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改良EMSA法分析人α1(Ⅰ)胶原基因序列特异性DNA结合蛋白 被引量：6
1
作者 高春芳 李德岩 +3 位作者 万伟东 伍严安 王皓 孔宪涛 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第8期708-710,共3页
目的 :分析人α1( )胶原基因 5′侧翼区具有较高启动调控活性序列的 DNA结合蛋白。方法 :以原代培养人瘢痕皮肤成纤维细胞为胶原产生细胞 ,采用限制性内切酶消化、DNA混合片段末端标记和增强化学发光的改良电泳迁移率改变实验(EMSA)分析... 目的 :分析人α1( )胶原基因 5′侧翼区具有较高启动调控活性序列的 DNA结合蛋白。方法 :以原代培养人瘢痕皮肤成纤维细胞为胶原产生细胞 ,采用限制性内切酶消化、DNA混合片段末端标记和增强化学发光的改良电泳迁移率改变实验(EMSA)分析人 α1( )胶原基因 5′侧翼区 - 2 6 8～ + 42 bp序列 DNA结合蛋白。结果 :在胶原产生细胞——人瘢痕成纤维细胞中存在 α1( )胶原基因 - 2 6 8～ + 42 bp序列的 DNA结合蛋白 ,其结合活性具有特异性 ,并能被 Sp- 1,NF- 1,NF- κB识别序列所竞争。结论 :改良 EMSA法可用于分析较长序列的 DNA结合蛋白 ,人 α1( )胶原基因 - 2 6 8～ + 42 bp序列中存在转录因子Sp- 1,NF- 1,NF- κB结合序列 ,这些转录因子结合位点可能与人 α1( )胶原基因 - 2 6 8～ + 42 bp序列的高启动活性有关。 展开更多
关键词 基因 胶原 DNA结合蛋白 电泳迁移率改变分析
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细胞间粘附分子表达调控的实验研究 被引量：1
2
作者 郭振辉 唐柚青 +3 位作者 赖添顺 洪新 毛宝龄 钱桂生 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期1041-1043,共3页
目的探讨血管内皮细胞激活表达细胞间粘附分子(ICAM-1),及核因子-κB(NF-κB)对其表达调控的作用。方法通过建立人脐静脉内皮细胞(HUVEC)体外培养,观察TNFα刺激HUVEC后,采用凝胶电泳迁移率改变分析法检测NF-κB活化强度和应用免疫组化... 目的探讨血管内皮细胞激活表达细胞间粘附分子(ICAM-1),及核因子-κB(NF-κB)对其表达调控的作用。方法通过建立人脐静脉内皮细胞(HUVEC)体外培养,观察TNFα刺激HUVEC后,采用凝胶电泳迁移率改变分析法检测NF-κB活化强度和应用免疫组化方法检测HUVEC表达ICAM-1。结果HUVEC受TNFα刺激后2～12hNF-κB的活性显著增高(P<0.01),峰值在刺激后6h;同时ICAM-1表达显著增强(P<0.01),并于12h达峰值,NF-κB活化与ICAM-1表达之间有峰值水平和时间顺序的正相关。且NF-κB可与含ICAM-1基因的κB序列的寡聚核苷酸系列特异结合;竞争抑制实验进一步证实了NF-κB与标记的κB系列结合的特异性;超迁移试验表明,与κB系列结合的NF-κB是由P65亚基构成的同源二聚体。结论TNFα可有效地激活HUVEC高效表达ICAM-1,其表达受P65亚基同源二聚体构成的NF-κB调控。 展开更多
关键词 人脐静脉内皮细胞 核因子-ΚB 细胞间粘附分子-1 肿瘤坏死因子Α 免疫组化 凝胶电泳迁移率改变分析
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肺癌细胞中调控ezrin基因基本转录活性的顺式作用元件及转录因子的鉴定 被引量：5
3
作者 高书颖 李恩民 +4 位作者 孟令英 崔磊 袁华敏 杜则澎 许丽艳 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第3期288-296,共9页
研究发现,质膜-细胞骨架连接蛋白Ezrin在多种肿瘤细胞中异常表达,而且Ezrin的表达上调与肿瘤细胞的移动侵袭相关,但是调控ezrin基因转录的分子机制却不清楚.为了探明ezrin基因的转录调控机制,以肺癌细胞A549为材料,首先采用双荧光素酶... 研究发现,质膜-细胞骨架连接蛋白Ezrin在多种肿瘤细胞中异常表达,而且Ezrin的表达上调与肿瘤细胞的移动侵袭相关,但是调控ezrin基因转录的分子机制却不清楚.为了探明ezrin基因的转录调控机制,以肺癌细胞A549为材料,首先采用双荧光素酶报告基因分析系统检测ezrin基因5′侧翼嵌套缺失序列和位点突变序列的转录活性,鉴定肺癌细胞中ezrin基因的基本启动子区以及关键的顺式作用元件Sp1结合位点(-75/-69)和AP-1结合位点(-64/-58).其次,利用凝胶电泳迁移率变动分析证明,肺癌细胞核蛋白提取物能够与ezrin基因含有关键顺式作用元件的DNA序列结合,形成DNA-核蛋白复合物,而且Sp1结合位点和AP-1结合位点与重组蛋白rhSp1和rhAP-1的结合具有位点特异性.最后,利用瞬时转染实验证实,转录因子Sp1和AP-1(由c-Jun和c-Fos组成的异源二聚体)分别通过Sp1结合位点和AP-1结合位点,增强ezrin基因基本转录活性,而且,过表达转录因子Sp1、c-Jun或c-Fos上调了Ezrin蛋白表达.研究确定,肺癌细胞中调控ezrin基因基本转录活性的关键顺式作用元件是Sp1结合位点(-75/-69)和AP-1结合位点(-64/-58),与之作用的转录因子Sp1和AP-1对于ezrin基因的转录激活作用至关重要. 展开更多
