分枝杆菌噬菌体Leo的生物学和基因组学特征 被引量：2

1

作者 江莉莎 邬亭亭 +1 位作者 刘平 郭述良 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期506-511,共6页

目的筛选能有效裂解结核分枝杆菌的噬菌体,并了解其生物学和遗传学信息。方法双层平板法扩增噬菌体,观察噬菌斑形态;电镜观察噬菌体颗粒形态;单斑法检测噬菌体宿主谱。采用λ噬菌体提取试剂盒提取噬菌体DNA,鸟枪法测序,得到的DNA序列用P... 目的筛选能有效裂解结核分枝杆菌的噬菌体,并了解其生物学和遗传学信息。方法双层平板法扩增噬菌体,观察噬菌斑形态;电镜观察噬菌体颗粒形态;单斑法检测噬菌体宿主谱。采用λ噬菌体提取试剂盒提取噬菌体DNA,鸟枪法测序,得到的DNA序列用Phred/PhraD/Consedh软件包组装,拼接重叠群,PCR扩增重叠群缺口。采用DNAStar软件包、Glimmer3.0基因预测软件、Promoter prediction/Prokaryotic程序进行基因成分分析,基因功能预测,启动子区预测,并同时对Leo作共线性分析及构建系统进化树。结果噬菌体Leo由多面体头部和尾部构成,头部直径(70.0±3.0)nm,尾长(211.0±31.7)nm。其噬菌斑清晰透明,能裂解不同的结核分枝杆菌临床分离株。Leo基因组全长39 981bp,GC含量66.86%,含3个可能的启动子区,不含串联重复序列和tRNA区。Leo含59个基因,gene32编码整合酶,不含编码阻遏蛋白的基因和不利基因,Leo与BPs和Angel相似性最高。结论噬菌体Leo是一株不含不利基因的裂解性噬菌体,能裂解结核分枝杆菌,可以作为鸡尾酒疗法的候选噬菌体。 展开更多

关键词 分枝杆菌噬菌体leo 基因组 结核分枝杆菌

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分枝杆菌噬菌体基因组学研究概况

2

作者 刘珂君 张海鹏 王鹏 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1283-1292,共10页

分枝杆菌感染给全球带来了很大的健康负担,尤其是耐多药结核病(MDR-TB)对公共卫生和卫生安全的威胁,寻找一种有效对抗分枝杆菌感染的方法成为亟待解决的问题。分枝杆菌噬菌体是特异性感染分枝杆菌的病毒,可以通过裂解宿主菌导致其死亡... 分枝杆菌感染给全球带来了很大的健康负担,尤其是耐多药结核病(MDR-TB)对公共卫生和卫生安全的威胁,寻找一种有效对抗分枝杆菌感染的方法成为亟待解决的问题。分枝杆菌噬菌体是特异性感染分枝杆菌的病毒,可以通过裂解宿主菌导致其死亡。目前,大量的分枝杆菌噬菌体已被分离和完成全基因组测序,可以帮助我们深入了解噬菌体的遗传多样性和基因组结构,并推动其应用和发展。因此,本文综述了分枝杆菌噬菌体基因组学的一般特征及基因功能与表达,以提供分枝杆菌噬菌体治疗新思路。 展开更多

关键词 分枝杆菌感染 分枝杆菌噬菌体 基因组学 基因表达 综述文献(主题)

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噬菌体D29对感染敏感株结核分枝杆菌豚鼠的疗效 被引量：6

3

作者 彭丽 罗永艾 +4 位作者 陈保文 黎友伦 沈小兵 苏城 王国治 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期733-736,共4页

