绿色荧光蛋白基因研究进展 被引量：17

1

作者 杨朝辉 雷建军 《生物学杂志》 CAS CSCD 2000年第5期12-14,共3页

绿色荧光蛋白 ( greenfluorescentprotein ,GFP)基因是目前唯一在细胞内稳定表达 ,不需要任何反应底物及其它辅助因子 ,无种属 ,组织和位置特异性 ,其产物GFP对细胞无毒性 ,且检测简单 ,结果真实可靠的新型报告基因 ,其特有的生物化学... 绿色荧光蛋白 ( greenfluorescentprotein ,GFP)基因是目前唯一在细胞内稳定表达 ,不需要任何反应底物及其它辅助因子 ,无种属 ,组织和位置特异性 ,其产物GFP对细胞无毒性 ,且检测简单 ,结果真实可靠的新型报告基因 ,其特有的生物化学性质使其在细胞生物学和分子生物学领域有着广泛的应用前景。 展开更多

关键词 绿色荧光蛋白基因 绿色荧光蛋白 报告基因

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绿色荧光蛋白基因原核表达质粒pET32a-AcGFP1的构建及其在大肠杆菌中的高效表达 被引量：2

2

作者 霍海龙 赵跃 +6 位作者 王锐 侯慧芳 李卫真 张永云 刘丽仙 王配 霍金龙 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期820-825,共6页

为了构建绿色荧光蛋白AcGFP1基因的原核表达载体pET32a-AcGFP1,并诱导使其在大肠杆菌中高效表达,本研究以pIRES-AcGFP1质粒为模板,采用PCR技术特异性扩增绿色荧光蛋白AcGFP1基因,通过酶切和连接使其与原核表达载体pET32a(+)构成重组子,... 为了构建绿色荧光蛋白AcGFP1基因的原核表达载体pET32a-AcGFP1,并诱导使其在大肠杆菌中高效表达,本研究以pIRES-AcGFP1质粒为模板,采用PCR技术特异性扩增绿色荧光蛋白AcGFP1基因,通过酶切和连接使其与原核表达载体pET32a(+)构成重组子,经PCR、酶切和测序鉴定后,重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3),用不同浓度的异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达绿色荧光蛋白,经15%SDS-PAGE鉴定,结果显示:重组质粒pET32a-AcGFP1中的AcGFP1序列与Clontech公司的pIRES-AcGFP1质粒的AcGFP1序列完全一致,表明本实验已成功构建了含有绿色荧光蛋白基因AcGFP1的原核表达质粒。此外,pET32a-AcGFP1转化Rosetta(DE3),经不同浓度的IPTG诱导,SDS-PAGE检测均获得高效表达,为今后构建pET32a(+)-TAT-AcGFP1融合表达载体以及深入研究TAT的细胞膜穿透作用的机制奠定基础。 展开更多

关键词 绿色荧光蛋白 基因克隆 报告基因 原核表达

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CD133基因启动子调控增强型绿色荧光蛋白基因在喉癌Hep-2细胞中的表达 被引量：2

3

作者 王晓峰 周翔宇 +3 位作者 张桂珍 王伟 杜珍武 张天夫 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期498-502,I0001,共6页

目的:构建人CD133基因启动子启动加强型绿色荧光蛋白(eGFP)基因表达载体,观察在喉癌Hep-2细胞系中人CD133基因启动子启动eGFP基因表达能力,为应用CD133基因启动子调控靶向肿瘤干细胞(CSCs)基因治疗奠定实验基础。方法:采用PCR方法从人... 目的:构建人CD133基因启动子启动加强型绿色荧光蛋白(eGFP)基因表达载体,观察在喉癌Hep-2细胞系中人CD133基因启动子启动eGFP基因表达能力,为应用CD133基因启动子调控靶向肿瘤干细胞(CSCs)基因治疗奠定实验基础。方法:采用PCR方法从人外周血基因组中克隆人CD133基因启动子,通过基因重组技术将人CD133基因启动子克隆入慢病毒基因转移载体pWPXLd-eGFP中,构建人CD133基因启动子启动eGFP基因表达载体,PCR以及酶切鉴定构建载体的正确性。应用脂质体介导该载体转染入Hep-2细胞中,细胞分为空白对照组(未转染质粒)、阳性对照组(转染pWPXLd)和实验组(转染pWPXLd-eGFP-CD133)。应用荧光显微镜观察各组eGFP基因在喉癌Hep-2细胞内的表达。结果:PCR法获得了约1 810bp大小的CD133基因启动子片段;酶切与PCR鉴定,成功构建了人CD133基因启动子启动eGFP基因表达载体。荧光显微镜下,阳性对照组和实验组转染的Hep-2细胞株有eGFP的表达,而空白组对照组的Hep-2细胞内无eGFP的表达。结论:构建的人CD133基因启动子启动eGFP基因表达载体可以调控eGFP基因在喉癌Hep-2细胞内的表达。 展开更多

