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单克隆抗体-白介素2融合蛋白一级结构的确证
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作者 董标 梁月琴 +1 位作者 王杰 董方霆 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期125-127,共3页
建立单克隆抗体-白介素2融合蛋白一级结构确证的方法。用基质辅助激光解吸飞行时间质谱测定单克隆抗体-白介素2融合蛋白的精确相对分子质量,毛细管等电聚焦方法测定其等电点,通过N_末端氨基酸序列的测定以及肽图分析,证实了抗体-白介素... 建立单克隆抗体-白介素2融合蛋白一级结构确证的方法。用基质辅助激光解吸飞行时间质谱测定单克隆抗体-白介素2融合蛋白的精确相对分子质量,毛细管等电聚焦方法测定其等电点,通过N_末端氨基酸序列的测定以及肽图分析,证实了抗体-白介素2融合蛋白一级结构表达的正确性,同时为单克隆抗体-白介素2融合蛋白的质量标准研究奠定了基础。 展开更多
关键词 单克隆抗体-白介素2融合蛋白 结构确证 基质辅助激光解吸飞行时间质谱 肽图 毛细管等电聚焦
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重组融合人血清白蛋白-人白介素-2 C125A突变体在毕赤酵母中的表达 被引量:13
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作者 金光泽 段作营 +2 位作者 张莲芬 金坚 李华钟 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期595-601,共7页
构建编码人血清白蛋白-人白介素-2 C125A的重组表达质粒,在Pichia pastorisGS115中表达,获得具有较高IL-2活性的融合蛋白。设计并合成符合P.pastoris密码子偏好,且含有C125A突变的IL-2编码基因IL-2m,通过酶切连接方法将其与人血清白蛋白... 构建编码人血清白蛋白-人白介素-2 C125A的重组表达质粒,在Pichia pastorisGS115中表达,获得具有较高IL-2活性的融合蛋白。设计并合成符合P.pastoris密码子偏好,且含有C125A突变的IL-2编码基因IL-2m,通过酶切连接方法将其与人血清白蛋白(HSA)的编码基因连接为融合蛋白HSA-IL2m的编码基因。克隆到表达质粒pPIC9K中,电击转化P.pastorisGS115感受态细胞,获得重组P.pastorisGS115/pPHIm基因工程菌。摇瓶发酵获得分泌表达产物。结果:Western blot鉴定结果显示该融合蛋白与IL-2、HSA的抗体都能发生免疫反应。经脱盐、冻干制备的粗蛋白的IL-2生物学活性为1.51×10^(6)IU/mg。结论:在P.pastorisGS115中成功表达了具有人白介素-2生物学活性的HSA-IL2m融合蛋白。 展开更多
关键词 突变型人白介素-2 人血清白蛋白 毕赤酵母 融合蛋白
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人白介素-2/人血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的表达 被引量:6
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作者 郭泽峰 段作营 +2 位作者 张莲芬 金坚 李华钟 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期82-86,共5页
目的:构建编码人白介素-2/人血清白蛋白的重组表达质粒pPIH,在毕赤酵母(Pichiapastria)中进行表达,获得具有白介素-2(IL-2)活性的融合蛋白。方法:通过逆转录方法从人外周血单核细胞得到人IL-2的cDNA,再通过重叠PCR方法,将编码人IL-2的c... 目的:构建编码人白介素-2/人血清白蛋白的重组表达质粒pPIH,在毕赤酵母(Pichiapastria)中进行表达,获得具有白介素-2(IL-2)活性的融合蛋白。方法:通过逆转录方法从人外周血单核细胞得到人IL-2的cDNA,再通过重叠PCR方法,将编码人IL-2的cDNA和编码人白蛋白的cDNA拼接起来,克隆至T载体获得含有融合基因IH的质粒pMD19/IH。用EcoRI和NotI双酶切pMD19/IH和pPIC9K两种质粒,通过琼脂糖凝胶电泳分离,试剂盒纯化,将IH片段和pPIC9K连接获得表达型pPIH的重组质粒,利用电转化方法转化毕赤酵母KM71获得重组表达质粒pPIH;CTLL-2/MTT法测定融合蛋白中人IL-2活性。结果:成功构建了人白介素-2/人血清白蛋白的重组表达质粒pPIH,融合蛋白得到了较理想的表达;重组菌经甲醇诱导表达后含有融合蛋白IL-2-HSA发酵上清液表现100U/mL的生物学活性。结论:成功获得具有人IL-2生物活性的重组人白介素-2/血清白蛋白融合蛋白,该研究结果未见文献报道。 展开更多
