖蛋白受体 肝靶向 前药 药物载体 基因治疗

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去唾液酸糖蛋白受体介导的新型肝细胞靶向磁共振对比剂的体外实验研究 被引量：1

10

作者 刘冠宇 刘屹 《中国临床医学影像杂志》 CAS 2019年第12期869-874,共6页

目的 :探讨去唾液酸糖蛋白受体(Asialoglycoprotein receptor,ASGPR)介导的新型肝细胞靶向磁共振对比剂(Fe-HSA-LA)对大鼠正常肝细胞(BRL 3A)的靶向性及利用MR检测的可行性。方法:制备Fe-HSA-LA,透射电镜(TEM)观测其表征,MR检测其T2弛... 目的 :探讨去唾液酸糖蛋白受体(Asialoglycoprotein receptor,ASGPR)介导的新型肝细胞靶向磁共振对比剂(Fe-HSA-LA)对大鼠正常肝细胞(BRL 3A)的靶向性及利用MR检测的可行性。方法:制备Fe-HSA-LA,透射电镜(TEM)观测其表征,MR检测其T2弛豫率。采用CCK-8法检测Fe-HSA-LA的细胞毒性。以10μg Fe/mL和50μg Fe/mL浓度的Fe-HSA-LA和PEG-USPIO分别孵育BRL 3A细胞及Colon26细胞后普鲁士蓝染色,对细胞悬液进行MR T2加权成像及T2map成像,利用原子吸收光谱法(AAS)测定各组标记细胞的结合铁量。结果:Fe-HSA-LA和PEG-USPIO的Z-平均水合粒径分别为(53.38±17.07)nm和(16.57±4.18)nm,Zeta电位分别为(-23.3±9.10)mV和(2.57±0.83)mV,T2弛豫率分别为168.4 mM-1s-1和416.3 mM-1s-1。细胞毒性实验表明,Fe-HSA-LA浓度≤50μg Fe/mL时,BRL 3A细胞存活率达到95%以上。普鲁士蓝染色显示BRL 3A细胞结合的Fe-HSA-LA含量最高(P<0.05)。磁共振检测显示,当Fe-HSA-LA浓度≥3.125μg Fe/mL时,Fe-HSA-LA标记的BRL 3A细胞的信号降低最明显,细胞内的铁含量最高(P<0.05)。标记细胞R2值和细胞内铁含量之间具有良好的相关性。结论:Fe-HSA-LA对BRL 3A细胞具有靶向效应,可采用3.0T MR对其进行监测。 展开更多

关键词 去唾液酸糖蛋白受体 肝细胞 磁共振成像

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^99mTc-DTPA-半乳糖人血清白蛋白在不同小鼠肝损伤模型中肝功能显像的应用 被引量：17

11

作者 毛一雷 董一女 +4 位作者 张现忠 杨文江 杜顺达 童俊翔 王学斌 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期404-408,I0001,I0002,共7页