关键词 CD133启动子 加强型绿色荧光蛋白 肿瘤干细胞 HEP-2细胞系

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绿色荧光蛋白基因在水稻遗传转化中的应用

4

作者 马旭俊 刘春娟 +1 位作者 吕世博 张超 《江苏农业科学》 北大核心 2013年第4期35-37,共3页

本研究构建了含有编码绿色荧光蛋白基因的植物表达载体,以愈伤组织作为外植体,采用农杆菌介导法将携带绿色荧光蛋白的植物表达载体转入水稻品种秀水11中。分析了转化1个月的抗性愈伤组织以及2个月的转基因植株根中绿色荧光蛋白基因的表... 本研究构建了含有编码绿色荧光蛋白基因的植物表达载体,以愈伤组织作为外植体,采用农杆菌介导法将携带绿色荧光蛋白的植物表达载体转入水稻品种秀水11中。分析了转化1个月的抗性愈伤组织以及2个月的转基因植株根中绿色荧光蛋白基因的表达。在荧光显微镜下观察到了绿色荧光蛋白基因的表达,转基因水稻愈伤组织和根具有很高的绿色荧光信号。结果表明,在水稻遗传转化研究中,绿色荧光蛋白基因既可用于检测基因的瞬间表达,也可用于检测基因在细胞中的稳定表达。 展开更多

关键词 绿色荧光蛋白 水稻 报告基因 遗传转化 愈伤组织

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外源报告基因EGFP在盐藻中实现瞬时表达 被引量：21

5

作者 李杰 任宏伟 +2 位作者 黄洁虹 俞梅敏 茹炳根 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期338-342,共5页

探索杜氏盐藻 (Dunaliellasalina)的转基因方法和筛选方法 .利用烟草花叶病毒启动子 (CaMV35S)、衣藻叶绿体atpA启动子与来源于水母的加强型绿色荧光蛋白报告基因 (EGFP)构建表达载体pART7GFP和pUCGFP ,转化盐藻 .EGFP在CaMV 35S启动下... 探索杜氏盐藻 (Dunaliellasalina)的转基因方法和筛选方法 .利用烟草花叶病毒启动子 (CaMV35S)、衣藻叶绿体atpA启动子与来源于水母的加强型绿色荧光蛋白报告基因 (EGFP)构建表达载体pART7GFP和pUCGFP ,转化盐藻 .EGFP在CaMV 35S启动下表达出绿色荧光蛋白 ,在荧光显微镜下看到发绿色荧光的转基因盐藻 .根据荧光数目进行统计 ,转化效率高于 5 % .衣藻来源的启动子atpA在盐藻中未能启动EGFP的表达 .用直径 1μm的金粉颗粒和 0 6 μm的金粉进行基因枪法转化 ,1μm的金粉颗粒成功将外源基因导入盐藻 ,用 0 6 μm的金粉配合多种技术参数也没有将外源基因导入盐藻 .EGFP可以用作盐藻遗传转化的报告基因使单细胞真核生物盐藻可以利用流式细胞术 (FACS)等技术进行筛选 ,从而避开平板筛选转基因盐藻的限制 。 展开更多