关键词 白介素-2 人血清白蛋白 毕赤酵母 融合蛋白 表达
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人血清白蛋白-白介素-2融合蛋白在CHO细胞中的表达
4
作者 卢慧惠 彭林 +3 位作者 段作营 蔡燕飞 金坚 李华钟 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期456-460,共5页
白细胞介素-2在人体免疫应答中具有重要作用,常用于治疗肿瘤、肝炎和免疫缺陷性疾病等多种疾病,但因其体内半衰期短而限制了其临床应用。文中构建了含有融合蛋白基因HSA-IL-2的p MH3质粒,并通过电转染的方法转入中国仓鼠卵巢细胞(Chines... 白细胞介素-2在人体免疫应答中具有重要作用,常用于治疗肿瘤、肝炎和免疫缺陷性疾病等多种疾病,但因其体内半衰期短而限制了其临床应用。文中构建了含有融合蛋白基因HSA-IL-2的p MH3质粒,并通过电转染的方法转入中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO细胞)中,利用p MH3质粒所携带的neo基因进行筛选,经96孔板培养并筛选得到稳定表达目的蛋白质的重组细胞,融合蛋白HSA-IL-2表达量达到2.26 mg/L。利用反转录PCR和Western blot对重组细胞鉴定后发现,融合蛋白编码基因整合入重组CHO细胞基因组中,而且融合蛋白同时具有HSA和IL-2双重免疫原性。利用对IL-2具有依赖性的CTLL-2细胞进行活性分析后发现,筛选得到的表达细胞分泌得到的融合蛋白具有较高的生物活性,表明成功构建具有表达IL-2生物活性能力的CHO细胞。 展开更多
关键词 白介素-2 人血清白蛋白 融合蛋白 中国仓鼠卵巢细胞
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抗基质金属蛋白酶-2单克隆抗体的制备、鉴定及其应用 被引量:1
5
作者 游牧 刘文 +1 位作者 徐振山 宋礼华 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1177-1181,共5页
目的:制备和鉴定基质金属蛋白酶-2(MMP-2)单克隆抗体(mAb),检测其在人卵巢癌组织和裸鼠移植瘤中的表达。方法:利用戊二醛法制备人工抗原MMP-2-BSA和MMP-2-KLH,并免疫小鼠,采用标准杂交瘤技术,亚克隆筛选出单克隆细胞株,制备腹水,采用辛... 目的:制备和鉴定基质金属蛋白酶-2(MMP-2)单克隆抗体(mAb),检测其在人卵巢癌组织和裸鼠移植瘤中的表达。方法:利用戊二醛法制备人工抗原MMP-2-BSA和MMP-2-KLH,并免疫小鼠,采用标准杂交瘤技术,亚克隆筛选出单克隆细胞株,制备腹水,采用辛酸-硫酸铵法纯化mAb。以ELISA、Western blot法对抗体进行鉴定。通过免疫组织化学法与商品化多抗进行对比,并联合CA125将自制抗体应用于临床人卵巢癌组织和裸鼠移植瘤的检测。结果:人工抗原MMP-2-BSA和MMP-2-KLH合成成功。获取3株稳定分泌抗MMP-2的杂交瘤细胞株(3G10、4D12、1E8),抗体亚型均为IgG1。其中3G10反应性最强。经间接ELISA法检测纯化后抗体的效价达1∶1×106。自制mAb应用于人卵巢癌组织切片和裸鼠模型检测,卵巢癌组织与正常组织之间表达差异有统计学意义(P<0.01)。卵巢癌患者CA125和MMP-2联合检测阳性率较单一检测高(P<0.01)。自制mAb的染色特性与商品化抗体相似,且检出率较商品化多抗高(P<0.01)。结论:采用人工合成多肽作为免疫原成功制备了与卵巢癌相关的特异性抗MMP-2 mAb。 展开更多
关键词 基质金属蛋白-2 单克隆抗体 卵巢癌 裸鼠 联合检测
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重组人骨形态发生蛋白-2原核表达及单克隆抗体制备
