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基于荧光定量PCR检测和原位杂交技术分析湖北省蛋鸡滑液支原体的感染情况
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作者 王纯 王晴 +8 位作者 吴晓倩 胡婷 崔卫涛 裴洁 宋铁平 胡思顺 张万坡 李自力 周祖涛 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第3期1396-1407,共12页
近年来,滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)在鸡群中的感染率日益上升。湖北省蛋鸡存栏规模较大,各蛋鸡品种均有饲养,目前湖北省蛋鸡群MS感染情况尚不清楚。因此,本研究开展湖北省规模蛋鸡养殖场鸡群MS感染情况的调查并探究MS在产蛋壳... 近年来,滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)在鸡群中的感染率日益上升。湖北省蛋鸡存栏规模较大,各蛋鸡品种均有饲养,目前湖北省蛋鸡群MS感染情况尚不清楚。因此,本研究开展湖北省规模蛋鸡养殖场鸡群MS感染情况的调查并探究MS在产蛋壳顶端异常(eggshell apex abnormality,EAA)蛋鸡输卵管中的分布。采集湖北省36个规模蛋鸡养殖场82个鸡群血清和气管棉拭子各1637份,利用建立的荧光定量PCR(real-time qPCR)方法检测MS载量,ELISA试剂盒检测免疫鸡群和非免疫鸡群血清抗体,并对产EAA蛋的蛋鸡输卵管进行MS载量、病理切片和MS定位分析。结果显示,临床样本中,喉气管拭子MS阳性率9.41%;血清抗体阳性率92.24%,其中非免疫鸡群抗体阳性率89.04%,且6月龄抗体达100%阳性,免疫鸡群抗体阳性率95%;36个规模场中有26个(72.22%)MS感染阳性场,82个鸡群中有61个(74.39%)感染阳性群;10个蛋鸡品种均有MS感染。产EAA蛋的鸡输卵管部位检出MS且膨大部的载量极显著高于子宫部、峡部和漏斗部(P<0.01),子宫部显著高于峡部和漏斗部(P<0.05);在产EAA蛋的蛋鸡输卵管中,峡部和子宫部出现黏膜上皮细胞变性和腺体肿大以及膨大部出现腺体上皮细胞脱落和坏死,子宫部和峡部的黏膜上皮以及膨大部的黏膜上皮和管状腺周围都有MS阳性信号检出,其中膨大部和子宫部阳性信号最强。综上,湖北省蛋鸡场MS感染严重,不同品种均有感染,MS主要定植在蛋鸡输卵管子宫部和膨大部中并造成病理损伤。本研究为湖北省蛋鸡MS感染情况的认识和MS引起EAA蛋的研究提供了数据支撑。 展开更多
关键词 滑液支原体 蛋壳顶端异常 荧光定量pcr 原位杂交 组织分布
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巴西橡胶树HbMyb1基因的原位PCR物理定位 被引量:6
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作者 高和琼 庄南生 +1 位作者 王英 邱海燕 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期365-368,共4页
为探讨巴西橡胶树(Heveabrasiliensis)皮病抗性相关HbMyb]基因的定位,采用所建立的橡胶树染色体原位PCR技术体系进行研究。结果表明,HbMybl基因初步定位于巴西橡胶树‘热研7.33—97’的第5号染色体长臂上,信号位点到着丝粒的百分... 为探讨巴西橡胶树(Heveabrasiliensis)皮病抗性相关HbMyb]基因的定位,采用所建立的橡胶树染色体原位PCR技术体系进行研究。结果表明,HbMybl基因初步定位于巴西橡胶树‘热研7.33—97’的第5号染色体长臂上,信号位点到着丝粒的百分距离为15.21,并观察到在巴西橡胶树‘热研7.33.97’叶片细胞核的不同分裂时期均扩增到1~2个信号。同时对染色体标本的制备、保存、预处理等方面进行了探讨。 展开更多
关键词 橡胶树 HbMyb1基因 原位pcr 染色体定位
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茶树叶片β-葡萄糖苷酶基因的原位PCR研究 被引量:6
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作者 李远华 江昌俊 余有本 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期147-150,共4页
关键词 茶树 Β-葡萄糖苷酶基因 原位pcr
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适合原位RT-PCR的石蜡切片制作方法 被引量:7
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作者 刘宏 牛建新 韩晓燕 《生物技术通报》 CAS CSCD 2006年第1期58-60,共3页