目的明确肝显像剂99mTc-DTPA-半乳糖人血清白蛋白(99mTc-GSA)在3种不同类型肝细胞损伤小鼠模型中不同的摄取和生物分布情况。方法3种小鼠模型分别为肝硬化、淤胆性肝损伤和肝肿瘤模型。肝硬化模型用腹腔内注射CCl4完成(每48小时腹腔注射... 目的明确肝显像剂99mTc-DTPA-半乳糖人血清白蛋白(99mTc-GSA)在3种不同类型肝细胞损伤小鼠模型中不同的摄取和生物分布情况。方法3种小鼠模型分别为肝硬化、淤胆性肝损伤和肝肿瘤模型。肝硬化模型用腹腔内注射CCl4完成(每48小时腹腔注射0.4 ml 10%CCl4,共48 d);淤胆性肝损伤模型以结扎胆总管72 h建立;肝肿瘤模型用H22肿瘤细胞株种植肝包膜下10 d建立。各模型组小鼠和正常对照组小鼠均以0.1 ml(0.37 MBq)99mTc-GSA(2μg)注射尾静脉,5 min后断头处死,取出各重要器官或组织(肝脏、心脏、肺脏、肾脏、脾脏、胃、血液、骨骼、肌肉、肠道)称量,测定其放射性计数。同时血清学及肝脏病理学检查验证肝脏损伤。结果3个模型组和对照组中99mTc-GSA在小鼠肝脏均有显著浓聚(均>40%ID.g-1),但与对照组(90.05±10.55)%ID.g-1相比,肝损伤模型组的浓聚度均显著下降(P<0.001)。病理检查结果和建立模型时预期的病变相符;血清肝功能显示肝硬化模型组的损伤[天冬氨酸转氨酶为(235.3±14.7)U/L]轻于淤胆性肝损伤模型以及肝肿瘤模型[天冬氨酸转氨酶分别为(841.3±68.7)和(1 060.3±208.3)U/L];但肝硬化模型的浓聚度(72.20±2.13)%ID.g-1较淤胆性肝损伤模型(56.72±5.92)%ID.g-1及肝肿瘤模型(42.80±6.05)%ID.g-1显著增高(P<0.001)。结论99mTc-GSA在肝脏有显著浓聚,其浓聚程度与肝功能受损情况呈负相关。99mTc-GSA可能成为临床上反映肝功能的显像剂,如与三维扫描技术相结合,有希望建立评估肝脏区段功能的三维成像系统。 展开更多

关键词 肝脏显像 去唾液酸糖蛋白受体显像剂 ^99mTc-DTPA半-乳糖人血清白蛋白 肝损伤模型

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抗人ASGPR大亚基异构体蛋白H1b多克隆抗体的制备和鉴定 被引量：3

12

作者 刘嘉 丁红晖 +5 位作者 杨燕 胡斌 余源 黄红平 陆蒙吉 杨东亮 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期917-919,共3页

目的:制备小鼠抗人ASGPR大亚基异构体蛋白H1b的多克隆抗体,并鉴定其特异性。方法:合成H1b特异性多肽,以匙孔血蓝蛋白(KLH)作为载体构建多肽免疫原,通过致敏小鼠,制备小鼠抗人H1b蛋白的多克隆抗体;ELISA法检测抗体效价,通过Western blot... 目的:制备小鼠抗人ASGPR大亚基异构体蛋白H1b的多克隆抗体,并鉴定其特异性。方法:合成H1b特异性多肽,以匙孔血蓝蛋白(KLH)作为载体构建多肽免疫原,通过致敏小鼠,制备小鼠抗人H1b蛋白的多克隆抗体;ELISA法检测抗体效价,通过Western blot和免疫组织化学检测,鉴定抗体的特异性与适用范围。结果:得到小鼠抗人H1b蛋白的多克隆抗体,效价达1∶105。纯化后的抗体用于Western blot可高特异性识别真核表达的H1b蛋白,并可用于免疫组织化学实验。结论:成功制备小鼠抗人H1b蛋白的多克隆抗体,该抗体具有较高的效价以及特异性,能区分ASG-PR大亚基的两种剪接异构体,从而为进一步研究H1b蛋白的生理功能及其在人类疾病中的意义提供了有利工具。 展开更多

关键词 去唾液酸糖蛋白受体 多克隆抗体 剪接异构体

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Gal-BSA-SPIO制备及兔VX2肝癌模型与人肝脏ASG受体的MRI研究 被引量：2

13

作者 贾飞鸽 张晓东 +1 位作者 许乙凯 孟卓 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期191-194,共4页