关键词 外源报告基因EGFP 盐藻 表达 遗传转化 加强型绿色荧光蛋白报告基因

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报告基因的选择及其研究趋向 被引量：29

6

作者 薛丽香 童坦君 张宗玉 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期364-366,共3页

报告基因是一种编码某种易于检测蛋白质或酶的基因,通过它的表达产物来标定目的基因的表达调控。由于具有灵敏度高、检测方便等特点,报告基因技术在转基因、启动子分析以及药物筛选等领域有了广泛的应用。近年来,随着荧光分析方法和技... 报告基因是一种编码某种易于检测蛋白质或酶的基因,通过它的表达产物来标定目的基因的表达调控。由于具有灵敏度高、检测方便等特点,报告基因技术在转基因、启动子分析以及药物筛选等领域有了广泛的应用。近年来,随着荧光分析方法和技术的进步,荧光素酶和绿色荧光蛋白成为众多报告基因中的后起之秀,本文以这两个报告基因为重点,综述了报告基因的特点、应用、近年来的进展以及未来发展方向。 展开更多

关键词 报告基因 选择 绿色荧光蛋白 荧光素酶 发展方向

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绿色荧光蛋白在植物病理学研究中的应用 被引量：7

7

作者 蒋明 吕枷薪 +3 位作者 黄余磊 苗立祥 倪雪莉 鲍笑笑 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期39-43,共5页

绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)是生命科学研究中的一种重要报告基因,本文在论述GFP的发现、结构和发光原理的基础上,从抗病基因的亚细胞定位、启动子活性分析、病原菌-植物互作研究和基因表达分析等方面讨论GFP在植物病... 绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)是生命科学研究中的一种重要报告基因,本文在论述GFP的发现、结构和发光原理的基础上,从抗病基因的亚细胞定位、启动子活性分析、病原菌-植物互作研究和基因表达分析等方面讨论GFP在植物病理学研究中的应用。 展开更多

关键词 绿色荧光蛋白 植物病理学 报告基因 应用

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绿色荧光蛋白及其在丝状真菌研究中的应用 被引量：15

8

作者 徐莹 刘太国 +1 位作者 何月秋 陈万权 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期1-6,共6页

绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)来源于海洋生物水母(Aequorea victoria),gfp基因作为报告基因已被广泛地应用于丝状真菌生物学研究中。gfp基因通过与目标基因融合,可进行真菌的蛋白质及细胞器定位、细胞动力学、突变体致... 绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)来源于海洋生物水母(Aequorea victoria),gfp基因作为报告基因已被广泛地应用于丝状真菌生物学研究中。gfp基因通过与目标基因融合,可进行真菌的蛋白质及细胞器定位、细胞动力学、突变体致病力检测、生态学行为以及与其他生物互作等研究。 展开更多

关键词 绿色荧光蛋白(GFP) 丝状真菌 报告基因

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绿色荧光蛋白在微生物与植物互作研究中的应用研究进展 被引量：4

9

作者 潘虹 雷珍珍 +3 位作者 许可静 叶晶龙 廖甜甜 乐超银 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期150-153,共4页

对绿色荧光蛋白的结构、发光机制、荧光检测方法以及在微生物与植物互作研究中的应用进行了详细的阐释,重点对其在根际微生物定殖及其与宿主植物的相互作用、内生菌定殖及其对植物生长促进作用、微生物与植物共生关系、病原微生物与植... 对绿色荧光蛋白的结构、发光机制、荧光检测方法以及在微生物与植物互作研究中的应用进行了详细的阐释,重点对其在根际微生物定殖及其与宿主植物的相互作用、内生菌定殖及其对植物生长促进作用、微生物与植物共生关系、病原微生物与植物的相互作用、微生物中蛋白在宿主植物中的定位、转基因安全与标记等方面的应用进行了综述,并对其应用进行了展望。 展开更多

关键词 绿色荧光蛋白 报告基因 生防微生物 分子标记

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绿色荧光蛋白cDNA在腺病毒重组载体转染中的应用 被引量：4

10

作者 张晓伟 王福山 童坦君 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1998年第3期266-268,共3页

