单细胞全基因组扩增技术与应用 被引量：5

1

作者 徐晓丽 吴凌娟 鄢仁祥 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2019年第4期342-352,共11页

同一组织中的细胞往往具有类似的结构和功能,然而通过对单个细胞进行测序分析后,发现每个细胞都具有一定异质性.单细胞全基因组扩增技术是进行单细胞测序的前提,该技术可用于揭示单细胞基因组结构差异,同时在肿瘤研究、发育生物学、微... 同一组织中的细胞往往具有类似的结构和功能,然而通过对单个细胞进行测序分析后,发现每个细胞都具有一定异质性.单细胞全基因组扩增技术是进行单细胞测序的前提,该技术可用于揭示单细胞基因组结构差异,同时在肿瘤研究、发育生物学、微生物学等研究中发挥重要作用,并成为生命科学研究技术的热点之一.单细胞全基因组扩增技术的难点在于单细胞的分离和全基因组的扩增.本文介绍了单细胞全基因组扩增技术中常用的单细胞分离技术和单细胞全基因组扩增技术,并对各技术间的优缺点进行比较,同时着重讨论该技术在肿瘤研究、发育生物学和微生物学研究中的应用. 展开更多

关键词 单细胞分离技术 单细胞全基因组扩增技术 比较 应用

在线阅读 下载PDF 职称材料

不同单细胞全基因组扩增体系扩增牛微量血液DNA效果评价

2

作者 牛一凡 李崇阳 +7 位作者 杨柏高 张培培 张航 冯肖艺 曹建华 余洲 马友记 赵学明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期3436-3445,共10页

旨在通过二代测序技术评估不同单细胞全基因组扩增(single cell whole genome amplification,scWGA)体系对牛微量血液基因组DNA的扩增效果,建立微量DNA全基因组扩增体系。本研究分别采用MDA(multiple displacement amplification)和MALB... 旨在通过二代测序技术评估不同单细胞全基因组扩增(single cell whole genome amplification,scWGA)体系对牛微量血液基因组DNA的扩增效果,建立微量DNA全基因组扩增体系。本研究分别采用MDA(multiple displacement amplification)和MALBAC(multiple annealing and looping-based amplification cycles)两种scWGA体系对华西牛1 ng血液基因组DNA进行全基因组扩增,随后基于两种体系的扩增产物以及原始未稀释血液DNA构建测序文库,利用DNBSEQ-T7RS测序平台进行全基因组测序(whole genome sequencing,WGS),通过比较扩增产物片段大小、浓度、总质量评估扩增效率,通过分析GC含量、测序覆盖度、基因分型一致率、基因型检出率等评估两种体系的扩增效果。结果显示,MDA体系的扩增产物片段大于MALBAC体系(8 kb vs.0.2~2 kb),产物浓度和总质量显著高于MALBAC体系(P<0.05)。基于测序数据,1×和5×测序深度下,MDA体系的基因组覆盖度显著高于MALBAC体系(P<0.05),此外,MDA体系的分型一致率、检出率显著高于MALBAC体系,而等位基因缺失率、假阳性率显著低于MALBAC体系(P<0.05)。综上,本研究揭示了MDA和MALBAC两种扩增体系基于华西牛1 ng血液基因组DNA扩增的体系特点,为改进现有华西牛胚胎基因组选择中的关键扩增技术提供理论依据,促进华西牛遗传育种进展。 展开更多

关键词 全基因组扩增 MDA MALBAC 微量DNA扩增体系

在线阅读 下载PDF 职称材料

不同单细胞全基因组扩增方法的比较及MALBAC在辅助生殖中的应用 被引量：16

3

作者 姚雅馨 喇永富 +4 位作者 狄冉 刘秋月 胡文萍 王翔宇 储明星 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期620-631,共12页