目的尝试合成肝脏靶向对比剂乳糖基白蛋白超顺磁氧化铁(Gal-BSA-SPIO),探讨Gal-BSA-SPIO对肝癌的检出及其诊断价值。材料和方法采用还原胺法合成Gal-BSA。Gal-BSA与SPIO混合后超声振荡。建立20只兔的VX2肝癌模型,随机分为SPIO组和Gal-BS... 目的尝试合成肝脏靶向对比剂乳糖基白蛋白超顺磁氧化铁(Gal-BSA-SPIO),探讨Gal-BSA-SPIO对肝癌的检出及其诊断价值。材料和方法采用还原胺法合成Gal-BSA。Gal-BSA与SPIO混合后超声振荡。建立20只兔的VX2肝癌模型,随机分为SPIO组和Gal-BSA-SPIO组,行MR平扫及增强。测定肝脏及肿瘤的T2值。对13例人肝脏标本(肝癌6例、肝硬化4例、正常肝组织3例)Gal-BSA-SPIO孵育后,Perl's染色,观察去唾液酸糖蛋白(ASG)受体分布。统计学方法:对增强前后各组的T2值进行t检验。结果Gal-BSA-SPIO平均粒径34.4nm。20只兔VX2肿瘤直径3～12mm,T1WI肝实质呈中等信号,肿瘤呈低信号,T2WI肝实质低信号,病灶为略高信号;GRET2*WI肝实质中等信号,肿瘤略高信号。增强扫描,SPIO组T2WI肝实质信号轻中度下降,与肿瘤对比提高;Gal-BSA-SPIO组T2WI肝实质信号显著下降,肿瘤呈明亮的"灯泡征"。正常肝脏的SPIO组和Gal-BSA-SPIO组增强后T2值明显下降,与增强前有显著性差异。肿瘤的SPIO组和Gal-BSA-SPIO组增强后T2值无明显下降,与增强前无显著性差异。组织学检查SPIO组,Kupffer细胞内见蓝染的铁颗粒;Gal-BSA-SPIO组,肝细胞内见较多的蓝染的铁颗粒,两组的肿瘤内未见蓝染的铁颗粒。Gal-BSA-SPIO孵育后,正常肝组织可见大量蓝染色,肝硬化及癌旁肝硬化组织均可见蓝染色;肝细胞癌罕见蓝染色。结论Gal-BSA-SPIO可以与肝细胞膜的ASG受体可特异性结合,通过受体介导的特异性对肝脏产生负向增强作用,明显提高肿瘤对比噪声比。 展开更多

关键词 超顺磁氧化铁 乳糖基白蛋白 去唾液酸糖蛋白受体 VX2 肝癌

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口服肝靶向制剂介导受体ASBT和ASGPR在肝泡型包虫病大鼠模型体内的表达分析 被引量：1

14

作者 高瑞雪 胡春晖 +4 位作者 张发斌 高攀 甘雪辉 张耀刚 姜博璠 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2021年第4期846-851,共6页

目的通过测定顶端钠依赖性胆盐转运体(ASBT)和去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)的表达研究,探讨其在肝泡型包虫病(HAE)药物治疗方面口服肝靶向制剂设计的可行性。方法18只雄性SD大鼠,10只大鼠造模,造模成功的8只大鼠为HAE组,正常组大鼠8只作... 目的通过测定顶端钠依赖性胆盐转运体(ASBT)和去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)的表达研究,探讨其在肝泡型包虫病(HAE)药物治疗方面口服肝靶向制剂设计的可行性。方法18只雄性SD大鼠,10只大鼠造模,造模成功的8只大鼠为HAE组,正常组大鼠8只作为对照。采用免疫荧光、Western Blot、实时荧光定量PCR对ASBT在HAE模型大鼠及正常大鼠的回肠组织的表达分布、蛋白及基因表达水平进行检测分析;采用同样的检测方法分析ASGPR在HAE大鼠模型的非患病肝组织、肝组织病灶边缘带及正常大鼠肝组织的表达水平。符合正态分布的计量资料2组间比较采用t检验,3组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验。结果免疫荧光、Western Blot、实时荧光定量PCR结果均显示ASBT在HAE组回肠组织的表达较正常组表达上调(t值分别为5.309、4.110、28.060,P值均<0.05)。免疫荧光、Western Blot、实时荧光定量PCR结果均显示,ASGPR在正常对照组大鼠肝组织、HAE组大鼠非患病肝组织和HAE组大鼠肝织病灶边缘带中表达差异有统计学意义(F值分别为110.666、128.201、143.879,P值均<0.001),其中HAE组较正常组表达水平高,且越靠近病灶组织表达越高。结论ASBT和ASGPR可作为HAE潜在的口服肝靶向制剂的介导受体,为设计用于治疗HAE的口服肝靶向制剂提供理论基础。 展开更多