绿色荧光蛋白（ｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ，ＧＦＰ）基因是目前发现的唯一能在细胞内表达，且不需要其他外源底物参与的全新报告基因．将ＧＦＰｃＤＮＡ与腺病毒载体ｐＡｄＥ１ＣＭＶ重组，以ｌｉｐｏｆｅｃｔｉ... 绿色荧光蛋白（ｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ，ＧＦＰ）基因是目前发现的唯一能在细胞内表达，且不需要其他外源底物参与的全新报告基因．将ＧＦＰｃＤＮＡ与腺病毒载体ｐＡｄＥ１ＣＭＶ重组，以ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ转染２９３细胞（一种人胚肾细胞），观察其在真核细胞内的表达情况，为转基因技术提供了新的监测方法． 展开更多

关键词 绿色荧光蛋白 报告基因 腺病毒 载体

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绿色荧光蛋白及其突变体的特征与应用 被引量：2

11

作者 徐晓晖 林佳楠 +1 位作者 言思敏 李素芳 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第7期3848-3850,共3页

就GFP及其突变体的性质和GFP作为报告基因,在基因表达、蛋白质定位、蛋白质互作等方面的应用进行了综述。。

关键词 绿色荧光蛋白 突变体 报告基因 应用

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利用双萤光素酶报告基因系统筛选有效的siRNA 被引量：1

12

作者 单志新 林秋雄 +4 位作者 谭虹虹 邓春玉 刘晓颖 肖定璋 余细勇 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1577-1581,1584,共6页

目的建立一种利用双萤光素酶报告基因系统筛选能有效抑制目的基因表达的小干扰RNA(siRNA)的方法。方法以绿色荧光蛋白(GFP)基因为研究对象,构建3个候选的靶向GFP的siRNA表达质粒pSi-GFPsiRNA1、pSi-GFPsiRNA2、pSi-GFPsiRNA3和阴性对照p... 目的建立一种利用双萤光素酶报告基因系统筛选能有效抑制目的基因表达的小干扰RNA(siRNA)的方法。方法以绿色荧光蛋白(GFP)基因为研究对象,构建3个候选的靶向GFP的siRNA表达质粒pSi-GFPsiRNA1、pSi-GFPsiRNA2、pSi-GFPsiRNA3和阴性对照pSi-Negative。构建拥有同一Kozak共有翻译启始序列、翻译启始密码子ATG的GFP与萤光素酶基因(LUC)的融合表达载体pGL3-GFPf。将包含3个GFPsiRNA靶序列的GFP片段插入到改建过的pGL3-promoter载体上LUC的3'非翻译区(UTR),构建pGL3-GFPp。将GFPsiRNA表达质粒联同内参照质粒pRL-TK分别与pGL3-GFPf、pGL3-GFPp共转化HEK293细胞。利用双萤光素酶检测试剂盒测定各组细胞中萤光素酶的活力水平,用荧光定量PCR检测各组细胞中GFPmRNA的表达水平。结果同对照组相比,与pGL3-GFPf共转化GFPsiRNA表达质粒的各组细胞中萤火虫萤光素酶/海肾萤光素酶比值明显降低,其中GFPsiRNA1表达组中降低最显著(P<0.01);定量PCR检测也显示,GFPsiRNA1表达组中GFPmRNA的表达水平降低最明显(P<0.01)。双萤光素酶活性检测和定量PCR结果还显示,与pGL3-GFPp共转化GFPsiRNA表达质粒的各组细胞中,GFPsiRNA1抑制GFP的表达最显著(P<0.01)。结论本文建立了通过双萤光素酶活性检测来筛选有效的siRNA的方法,并为进行多个基因的有效siRNA的筛选提供解决方案。 展开更多