石蜡切片是原位RT-PCR中常用一种生物制片技术,简要阐述原位RT-PCR的原理以及适合于原位RT-PCR的石蜡切片的制作流程,对其易出现的问题和解决办法作了简要的概述。
关键词 石蜡切片 原位RT—pcr
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半套式原位 PCR 技术在非何杰金氏淋巴瘤 bc1-2/JH 融合基因检测中的应用 被引量:3
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作者 肖莎 朱新生 郭琳琅 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1997年第A01期14-15,共2页
本文在实验中建立了半套式原位PCR技术,采用一对半引物,两次PCR扩增,经外引物扩增的片段又经内引物扩增,既增加了反应的特异性,又增加了敏感性,并能得到丰富的特异性靶序列。对于组织切片中低拷贝基因的检测更赋有意义。
关键词 原位pcr 半套式 淋巴瘤 融合基因
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豫医无毛小鼠无毛基因DNA原位PCR检测 被引量:2
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作者 轩小燕 付庆 +1 位作者 杜献堂 李敏 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2003年第2期203-204,共2页
目的 :探讨原位PCR技术对检测基因组变异的有效性。方法 :应用原位PCR检测豫医无毛小鼠皮肤和脾的石蜡组织切片 ,并以健康昆明小鼠皮肤和脾的石蜡组织切片、PCR反应液不加TaqDNA聚合酶、不加引物和引物不带生物素作为对照。结果 :豫医... 目的 :探讨原位PCR技术对检测基因组变异的有效性。方法 :应用原位PCR检测豫医无毛小鼠皮肤和脾的石蜡组织切片 ,并以健康昆明小鼠皮肤和脾的石蜡组织切片、PCR反应液不加TaqDNA聚合酶、不加引物和引物不带生物素作为对照。结果 :豫医无毛小鼠皮肤和脾石蜡组织切片中检测到清晰的杂交信号 ,而且杂交信号位于细胞核内 ;4组对照均未出现杂交信号。结论 :原位PCR在基因组变异检测方面实用。 展开更多
关键词 小鼠 无毛基因 原位pcr DNA检测
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猫肾F_(81)传代细胞中犬细小病毒原位PCR检测方法 被引量:8
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作者 刘雪燕 黄韧 +1 位作者 刘忠华 程树军 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2001年第3期146-149,共4页
目的 建立在猫肾F81 细胞中犬细小病毒原位PCR的检测方法。方法 在猫肾F81 细胞上感染犬细小病毒 ,设计特异性引物 ,用直接原位PCR法在染毒 12h ,2 4h ,48h细胞片上检测出犬细小病毒 ,并与常规免疫组化的方法进行了比较。结果 在染毒... 目的 建立在猫肾F81 细胞中犬细小病毒原位PCR的检测方法。方法 在猫肾F81 细胞上感染犬细小病毒 ,设计特异性引物 ,用直接原位PCR法在染毒 12h ,2 4h ,48h细胞片上检测出犬细小病毒 ,并与常规免疫组化的方法进行了比较。结果 在染毒 48h的细胞片上 ,用阳性记分法将两种检测方法得到的阳性细胞进行统计比较 ,差异极显著 (P <0 .0 0 1) ,用原位PCR法所得出的阳性率高。 展开更多
关键词 原位pcr 阳性细胞 染毒 上感 检测方法 常规免疫 感染 犬细小病毒 特异性引物 传代细胞
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原位PCR技术检测PTEN基因DNA在肺癌中的表达 被引量:4
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作者 辛丽红 李雅莉 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1270-1273,共4页
目的:从DNA水平检测PTEN基因在肺癌组织中的表达,探讨PTEN基因的表达与肺癌发生发展的关系。方法:应用原位PCR技术检测56例肺癌石蜡标本PTEN基因DNA表达。结果:①PTEN DNA表达阳性信号主要位于癌细胞核,胞浆中亦有少量表达,阳性产物呈... 目的:从DNA水平检测PTEN基因在肺癌组织中的表达,探讨PTEN基因的表达与肺癌发生发展的关系。方法:应用原位PCR技术检测56例肺癌石蜡标本PTEN基因DNA表达。结果:①PTEN DNA表达阳性信号主要位于癌细胞核,胞浆中亦有少量表达,阳性产物呈棕黄色弥漫分布;②不同性别患者的PTEN基因的表达不同,但差异甚微;③PTEN DNA表达在非小细胞肺癌中的阳性率明显高于小细胞肺癌中的表达阳性率;④分化不良的肺癌PTEN基因表达阳性率低于分化良好和中等分化者;⑤19例有淋巴结转移的肺癌患者PTEN基因表达明显低于37例无淋巴结转移者。结论:PTEN基因在肺癌组织中的表达较正常肺组织中的表达有所降低,说明PTEN基因的低表达可能在肺癌的发生发展过程中起重要作用,且该基因的表达与肺癌患者的性别无显著相关,而与肺癌的病理类型、组织分化程度、临床分期,以及有无淋巴结转移密切相关。 展开更多