目的观察噬菌体D29对豚鼠感染结核分枝杆菌敏感株的治疗作用。方法采用皮下攻击法建立敏感结核病豚鼠模型,感染后动物被随机分为对照组、利福平(rifampin,RFP)组、噬菌体组。分别以不治疗、RFP25mg/kg灌胃、噬菌体D29108噬菌斑形成单位(... 目的观察噬菌体D29对豚鼠感染结核分枝杆菌敏感株的治疗作用。方法采用皮下攻击法建立敏感结核病豚鼠模型,感染后动物被随机分为对照组、利福平(rifampin,RFP)组、噬菌体组。分别以不治疗、RFP25mg/kg灌胃、噬菌体D29108噬菌斑形成单位(plaque-formingunit,PFU)/0.5ml滴鼻,每w3次,隔d给药。治疗4w后,每组取4～5只豚鼠进行解剖,观察动物一般情况、脏器肉眼病变程度、脏器重量指数、脏器病理组织学检查以及肺脏和脾脏结核分枝杆菌的定量培养。结果采用噬菌体、RFP治疗4w后豚鼠结核病模型的脏器病变指数显著低于对照组(P<0.05),噬菌体组的肺脏荷菌量显著低于对照组(P<0.05),RFP组的肺脏荷菌量低于对照组(P>0.05)。病理组织学上,噬菌体组豚鼠的肺脏以纤维化为主;脾脏很少有干酪样坏死,以增生性结节为主。对照组肺脏见大量Langhans细胞,以增生结节为主;脾脏较多干酪样坏死。结论噬菌体D29可减轻结核病豚鼠的脏器病变程度和脏器荷菌量,具有与RFP接近,甚至更好的疗效,且对豚鼠无副作用,有可能作为新型抗结核药物的开发对象。 展开更多

关键词 分枝杆菌噬菌体 分枝杆菌 结核 药效学

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分枝杆菌噬菌体Chy2的分离及生物学特性 被引量：5

4

作者 刘平 邬亭亭 +2 位作者 彭丽 郭述良 罗永艾 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1176-1180,共5页

目的分离鉴定新分枝杆菌噬菌体并研究其生物学特性。方法以平板法从泥土中分离纯化噬菌体,紫外线诱导法鉴定溶原性,从噬菌斑大小、颗粒形态和限制性内切酶分析三方面比较Chy2、D29、TM4异同;以不同感染复数(MOI)扩增Chy2,测定最佳MOI;... 目的分离鉴定新分枝杆菌噬菌体并研究其生物学特性。方法以平板法从泥土中分离纯化噬菌体,紫外线诱导法鉴定溶原性,从噬菌斑大小、颗粒形态和限制性内切酶分析三方面比较Chy2、D29、TM4异同;以不同感染复数(MOI)扩增Chy2,测定最佳MOI;通过一步生长实验测出Chy2潜伏期、裂解期和裂解量;采用单斑法测定MOI的裂解谱;检测MOI在不同pH值培养基中裂解耻垢分枝杆菌mc2155的能力。结果成功分离纯化1株分枝杆菌噬菌体,命名为Chy2,其噬菌斑圆形透明,紫外线诱导法处理宿主菌后不能形成噬菌斑,头部呈椭圆形,长尾,基因组核酸能被双链DNA内切酶EcoRⅠ、HindⅢ、BamHⅠ及XbaⅠ切开,大小约49 kb,与D29、TM4差异大;Chy2最佳MOI为9.58×10-5;Chy2一步生长周期为270 min,潜伏期210 min,裂解期60 min,裂解量为23;Chy2能裂解耻垢分枝杆菌mc2155、结核菌标准株H37Rv、多数临床耐药株;在7H9固体培养基pH值为5.0和7.4时,Chy2均能裂解耻垢分枝杆菌mc2155。结论 Chy2属长尾噬菌体科,基因组为双链DNA,宽噬谱广,是一种潜在的抗结核药物资源。 展开更多

关键词 分枝杆菌噬菌体 耻垢分枝杆菌 结核分枝杆菌 生物学特性 耐药结核病

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结核分枝杆菌噬菌体试剂盒的研制与初步评价 被引量：6

5

作者 彭丽 沈小兵 +1 位作者 罗永艾 王国治 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期389-392,共4页