6
作者 王婧 张杰 +2 位作者 张颖 马宁宁 谢良志 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期543-548,共6页
目的利用原核表达系统(E.coli)表达纯化重组人骨形态发生蛋白-2成熟肽(rhBMP-2m),并制备rh-BMP-2m的单克隆抗体。方法将工程菌株进行常规发酵,自诱导表达,裂菌离心分离包涵体,包涵体变性后经阳离子交换色谱分离纯化。纯化后的变性rhBMP... 目的利用原核表达系统(E.coli)表达纯化重组人骨形态发生蛋白-2成熟肽(rhBMP-2m),并制备rh-BMP-2m的单克隆抗体。方法将工程菌株进行常规发酵,自诱导表达,裂菌离心分离包涵体,包涵体变性后经阳离子交换色谱分离纯化。纯化后的变性rhBMP-2m经稀释复性,获得具有生物学活性的rhBMP-2m。并以此作为抗原,免疫Balb/c小鼠制备单克隆抗体。结果获得还原SDS-PAGE下95%以上纯度的rhBMP-2m。细胞活性结果分析显示,所获得的rhBMP-2m具有较强的生物学活性。免疫小鼠最终获得两株稳定分泌抗rhBMP-2m抗体的杂交瘤细胞株。结论成功制备了具有生物学活性的rhBMP-2m及其单克隆抗体,为rhBMP-2未来的研究和制备奠定良好的基础。 展开更多
关键词 重组人骨形态发生蛋白-2成熟肽 蛋白复性 单克隆抗体
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抗蛋白酶激活受体-2单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:1
7
作者 杨晓玉 何韶衡 +2 位作者 黄阗 方泽漫 李桂双 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期839-842,F0003,共5页
目的:制备出一种具有多种用途的抗蛋白酶激活受体-2(PAR-2)单克隆抗体(mAb)。方法:用人工合成的11肽PAR-2作为免疫原,采用皮下多点注射方法免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞融合,杂交瘤细胞采用间接ELISA法筛选。通过ELISA、D... 目的:制备出一种具有多种用途的抗蛋白酶激活受体-2(PAR-2)单克隆抗体(mAb)。方法:用人工合成的11肽PAR-2作为免疫原,采用皮下多点注射方法免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞融合,杂交瘤细胞采用间接ELISA法筛选。通过ELISA、Dot blot、免疫组化染色、流式细胞分析、激光共聚焦显微镜技术鉴定mAb的特异性。结果:获得1株可稳定分泌抗PAR-2 mAb的杂交瘤细胞。其分泌的mAb为IgM型,ELISA法检测杂交瘤细胞培养上清效价为1:16;点杂交分析表明此抗体可特异性结合PAR-2;免疫组化染色显示该单克隆抗体与人肺组织中的肺泡上皮细胞和平滑肌细胞,结肠组织中的腺上皮细胞和疑似淋巴细胞,扁桃体中的淋巴细胞,包皮组织中的鳞状上皮细胞呈阳性反应;流式细胞仪分析显示与人肺腺癌细胞系A549细胞中的PAR-2呈阳性反应;激光共聚焦扫描显微镜观察发现荧光标记的阳性反应物位于A549细胞的胞膜和胞浆。结论:成功地制备出可用于免疫组化和点杂交的抗PAR-2单克隆抗体,为PAR-2相关性疾病的研究提供了有用的工具。 展开更多
关键词 蛋白酶激活受体-2 单克隆抗体 杂交瘤细胞 A549细胞
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双抗体夹心ELISA定量检测IL-2-HSA融合蛋白 被引量:4
8
作者 张红梅 李波 +3 位作者 段作营 雷楗勇 金坚 李华钟 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期175-179,共5页
