目的观察重组人红细胞生成素(r Hu EPO)对戊四氮(PTZ)点燃的癫痫持续状态(SE)的成年雄性(SD)大鼠海马神经元磷酸化蛋白激酶B(p-PKB/p-Akt)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和X-连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)表达的影响,并进一步探讨r Hu EPO作用的可能...目的观察重组人红细胞生成素(r Hu EPO)对戊四氮(PTZ)点燃的癫痫持续状态(SE)的成年雄性(SD)大鼠海马神经元磷酸化蛋白激酶B(p-PKB/p-Akt)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和X-连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)表达的影响,并进一步探讨r Hu EPO作用的可能机制。方法于2010年3月,由河北省实验动物中心提供的健康清洁级成年SD大鼠。采用PTZ点燃大鼠SE模型,将大鼠随机分为B组(PTZ+0.9%氯化钠溶液)、C组(PTZ+r Hu EPO)、D组(PTZ+LY294002+r Hu EPO)、E组(PTZ+二甲基亚砜+r Hu EPO),同时另选取不进行SE制模的SD大鼠作为A组(0.9%氯化钠溶液),检测大鼠行为学和脑电图的改变;用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测海马神经元的凋亡情况;免疫组织化学法观察p-Akt、Bax、XIAP的阳性细胞数;反转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测各组大鼠海马Bax信使RNA(BaxmRNA)的表达;Western blot方法检测各组大鼠海马蛋白激酶B(Akt)、p-Akt、XIAP蛋白的表达。结果与B组比较,C组p-Akt、XIAP阳性细胞数和p-Akt、XIAP蛋白表达水平均增多,Bax阳性细胞数及BaxmRNA表达水平均减少,差异有统计学意义(P<0.05);与C组比较,D组p-Akt、XIAP阳性细胞数和p-Akt、XIAP蛋白表达水平均减少,Bax阳性细胞数及BaxmRNA表达水平均增多,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 r Hu EPO可以提高p-Akt、XIAP阳性细胞数及蛋白表达水平,降低Bax阳性细胞数及BaxmRNA表达水平,减少海马神经元的凋亡,发挥神经保护作用;加入磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂LY294002后,海马p-Akt、XIAP阳性细胞数及蛋白表达减少、Bax阳性细胞数及BaxmRNA表达增加,海马神经元的凋亡增加,减弱了r Hu EPO的保护作用。因此,PI3K/Akt信号通路是r Hu EPO发挥神经保护作用的通路之一,其作用机制可能是r Hu EPO活化PI3K/Akt后,提高p-Akt蛋白及线粒体凋亡途径相关调控因子XIAP的表达,下调了Bax的表达,从而介导线粒体凋亡途经,发挥抗凋亡、促存活的神经保护作用。展开更多
目的探讨C3G基因对H9C2心肌细胞凋亡、增殖的影响及其机制。方法构建RNA干扰慢病毒,购买p CXN2-Flag空质粒和p CXN2-Flag-h C3G过表达人C3G m RNA质粒。分别用空白试剂、阴性慢病毒、C3G si RNA慢病毒、C3G si RNA慢病毒+空质粒、C3G si...目的探讨C3G基因对H9C2心肌细胞凋亡、增殖的影响及其机制。方法构建RNA干扰慢病毒,购买p CXN2-Flag空质粒和p CXN2-Flag-h C3G过表达人C3G m RNA质粒。分别用空白试剂、阴性慢病毒、C3G si RNA慢病毒、C3G si RNA慢病毒+空质粒、C3G si RNA慢病毒+h C3G质粒随机感染和转染H9C2心肌细胞,实验被随机分为5个组,即空白对照组、阴性对照组、沉默C3G组、沉默C3G+空质粒组和沉默C3G+过表达人C3G组。转染质粒72h后,采用RTPCR法检测目的基因C3G m RNA的表达,流式细胞术检测H9C2心肌细胞的凋亡情况,MTT比色法测定细胞增殖率,Western blotting检测细胞C3G、p-ERK1/2、Bax及Flag的蛋白表达水平。