目的:研制能快速检测标本中结核分枝杆菌的噬菌体试剂盒,并对之在临床上的应用做出初步评价。方法:采用不同方法对噬菌体的生产和保存工艺进行探讨,并且观察该方法中所用试剂的稳定性。建立噬菌体快速检测结核分枝杆菌的方法,分别用噬... 目的:研制能快速检测标本中结核分枝杆菌的噬菌体试剂盒,并对之在临床上的应用做出初步评价。方法:采用不同方法对噬菌体的生产和保存工艺进行探讨,并且观察该方法中所用试剂的稳定性。建立噬菌体快速检测结核分枝杆菌的方法,分别用噬菌体法与传统培养法检测34份临床标本中的结核分枝杆菌,以培养法作为金标准观察噬菌体法的敏感度、特异度和符合率。结果:①在37℃环境中采用琼脂双层法进行噬菌体扩增生产,48h后采用孵育-过滤法收集,可以获得较为理想的产量且简单易行。②噬菌体以液体形式4℃保存或以噬菌体宿主菌的无细胞菌苗作为保护剂进行真空冻干后4℃保存,28周后效价下降不足10的一个数量级。③噬菌体法中的重要试剂:辅助细菌和杀病毒剂,4℃保存40周均具有良好的稳定性。④34份痰标本培养4周,其中2份污染,29份阳性,3份阴性;噬菌体法检测标本中结核分枝杆菌的敏感度、特异度和符合率分别为86.2%(25/29)、66.7%(2/3)、84.4%(27/32)。结论:噬菌体法在48h内可以快速检测标本中的结核分枝杆菌活菌,并且具有以试剂盒形式进行商业化生产的可行性,将有助于临床结核病的快速诊断。 展开更多

关键词 噬菌体 分枝杆菌 结核 诊断

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以分枝杆菌噬菌体为例探索生命科学研究型教学 被引量：5

6

作者 樊祥宇 何颖 谢建平 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期842-846,共5页

综合多学科技术手段研究生物体系复杂问题,是目前生物医学研究的显著特征之一,这为本科生教学改革提出了新的更高的要求。噬菌体是开展生命科学研究型教学改革的理想生物材料。文章借鉴美国匹斯堡大学牵头的美国大学生物学教学改革项目&... 综合多学科技术手段研究生物体系复杂问题,是目前生物医学研究的显著特征之一,这为本科生教学改革提出了新的更高的要求。噬菌体是开展生命科学研究型教学改革的理想生物材料。文章借鉴美国匹斯堡大学牵头的美国大学生物学教学改革项目"噬菌体猎人"的实践,总结了本课题组近5年来将分枝杆菌噬菌体科研成果转化为本科生命科学研究型教学的经验。 展开更多

关键词 生物学 研究型教学 噬菌体 分枝杆菌噬菌体

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牛分枝杆菌的噬菌体快速检测方法研究 被引量：3

7

作者 钟志军 彭广能 +4 位作者 王洁 秦莲花 杨华 白永平 胡忠义 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期909-912,共4页

建立牛分枝杆菌噬菌体快速检测技术，探讨最佳的检测条件，并将建立的方法用于牛分枝杆菌及16种常见非结核分枝杆菌和6种其他细菌的检测。结果表明，噬菌体工作浓度为1×10^8PFU／ml、37℃感染2h为最佳检测条件。杀毒剂浓度在100mmo... 建立牛分枝杆菌噬菌体快速检测技术，探讨最佳的检测条件，并将建立的方法用于牛分枝杆菌及16种常见非结核分枝杆菌和6种其他细菌的检测。结果表明，噬菌体工作浓度为1×10^8PFU／ml、37℃感染2h为最佳检测条件。杀毒剂浓度在100mmol／L，室温作用10min即可完全杀灭受试噬菌体。选择浓度为4mg／ml的对数生长期指示细菌为工作浓度，获得理想的检测结果。加热灭活的细菌和指示细菌不被噬菌体感染。牛分枝杆菌和耻垢分枝杆菌检测结果为阳性，16种常见非结核分枝杆菌和6种其他细菌检测结果均为阴性。该法可检测出60～120条／ml牛分枝杆菌。重复性试验表明，批内、批间变异系数均小于15％．重复性良好。 展开更多

关键词 分枝杆菌噬菌体 牛分枝杆菌 诊断技术

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应用噬菌体生物扩增技术检测牛结核分枝杆菌的方法研究 被引量：5

8

作者 刘子芝 赵勇 +5 位作者 刘纪艳 杨建华 尹望中 王颖 赵晶 周永燚 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2008年第10期20-21,共2页

建立噬菌体生物扩增技术检测牛结核分枝杆菌试验方法,探讨最佳检测条件。比较各种检测方法对测定结果的影响。结果:噬菌体工作浓度为1×108PFU/ml、37℃感染2h,杀毒剂浓度在100mmol/L、室温作用10min为最佳检测条件。指示细胞浓度在... 建立噬菌体生物扩增技术检测牛结核分枝杆菌试验方法,探讨最佳检测条件。比较各种检测方法对测定结果的影响。结果:噬菌体工作浓度为1×108PFU/ml、37℃感染2h,杀毒剂浓度在100mmol/L、室温作用10min为最佳检测条件。指示细胞浓度在1×106条/ml时,形成噬菌斑清晰,便于计数。结论:在选择最佳测定条件下,噬菌体生物扩增法检测牛结核分枝杆菌,快速、简便、灵敏。 展开更多