单细胞全基因组扩增(whole genome amplification,WGA)是指在单细胞水平对全基因组进行扩增的新技术,其原理是将分离的单个细胞的微量全基因组DNA进行扩增,获得高覆盖率的完整的基因组后进行高通量测序,用于揭示细胞异质性。目前,WGA方... 单细胞全基因组扩增(whole genome amplification,WGA)是指在单细胞水平对全基因组进行扩增的新技术,其原理是将分离的单个细胞的微量全基因组DNA进行扩增,获得高覆盖率的完整的基因组后进行高通量测序,用于揭示细胞异质性。目前,WGA方法主要包括引物延伸预扩增(primer extension preamplification PCR,PEP-PCR)、简并寡核苷酸引物PCR(degenerate oligonucleotide primed PCR,DOP-PCR)、多重置换扩增(multiple displacement amplification,MDA)、多次退火环状循环扩增(multiple annealing and looping-based amplification cycles,MALBAC)等。本文对不同的单细胞WGA方法的原理及应用情况分别进行了阐述,并对其扩增效率进行评价和比较,包括基因组覆盖度、均一性、重现性、SNV(single-nucleotide variants)和CNV(copy number variants)检测力等。综合对比不同单细胞WGA方法后发现,MALBAC的扩增均一性最高、等位基因脱扣率最低、重现性最好,且对于CNV和SNV的检测效果最好。本文还阐述了MALBAC技术在人类单精子减数重组、非整倍体分析以及人类卵细胞基因组研究中的应用。 展开更多

关键词 单细胞全基因组扩增 MALBAC DOP-PCR MDA 单细胞

在线阅读 下载PDF 职称材料

激光捕获显微分离-高可信度全基因组mRNA扩增技术的建立及其在食管癌细胞基因检测中的应用 被引量：1

4

作者 李沛 凌志强 +4 位作者 金戈 杨洪艳 赵继敏 黄幼田 董子明 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2006年第5期838-840,共3页

目的:建立激光捕获显微分离(LCM)-高可信度全基因组mRNA扩增(GMA)技术,并用其分析食管癌细胞基因表达的变化。方法:应用LCM直接捕获15例食管癌组织中癌细胞,提取并纯化mRNA,在T7RNA聚合酶作用下扩增成cRNA直接用于表达谱筛选。用实时荧... 目的:建立激光捕获显微分离(LCM)-高可信度全基因组mRNA扩增(GMA)技术,并用其分析食管癌细胞基因表达的变化。方法:应用LCM直接捕获15例食管癌组织中癌细胞,提取并纯化mRNA,在T7RNA聚合酶作用下扩增成cRNA直接用于表达谱筛选。用实时荧光定量RT-PCR验证MET和PTPN2基因的表达,并将LCM与组织匀浆法和显微镜下针挑法检测结果进行比较。结果:基因芯片筛选出上调基因MET,其高表达率为12/15;下调基因PTPN2,其低表达率为9/15;2个基因实时荧光定量RT-PCR检测结果与上述结果的一致率达100%。组织匀浆法、显微镜下针挑细胞法所获样品经实时荧光定量RT-PCR检测,MET结果与LCM-GMA结果的一致率分别为25%(3/12)和33%(4/12),PTPN2分别为22%(2/9)和33%(3/9)。结论:LCM-GMA技术十分有利于基因表达谱的芯片分析和单个基因表达变化的实时荧光定量RT-PCR研究。 展开更多

关键词 食管肿瘤 癌 激光捕获显微分离细胞技术 高可信度全基因组 mRNA扩增技术 方法

在线阅读 下载PDF 职称材料

质粒连接克隆法用于提高单细胞全基因组扩增产物覆盖率及质量的初探 被引量：1

5

作者 陈伟珊 黄一芳 +1 位作者 叶昕怡 郑磊 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期643-652,共10页

目的:评估利用质粒连接克隆技术提高稀有细胞全基因组扩增(WGA)产物覆盖率及质量的可行性。方法:以54例宫颈脱落滋养层细胞和循环肿瘤细胞的WGA产物为研究对象,利用质粒连接克隆技术,通过质粒载体pMDTM19-T将单细胞WGA产物转入大肠杆菌... 目的:评估利用质粒连接克隆技术提高稀有细胞全基因组扩增(WGA)产物覆盖率及质量的可行性。方法:以54例宫颈脱落滋养层细胞和循环肿瘤细胞的WGA产物为研究对象,利用质粒连接克隆技术,通过质粒载体pMDTM19-T将单细胞WGA产物转入大肠杆菌DH5α感受态细胞进行增殖获取WGA产物的克隆产物。设计22条常染色体中22个特定位点引物进行扩增,根据扩增阳性率计算单细胞WGA产物克隆前后的覆盖率,并利用配对t检验及散点图进行统计学分析。随机选取样本,利用Sanger测序和短串联重复序列技术进行产物质量验证。结果:克隆后单细胞WGA产物的覆盖率有所提高(克隆前73%、克隆后79%),尤其对宫颈脱落滋养层细胞效果更为显著(克隆前72%、克隆后81%);在随机选取的12例样本中,克隆后样本的Sanger测序峰图质量和成功率均优于克隆前;此外,随机选取的2例克隆后的样本检测出的STR基因座均显著多于克隆前的。结论:质粒连接克隆法在一定程度上能提高单细胞WGA产物覆盖率及质量,有助于更深入地研究稀有细胞的生物学意义及临床价值。 展开更多