关键词 双萤光素酶报告基因系统 RNA干扰 荧光定量PCR 绿色荧光蛋白

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绿色荧光蛋白和荧光素酶 被引量：7

13

作者 马三梅 王永飞 《生物学教学》 北大核心 2005年第12期5-6,共2页

绿色荧光蛋白和荧光素酶基因是基因工程中广泛使用的两个报告基因。本文从绿色荧光蛋白和荧光素酶的来源、性质、发光机理、检测方法和用途等方面论述了两者的区别。

关键词 绿色荧光蛋白 荧光素酶 报告基因

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重组杆状病毒载体介导报告基因在甲状腺癌细胞中的表达研究

14

作者 周翔 尹红燕 +2 位作者 乌海飞 李彪 张一帆 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期279-283,共5页

目的探讨杆状病毒作为甲状腺癌基因转移和治疗载体的可行性。方法利用杆状病毒Bac-to-Bac表达系统制备携带绿色荧光蛋白(GFP)的重组杆状病毒(Bac-GFP)。分别以不同感染复数(MOI)的Bac-GFP感染滤泡状甲状腺癌细胞株FTC-133,流式细胞仪鉴... 目的探讨杆状病毒作为甲状腺癌基因转移和治疗载体的可行性。方法利用杆状病毒Bac-to-Bac表达系统制备携带绿色荧光蛋白(GFP)的重组杆状病毒(Bac-GFP)。分别以不同感染复数(MOI)的Bac-GFP感染滤泡状甲状腺癌细胞株FTC-133,流式细胞仪鉴定感染效率及GFP表达强度。以MOI为100的Bac-GFP感染FTC-133,荧光显微镜观察GFP表达持续时间;流式细胞仪检测不同浓度丁酸钠干预对感染效率及GFP表达强度的影响。MTT比色法检测不同MOI的Bac-GFP感染对FTC-133细胞存活的影响。结果成功制备重组杆状病毒载体Bac-GFP并感染FTC-133。感染效率随MOI的增加而提高;当MOI为100时,感染效率高达71.3%。丁酸钠可提高Bac-GFP对FTC-133的感染效率及GFP表达强度,但感染效率的提高无统计学意义。荧光显微镜观察显示,Bac-GFP感染FTC-133其GFP表达可持续2周。MTT检测显示,不同MOI的Bac-GFP感染FTC-133的细胞存活率比较差异无统计学意义(P>0 05)。结论重组杆状病毒Bac-GFP对FTC-133细胞具有较高的感染效率,报告基因表达时间较长且无明显细胞毒性,有可能成为甲状腺癌基因治疗的良好载体。 展开更多

关键词 甲状腺肿瘤 杆状病毒 报告基因 绿色荧光蛋白

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AFP启动子对绿色荧光蛋白在人肝癌细胞中表达的影响 被引量：3

15

作者 茆灿泉 黄常志 +4 位作者 杨树德 赵玫 范云霞 徐枫 杜菲 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期495-498,共4页

目的研究AFP5′端3.1kb启动子序列对GFP在人肝癌细胞中表达的影响。方法首先采用重组DNA技术,构建了由AFP5′端前导序列AFP启动子+AFPEI增强子,3.1kb调控的绿色荧光蛋白GFP报告基因哺乳动物表达载体pcDNA3-GFP-AFP-w,然后将pcDN... 目的研究AFP5′端3.1kb启动子序列对GFP在人肝癌细胞中表达的影响。方法首先采用重组DNA技术,构建了由AFP5′端前导序列AFP启动子+AFPEI增强子,3.1kb调控的绿色荧光蛋白GFP报告基因哺乳动物表达载体pcDNA3-GFP-AFP-w,然后将pcDNA3-GFP-AFP-w、pcDNA3-GFP及空载(pcDNA3-neo)经lipofectin分别转染Bel7402、Hela二种肿瘤细胞,G418抗性筛选得到含各不同质粒的稳定阳性细胞克隆,Westernblotting和密度积分扫描检测GFP基因的表达。结果转染pcDNA3-GFP-AFP-w细胞的GFP表达量在Bel7402中明显高于Hela细胞,在Hela细胞中GFP几乎不表达,但均低于相应转染pcDNA3-GFP的细胞,呈现一定的专一性。结论AFP5′端3.1kb启动子序列调控的GFP报告基因载体pcDNA3-GFP-AFP-w对Bel7402肝癌细胞呈现一定的细胞专一性。 展开更多