关键词 棘球蚴病 肝 分子靶向治疗 顶端钠依赖性胆盐转运体 去唾液酸糖蛋白受体 大鼠 Sprague-Dawley

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番连化浊方对急性高脂血症小鼠胆固醇代谢紊乱的调节作用 被引量：4

15

作者 牛梦园 戴卫波 +5 位作者 董更婷 钟希文 黄曼婷 张哲 王琪文 李乐愚 《世界中医药》 CAS 北大核心 2024年第15期2284-2289,共6页

目的:探讨番连化浊方对急性高脂血症小鼠胆固醇代谢紊乱的调节作用。方法:采用Triton-WR1339构建C57BL/6小鼠急性高脂血症模型,给药5 d后,测定血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C... 目的:探讨番连化浊方对急性高脂血症小鼠胆固醇代谢紊乱的调节作用。方法:采用Triton-WR1339构建C57BL/6小鼠急性高脂血症模型,给药5 d后,测定血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)含量;苏木精-伊红(HE)染色观察肝脏病理变化;油红O染色检测肝脏内脂质累积情况;蛋白质印迹法检测肝脏去唾液酸糖蛋白受体1(ASGR1)、肝X受体α(LXRα)、三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1(ABCA1)、ABCA5、细胞色素P4507A1(CYP7A1)蛋白表达变化。结果:与模型组比较,番连化浊方能显著降低血清中TC、TG、LDL-C、GOT、GPT含量,同时升高HDL-C含量(均P<0.05);显著上调ABCA1、ABCG5、LXRα、CYP7A1蛋白表达水平,显著下调ASGR1蛋白表达水平(均P<0.05);显著减少肝细胞内脂质累积,改善肝脏病理形态。结论:番连化浊方可能通过调控ASGR1/LXRα/CYP7A1信号通路促进急性高脂血症小鼠的胆固醇外排,降低血脂。 展开更多

关键词 番连化浊方 高脂血症 胆固醇 去唾液酸糖蛋白受体1 肝X受体Α 细胞色素P4507A1 三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1 三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A5

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甲氨喋呤-乳糖酰基壳聚糖的制备及其体外实验 被引量：19

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作者 王银松 韩月莲 +2 位作者 李英霞 王玉玫 李荣珊 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2007年第6期1092-1097,共6页

制备了不同乳糖酰基取代度的N-乳糖酰基壳聚糖(LCH),并通过红外光谱(IR)及核磁共振氢谱(1H NMR)对其进行了结构表征.体外放射性配基竞争结合实验结果显示,当乳糖酰基取代度为15·5%～38·9%时,LCH对肝实质细胞膜表面去唾液酸糖... 制备了不同乳糖酰基取代度的N-乳糖酰基壳聚糖(LCH),并通过红外光谱(IR)及核磁共振氢谱(1H NMR)对其进行了结构表征.体外放射性配基竞争结合实验结果显示,当乳糖酰基取代度为15·5%～38·9%时,LCH对肝实质细胞膜表面去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)具有特异亲和性,即具有潜在的肝靶向性.将甲氨喋呤(MTX)与壳聚糖以酰胺键偶联,制备MTX-壳聚糖(MTX-CH),再与乳糖酸反应生成目标产物MTX-乳糖酰基壳聚糖(MTX-LCH),并通过紫外分光光度法(UV)检测MTX的取代度为5·6%,乳糖酰基取代度为33·8%.溶解性实验结果显示,MTX-LCH溶于pH=1～14的水溶液;体外释放实验结果表明,MTX-LCH性质稳定,能明显延缓MTX的释放. 展开更多