关键词 单细胞 全基因组扩增 质粒连接克隆 覆盖率

在线阅读 下载PDF 职称材料

全基因组扩增技术及其在法医个体识别中的应用 被引量：11

6

作者 蔡海强 柳海涛 +3 位作者 史斌 李安 唐文如 罗瑛 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1119-1125,共7页

全基因组扩增(Whole genome amplification,WGA)技术是一种对全部基因组序列进行非选择性扩增的技术。近几年来,对WGA技术扩增痕量DNA检材的研究日渐深入,这些研究可望用于刑案现场采集到的痕量DNA样品的扩增,为法医个体识别提供足量的... 全基因组扩增(Whole genome amplification,WGA)技术是一种对全部基因组序列进行非选择性扩增的技术。近几年来,对WGA技术扩增痕量DNA检材的研究日渐深入,这些研究可望用于刑案现场采集到的痕量DNA样品的扩增,为法医个体识别提供足量的DNA模板。然而,对实际案件中复杂检材的扩增偏差问题一直困扰着法医工作者,寻求一个低扩增偏差、高扩增产率的WGA技术是法医工作者的主要目标。文章综述了WGA技术在法医个体识别中的研究进展及应用前景,为法医解决扩增偏差问题提供参考。 展开更多

关键词 全基因组扩增 STR 个体识别 法医

在线阅读 下载PDF 职称材料

全基因组扩增技术的法医学应用价值及其结果评价 被引量：5

7

作者 邓建强 侯一平 《法医学杂志》 CAS CSCD 2005年第3期219-222,225,共5页

微量模板DNA的分析,一直是法医学特别关注和急需解决的难题之一,近年发展起来的一系列技术为解决这一问题提供了新的可能途径,本文即对微量模板DNA分析技术的进展和目前逐步发展的全基因组扩增技术的法医学应用价值、结果评价进行浅议。

关键词 法医学 DNA检验 微量分析 全基因组扩增

在线阅读 下载PDF 职称材料

全基因组扩增技术在产前诊断中的应用 被引量：4

8

作者 陈欣洁 宋艳琴 +4 位作者 陈敦金 李南 王佳燕 罗凯 陈敏 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2016年第13期2181-2183,共3页

目的:探讨全基因组扩增技术(WGA)结合微阵列比较基因组杂交技术(Array-CGH)在低DNA浓度的产前样本中的应用价值。方法:对18例有产前诊断指征的孕妇进行侵入性产前诊断,所抽取的羊水或绒毛样本经DNA提取后因DNA浓度较低行全基因组扩增,... 目的:探讨全基因组扩增技术(WGA)结合微阵列比较基因组杂交技术(Array-CGH)在低DNA浓度的产前样本中的应用价值。方法:对18例有产前诊断指征的孕妇进行侵入性产前诊断,所抽取的羊水或绒毛样本经DNA提取后因DNA浓度较低行全基因组扩增,再应用微阵列比较基因组杂交技术分析。结果:所检测的18例样本中,有3例异常,均提示为45,X0,其余芯片结果正常。随访15例正常a CGH结果的胎儿,有9例出生后正常。结论:应用WGA技术辅助微阵列比较基因组杂交技术对早孕期超声提示异常的胎儿进行产前诊断是可行的,它不仅缩短了发报告的时间也保持了应用a CGH技术检测的敏感性和精确性。 展开更多

关键词 全基因组扩增技术 微阵列比较基因组杂交技术 产前诊断

在线阅读 下载PDF 职称材料

简并寡核苷酸引物PCR扩增单细胞基因组的影响因素研究 被引量：1

9

作者 王晶 乔龙 +3 位作者 孙海翔 胡娅莉 李洁 李朝军 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第16期6675-6677,共3页