关键词 报告基因 GFP AFP启动子 转染 绿色荧光蛋白 肝癌 肝细胞癌

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GFP为外源报告基因在地衣芽孢杆菌20386中表达的研究 被引量：1

16

作者 朱科 韩玲 杨渝珍 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期478-480,共3页

目的　探讨外源基因在野生型地衣芽孢杆菌 2 0 386中表达的可行性。方法　利用大肠杆菌 枯草芽孢杆菌穿梭表达载体在大肠杆菌DH5α中构建含绿色荧光蛋白 (GFP)基因的重组质粒 ,通过电转化将重组质粒转入到野生型地衣芽孢杆菌 2 0 386... 目的　探讨外源基因在野生型地衣芽孢杆菌 2 0 386中表达的可行性。方法　利用大肠杆菌 枯草芽孢杆菌穿梭表达载体在大肠杆菌DH5α中构建含绿色荧光蛋白 (GFP)基因的重组质粒 ,通过电转化将重组质粒转入到野生型地衣芽孢杆菌 2 0 386中表达 ,通过检测绿色荧光蛋白的存在 ,考察该野生型菌株表达外源基因的可能性和表达能力。结果　在紫外光激发下 ,在固体LB平板上生长的菌落能显示绿色荧光 ,而在液体LB培养基中培养的菌体和培养上清中未能检测到绿色荧光蛋白的存在。结论　外源基因在野生型地衣芽孢杆菌 2 0 386中能够表达 ,但在液体LB中培养时 ,可能会被该菌自身分泌的蛋白酶分解 ;亦可能被稀释而无法测到荧光 。 展开更多

关键词 GFP 外源报告基因 地衣芽孢杆菌 表达 研究 穿梭载体 绿色荧光蛋白

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报告基因在监测基因转移中的应用新进展 被引量：4

17

作者 孙安赛 黄广明 《动物医学进展》 CSCD 2002年第6期52-55,共4页

绿色荧光蛋白 (GFP)和虫荧素酶 (luc)等报道分子的应用使人们能够对基因的转移和表达进行灵敏的监测。对 GFP进行修饰可增加其荧光强度和热稳定性 ,同时也改变了它的光学特性 ,因而使 GFP在进行基因转移时发挥出更大的作用。成像技术的... 绿色荧光蛋白 (GFP)和虫荧素酶 (luc)等报道分子的应用使人们能够对基因的转移和表达进行灵敏的监测。对 GFP进行修饰可增加其荧光强度和热稳定性 ,同时也改变了它的光学特性 ,因而使 GFP在进行基因转移时发挥出更大的作用。成像技术的改进及其在生物学研究方面日益广泛的使用 ,推动了 luc在基因转移 。 展开更多

关键词 报告基因 监测 基因转移 应用 绿色荧光蛋白

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人CREG启动子报告基因质粒的构建及转录活性分析 被引量：1

18

作者 刘姗 刘美丽 +3 位作者 刘丹 闫承慧 田孝祥 刘艳霞 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期585-592,共8页

