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破色期番茄果实均一化cDNA沉默文库的构建和功能基因筛选模型的初步建立 被引量:7
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作者 王晓光 马远征 +3 位作者 王晓辉 李玲 罗云波 朱本忠 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1079-1083,共5页
番茄果实的成熟是由多基因精细调控的一个过程.利用破色期番茄果实,根据复性动力学原理在mRNA水平进行均一化操作使高丰度和低丰度的mRNA丰度接近.然后把均一化之后mRNA反转录得到cDNA,再与基因沉默载体pTRV重组,最后把构建好的载体通... 番茄果实的成熟是由多基因精细调控的一个过程.利用破色期番茄果实,根据复性动力学原理在mRNA水平进行均一化操作使高丰度和低丰度的mRNA丰度接近.然后把均一化之后mRNA反转录得到cDNA,再与基因沉默载体pTRV重组,最后把构建好的载体通过电转化的方法转入到GV3101农杆菌中,从而建立起破色期番茄果实均一化cDNA沉默文库.通过番茄果实中病毒诱导基因沉默技术,对cDNA沉默文库进行初步筛选,从而确定功能基因筛选模型.在模型建立阶段,以番茄红素合成途径相关的PDS基因作为内标基因,在100个混合农杆菌样中,成功筛选到了PDS基因. 展开更多
关键词 CDNA文库 均一 功能基因 VIGS
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发现新基因的高效方法——cDNA文库的复性式均一化技术 被引量:3
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作者 王强 刘秋云 李宝健 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期325-328,共4页
由复性式均一化技术制作的均一化cDNA文库 (equalizedcDNAlibrary ,normalizedcDNAlibrary)是近年来发展起来的一种获得EST、发现新基因的高效平台。本文就该技术的原理、方法比较、存在问题和展望进行了阐述。
关键词 基因 高效方法 CDNA文库 复性式均一技术
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发酵生物制氢领域的基因工程技术研究进展
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作者 赵鑫 刘一威 +2 位作者 刘文宗 郎咸明 全燮 《环境科学与技术》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期100-104,143,共6页
氢气以其清洁、无污染、热值高的特征和广泛的来源,被认为是未来的良好能源载体。自然条件中,很多微生物可以利用有机底物或者水和光能代谢产生氢气。通过基因工程技术手段可以提高这些微生物的产氢能力,更有利于生物制氢技术的工业化... 氢气以其清洁、无污染、热值高的特征和广泛的来源,被认为是未来的良好能源载体。自然条件中,很多微生物可以利用有机底物或者水和光能代谢产生氢气。通过基因工程技术手段可以提高这些微生物的产氢能力,更有利于生物制氢技术的工业化应用和推广。文章综述了近年来基因工程手段在发酵法生物制氢领域的研究和应用情况,对现有的研究成果进行了比较,并对该技术将来在生物制氢领域的发展趋势做以预测分析。 展开更多
关键词 生物制氢 基因工程技术 产氢功能基因 基因工程菌株
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单细胞基因组学分析的技术前沿 被引量:7
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作者 潘星华 朱海英 MARJANI Sadie L. 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期17-24,共8页
基因组学已经深刻地改变了生命科学的诸多领域的面貌。目前它的主要内容是新的全基因组碱基序列的测定和在全基因组范围内鉴定那些在不同水平上影响生命活动的基因群的功能和相互作用。为达此要求,近年出现的第二代测序(深度测序)技术... 基因组学已经深刻地改变了生命科学的诸多领域的面貌。目前它的主要内容是新的全基因组碱基序列的测定和在全基因组范围内鉴定那些在不同水平上影响生命活动的基因群的功能和相互作用。为达此要求,近年出现的第二代测序(深度测序)技术和基因芯片技术发挥了关键作用,但是两者都需要足够的高质量的核酸样品。所以,在只有或只能用单细胞或极少量细胞的情况下,如果没有特殊手段,上述分析往往不能常规、方便地进行。文章以DNA扩增为主线,综合阐述了目前在单细胞(特别是微生物)全基因组测序和大基因组的靶向重测序,以及对单细胞或微量细胞进行的基于深度测序或芯片杂交的功能基因组分析,如转录组、ChIP和DNA的CpG甲基化分析等的最新策略和技术,评价了单细胞基因组测序和功能基因组学各技术的特点并对发展前景进行了展望。 展开更多
关键词 单细胞基因组测序 第二代测序技术 功能基因组学 转录组分析 染色质免疫共沉淀 CpG甲基图谱
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菰均一化全长cDNA文库的构建 被引量:2