关键词 EZRIN基因 转录调控元件 转录因子 双荧光素酶报告基因分析系统 凝胶电泳迁移率变动分析
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不同剂量X射线照射对小鼠腹腔巨噬细胞NF-κB的影响 被引量：4
4
作者 金顺子 刘晓冬 刘树铮 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期335-337,共3页
目的 :观察不同剂量 X射线照射对小鼠腹腔巨噬细胞转录因子 NF- κB的影响。方法 :用凝胶电泳迁移率变化分析法得到电泳带 ,用 Phosphor Imager扫描仪分析数据。结果 :0 .0 75 GyX射线全身照射后 4h开始小鼠腹腔巨噬细胞 NF- κB的 DNA... 目的 :观察不同剂量 X射线照射对小鼠腹腔巨噬细胞转录因子 NF- κB的影响。方法 :用凝胶电泳迁移率变化分析法得到电泳带 ,用 Phosphor Imager扫描仪分析数据。结果 :0 .0 75 GyX射线全身照射后 4h开始小鼠腹腔巨噬细胞 NF- κB的 DNA结合活性逐渐升高 ,48h时基本恢复到假照水平 ,2 .0 0 0 Gy X射线全身照射后小鼠腹腔巨噬细胞 NF- κB的 DNA结合活性从 8h开始上升 ,持续到 48h。结论 :低剂量和较高剂量 X射线均能诱导小鼠腹腔巨噬细胞中的转录因子NF-κB。 展开更多
关键词 X射线 转录因子 电离辐射 NF-KB 凝胶电泳迁移率变化分析法 巨噬细胞
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转录因子CREB激活介导吗啡依赖SK-N-SH细胞的nNOS及fosB基因表达的调控机制 被引量：3
5
作者 苏彦君 丛斌 +4 位作者 张国忠 张瑾 李淑瑾 姚玉霞 付丽红 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期395-398,共4页
目的　探讨吗啡依赖的SK- N -SH细胞表达神经元型一氧化氮合酶 (neuronalnitricoxidesynthase ,nNOS)及fosB基因的调控机制。方法　建立吗啡依赖及戒断细胞模型 ,体外合成含cAMP反应元件 (cAMPresponseelement ,CRE)序列的寡核苷酸 ,经... 目的　探讨吗啡依赖的SK- N -SH细胞表达神经元型一氧化氮合酶 (neuronalnitricoxidesynthase ,nNOS)及fosB基因的调控机制。方法　建立吗啡依赖及戒断细胞模型 ,体外合成含cAMP反应元件 (cAMPresponseelement ,CRE)序列的寡核苷酸 ,经硫代磷酸化修饰 ,作为单链寡核苷酸 (CRE transcriptionfactordecoyoligodeoxynucleotide ,CRE decoyODN)。分别采用电泳迁移率改变分析 (electrophoresismobilityshiftassay ,EMSA)及RT -PCR技术 ,检测CRE decoyODN对吗啡依赖及纳络酮急性戒断诱导的CREB的DNA结合活性、nNOS及fosBmRNA表达的影响。结果　吗啡依赖及纳络酮急性戒断使SK- N- SH细胞的CREB的DNA结合活性、nNOS及fosBmRNA明显升高 ,CRE decoyODN可特异抑制上述指标升高。结论　CREB的激活介导了吗啡依赖SK- N 展开更多
关键词 SK-N-SH细胞 吗啡依赖 NNOS CREB 调控机制 FOSB 基因表达 转录因子 介导 激活 神经元型一氧化氮合酶 DNA结合活性 电泳迁移率改变分析 RT-PCR技术 nitric factor mRNA表达 寡核苷酸 oxide decoy 细胞表达 细胞模型 反应元件 cAMP 体外合成 表达上调 纳络酮 ODN
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23份豌豆材料过氧化物酶同工酶研究
6
作者 王翠玲 杨晓明 +1 位作者 王旺田 周卫东 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期55-58,共4页