关键词 N-乳糖酰基壳聚糖 甲氨喋呤 去唾液酸糖蛋白受体 肝靶向 高分子前体药

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脂质体的乳糖化修饰及其肝脏靶向性研究 被引量：9

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作者 陈永鹏 章廉 +3 位作者 胡俊 刘定立 冯筱榕 骆抗先 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第3期177-179,共3页

目的探讨乳糖化白蛋白－脂质体交联物（简称交联物）作为肝脏靶向性药物载体的可行性。方法应用生物化学技 术合成交联物并对大鼠进行体内实验，了解交联物在动物肝脏的聚集量以及预先注射乳糖化白蛋白对交联物肝脏聚集 性的抑制作用；... 目的探讨乳糖化白蛋白－脂质体交联物（简称交联物）作为肝脏靶向性药物载体的可行性。方法应用生物化学技 术合成交联物并对大鼠进行体内实验，了解交联物在动物肝脏的聚集量以及预先注射乳糖化白蛋白对交联物肝脏聚集 性的抑制作用；比较交联物、普通脂质体分别包裹的 α－干扰素及游离 α－干扰素在 ２．２．１５细胞中的抗乙型肝炎病毒效 应。结果交联物在肝脏的聚集量是脾脏的２倍以上，是其他脏器的４－９倍；预先注射乳糖化白蛋白后交联物的肝脏聚 集性减弱，与脾脏聚集量无显著差异；交联物包裹干扰素后抗乙肝病毒效应较普通脂质体包裹的干扰素及游离干扰素 显著提高，相当于普通脂质体干扰素１／４剂量、游离干扰素１／８剂量的抗病毒效应。结论文联物通过去唾液酸糖蛋白受 体实现肝脏聚集性，可望成为理想的肝脏靶向性药物载体。 展开更多

关键词 去唾液酸糖蛋白受体 药物靶向性 靶向性脂质体 肝脏疾病脂质体 乳糖化修饰

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大鼠IL-10基因真核表达质粒的构建及其在BRL细胞中的表达 被引量：5

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作者 陈运新 黄月红 +2 位作者 陈治新 郑伟达 王小众 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期332-334,共3页

目的:构建大鼠IL-10基因的真核表达载体,观察其在大鼠肝细胞系BRL中的表达,比较有无受体介导的脂质体的转染效率。方法:抽提外周血单个核细胞的总RNA,通过RT-巢式PCR方法获得大鼠IL-10的全长编码序列,定向克隆到真核表达载体pcDNA3·... 目的:构建大鼠IL-10基因的真核表达载体,观察其在大鼠肝细胞系BRL中的表达,比较有无受体介导的脂质体的转染效率。方法:抽提外周血单个核细胞的总RNA,通过RT-巢式PCR方法获得大鼠IL-10的全长编码序列,定向克隆到真核表达载体pcDNA3·0,并进行限制性内切酶酶切及测序鉴定。将重组质粒分别通过脂质体TransfastTM与去唾液酸糖蛋白受体介导的脂质体PEIjet-gal转入大鼠肝细胞系BRL,通过RT-PCR方法检测IL-10mRNA的表达,比较二者的转染效率,用ELISA法检测后者分泌型IL-10的表达。结果:经酶切及测序鉴定证实,重组质粒插入片段与大鼠IL-10的全长编码序列完全相符。发现受体介导的脂质体PEIjet-gal转染效率明显高于非受体介导的脂质体TransfastTM。通过受体介导的脂质体转染,BRL细胞获得高水平的IL-10表达。结论:成功地构建pcDNA3·0-IL-10重组质粒。受体介导的脂质体对肝细胞有较高的转染活性,可能成为IL-10基因治疗肝纤维化的有效转染载体。 展开更多

关键词 白细胞介素-10 基因治疗 去唾液酸糖蛋白受体 肝细胞

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肝靶向抗病毒药Lac-PLL-ACV的制备及其趋肝性研究 被引量：3