关键词 噬菌体 牛结核分枝杆菌 检测方法

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不同类型土壤中分枝杆菌噬菌体分离率的比较 被引量：2

9

作者 徐凤宇 苏胜兵 +7 位作者 马红霞 高云航 么乃全 康元环 刘洪岩 周鹏 陆承平 刘永杰 《生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第15期4616-4622,共7页

为了解分枝杆菌噬菌体在自然界的生存环境,深入研究噬菌体在微生态环境中的作用奠定基础。以含柠檬酸和磷酸氢二钠的溶液为提取剂,从50份不同性质土壤中分离、纯化分枝杆菌噬菌体,电镜观察初步确定其分类;统计分析土壤类型、酸碱度、含... 为了解分枝杆菌噬菌体在自然界的生存环境,深入研究噬菌体在微生态环境中的作用奠定基础。以含柠檬酸和磷酸氢二钠的溶液为提取剂,从50份不同性质土壤中分离、纯化分枝杆菌噬菌体,电镜观察初步确定其分类;统计分析土壤类型、酸碱度、含水量、阳离子交换量、有机碳含量对噬菌体分离率的影响。共分离纯化到13株尾病毒目肌尾病毒科的分枝杆菌噬菌体。3种类型土壤的分枝杆菌噬菌体分离率分别为暗棕壤(41.2%)>黄棕壤(25.0%)>褐土(16.7%);土壤pH值、含水量、阳离子交换量对分离率影响呈规律性:pH值和含水量分别在7.45—7.95和13.7%—21.7%时分离率最高;当阳离子交换量为20.8—28.6 cmol/kg时,分离率随之升高而升高;未见有机碳含量对分离率的影响有明显规律。 展开更多

关键词 分枝杆菌噬菌体 土壤 分离率

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牛体内耻垢分枝杆菌噬菌体的分离与保存 被引量：3

10

作者 苏胜兵 高云航 +4 位作者 孟庆峰 于录 马红霞 胡静涛 徐凤宇 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2013年第2期27-30,共4页

鉴于体外分离噬菌体治疗价值的局限性,本研究从12份副结核血清学检测阳性的牛唾液和鼻黏液中成功分离纯化到不同牛体来源的4株耻垢分枝杆菌烈性噬菌体。电镜观察发现它们均属有尾病毒目,肌尾病毒科。为进一步研究和应用这些噬菌体,以其... 鉴于体外分离噬菌体治疗价值的局限性,本研究从12份副结核血清学检测阳性的牛唾液和鼻黏液中成功分离纯化到不同牛体来源的4株耻垢分枝杆菌烈性噬菌体。电镜观察发现它们均属有尾病毒目,肌尾病毒科。为进一步研究和应用这些噬菌体,以其中一株为受试株,比较了16种保存方法,发现其中8种方法保存效果较好。 展开更多

关键词 牛 耻垢分枝杆菌 噬菌体 分离 纯化 保存

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噬菌体生物扩增法快速测定结核分枝杆菌卷曲霉素耐药性的研究 被引量：4