以抗人IL-2多克隆抗体为包被抗体,以IL-2-HSA融合蛋白为夹心抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗HSA单克隆抗体为检测抗体,建立了一种定量测定完整的IL-2-HSA融合蛋白的双抗体夹心ELISA方法。包被抗体和检测抗体的最佳工作浓度分别为为2... 以抗人IL-2多克隆抗体为包被抗体,以IL-2-HSA融合蛋白为夹心抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗HSA单克隆抗体为检测抗体,建立了一种定量测定完整的IL-2-HSA融合蛋白的双抗体夹心ELISA方法。包被抗体和检测抗体的最佳工作浓度分别为为2μg/mL和0.5μg/mL,方法的线性检测范围39.06~1250ng/mL,标准曲线回归方程为y=0.4429x-1.1433,r=0.9966,灵敏度可达10.25ng/mL,批内、批间变异系数分别为6.40%和7.81%,发酵上清液中回收率为98.13%~102.94%,与IL-2、HSA基本无交叉反应,健全性分析表明发酵液及小鼠血清组分及稀释倍数对该方法无影响。该方法可用于该融合蛋白的发酵过程优化、分离纯化工艺、后期药动学、临床研究等的定量检测。 展开更多
关键词 抗体夹心ELISA 定量分析 融合蛋白 白介素2-人血清白蛋白
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猪圆环病毒2型ORF2重组蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 被引量:5
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作者 魏巍 杨汉春 +2 位作者 郭鑫 陈艳红 查振林 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2007年第11期9-11,共3页
利用已构建的基因工程重组菌BL21(DE3)表达猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2编码的结构蛋白,经切胶纯化后作为免疫原。采取抗原量依次递增的免疫方式免疫8周龄BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合。间接酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选,有... 利用已构建的基因工程重组菌BL21(DE3)表达猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2编码的结构蛋白,经切胶纯化后作为免疫原。采取抗原量依次递增的免疫方式免疫8周龄BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合。间接酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选,有限稀释法进行亚克隆3次,最终获得4株稳定分泌抗PCV2 ORF2重组蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为D2A1、H4G2、B10H10和G1G2。经ELISA检测,其腹水效价分别达到1∶2.048×107、1∶2.56×106、1∶1.28×106、1∶2.56×106。亚型鉴定4株单克隆抗体均属IgG2a亚型,其轻链均为κ链。Western blot鉴定表明获得的4株单克隆抗体均能特异性的识别43 kD的重组PCV2 ORF2蛋白。在间接免疫荧光试验中,单抗D2A1株的反应为阴性,H4G2、B10H10和G1G2反应为阳性,表明后3株单抗能够识别天然的PCV2 ORF2蛋白表位。本试验为进一步研究PCV2ORF2基因的功能及建立快速准确的诊断PCV2的方法奠定了基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2 融合蛋白 单克隆抗体
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猪圆环病毒2型Cap蛋白单克隆抗体的制备 被引量:4
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作者 梁武 孙艳 +3 位作者 吕茂杰 李建丽 杨保收 乔健 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第7期1674-1679,共6页