目的构建人E1A激活基因阻遏子基因(hCREG)不同截短片段的启动子增强型绿色荧光蛋白(pEGFP1)报告基因载体,比较各启动子转录活性,从而确定hCREG核心启动子区。方法通过查询美国国立生物技术信息中心(NCBI)数据库hCREG序列并结合启动子特... 目的构建人E1A激活基因阻遏子基因(hCREG)不同截短片段的启动子增强型绿色荧光蛋白(pEGFP1)报告基因载体,比较各启动子转录活性,从而确定hCREG核心启动子区。方法通过查询美国国立生物技术信息中心(NCBI)数据库hCREG序列并结合启动子特点,获得长度为2003(–1925/+78) bp的启动子片段。利用PCR法及双酶切法截短5个启动子片段并克隆至pEGFP1中,构建pEGFP1_hCREG_2003、pEGFP1_hCREG_945、pEGFP1_hCREG_586、pEGFP1_hCREG_478、pEGFP1_hCREG_358报告基因载体质粒。并将其与内参质粒pGL4.73[hRluc/SV40]瞬时共转染入293T细胞48 h,荧光显微镜下观察pEGFP1hCREG启动子报告基因的绿色荧光表达;采用实时定量PCR检测各启动子mRNA的表达,并确定核心启动子区。采用生物信息学方法预测核心启动子区可能结合的转录因子。结果通过双酶切和基因测序法证实成功构建5个hCREG启动子报告基因载体。荧光显微镜下的观察结果和实时定量PCR结果均显示,pEGFP_1hCREG_586转录活性最高(P<0.05),pEGFP1_hCREG_358转录活性最低(P<0.05),pEGFP1_hCREG_2003、pEGFP1_hCREG_945、pEGFP1_hCREG_478转录活性差异均无统计学意义(P>0.05),提示–867/–509 bp为负性调控区,–400/–281 bp和–508/–401 bp均存在增强子序列,故hCREG基因核心启动子区位于基因5’上游序列–508/–281 bp区域。生物信息学预测关键启动子区–508/–281 bp可能结合的转录因子为Pax5/P53、C/EBPβ、GR-β、GATA-1、GR-α、c-Jun、PRB/PRA、YY1、RXR-α、AP-2、FOXP3、GR、TFIID、STAT4、c-Ets-1。结论成功构建了hCREG基因启动子重组质粒,其核心启动子位于–508/–281 bp区域,此区域可结合多个转录因子。 展开更多

关键词 E1A激活基因阻遏子 转录启动子 报告基因质粒 绿色荧光蛋白质类 聚合酶链反应

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绿色荧光蛋白在植物与病原菌互作研究中的应用 被引量：3

19

作者 史志丹 宋培玲 +9 位作者 郝丽芬 皇甫海燕 燕孟娇 杨永青 郭晨 贾晓清 皇甫九茹 李子钦 张宝辉 陈斐斐 《北方农业学报》 2019年第6期68-72,共5页

绿色荧光蛋白(GFP)作为一种报告基因,具有高灵敏度、稳定性好、低细胞毒害性等优点,被广泛应用在植物与病原菌互作的研究中。文章从GFP转化方法、病原菌侵染寄主过程研究、病原菌数量检测、病原菌亚细胞结构定位研究等方面论述了GFP在... 绿色荧光蛋白(GFP)作为一种报告基因,具有高灵敏度、稳定性好、低细胞毒害性等优点,被广泛应用在植物与病原菌互作的研究中。文章从GFP转化方法、病原菌侵染寄主过程研究、病原菌数量检测、病原菌亚细胞结构定位研究等方面论述了GFP在植物病原菌研究中的应用情况,为GFP的应用提供参考信息。 展开更多

关键词 绿色荧光蛋白 病原菌 报告基因

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乙型肝炎病毒启动子调控的增强型绿色荧光蛋白真核表达载体的构建与表达

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作者 谢娜 王晓燕 张琼 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期353-353,共1页

为研究乙型肝炎病毒（HBV）启动子（含增强子）调控下的增强型绿色荧光蛋白（EGFP）报告基因在肝癌细胞中的表达。用聚合酶链反应（PCR）技术分别扩增出HBV的4个启动子，载入T载体，测序后插入到含EGFP报告基因的质粒pEGFP-1。构建出HB... 为研究乙型肝炎病毒（HBV）启动子（含增强子）调控下的增强型绿色荧光蛋白（EGFP）报告基因在肝癌细胞中的表达。用聚合酶链反应（PCR）技术分别扩增出HBV的4个启动子，载入T载体，测序后插入到含EGFP报告基因的质粒pEGFP-1。构建出HBV不同启动子调控的EGFP基因表达载体，经酶切、测序鉴定各重组体。采用脂质体介导法将4种构建好的载体转染肝癌细胞株HepG2，用倒置荧光显微镜观察各重组体转染细胞中EGFP的表达。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒(HBV) 增强型绿色荧光蛋白 真核表达载体 启动子 肝癌细胞株HEPG2 调控 聚合酶链反应(PCR) GFP报告基因 基因表达载体 脂质体介导法

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