11

作者 林健雄 王冬敏 +3 位作者 彭东东 陈秉熙 陈潮钦 蔡杰 《中国防痨杂志》 CAS 2008年第6期506-509,共4页

目的建立快速测定结核分枝杆菌卷曲霉素耐药性的噬菌体生物扩增法,并探讨其在结核分枝杆菌卷曲霉素耐药性测定中的应用价值。方法应用噬菌体生物扩增法测定112株结核分枝杆菌卷曲霉素耐药性,并与绝对浓度法结果进行比较,对不符合的菌株... 目的建立快速测定结核分枝杆菌卷曲霉素耐药性的噬菌体生物扩增法,并探讨其在结核分枝杆菌卷曲霉素耐药性测定中的应用价值。方法应用噬菌体生物扩增法测定112株结核分枝杆菌卷曲霉素耐药性,并与绝对浓度法结果进行比较,对不符合的菌株采用Bactec MGIT 960测定其最低抑菌浓度(MIC)。以细菌接种量为10-3mg/ml,药物浓度5μg/ml、37℃作用24 h为药敏试验条件。结果噬菌体法测定112株结核分枝杆菌临床分离株卷曲霉素敏感91株、耐药21株,绝对浓度法敏感92株、耐药20株;两法测定均为敏感89株、均为耐药18株。在5株噬菌体法与绝对浓度法测定结果不符的菌株中,3株噬菌体法与MIC测定结果相符合。如以绝对浓度法药敏结果为判断标准,则噬菌体法测定卷曲霉素耐药性的敏感性为90%(18/20),特异性为96.7%(89/92),阳性预测值为85.7%(18/21),阴性预测值为97.8%(89/91),准确性为95.5%(107/112)。结论噬菌体生物扩增法测定卷曲霉素耐药性简便快速,只需2 d时间,操作不需特殊仪器设备,具有很高的敏感性和特异性,可作为MTB的卷曲霉素耐药性快速筛选方法,建议临床推广应用。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 药物敏感性实验 噬菌体 卷曲霉素

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利用噬菌体扩增技术快速检测结核分枝杆菌 被引量：7

12

作者 徐伟红 张正银 孙晨光 《中国防痨杂志》 CAS 2005年第1期60-61,共2页

关键词 扩增 噬菌体 结核分枝杆菌 结核病 细菌学检查 快速检测 公共卫生问题 期盼 技术 主要途径

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噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌阿米卡星耐药性方法的建立及应用评价 被引量：2

13

作者 李同心 崔振玲 +3 位作者 汪小黎 陆俊梅 王洁 胡忠义 《中国防痨杂志》 CAS 2011年第3期158-162,共5页

目的建立结核分枝杆菌阿米卡星(Am)耐药性的噬菌体生物扩增法(PhaB)快速检测技术,并探讨其临床应用价值。方法通过不同菌量及药物浓度的筛选,建立PhaB测定结核分枝杆菌阿米卡星药敏检测方法;用该方法对108株结核分枝杆菌临床分离株进行... 目的建立结核分枝杆菌阿米卡星(Am)耐药性的噬菌体生物扩增法(PhaB)快速检测技术,并探讨其临床应用价值。方法通过不同菌量及药物浓度的筛选,建立PhaB测定结核分枝杆菌阿米卡星药敏检测方法;用该方法对108株结核分枝杆菌临床分离株进行了阿米卡星药敏检测,同步进行Bactec-MGIT 960的Am药敏检测,对2种方法的检测结果进行比较分析。结果不符合的菌株测定其Am的最低抑茵浓度(MIC)。结果以细菌接种量10-3mg/ml、药物浓度2μg/ml、37℃作用48 h为药敏最佳检测条件,噬菌体检测108株结核分枝杆菌临床分离株阿米卡星敏感82株、耐药26株,Bactec MGIT 960检测敏感80株、耐药28株;2法测定均为敏感79株、均为耐药25株。以Bactec MGIT 960测定结果为判断标准,则PhaB的敏感性、特异性、阳性和阴性预测值及符合率分别为89.3%、98.8%、96.2%、96.3%、96.3%。结论 PhaB检测结核分枝杆菌的Am耐药性有较高的敏感性、特异性和准确性,整个检测只需3 d,且操作简单、不需特殊仪器设备,可作为M.TB临床分离株Am药敏快速检测备选方法之一。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 阿米卡星 药物敏感性实验 细菌噬菌体

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重组分枝杆菌噬菌体检测分枝杆菌的发光研究 被引量：1

14

作者 吕斌 徐顺清 +3 位作者 符志军 陈志飞 李开赏 周宜开 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第1期108-112,共5页

采用生物发光方法检测重组的分支杆菌噬菌体对不同细菌的发光反应 ,并比较了仅在特定的温度范围内才能繁殖的温敏噬菌体Phage 88和正常噬菌体Phage 40对分枝杆菌感染活力测定时发光强度的差异 ,以建立用不同类型重组噬菌体检测结核分枝... 采用生物发光方法检测重组的分支杆菌噬菌体对不同细菌的发光反应 ,并比较了仅在特定的温度范围内才能繁殖的温敏噬菌体Phage 88和正常噬菌体Phage 40对分枝杆菌感染活力测定时发光强度的差异 ,以建立用不同类型重组噬菌体检测结核分枝杆菌耐药性的方法和条件 .结果显示两种噬菌体对各种分枝杆菌作用后均有发光 ,对非分枝杆菌发光值很低 ,两者差异有显著性 ;不同的分枝杆菌发光值有差异 :卡介苗的发光值最高 ,结核分枝杆菌的发光值最低 ;温敏噬菌体Phage 88的检测灵敏度大于正常噬菌体Phage 40 ,差异显著 .因此可认为两株噬菌体均可特异地检测结核分枝杆菌 ,但Phage 88的效果优于Phage 40 . 展开更多