本研究利用已构建的基因工程重组菌表达猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)ORF2编码的Cap蛋白,纯化后作为免疫原,免疫8周龄BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合。经间接免疫荧光试验(IFA)筛选及有限稀释法进行3次... 本研究利用已构建的基因工程重组菌表达猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)ORF2编码的Cap蛋白,纯化后作为免疫原,免疫8周龄BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合。经间接免疫荧光试验(IFA)筛选及有限稀释法进行3次亚克隆后,本试验最终获得5株稳定分泌抗PCV2Cap蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为3D12、4D5、4B9、4C9和4G10。其中4D5为IgG2b亚型,其余4株单克隆抗体均为IgG1亚型,轻链类型均为κ。Western blotting鉴定结果表明获得的5株单克隆抗体均不能特异性的识别47ku重组PCV2Cap蛋白;对病毒感染细胞进行IFA试验,结果显示5株单克隆抗体均特异性的识别病毒抗原,表明5株单克隆抗体识别的抗原表位均为构象表位。中和试验结果表明,5株单克隆抗体均有中和活性。本试验结果为进一步探索ORF2基因的结构、功能及建立快速准确的诊断方法奠定了基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2 融合蛋白 单克隆抗体
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rhIL-2/GM-CSF融合蛋白抗体制备、鉴定及其生物学活性研究
11
作者 林来兴妹 周明乾 +2 位作者 陈泽洪 张亚莉 王小宁 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第10期1103-1105,共3页
目的 :制备 rh IL - 2 / GM- CSF融合蛋白的抗体 ,并观察该抗体的特异性及对融合蛋白生物学活性的影响。方法 :用纯化的融合蛋白 (rh IL - 2 / GM- CSF)作为抗原 ,免疫新西兰兔后制备抗血清 ,用 EL ISA和 Dot- EL ISA检测抗体滴度和特... 目的 :制备 rh IL - 2 / GM- CSF融合蛋白的抗体 ,并观察该抗体的特异性及对融合蛋白生物学活性的影响。方法 :用纯化的融合蛋白 (rh IL - 2 / GM- CSF)作为抗原 ,免疫新西兰兔后制备抗血清 ,用 EL ISA和 Dot- EL ISA检测抗体滴度和特异性。用依赖株细胞增殖实验检测抗体对 rh IL - 2 / GM- CSF生物学活性的影响。 结果 :此抗体效价高 ,特异性好 ,不仅与融合蛋白(rh IL - 2 / GM- CSF)、IL - 2以及 GM- CSF发生反应 ,而且能够竞争抑制 rh IL - 2 / GM- CSF的生物学活性。 结论 :此抗体可用于融合蛋白 (rh IL - 2 / GM- CSF) 展开更多
关键词 RHIL-2 GM-CSF 融合蛋白 抗体 制备 鉴定 生物学活性 白细胞介素-2 -巨噬细胞集落刺激因子
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重组抗体-白细胞介素2融合蛋白对重症免疫缺陷鼠人神经纤维瘤肝转移灶生长的抑制作用
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作者 雷虹 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1994年第1期17-17,共1页
临床试验表明,在神经纤维瘤患者中单独应用rh IL-2或鼠抗GD2与人的嵌台变异体ch14.18能通过激活LAK细胞或通过外周血单核细胞介导的ADCC作用杀死瘤细胞,通过基因工程将二者融合成为ch14.18-IL-2融台蛋白能特异地将rh IL-2导向肿瘤位... 临床试验表明,在神经纤维瘤患者中单独应用rh IL-2或鼠抗GD2与人的嵌台变异体ch14.18能通过激活LAK细胞或通过外周血单核细胞介导的ADCC作用杀死瘤细胞,通过基因工程将二者融合成为ch14.18-IL-2融台蛋白能特异地将rh IL-2导向肿瘤位点,抑制瘤细胞播散与生长的能力要比单独使用rh IL-2更有效。本研究选用人神经纤维瘤系SKN—AS细胞5×10^5/100μl PBS注入CB—17scid小鼠脾包膜下构建肝转移模型。 展开更多
关键词 重组抗体-白细胞介素2融合蛋白 重症免疫缺陷 神经纤维瘤 肝转移灶 抑制作用
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COX-2的基因克隆和多克隆抗体制备 被引量:6