采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对23份不同地区来源的豌豆进行过氧化物酶同工酶分析。通过对各供试材料酶谱特征和相似系数的分析,探讨供试材料间的亲缘关系。结果表明:不同地区来源的豌豆材料过氧化物同工酶在酶带数、酶量、酶活... 采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对23份不同地区来源的豌豆进行过氧化物酶同工酶分析。通过对各供试材料酶谱特征和相似系数的分析,探讨供试材料间的亲缘关系。结果表明:不同地区来源的豌豆材料过氧化物同工酶在酶带数、酶量、酶活性等方面存在差异,供试材料中共出现161条酶带,14种类型,2条共有表达酶带。酶带数量在品种间差异显著,其中最多者出现8条,最少5条,Rf值范围为0.13~0.83。各个豌豆材料间的遗传相似度在0.33~1.00之间,过氧化物酶同工酶酶谱聚类分析将23份豌豆材料分为5个类群,分类结果与品种的来源和地理位置有一定的相关性,其中3号与17号材料、8号与16号材料、12号与13号材料亲缘关系相互最近;6号材料与其他材料的亲缘关系较远。 展开更多
关键词 豌豆 聚丙烯酰胺凝胶电泳 亲缘关系 聚类分析 迁移率
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CREB诱骗寡核苷酸抑制吗啡依赖诱导SK-N-SH细胞神经元型一氧化氮合酶及fosB基因表达上调
7
作者 苏彦君 丛斌 +4 位作者 张国忠 张瑾 姚玉霞 李淑瑾 付丽红 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期837-841,共5页
目的研究转录因子CREB的结合位点cAMP反应元件(cAMPresponseelement,CRE)的诱骗寡核苷酸(CREtranscriptionfactordecoyoligodeoxynucleotide,CREdecoyODN)对吗啡依赖SKNSH细胞的神经元型一氧化氮合酶(Neuronalnitricoxidesynthase,nNOS)... 目的研究转录因子CREB的结合位点cAMP反应元件(cAMPresponseelement,CRE)的诱骗寡核苷酸(CREtranscriptionfactordecoyoligodeoxynucleotide,CREdecoyODN)对吗啡依赖SKNSH细胞的神经元型一氧化氮合酶(Neuronalnitricoxidesynthase,nNOS)及fosBmRNA表达上调的抑制作用。方法建立吗啡依赖SKNSH细胞模型,体外合成含CRE序列的寡核苷酸,作为CREdecoyODN,与阳离子脂类N[1(2,3dioleoyloxy)propyl]N,N,Ntrimethylammoniummethylsulfate(DOTAP)混合后导入细胞。采用放射自显影检测细胞内参入的CREdecoyODN。采用电泳迁移率改变分析(Electrophoresismobilityshiftassay,EMSA)及RTPCR技术,分别检测CREdecoyODN对吗啡依赖诱导的CREB的DNA结合活性、nNOS及fosBmRNA表达的影响。结果CREdecoyODN可在细胞内稳定存在,特异抑制吗啡依赖SKNSH细胞CREB的DNA结合活性升高、nNOS和fosBmRNA表达上调。结论CREdecoyODN通过特异抑制吗啡依赖SKNSH细胞的CREB的DNA结合活性而下调nNOS及fosBmRNA表达。 展开更多
关键词 吗啡 SK—N—SH细胞 CREB诱骗寡核苷酸 电泳迁移率改变分析 一氧化氮合酶 FOSB
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人肺癌细胞转录因子——C/EBP和HMG样蛋白的EMSA检测
8
作者 吴国明 钱桂生 +3 位作者 周玉国 黄桂君 姚伟 陆俊羽 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第10期1173-1175,共3页
目的　检测人肺癌细胞中是否存在与Na+ H+ 交换蛋白 1(NHE 1)基因转录相关的重要转录因子———C EBP和HMG样蛋白。方法　采用电泳迁移率改变分析法 (EMSA)检测人肺癌细胞株核蛋白中C EBP和HMG样蛋白的表达及其水平。结果　EMSA检测到... 目的　检测人肺癌细胞中是否存在与Na+ H+ 交换蛋白 1(NHE 1)基因转录相关的重要转录因子———C EBP和HMG样蛋白。方法　采用电泳迁移率改变分析法 (EMSA)检测人肺癌细胞株核蛋白中C EBP和HMG样蛋白的表达及其水平。结果　EMSA检测到A5 49细胞和转染NHE 1反义载体的A5 49细胞均有转录因子C EBP和HMG样蛋白的表达 ,且后者表达水平高于前者 ;采用 5 0倍未标记的片段能完全抑制相应转录因子与32 P标记的相同片段的结合。结论　A5 49细胞核蛋白中存在能与C EBP结合序列和Poly(dA∶dT)区结合的转录因子 ,即C EBP和HMG样蛋白 ,后者的表达水平高于前者。特异性竞争抑制试验表明外源性特异DNA片段能抑制相同片段与转录因子的结合。 展开更多
关键词 肺癌 转录因子 HMG样蛋白 Na^+/H^+交换蛋白-1 转录调控 电泳迁移率改变分析 C/EBP样蛋白
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