关键词 肺癌 PTEN 原位pcr
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原位PCR防脱片方法的选择及应用 被引量:3
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作者 肖莎 朱新生 郭琳琅 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 1998年第1期52-52,I008,共2页
原位PCR防脱片方法的选择及应用肖莎朱新生郭琳琅原位PCR是PCR与原位杂交两种方法的结合,其最大的特点就是将附在载玻片上组织切片内的靶基因原位扩增、原位检测、原位观察。这对于探明靶基因与病变发生发展的关系十分重要。... 原位PCR防脱片方法的选择及应用肖莎朱新生郭琳琅原位PCR是PCR与原位杂交两种方法的结合,其最大的特点就是将附在载玻片上组织切片内的靶基因原位扩增、原位检测、原位观察。这对于探明靶基因与病变发生发展的关系十分重要。然而原位PCR步骤多,时间长,其间... 展开更多
关键词 聚合酶链反应 原位pcr 脱片 预防
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原位PCR及其在植物研究中的应用 被引量:12
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作者 吴文嫱 黄东益 庄南生 《热带农业科学》 2006年第2期65-69,共5页
原位PCR是继PCR技术发明以来,分子生物学技术上又一个革命性的突破。由于该技术可检测出组织或细胞中低拷贝,甚至是单拷贝的特异序列,而被越来越多的研究人员青睐,但它在植物上的应用报道较少。该文简要介绍了原位PCR的技术原理;综述了... 原位PCR是继PCR技术发明以来,分子生物学技术上又一个革命性的突破。由于该技术可检测出组织或细胞中低拷贝,甚至是单拷贝的特异序列,而被越来越多的研究人员青睐,但它在植物上的应用报道较少。该文简要介绍了原位PCR的技术原理;综述了国内外研究人员以植物材料为研究对象进行原位PCR的技术操作;综述了原位PCR在植物细胞水平、组织水平和染色体水平的应用进展;探讨了原位PCR在植物上应用难的原因;从4个方面阐述了原位PCR在植物上的应用前景:(1)单拷贝、低拷贝和多拷贝的基因或特异序列的检测;(2)杂种中亲本染色体的鉴定;(3)物种进化的研究;(4)遗传转化材料的分析。 展开更多
关键词 植物原位pcr 特异序列 检测 应用
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原位PCR技术检测肾组织乙肝病毒DNA的临床价值 被引量:6
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作者 李刚 王力 周展眉 《实用医学杂志》 CAS 2003年第12期1312-1313,共2页
目的 :探讨原位PCR技术检测肾组织乙肝病毒DNA的可靠性。方法 :将肾活检确诊为乙肝病毒相关性肾炎患者 5 9例与血清单纯HBsAb阳性且肾组织未查到HBsAg病人 15 2例的肾组织PCR检查结果 ,按照诊断试验的研究方法进行比较。结果 :PCR检测... 目的 :探讨原位PCR技术检测肾组织乙肝病毒DNA的可靠性。方法 :将肾活检确诊为乙肝病毒相关性肾炎患者 5 9例与血清单纯HBsAb阳性且肾组织未查到HBsAg病人 15 2例的肾组织PCR检查结果 ,按照诊断试验的研究方法进行比较。结果 :PCR检测肾组织HBVDNA的假阳性率 5 3 2 9% ,假阴性率 49 15 % ,诊断符合率47 87%。结论 :原位PCR检测肾组织中HBVDNA有较高的假阳性率和假阴性率 。 展开更多
关键词 原位pcr技术 检测 肾组织 乙肝病毒DNA 乙肝病毒相关性肾炎
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原位PCR确诊一例由病毒性心肌炎所致心肌梗塞 被引量:1
12
作者 徐瑾 陈曙霞 +1 位作者 谢龙山 石迪明 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2000年第6期571-573,共3页
目的应用原位PCR诊断青年型急性心肌梗塞的柯萨奇B组病毒 (coxsackievirusB ,CVB)感染。方法应用原位PCR法对具有急性心肌梗塞临床演变年轻患者的心肌活检组织进行CVB检测 ,以明确病因。 结果患者的心肌活检组织中CVB -RNA显示阳性。... 目的应用原位PCR诊断青年型急性心肌梗塞的柯萨奇B组病毒 (coxsackievirusB ,CVB)感染。方法应用原位PCR法对具有急性心肌梗塞临床演变年轻患者的心肌活检组织进行CVB检测 ,以明确病因。 结果患者的心肌活检组织中CVB -RNA显示阳性。 结论柯萨奇B组病毒感染所致的急性病毒性心肌炎可导致急性心肌梗塞。 展开更多