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作者 李改丽 王百忍 +3 位作者 费玲玲 张萍 杨浩 鞠躬 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第3期478-482,共5页
环氧合酶 2 (COX 2 )是一种具有多种功能的神经调节物质 ,它的许多功能细节仍不十分清楚 ,还需要进一步深入研究 .用PCR技术从大鼠脑cDNA文库中 ,扩增到正常成年大鼠COX 2的cDNA序列 ,测序结果与已发表的序列一致 .通过PCR扩增和基因重... 环氧合酶 2 (COX 2 )是一种具有多种功能的神经调节物质 ,它的许多功能细节仍不十分清楚 ,还需要进一步深入研究 .用PCR技术从大鼠脑cDNA文库中 ,扩增到正常成年大鼠COX 2的cDNA序列 ,测序结果与已发表的序列一致 .通过PCR扩增和基因重组 ,分别构建COX 2编码基因全长和羧基端部分编码序列的表达载体 ,并导入大肠杆菌DH5α中 ,通过IPTG诱导表达重组融合蛋白 ,结果导入全长编码基因表达载体的DH5α无COX 2融合蛋白表达 ,而羧基端部分基因编码的COX 2融合蛋白在DH5α中以包涵体的形式进行表达 .经SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 ,在相对分子质量 (Mr)为 44 0 0 0处有 1条特异的蛋白质条带 .对以包涵体形式表达的蛋白质进行变性、重折叠及纯化后 ,得到了高纯度融合蛋白 .以重组融合蛋白免疫新西兰种大白兔 ,制作了抗COX 2多克隆抗体 ,经酶联免疫吸附测定、蛋白质印迹和免疫细胞化学方法检测 ,此抗体具有较高效价和特异性 .COX 2基因和多克隆抗体的获得 ,为进一步研究COX 展开更多
关键词 COX-2 基因克隆 克隆抗体 融合蛋白 环氧合酶-2 前列腺素 第二信使
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一株分泌抗猪γ-干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞的鉴定 被引量:7
14
作者 张敬梅 余为一 +1 位作者 李林 张春玲 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第27期12955-12956,12983,共3页
[目的]应用杂交瘤技术获得稳定分泌抗猪γ-干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。[方法]先将原核表达产物His-PoIFN-γ免疫BALB/c小鼠4次,然后进行细胞融合,再以纯化的GST-PoIFN-γ作为包被抗原,用间接ELISA筛选阳性杂交瘤无性系,最终获得... [目的]应用杂交瘤技术获得稳定分泌抗猪γ-干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。[方法]先将原核表达产物His-PoIFN-γ免疫BALB/c小鼠4次,然后进行细胞融合,再以纯化的GST-PoIFN-γ作为包被抗原,用间接ELISA筛选阳性杂交瘤无性系,最终获得能稳定分泌抗猪IFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞株,对其进行间接ELISA和Western blot检测。[结果]试验获得1株能稳定分泌抗猪IFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞株,被命名为B3株,经间接ELISA和Western blot检测,该株分泌的抗体能与融合蛋白His-PoIFN-γ和GST-PoIFN-γ发生特异性反应,而与其他表达鸡γ-干扰素、His和GST蛋白等的重组质粒均不发生反应。B3株分泌的抗体小鼠腹水的ELISA效价达到1∶160 000,抗体亚型为IgG1型,且轻链为κ链。[结论]该研究为建立猪γ-干扰素检测方法,研究机体的免疫状态及免疫机制提供了技术基础。 展开更多
关键词 猪Γ-干扰素 融合蛋白 单克隆抗体 制备 鉴定
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β淀粉样肽1~42单克隆抗体的制备 被引量:1
15
作者 董炜疆 胡海涛 +2 位作者 冯改丰 杨广笑 王全颖 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期517-519,共3页