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作者 臧剑 颜育民 +2 位作者 张志刚 邹世湘 彭琼 《湖南农业科学》 2017年第4期11-13,18,共4页
为了获得国家二级保护植物品种菰的功能基因信息,并克隆功能基因片段,研究以SMART(switching mechanism at 5 end of RNA transcript)方式合成菰全长cDNA,结合DSN(duplex-specific nuclease)均一化技术,构建菰叶片组织的均一化全长cDNA... 为了获得国家二级保护植物品种菰的功能基因信息,并克隆功能基因片段,研究以SMART(switching mechanism at 5 end of RNA transcript)方式合成菰全长cDNA,结合DSN(duplex-specific nuclease)均一化技术,构建菰叶片组织的均一化全长cDNA文库。该cDNA文库库容量大,达到了3.6×10~6 PFU/m L,插入片段平均长度为1 000 bp,重组率为97.9%。均一化全长cDNA文库能有效富集低丰度表达基因,降低冗余率,适用于目的基因的筛选,以及后续的基因、蛋白互作分析。 展开更多
关键词 均一 CDNA 文库 功能基因
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抑制性消减杂交技术的应用 被引量:8
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作者 李小庆 景志忠 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期46-50,共5页
基因的差异表达是调控各种生命活动的核心分子机制,而分离、克隆并进一步研究差异表达基因已成为现代分子生物学研究的热点,也是功能基因组学研究的重要内容。在研究差异表达基因的诸多项技术中,抑制性消减杂交(SSH)技术具有特异性强、... 基因的差异表达是调控各种生命活动的核心分子机制,而分离、克隆并进一步研究差异表达基因已成为现代分子生物学研究的热点,也是功能基因组学研究的重要内容。在研究差异表达基因的诸多项技术中,抑制性消减杂交(SSH)技术具有特异性强、假阳性率低、灵敏度高和快速简便等优点,被广泛地应用于生命科学和医学领域的基因差异表达的研究中。近年来,抑制性消减杂交(SSH)技术得到了相应的改进和完善,而在许多研究领域,该技术在广度和深度上都有了一些新进展。主要就抑制性消减杂交技术的产生背景、原理、技术流程、特点及其最新应用研究进展等方面作简要综述。 展开更多
关键词 抑制性消减杂交 差异表达 功能基因dsn均一化技术 CDNA微阵列
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马立克氏病病毒MEQ蛋白单克隆抗体的制备及应用研究 被引量:9
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作者 韦平 崔治中 +2 位作者 龙进学 金文杰 刘岳龙 《广西大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 2002年第1期5-9,共5页
基因表达与病毒感染细胞及致瘤能力之间关系的阐明 ,将有助于我们对马立克氏病病毒 (MDV) meq基因功能的了解 .该研究利用通过杆状病毒载体在昆虫细胞系 SF9上高度表达的 MEQ蛋白免疫 BALB/ c小鼠 ,然后收获其免疫脾细胞与肿瘤细胞系 SP... 基因表达与病毒感染细胞及致瘤能力之间关系的阐明 ,将有助于我们对马立克氏病病毒 (MDV) meq基因功能的了解 .该研究利用通过杆状病毒载体在昆虫细胞系 SF9上高度表达的 MEQ蛋白免疫 BALB/ c小鼠 ,然后收获其免疫脾细胞与肿瘤细胞系 SP2 / 0通过 PEG于体外融合 .获得的杂交瘤细胞被克隆并通过与MDV感染的鸡胚成纤维细胞 (CEF)做免疫荧光试验 (FA) ,进行其分泌抗 MEQ单克隆抗体 (Mc Ab)能力的筛选 .获得 4株稳定产生抗 MEQ蛋白 Mc Ab的杂交瘤细胞 ,其中 3 G1 2 E6通过 FA和免疫酶组化技术能够检测到 MDV致瘤株感染的 CEF及自然 MD肿瘤细胞中表达的 meq基因产物 .研究的结果首次发现 ,MDV致瘤株 GA、RB1 B感染的 CEF及自然 MD肿瘤细胞中均有 meq基因的表达 ,但在弱毒疫苗株 CVI988感染的 CEF和免疫鸡组织细胞中则未检测到 MEQ.作者认为这是由于 meq基因在致瘤株中表达水平高 ,而在非致瘤株中表达水平低所致 ,这可能是决定 MDV毒力 (virulence)或致瘤性(oncogenicity)的关键因素之一 . 展开更多
关键词 马立克氏病病毒 MEQ 蛋白 单克隆抗体 制备 应用研究 功能分析 免疫酶组技术 鸡疾病 基因表达
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干扰素的研究进展 被引量:12
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作者 马飞 《中国畜牧兽医》 CAS 2005年第12期36-38,共3页
关键词 干扰素 免疫系统功能 纤维疾病 DNA重组技术 抗病毒活性 基因工程技术 分子生物学 细胞因子 临床研究 调节功能
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