关键词 重组分枝杆菌噬菌体 生物发光 结构分枝杆菌 结构病

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结核分枝杆菌T7噬菌体展示基因组DNA文库的构建与鉴定 被引量：1

15

作者 曾焱华 王丽 +3 位作者 刘海灿 游晓拢 邓湘赢 万康林 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1120-1123,共4页

目的利用T7噬菌体作为载体,构建结核分枝杆菌的基因组DNA文库。方法提取MTB的基因组DNA,用EcoR I和Hind III进行双酶切,以对基因组DNA进行片段化,并在其末端加上定向的EcoR I和Hind III黏性末端,用DNA片段纯化分离柱除去小于200bp的片... 目的利用T7噬菌体作为载体,构建结核分枝杆菌的基因组DNA文库。方法提取MTB的基因组DNA,用EcoR I和Hind III进行双酶切,以对基因组DNA进行片段化,并在其末端加上定向的EcoR I和Hind III黏性末端,用DNA片段纯化分离柱除去小于200bp的片段和多余接头。将DNA片段与T7 10-3b噬菌体连接,经包装蛋白进行包装后转入BLT5403宿主菌以构建T7噬菌体展示基因组DNA文库,并检测文库的滴度和随机性。结果成功提取到较高质量的MTB基因组DNA;构建的T7噬菌体展示基因组DNA文库的滴度约为6×106 pfu/cm3;用PCR检测结果表明,在随机挑取的16个噬菌斑中,其重组率为100%,且插入片段都介于250~2 000bp左右。结论成功构建了MTB T7噬菌体展示基因组DNA文库,为从基因组范围筛选MTB的优势抗原奠定了前期实验基础。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 基因组DNA T7噬菌体展示文库

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分枝杆菌噬菌体CJAUS9 lysB基因的克隆与序列分析 被引量：1

16

作者 苏胜兵 姜秀云 +6 位作者 马红霞 高云航 么乃全 王春芳 胡静涛 宋磊 徐凤宇 《中国兽药杂志》 2013年第7期1-4,共4页

参照GenBank中lysB基因序列设计特异引物,以耻垢分枝杆菌噬菌体CJAUS9的基因组为模板,PCR扩增出1029 bp的条带,经酶切、PCR鉴定含有目的基因的克隆载体pMD19-T正确后进行测序分析。结果显示,克隆出的lysB基因与已知分枝杆菌肌尾噬菌体l... 参照GenBank中lysB基因序列设计特异引物,以耻垢分枝杆菌噬菌体CJAUS9的基因组为模板,PCR扩增出1029 bp的条带,经酶切、PCR鉴定含有目的基因的克隆载体pMD19-T正确后进行测序分析。结果显示,克隆出的lysB基因与已知分枝杆菌肌尾噬菌体lysB序列同源性为98.7%～99.1%;编码的氨基酸同源性为99%～100%,有酯酶保守的G-X-S-X-G基序,为研究LysB蛋白的生物学特性奠定了基础。 展开更多

关键词 分枝杆菌 肌尾噬菌体 lysB 基因克隆 序列分析

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检测牛分枝杆菌的噬菌体生物扩增法的建立及初步应用

17

作者 钟志军 彭广能 +7 位作者 唐明霞 白永平 石梅 马晓平 胡忠义 王洁 秦莲花 杨华 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1224-1229,共6页