[目的]研究影响简并寡核苷酸引物聚合酶链反应(degenerate oligonucleotide primed PCR,DOP-PCR)扩增单细胞全基因组的因素。[方法]以单个人外周血淋巴细胞为材料,进行DOP-PCR,研究新鲜细胞与冷藏细胞及采用新鲜和冻存的细胞裂解物为模... [目的]研究影响简并寡核苷酸引物聚合酶链反应(degenerate oligonucleotide primed PCR,DOP-PCR)扩增单细胞全基因组的因素。[方法]以单个人外周血淋巴细胞为材料,进行DOP-PCR,研究新鲜细胞与冷藏细胞及采用新鲜和冻存的细胞裂解物为模板对扩增产物的均匀性及特异性的影响。[结果]以新鲜的淋巴细胞为模板与以冷藏的淋巴细胞为模板相比,扩增产物的均匀性相当,特异性上新鲜细胞较好。细胞裂解后立即进行扩增的效果在产物的均匀性及特异性方面均明显优于冻存的细胞裂解物。[结论]对单细胞应用DOP-PCR方法进行全基因组扩增时,应尽量选取新鲜细胞进行裂解,裂解后避免冻存以保证扩增的均匀性及特异性。 展开更多

关键词 单细胞 简并寡核苷酸引物PCR 基因扩增 全基因组

在线阅读 下载PDF 职称材料

甘蔗单花粉全基因组扩增(WGA)与SCoT分子标记研究 被引量：6

10

作者 陈平华 陈如凯 +8 位作者 许莉萍 王恒波 陈利平 林冰 施桂姣 张卓 高三基 郭晋隆 潘永保 《热带作物学报》 CSCD 2011年第11期2069-2075,共7页

从一个完整的甘蔗花粉囊中分离出单个花粉粒．利用特制取样器进行收集，采用碱裂解法释放单花粉DNA．裂解液可以直接作为WGA模板进行全基因组扩增．制备出单个花粉粒大量DNA。通过5SrRNA—ITS鉴定WGA产物真实性．并以目标起始密码子多... 从一个完整的甘蔗花粉囊中分离出单个花粉粒．利用特制取样器进行收集，采用碱裂解法释放单花粉DNA．裂解液可以直接作为WGA模板进行全基因组扩增．制备出单个花粉粒大量DNA。通过5SrRNA—ITS鉴定WGA产物真实性．并以目标起始密码子多态性标记对真实的WGA产物进行分析，显示出丰富的多态性。利用NTSYSpc软件分析花粉粒间遗传距离，并进行聚类分析，显示单花粉间遗传距离变幅为0．0888-0．3654，在相似系数0．187处．受试花粉粒中的36个明显分为2组．占总数的69％。说明减数分裂染色体重组过程中，有一定比例的基因位点为多数花粉粒所共有。根据SCoT标记聚类图可将所有供试花粉分为4大类．不同类花粉粒的分布具有一定的规律性． 展开更多

关键词 甘蔗 单花粉 全基因组扩增 SCoT分子标记 遗传分布

在线阅读 下载PDF 职称材料

人感染H7N9禽流感病毒全基因组扩增与测序方法的建立 被引量：4

11

作者 谢剑锋 赵琳 +10 位作者 张炎华 翁育伟 陈炜 王金章 何文祥 吴冰珊 黄萌 黄枝妙 朱颖 郑奎城 严延生 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期795-799,共5页

目的为了解人感染H7N9禽流感病毒基因特征从而更有效地防控疫情,需建立获得人感染H7N9禽流感病毒全基因序列的扩增和测序方法。方法采用鸡胚分离H7N9禽流感病毒,提取标本和毒株病毒RNA,自行设计引物,通过一步法RT-PCR扩增其全基因组片段... 目的为了解人感染H7N9禽流感病毒基因特征从而更有效地防控疫情,需建立获得人感染H7N9禽流感病毒全基因序列的扩增和测序方法。方法采用鸡胚分离H7N9禽流感病毒,提取标本和毒株病毒RNA,自行设计引物,通过一步法RT-PCR扩增其全基因组片段,纯化PCR产物后测定核苷酸序列,利用生物信息学软件拼接各节段序列并初步分析其特征。结果本研究中的引物能特异地扩增各基因的目的片段,通过序列拼接可以获得H7N9禽流感全基因组序列。经分析8个节段序列与近期国内流行的人感染H7N9禽流感病毒序列高度同源。结论该方法能有效地获得人感染H7N9禽流感病毒全基因组序列,可为进一步分析其基因特征奠定基础。 展开更多