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作者 项贵明 周世文 +2 位作者 汤建林 徐颖 黄永平 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期311-313,共3页

目的　减少抗病毒药阿昔洛韦 (Acyclovir ,ACV)在治疗乙型肝炎中的肝外毒副作用 ,获得肝靶向ACV偶联物。方法　多聚赖氨酸 (Poly L lysine ,PLL)在氰硼酸钠的催化作用下与乳糖反应生成乳糖化多聚赖氨酸 ,乳糖化多聚赖氨酸与咪唑化阿昔... 目的　减少抗病毒药阿昔洛韦 (Acyclovir ,ACV)在治疗乙型肝炎中的肝外毒副作用 ,获得肝靶向ACV偶联物。方法　多聚赖氨酸 (Poly L lysine ,PLL)在氰硼酸钠的催化作用下与乳糖反应生成乳糖化多聚赖氨酸 ,乳糖化多聚赖氨酸与咪唑化阿昔洛韦在 3 7℃pH 9 5的条件下反应合成偶联物乳糖化多聚赖氨酸 阿昔洛韦 (Lactosaminatedpoly L lysine acyclovir ,Lac PLL ACV)。偶联物经尾静脉注射进入小鼠体内后 ,收集小鼠血浆及肝脏样品 ,用高效液相色谱法测定药物浓度 ,研究偶联物的体内分布和药代动力学。结果　HPLC检测证实Lac PLL ACV在血浆中十分稳定 ,不易解离出ACV。偶联物的肝最大摄取率约为 60 % ,是ACV组的 10倍以上 ,偶联物肝中的T1/ 2 ,AUC ,CL分别为ACV的 4 2倍 ,5 6 6倍和 1/ 5 7,具有明显的肝靶向性。结论　乳糖化多聚赖氨酸作为肝去唾液酸糖蛋白受体 (Asialoglycoproteinreceptor ,ASGPR)介导的一种药物载体 。 展开更多

关键词 去唾液酸糖蛋白受体 肝靶向抗病毒药 阿昔洛韦 药代动力学 Lac-PLL-ACV 超肝性 研究 病毒性肝炎

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ASGP-R介导的乳糖酸-壳聚糖-SPIO纳米颗粒的制备及体外MR成像 被引量：4

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作者 金光玉 全松石 +2 位作者 龙彦军 刘岩 金恩浩 《中国医学计算机成像杂志》 CSCD 北大核心 2013年第6期558-562,共5页

目的:探讨去唾液酸糖蛋白受体(ASGP-R)介导的肝细胞靶向磁性纳米颗粒应用于磁共振分子成像的可行性。方法:乳糖酸与壳聚糖偶联修饰超顺磁性氧化铁纳米颗粒,采用透射电镜与动态光散射纳米粒度分析仪对LA-CS@SPION进行形貌表征;MTT法检测... 目的:探讨去唾液酸糖蛋白受体(ASGP-R)介导的肝细胞靶向磁性纳米颗粒应用于磁共振分子成像的可行性。方法:乳糖酸与壳聚糖偶联修饰超顺磁性氧化铁纳米颗粒,采用透射电镜与动态光散射纳米粒度分析仪对LA-CS@SPION进行形貌表征;MTT法检测细胞毒性;利用体外及体内磁共振成像验证磁性纳米粒对肝细胞的靶向增强作用;普鲁士蓝染色观察肝细胞铁颗粒摄取情况。结果:LA-CS@SPION显示超顺磁性,T2弛豫率为456±5.8mM‐1S‐1。普鲁士蓝染色显示肝细胞浆内大量铁颗粒聚集,同时加入乳糖酸后肝细胞内未见铁颗粒。结论:ASGP-R介导的LA-CS@SPION对肝细胞具有特异靶向性,可作为肝脏MRI靶向对比剂。 展开更多

关键词 去唾液酸糖蛋白受体 乳糖酸 壳聚糖 肝靶向 磁共振成像

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