关键词 原位pcr 病毒性心肌炎 心肌梗塞 CVB
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应用原位逆转录PCR技术检测Captopril对动脉粥样斑块中c-myc和c-fos mRNA表达的影响 被引量:2
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作者 董晓雁 方向明 +3 位作者 郑民安 胡继军 林桂珍 蒋雯 《中国心血管杂志》 2002年第1期3-5,共3页
目的 了解卡托普利对动脉粥样斑块中原癌基因 c- m yc和 c- fos m RNA表达的影响及原位逆转录 - PCR(IS-RT- PCR)技术在检测中的应用效果。方法 将 40只雄性日本大耳白兔随机分为对照组、胆固醇组及用药组 ,采用ISRT- PCR技术观察三... 目的 了解卡托普利对动脉粥样斑块中原癌基因 c- m yc和 c- fos m RNA表达的影响及原位逆转录 - PCR(IS-RT- PCR)技术在检测中的应用效果。方法 将 40只雄性日本大耳白兔随机分为对照组、胆固醇组及用药组 ,采用ISRT- PCR技术观察三组原癌基因 c- myc和 c- fos m RNA的表达及分布。结果  (1)胆固醇组的 c- m yc和 c- fosm RNA阳性率明显高于对照组 ,用药组则显著低于胆固醇组 ;(2 )主动脉粥样斑块中 c- m yc、c- fos m RNA呈强阳性反应 ,广泛分布于内膜层 ,阳性信号为核阳性 ;而用药组呈弱阳性反应 ,散在性分布。结论 提示卡托普利能显著抑制 AS斑块中原癌基因 c- m yc和 c- fos m RNA的表达 ,同时亦体现了 ISRT- 展开更多
关键词 动脉粥样硬化 原癌基因 卡托普利 原位逆转录pcr技术
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原位PCR和免疫组化检测垂体腺癌P16基因
14
作者 易静 陈玉英 +3 位作者 于德蓉 李骁雄 熊文浩 沈建康 《上海第二医科大学学报》 CSCD 1999年第3期223-226,共4页
目的研究人垂体腺瘤P16基因的改变,同时探索原位PCR技术的适宜条件和结果确认,以及用于基因缺失检测的可行性。方法原位PCR和免疫组化技术。结界绝大部分间质细胞为P16蛋白免疫组化阴性,而一部分垂体肿瘤细胞呈P16阳性;针对P16基因... 目的研究人垂体腺瘤P16基因的改变,同时探索原位PCR技术的适宜条件和结果确认,以及用于基因缺失检测的可行性。方法原位PCR和免疫组化技术。结界绝大部分间质细胞为P16蛋白免疫组化阴性,而一部分垂体肿瘤细胞呈P16阳性;针对P16基因的原位PCR信号则可见于垂体肿瘤细胞和间质细胞等各种细胞,即P16组化阴性的细胞同样表明有P16基因存在。结论原位PCR可以是P16基因研究的一种有效手段,提示垂体腺癌的P16基因改变形式可能主要是表达过度而不是基因缺失。 展开更多
关键词 原位pcr 免疫组化 P16基因 垂体腺瘤
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间接法原位PCR在cHL IgH基因重排研究中的应用
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作者 吴自勍 周新华 +2 位作者 贺海容 肖莎 赵彤 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 2002年第4期408-409,共2页
目的 :探索在石蜡切片上进行间接法原位PCR的可行性及利用产物探针检测IgH克隆性基因重排的意义。 方法 :选取获得IgH克隆性基因重排的经典型霍奇金淋巴瘤 (cHL) ,纯化产物合成探针 ,进行间接法原位PCR。 结果 :在H/RS细胞和周围背景细... 目的 :探索在石蜡切片上进行间接法原位PCR的可行性及利用产物探针检测IgH克隆性基因重排的意义。 方法 :选取获得IgH克隆性基因重排的经典型霍奇金淋巴瘤 (cHL) ,纯化产物合成探针 ,进行间接法原位PCR。 结果 :在H/RS细胞和周围背景细胞核内均发现棕褐色杂交颗粒 ,利用产物探针互测时也能出现杂交颗粒。结论 :在石蜡切片上进行间接法原位PCR是可行和有效的 ,但产物探针的精确性仍有待进一步证实。 展开更多
关键词 间接法原位pcr IGH基因 基因重排 研究 霍奇金淋巴瘤
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原位逆转录PCR检测干细胞因子mRNA在白血病细胞的表达
16
作者 吴彬 刘晓力 +3 位作者 宣文兰 冯茹 尹芳 周淑芸 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第6期490-492,共3页