关键词 H7N9禽流感 全基因组 扩增与测序 方法

在线阅读 下载PDF 职称材料

基于不同方法的微量细胞全基因组遗传变异检测和比较分析

12

作者 石庆珍 徐鸿洋 +4 位作者 张燕 张毅 王雅春 韩建永 姜力 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期4311-4324,共14页

旨在用不同方法对微量细胞全基因组遗传变异进行检测和比较分析。本研究首先以3、5、7、10个猪耳缘成纤维细胞为试验材料,利用不同方法提取微量细胞基因组,进行全基因组测序(whole genome sequencing,WGS),比较不同细胞数及不同提取方... 旨在用不同方法对微量细胞全基因组遗传变异进行检测和比较分析。本研究首先以3、5、7、10个猪耳缘成纤维细胞为试验材料,利用不同方法提取微量细胞基因组,进行全基因组测序(whole genome sequencing,WGS),比较不同细胞数及不同提取方法之间的遗传变异检测性能。随后利用牛囊胚的5个和7个滋养外胚层细胞获得的基因组进行全基因组测序和SNP芯片技术的比较分析,每组均进行3次重复。结果表明,针对不同细胞数,基于全基因组扩增技术(whole genomic amplification,WGA)的MDA(multiple displacement amplification)方法均比其他方法的DNA产物浓度、测序质量及SNP检出性能效果更优。使用REPLI-g^((R)) Single Cell Kit扩增7、10细胞数的DNA浓度显著高于3、5细胞数,但质量评估的各项性能基本无显著差异,且不同细胞数检测到的SNP位点数量相似。5、7细胞数的Illumina Bovine GGP芯片SNP位点call rate分别为74.09%和81.52%。全基因组测序相较于芯片可以获得更丰富的遗传变异信息,但两种检测手段共同检测到的SNP以及基因型相同的位点数占比较低。综上所述,本研究系统比较了不同细胞数下不同微量细胞基因组提取方法以及不同全基因组遗传变异检测技术的各项性能,结果显示利用REPLI-g^((R)) Single Cell Kit扩增7细胞进行二代测序可得到较为准确且稳定的结果,本研究建立了一套较为可靠的家畜胚胎微量细胞样品基因组提取和遗传变异检测方案,为将来实现准确的胚胎基因组选择和胚胎质量评估具有重要的意义和价值。 展开更多

关键词 微量细胞 胚胎 全基因组扩增 重测序 SNP芯片 遗传变异

在线阅读 下载PDF 职称材料

长距离PCR法扩增RHDV全基因组及其序列分析

13

作者 张玉颖 刘光清 +3 位作者 倪征 云涛 吴润 张淼涛 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期1-5,共5页

从人工感染RHDV致死的兔肝组织中提取病毒总RNA,应用特异性引物将病毒RNA反转录成cD-NA,以此为模板用长距离PCR法扩增RHDV全基因组,将成功扩增出的RHDV全基因组克隆到pMD18-T载体中,经PCR鉴定及酶切分析后进行序列测定。测序结果表明,J... 从人工感染RHDV致死的兔肝组织中提取病毒总RNA,应用特异性引物将病毒RNA反转录成cD-NA,以此为模板用长距离PCR法扩增RHDV全基因组,将成功扩增出的RHDV全基因组克隆到pMD18-T载体中,经PCR鉴定及酶切分析后进行序列测定。测序结果表明,JX97全基因组由7 437个核苷酸组成,包括由9个核苷酸组成5′NCR、59个核苷酸组成3′NCR和一个至少含有27个核苷酸的poly(A)尾。序列比较结果显示,RHDVJX97株的衣壳蛋白与已报道的参考毒株具有较高的序列同源性,均在90%以上,提示所有的RHDV分离株具有较近的亲缘关系。 展开更多

关键词 免病毒性出血症病 长距离扩增 全基因组

在线阅读 下载PDF 职称材料

新型鹅细小病毒四川株的全基因组扩增及遗传进化分析 被引量：5

14

作者 葛志琪 刘亚刚 +9 位作者 陈舜 朱德康 刘马峰 汪铭书 贾仁勇 孙昆峰 杨乔 吴英 赵新新 程安春 《四川农业大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第4期574-580,共7页