目的 制备稳定分泌β -淀粉样肽 1~ 4 2 (Aβ1-42 )单克隆抗体的杂交瘤细胞 ,产生高效价抗体。方法 通过基因工程技术 ,将Aβ1-42 基因融合于乙肝核心抗原 (HBcAg)的主要免疫优势区 (MIR) ,制备Aβ和HBcAg的融合蛋白 ,免疫BALB/c小... 目的 制备稳定分泌β -淀粉样肽 1~ 4 2 (Aβ1-42 )单克隆抗体的杂交瘤细胞 ,产生高效价抗体。方法 通过基因工程技术 ,将Aβ1-42 基因融合于乙肝核心抗原 (HBcAg)的主要免疫优势区 (MIR) ,制备Aβ和HBcAg的融合蛋白 ,免疫BALB/c小鼠 ,取脾细胞与SP2 / 0细胞融合 ,筛选能稳定分泌Aβ1-42 单克隆抗体的杂交瘤细胞。结果 得到两株能稳定分泌Aβ1-42 单克隆抗体的杂交瘤细胞 ,Aβ1-42 单克隆抗体的Ig亚类为IgG3 。结论 制备得到的Aβ1-42 单克隆抗体特异性强 。 展开更多
关键词 Β-淀粉样肽 单克隆抗体 融合蛋白 细胞融合
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脂蛋白(a)单克隆抗体制备与表位分析
16
作者 熊宁 郑长龙 +1 位作者 王兰珍 苏志国 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期505-507,519,共4页
目的:解决脂蛋白(a)抗体批间差大,以及试剂盒检测结果不一致的问题。方法:制备脂蛋白(a)单克隆抗体,筛选与Kringle IV-2无反应,且能自身配对的杂交瘤细胞株,并对抗体识别位点与检测特异性进行分析。结果:获得了一株识别Kringle IV-5的单... 目的:解决脂蛋白(a)抗体批间差大,以及试剂盒检测结果不一致的问题。方法:制备脂蛋白(a)单克隆抗体,筛选与Kringle IV-2无反应,且能自身配对的杂交瘤细胞株,并对抗体识别位点与检测特异性进行分析。结果:获得了一株识别Kringle IV-5的单抗,标记为LPa-3,该单抗能够实现自身配对,用LPa-3单抗作为包被抗体与标记抗体初步建立的夹心ELISA方法检测15份血清样品,检测结果与商品试剂盒具有较好的相关性:y=0.190 4 x-0.032 6,R2=0.922。结论:LPa-3单抗能实现自身配对,检测特异性好,是一种优良的体外诊断试剂盒原料,为胶乳增强免疫比浊试剂盒的开发奠定了基础。 展开更多
关键词 蛋白(a) KRINGLE -2 单克隆抗体 抗体配对
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多囊蛋白-1胞内区cDNA的克隆与表达 被引量:2
17
作者 郑瑞英 梅长林 毛积芳 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期313-315,共3页
目的 :获取多囊蛋白 - 1胞内区片段。 方法 :用 PCR法克隆多囊蛋白 - 1胞内区的 c DNA片段 ,然后插入融合蛋白表达载体 p Pro EX Hta中 ,经测序证实后 ,转入大肠杆菌中表达并用亲和层析法进行纯化。结果 :克隆到一个 6 6 0 bp的多囊蛋白... 目的 :获取多囊蛋白 - 1胞内区片段。 方法 :用 PCR法克隆多囊蛋白 - 1胞内区的 c DNA片段 ,然后插入融合蛋白表达载体 p Pro EX Hta中 ,经测序证实后 ,转入大肠杆菌中表达并用亲和层析法进行纯化。结果 :克隆到一个 6 6 0 bp的多囊蛋白- 1胞内区 c DNA片段 ,得到了一个相对分子质量为 2 .6万的融合蛋白。结论 :多囊蛋白 - 1胞内区片段的融合蛋白为制备抗多囊蛋白 - 1单克隆抗体提供了基础。 展开更多
关键词 多囊蛋白-1 融合蛋白 常染色体显性 胞内区 多囊肾 单克隆抗体 CDNA
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β_2-微球蛋白连续表位的免疫亲和质谱研究 被引量:2
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作者 黎根 刘宁 +1 位作者 刘志强 刘淑莹 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2007年第1期92-96,共5页