建立噬菌体生物扩增法（PhaB）检测牛分枝杆菌,将建立的方法用于22株牛分枝杆菌临床分离株及20种常见非结核分枝杆菌（NTM）及5种非分枝杆菌,同时对203头疑患牛结核病奶牛的奶样进行检测,其结果与皮内变态试验、涂片法、罗氏培养进行比... 建立噬菌体生物扩增法（PhaB）检测牛分枝杆菌,将建立的方法用于22株牛分枝杆菌临床分离株及20种常见非结核分枝杆菌（NTM）及5种非分枝杆菌,同时对203头疑患牛结核病奶牛的奶样进行检测,其结果与皮内变态试验、涂片法、罗氏培养进行比较。结果表明,噬菌体工作浓度为1×10^9 PFU/mL、37℃感染2 h为最佳检测条件;杀毒剂浓度为100 mmol/L,室温作用10 min即可完全杀灭受试噬菌体;加热灭活的细菌和指示细菌不被噬菌体感染;牛分枝杆菌、耻垢分枝杆菌和22株牛分枝杆菌临床分离株检测结果均为阳性,16种NTM和5种非分枝杆菌为阴性,4种NTM（偶然、胞内、金色、草分枝杆菌）在高浓度时（〉10^5CFU/mL）检测结果为阳性;该法可检测出60-120 CFU/mL牛分枝杆菌;批内、批间变异系数均小于15%,重复性良好;203头检测奶牛中,PhaB法、涂片法、皮内变态试验和罗氏培养结果分别有14头（6.9%）、17头（8.4%）、21头（10.3%）和12头（6.0%）为阳性,PhaB法与其他3种方法比较,阳性准确性、特异性都在96%以上,敏感性在71%-100%。该法检测牛分枝杆菌具有快速、简便、灵敏、特异性高等特点。 展开更多

关键词 分枝杆菌噬菌体 牛分枝杆菌 检测方法 牛乳

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分枝杆菌噬菌体D29与巨噬细胞的相互作用及其机制

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作者 张红梅 梁梅 +2 位作者 刘平 乌亭亭 郭述良 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期230-235,共6页

目的:探讨分枝杆菌噬菌体D29与巨噬细胞的相互作用及其在被吞噬了结核菌的巨噬细胞吞噬后分布于结核菌内外的滴度变化,为探讨D29用于治疗结核病的机制及临床治疗剂量的确定提供参考。方法:将体外培养的巨噬细胞在加入D29不同时间后裂解... 目的:探讨分枝杆菌噬菌体D29与巨噬细胞的相互作用及其在被吞噬了结核菌的巨噬细胞吞噬后分布于结核菌内外的滴度变化,为探讨D29用于治疗结核病的机制及临床治疗剂量的确定提供参考。方法:将体外培养的巨噬细胞在加入D29不同时间后裂解,测定D29滴度,同时在加入D29 12 h后收集细胞上清液,ELISA法检测一氧化氮(NO)和白细胞介素12(IL-12)水平;将D29加入到已吞噬结核菌的巨噬细胞中,于不同时间采用荧光定量PCR测定D29在结核菌内外分布的滴度。结果:1×108噬菌斑形成单位(PFU)D29加入巨噬细胞后,20 min时有2.5×104PFU被巨噬细胞吞噬,180 min后D29大量失活,190 min时巨噬细胞内已无存活的D29;细胞上清液中NO和IL-12水平与巨噬细胞空白组比较差异无统计学意义(P>0.05),但明显少于LPS阳性对照组(P<0.05);D29与吞噬了结核菌的巨噬细胞作用30 min时,即有D29进入结核菌内,作用40和50 min时,D29在结核菌内外滴度均有一过性升高,此后结核菌内外滴度均下降;作用190和210 min时D29量大幅度减少,48 h后几乎不能检测到D29。结论:D29被巨噬细胞吞噬后会失活,并且不影响巨噬细胞的免疫功能;D29能够进入被巨噬细胞吞噬的结核菌中,开始时随着时间延长结核菌中的D29数量增多;随后D29数量大量减少,最后消失。 展开更多

关键词 分枝杆菌噬菌体 巨噬细胞 结核分枝杆菌

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结核分枝杆菌Rv2647蛋白对肺组织损伤效应的初步研究

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作者 金霄 陈晓林 +4 位作者 姚静 杜兴冉 颜海豪 李国莉 冯旰珠 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2024年第11期1517-1524,共8页