【目的】了解四川地区新型鹅细小病毒(Novel goose parvovirus,NGPV)的分子生物学特征及遗传变异情况。【方法】根据Gen Bank中发表的新型鹅细小病毒的全基因组序列,设计5对兼并引物采用PCR方法分段扩增新型鹅细小病毒四川株的全基因组... 【目的】了解四川地区新型鹅细小病毒(Novel goose parvovirus,NGPV)的分子生物学特征及遗传变异情况。【方法】根据Gen Bank中发表的新型鹅细小病毒的全基因组序列,设计5对兼并引物采用PCR方法分段扩增新型鹅细小病毒四川株的全基因组序列,并利用DNAstar等生物信息分析软件对获得的基因组序列进行分子特性与遗传演变分析。【结果】获得的新型鹅细小病毒四川株(命名为SC16)全长5 109 nt,5′端ITR长408 nt,3′端ITR长407 nt,NS基因长1 884 nt,VP基因长2 199 nt。序列比对和遗传进化分析显示,SC16株与山东分离株SDLC01(KT343253.1)及QH15(KT751090.1)的基因组核苷酸同源性高达99%,与两者的亲缘关系最近,基于NS及VP蛋白的氨基酸序列系统进化树分析结果与此一致。但SC16株的5′端ITR还是发生了一定的变异:与SDLC01及QH15相比,多了几个14 nt的插入片段。【结论】研究结果丰富了NGPV的分子生物学资料。 展开更多

关键词 新型鹅细小病毒 鸭短喙侏儒综合征 全基因组扩增 遗传进化分析

在线阅读 下载PDF 职称材料

全基因组扩增法应用于低拷贝数DNA检测 被引量：11

15

作者 周怀谷 张晨 《法医学杂志》 CAS CSCD 2006年第1期43-44,47,共3页

目的建立基于多重置换扩增(MDA)技术的全基因组扩增(WGA)方法,实现对低拷贝数(LCN)DNA样品进行分析。方法采用REPLI-g试剂盒对样本进行等温全基因组扩增,扩增产物采用ProfilerPlus试剂盒确定样本的十个STR基因座的等位基因型。结果10pg... 目的建立基于多重置换扩增(MDA)技术的全基因组扩增(WGA)方法,实现对低拷贝数(LCN)DNA样品进行分析。方法采用REPLI-g试剂盒对样本进行等温全基因组扩增,扩增产物采用ProfilerPlus试剂盒确定样本的十个STR基因座的等位基因型。结果10pgDNA模板经全基因组扩增后,能够进行DNA分型。结论全基因组扩增可以用于LCN的DNA分析,帮助提高微量物证的检出成功率。 展开更多

关键词 多重置换扩增 全基因组扩增 低拷贝数

在线阅读 下载PDF 职称材料

低体积PCR扩增用于单细胞分离和检验 被引量：7

16

作者 韩俊萍 李彩霞 +3 位作者 严红 朱典 李艮平 胡兰 《法医学杂志》 CAS CSCD 2012年第2期123-125,共3页

目的优化在单细胞分离检验中应用0.2mL试管做低体积扩增载体的最佳反应条件。方法制备理想口腔上皮细胞悬液,用0.2mL试管分别收集捕获到的5、10个细胞,设置蛋白酶K添加、PCR反应金牌酶用量、循环次数3组条件,用Identifiler誖Plus试剂盒... 目的优化在单细胞分离检验中应用0.2mL试管做低体积扩增载体的最佳反应条件。方法制备理想口腔上皮细胞悬液,用0.2mL试管分别收集捕获到的5、10个细胞,设置蛋白酶K添加、PCR反应金牌酶用量、循环次数3组条件,用Identifiler誖Plus试剂盒进行复合扩增,比较各组的检出率、等位基因丢失率和非特异性扩增情况。结果用0.2mL试管做低体积扩增中,加蛋白酶K裂解、PCR反应金牌酶0.4μL、PCR反应32个循环,这3个条件的检出率较高,等位基因丢失率较低。结论在单细胞分离检验中采用0.2 mL试管进行低体积扩增,可以作为芯片-低体积扩增的有效补充手段。 展开更多