目的探索应用原位逆转录PCR(RT-PCR)检测低拷贝的干细胞因子mRNA在白血病细胞表达的可行性。方法在普通的PE480型PCR仪进行原位RT-PCR,检测干细胞因子mRNA在K562、HL-60和慢性粒细胞性白血病细胞的表达。结果直接法和间接法原位RT-PCR... 目的探索应用原位逆转录PCR(RT-PCR)检测低拷贝的干细胞因子mRNA在白血病细胞表达的可行性。方法在普通的PE480型PCR仪进行原位RT-PCR,检测干细胞因子mRNA在K562、HL-60和慢性粒细胞性白血病细胞的表达。结果直接法和间接法原位RT-PCR均可以检测到干细胞因子mRNA在K562、HL-60和慢性粒细胞性白血病细胞表达,而常规的原位杂交则为阴性。结论(1)干细胞因子在K562、HL-60和慢性粒细胞性白血病细胞均有表达,但是表达量较低,应用原位RT-PCR可进行检测;(2)在普通的PE480型PCR仪上可以进行原位PCR。 展开更多
关键词 原位逆转录pcr 干细胞因子 MRNA 白血病 原位杂交 K562细胞 HL-60细胞
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用原位逆转录PCR两种扩增系统检测HCVRNA的对比研究
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作者 高亚兵 彭瑞云 +1 位作者 陈明易 王德文 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第8期621-,共2页
关键词 逆转录扩增系统 原位逆转录pcr 肝炎病毒 丙型
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原位PCR和原位杂交技术在HPV基因诊断中的应用
18
作者 王剑波 马福成 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1997年第A01期10-11,共2页
目的:探讨原位杂交法与间接法原位PCR法在检测尖锐湿疣组织中人乳头状瘤病毒(HPV)感染中的应用及意义。方法:对20例福尔马林固定的、石蜡包埋、怀疑HPV6B/11型感染的外阴湿疣组织进行了比较研究。结果:用原位杂交... 目的:探讨原位杂交法与间接法原位PCR法在检测尖锐湿疣组织中人乳头状瘤病毒(HPV)感染中的应用及意义。方法:对20例福尔马林固定的、石蜡包埋、怀疑HPV6B/11型感染的外阴湿疣组织进行了比较研究。结果:用原位杂交方法检测的20例中有13例HPV阳性(阳性率65%);用间接法原位PCR检测的20例中有18例HPV阳性(阳性率90%)。结论:用间接法原位PCR检测外阴湿疣组织中的HPV感染具有灵敏度高、特异性强、结果可靠并可定性、定位等优点,为临床病理诊断HPV感染引起的尖锐湿疣及临床治疗提供了直接依据。 展开更多
关键词 尖锐湿疣 人乳头状瘤病毒 原位杂交 原位pcr
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原位PCR技术在兽医分子生物技术中的应用 被引量:2
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作者 朱善元 《四川畜牧兽医》 2002年第6期27-28,30,共3页
本文阐述了原位PCR技术的原理、操作步骤及注意事项,原位PCR中非特异性问题及主要技术难点,原位PCR结果对照实验的目的和设计方法,不同原位检测技术的应用比较及其在兽医分子生物技术的应用和前景。对临床兽医分子水平的研究和诊断具有... 本文阐述了原位PCR技术的原理、操作步骤及注意事项,原位PCR中非特异性问题及主要技术难点,原位PCR结果对照实验的目的和设计方法,不同原位检测技术的应用比较及其在兽医分子生物技术的应用和前景。对临床兽医分子水平的研究和诊断具有一定的指导作用,是兽医分子生物技术的重要研究内容。 展开更多
关键词 原位pcr技术 兽医 分子生物技术 应用
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原位PCR技术及其应用
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作者 韩振生 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 1996年第5期375-376,共2页
原位PCR技术及其应用韩振生天津市南开医院微生物免疫室(天津市300100)由于热稳定DNA多聚酶的引入,实现了聚合酶链反应(PCR)DNA体外扩增技术的自动化,为疾病的基础研究,临床诊断治疗提供了一种全新的重要手段... 原位PCR技术及其应用韩振生天津市南开医院微生物免疫室(天津市300100)由于热稳定DNA多聚酶的引入,实现了聚合酶链反应(PCR)DNA体外扩增技术的自动化,为疾病的基础研究,临床诊断治疗提供了一种全新的重要手段。原位PCR技术是在标准PCR技术... 展开更多
关键词 聚合酶链反应 原位pcr技术 临床应用
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