目的:通过噬菌体重组技术分别构建结核分枝杆菌Rv2647基因的敲除株和回补株以及过表达Rv2647的耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Ms),评估结核分枝杆菌Rv2647蛋白对模型鼠肺组织的损伤效应。方法:构建同源交换位点并整合到结核分... 目的:通过噬菌体重组技术分别构建结核分枝杆菌Rv2647基因的敲除株和回补株以及过表达Rv2647的耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Ms),评估结核分枝杆菌Rv2647蛋白对模型鼠肺组织的损伤效应。方法:构建同源交换位点并整合到结核分枝杆菌噬菌体基因组,获取噬菌粒并将其导入Ms,构建具有同源交换位点的重组噬菌体。体外扩增获得高滴度重组噬菌体并转染结核分枝杆菌(H37Rv),37℃静置培养28 d,挑取单克隆进行PCR验证,获得Rv2647基因敲除株(H37RvΔRv2647)。PCR扩增Rv2647基因并通过无缝克隆分别将其整合到载体pMV361和pMV261多克隆位点处,获得阳性质粒后分别电转化H37RvΔRv2647和Ms,获得结核分枝杆菌回补株(H37RvΔRv2647::Rv2647)及过表达Rv2647的耻垢分枝杆菌(Ms::Rv2647)。分别以H37Rv、H37RvΔRv2647、H37RvΔRv2647::Rv2647、Ms及Ms::Rv2647的菌液经气管攻击C57BL/6小鼠,分别比较H37Rv(30 d)与Ms(7 d)模型鼠的存活率、肺组织细菌负荷及肺组织病理损伤程度。结果:PCR结果显示,H37RvΔRv2647中Rv2647基因缺失,而H37RvΔRv2647::Rv2647及Ms::Rv2647中Rv2647基因皆存在。H37RvΔRv2647、H37Rv及H37RvΔRv2647::Rv2647组模型鼠30 d存活率分别为100.00%、83.33%及83.33%;Ms和Ms::Rv2647组模型鼠的7 d存活率分别为100.00%和83.33%;H37RvΔRv2647组模型鼠肺组织细菌负荷(lgCFU)为(3.40±0.18),显著低于H37Rv组(3.86±0.15,P<0.001)和H37RvΔRv2647::Rv2647组(3.80±0.16,P<0.01);H37RvΔRv2647组模型鼠肺组织炎症面积(%)为(4.37±3.06),显著低于H37Rv组(62.76±14.24,P<0.001)和H37RvΔRv2647::Rv2647组(67.37±0.45,P<0.001);Ms组模型鼠肺组织lgCFU为(2.53±0.16),显著低于Ms::Rv2647组(2.81±0.13,P<0.01);Ms组模型鼠肺组织炎症面积(%)为(5.71±1.29),显著低于Ms::Rv2647组(33.13±13.84,P<0.05)。结论:成功构建了结核分枝杆菌Rv2647基因敲除株(H37RvΔRv2647)及回补株(H37RvΔRv2647::Rv2647)以及过表达Rv2647的耻垢分枝杆菌(Ms::Rv2647)。Rv2647蛋白可能通过抑制宿主对结核分枝杆菌的清除,加重了模型鼠肺组织病理损伤。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 差异区域 Rv2647蛋白 噬菌体重组技术 肺组织损伤

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噬菌体生物扩增法检测脓肿型颈部淋巴结结核患者脓液中结核分枝杆菌

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作者 高健齐 李志强 刘家杰 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期2541-2542,共2页

目的探讨噬菌体生物扩增法在检测脓肿型颈部淋巴结结核患者脓液中结核分枝杆菌的临床应用价值,寻找一快速检测方法。方法采用噬菌体生物扩增技术对21例脓肿型颈部淋巴结结核患者的脓液标本进行检测,同份标本同时进行涂片抗酸染色、罗氏... 目的探讨噬菌体生物扩增法在检测脓肿型颈部淋巴结结核患者脓液中结核分枝杆菌的临床应用价值,寻找一快速检测方法。方法采用噬菌体生物扩增技术对21例脓肿型颈部淋巴结结核患者的脓液标本进行检测,同份标本同时进行涂片抗酸染色、罗氏培养。结果噬菌体生物扩增法阳性率为47.6%(10/21),涂片抗酸染色阳性率为28.6%(6/21),罗氏培养阳性率为42.8%(9/21)。检验所需时间:传统的罗氏培养法需8周,而噬菌体生物扩增法仅需2d。结论噬菌体生物扩增法检测颈淋巴结脓液中结核分枝杆菌阳性率高于传统方法,且耗时明显缩短。关键词:颈部淋巴结结核;结核分枝杆菌; 展开更多

关键词 噬菌体生物扩增法 颈部淋巴结 淋巴结结核 脓液 结核分枝杆菌

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