关键词 法医遗传学 核酸扩增技术 单细胞

在线阅读 下载PDF 职称材料

全基因组扩增试剂盒

17

《生物技术通报》 CAS CSCD 2005年第1期43-43,共1页

Bioscience Technology 2003年7月31页报道：美国Amersham Biosciences公司最近推出GenomiPhi^TM DNA扩增试剂盒。利用这种试剂盒可从有限的生物材料制备高质量的DNA。这是一种简单的等温扩增技术，它不需要使用热循环器。原材料可以是... Bioscience Technology 2003年7月31页报道：美国Amersham Biosciences公司最近推出GenomiPhi^TM DNA扩增试剂盒。利用这种试剂盒可从有限的生物材料制备高质量的DNA。这是一种简单的等温扩增技术，它不需要使用热循环器。原材料可以是来自全血、颊面拭子、细胞印迹纸、 展开更多

关键词 试剂盒 全血 全基因组扩增 DNA扩增 生物材料 细胞 TM 印迹

在线阅读 下载PDF 职称材料

应用荧光PCR技术检测单细胞β地中海贫血基因 被引量：3

18

作者 邓捷 庄广伦 +6 位作者 彭文林 周灿权 梁晓燕 詹前胜 孙宏钰 陈勇 曾艳红 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期131-134,共4页

【目的】应用荧光PCR技术检测单细胞β地中海贫血(β地贫)基因,并与巢式PCR相比较,探讨荧光PCR应用于β地贫植入前诊断中的可行性。【方法】获取β地贫41-42突变杂合子单个淋巴细胞,用巢式PCR及荧光PCR技术检测β珠蛋白基因。【结果】16... 【目的】应用荧光PCR技术检测单细胞β地中海贫血(β地贫)基因,并与巢式PCR相比较,探讨荧光PCR应用于β地贫植入前诊断中的可行性。【方法】获取β地贫41-42突变杂合子单个淋巴细胞,用巢式PCR及荧光PCR技术检测β珠蛋白基因。【结果】160个淋巴细胞进行荧光PCR扩增,β地贫基因的平均扩增效率为92.5%,等位基因脱扣(ADO)率为8.8%;240个淋巴细胞进行巢式PCR扩增,β地贫基因的扩增效率为91.7%,ADO率为15.8%。两种方法的扩增效率没有统计学差异,但荧光PCR的ADO发生率显著低于巢式PCR的ADO发生率(P<0.05)。【结论】本研究建立的单细胞荧光PCR技术具有较高的扩增效率,可显著降低ADO发生率,可望用于β地贫的临床植入前诊断。 展开更多

关键词 荧光PCR技术 单细胞 Β地中海贫血 基因扩增 等位基因脱扣 胚胎植入 遗传学诊断

在线阅读 下载PDF 职称材料

甲醛溶液保存的中华哲水蚤基因组DNA提取和PCR扩增 被引量：3

19

作者 周美玉 林元烧 +3 位作者 方旅平 郑连明 刘迟迟 曹文清 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期403-406,共4页

提取了保存于5%甲醛溶液中的单只中华哲水蚤基因组DNA.经凝胶电泳后虽无清晰条带,但PCR扩增后可得线粒体DNA细胞色素氧化酶I亚基基因(mtCOI)片段.测序分析,该片段长度为710bp,与GenBank中的序列(索引号AF332769)比对后确定为中华哲水蚤m... 提取了保存于5%甲醛溶液中的单只中华哲水蚤基因组DNA.经凝胶电泳后虽无清晰条带,但PCR扩增后可得线粒体DNA细胞色素氧化酶I亚基基因(mtCOI)片段.测序分析,该片段长度为710bp,与GenBank中的序列(索引号AF332769)比对后确定为中华哲水蚤mtCOI序列的一部分.利用本实验方法所提取的基因组DNA可适用于系统发生、种群遗传结构等领域的分子水平研究,为保存在甲醛溶液中的小型海洋浮游动物的基因信息利用提供实用技术. 展开更多

关键词 中华哲水蚤 PCR扩增 基因组DNA提取 甲醛溶液 保存 细胞色素氧化酶 GENBANK 线粒体DNA 海洋浮游动物 种群遗传结构 测序分析 凝胶电泳 片段长度 系统发生 实验方法 实用技术 信息利用 分子水平 序列

在线阅读 下载PDF 职称材料

3′-RACE技术在狂犬病病毒基因末端体外扩增中的优化

20

作者 钱爱东 郭利 赵云蛟 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第5期18-19,共2页

关键词 病毒基因组 狂犬病病毒 体外扩增 RACE技术 负链RNA病毒 优化 分子流行病学 mRNA

在线阅读 下载PDF 职称材料