采用Endoproteinase Glu-C,Lys—C和Trypsin 3种蛋白酶分别水解β2-微球蛋白,产生一系列肽段,利用固定在琼脂糖珠上的单克隆抗体与其发生免疫亲和反应.利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF—MS)技术,对抗原决定簇肽... 采用Endoproteinase Glu-C,Lys—C和Trypsin 3种蛋白酶分别水解β2-微球蛋白,产生一系列肽段,利用固定在琼脂糖珠上的单克隆抗体与其发生免疫亲和反应.利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF—MS)技术,对抗原决定簇肽段-抗体复合物进行系统研究,结果表明,与抗体结合部位即连续表位的位点为肽段(59—69)(DWSFYLLYYTE).该研究方法简便、准确,可用来对其它抗原连续表位的快速测定. 展开更多
关键词 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 免疫亲和 Β2-微球蛋白 连续表位 单克隆抗体
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LAIR-1/LAIR-2(CD305/CD306)推定配体分布的研究 被引量:3
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作者 许晓光 王春燕 +4 位作者 谢鑫 薛江楠 欧阳为明 菅金龙 金伯泉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期553-556,560,共5页
目的:研究LAIR-1(CD305)及LAIR-2(CD306)推定配体在多种细胞系上的分布,为鉴定LAIR-1/LAIR-2推定配体提供了实验依据。方法:建立稳定表达LAIR-1-Fc和LAIR-2-Fc融合蛋白的细胞系。以纯化的融合蛋白进行活细胞免疫荧光染色,用流式细胞仪检... 目的:研究LAIR-1(CD305)及LAIR-2(CD306)推定配体在多种细胞系上的分布,为鉴定LAIR-1/LAIR-2推定配体提供了实验依据。方法:建立稳定表达LAIR-1-Fc和LAIR-2-Fc融合蛋白的细胞系。以纯化的融合蛋白进行活细胞免疫荧光染色,用流式细胞仪检测LAIR-1及LAIR-2推定配体在多种细胞系膜表面的表达,并比较LAIR-1和LAIR-2推定配体的分布及可能结合的位点。结果:LAIR-1推定配体及LAIR-2推定配体均在人羊膜来源的上皮细胞系WISH上高表达,在人黑色素瘤细胞系C32、人胚肾上皮细胞系293T及人脐静脉内皮细胞系ECV304上有一定程度的表达。LAIR-1-Fc和LAIR-2-Fc融合蛋白与推定配体的结合,可分别被可同时识别LAIR-2和LAIR-1的单克隆抗体(mAb)FMU-LAIR-2.2和FMU-LAIR-2.1阻断。结论:LAIR-1推定配体及LAIR-2推定配体的分布基本一致,主要表达于WISH、C32、293T和ECV304细胞系。LAIR-1和LAIR-2可能拥有共同的配体。 展开更多
关键词 LAIR-1 LAIR-2 推定配体 融合蛋白 单克隆抗体 CD305 CD306
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不同控制模式对毕赤酵母表达IL-2-HSA的比较研究 被引量:1
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作者 堵益平 高敏杰 +1 位作者 金虎 史仲平 《生物学杂志》 CAS CSCD 2008年第4期44-47,61,共5页
以溶氧(DO)和甲醇浓度作为控制指标,分别考察了诱导表达阶段DO和甲醇浓度对毕赤酵母高密度发酵表达白介素-2-白蛋白融合蛋白(IL-2-HSA)的影响。通过实验比较得出:诱导阶段控制DO对IL-2-HSA表达影响不明显,而甲醇浓度对IL-2-HSA... 以溶氧(DO)和甲醇浓度作为控制指标,分别考察了诱导表达阶段DO和甲醇浓度对毕赤酵母高密度发酵表达白介素-2-白蛋白融合蛋白(IL-2-HSA)的影响。通过实验比较得出:诱导阶段控制DO对IL-2-HSA表达影响不明显,而甲醇浓度对IL-2-HSA影响很大。高甲醇浓度(15~25g/L)有利于IL-2-HSA的表达,发酵结束时的表达量约是低甲醇浓度(5~8g/L)诱导下的2倍。此外,在诱导阶段,通过限制性添加甘油可以有效提高菌体的呼吸活性,促进菌体生长。 展开更多
关键词 白介素-2-蛋白融合蛋白 毕赤酵母 溶氧 甲醇浓度
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