结果阴性对照组和沉默C3G组经嘌呤霉素筛选,85%以上细胞被绿色荧光蛋白标记,提示细胞被慢病毒感染。与空白对照组和阴性对照组比较,沉默C3G组和沉默C3G+空质粒组的细胞中Bax蛋白表达水平和细胞凋亡率均明显增加(P<0.01,P<0.05),且这两组细胞C3G m RNA、C3G蛋白、p-ERK1/2蛋白的表达水平和细胞增殖率均明显降低(P<0.01,P<0.05);与沉默C3G组和沉默C3G+空质粒组比较,沉默C3G+过表达人C3G组的细胞中Bax蛋白表达水平和细胞凋亡率明显降低(P<0.01,P<0.05),且细胞中C3G m RNA、C3G蛋白、p-ERK1/2蛋白的表达水平和细胞增殖率则明显增加(P<0.01,P<0.05)。结论沉默C3G基因能有效抑制细胞的增殖,促进H9C2心肌细胞凋亡;过表达C3G基因能逆转沉默C3G基因对H9C2心肌细胞的影响,表现为细胞凋亡减少,增殖明显,其机制可能与C3G基因对p-ERK1/2蛋白和促凋亡分子Bax的调控有关。展开更多
文摘目的观察重组人红细胞生成素(r Hu EPO)对戊四氮(PTZ)点燃的癫痫持续状态(SE)的成年雄性(SD)大鼠海马神经元磷酸化蛋白激酶B(p-PKB/p-Akt)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和X-连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)表达的影响,并进一步探讨r Hu EPO作用的可能机制。方法于2010年3月,由河北省实验动物中心提供的健康清洁级成年SD大鼠。采用PTZ点燃大鼠SE模型,将大鼠随机分为B组(PTZ+0.9%氯化钠溶液)、C组(PTZ+r Hu EPO)、D组(PTZ+LY294002+r Hu EPO)、E组(PTZ+二甲基亚砜+r Hu EPO),同时另选取不进行SE制模的SD大鼠作为A组(0.9%氯化钠溶液),检测大鼠行为学和脑电图的改变;用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测海马神经元的凋亡情况;免疫组织化学法观察p-Akt、Bax、XIAP的阳性细胞数;反转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测各组大鼠海马Bax信使RNA(BaxmRNA)的表达;Western blot方法检测各组大鼠海马蛋白激酶B(Akt)、p-Akt、XIAP蛋白的表达。结果与B组比较,C组p-Akt、XIAP阳性细胞数和p-Akt、XIAP蛋白表达水平均增多,Bax阳性细胞数及BaxmRNA表达水平均减少,差异有统计学意义(P<0.05);与C组比较,D组p-Akt、XIAP阳性细胞数和p-Akt、XIAP蛋白表达水平均减少,Bax阳性细胞数及BaxmRNA表达水平均增多,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 r Hu EPO可以提高p-Akt、XIAP阳性细胞数及蛋白表达水平,降低Bax阳性细胞数及BaxmRNA表达水平,减少海马神经元的凋亡,发挥神经保护作用;加入磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂LY294002后,海马p-Akt、XIAP阳性细胞数及蛋白表达减少、Bax阳性细胞数及BaxmRNA表达增加,海马神经元的凋亡增加,减弱了r Hu EPO的保护作用。因此,PI3K/Akt信号通路是r Hu EPO发挥神经保护作用的通路之一,其作用机制可能是r Hu EPO活化PI3K/Akt后,提高p-Akt蛋白及线粒体凋亡途径相关调控因子XIAP的表达,下调了Bax的表达,从而介导线粒体凋亡途经,发挥抗凋亡、促存活的神经保护作用。
文摘目的探讨C3G基因对H9C2心肌细胞凋亡、增殖的影响及其机制。方法构建RNA干扰慢病毒,购买p CXN2-Flag空质粒和p CXN2-Flag-h C3G过表达人C3G m RNA质粒。分别用空白试剂、阴性慢病毒、C3G si RNA慢病毒、C3G si RNA慢病毒+空质粒、C3G si RNA慢病毒+h C3G质粒随机感染和转染H9C2心肌细胞,实验被随机分为5个组,即空白对照组、阴性对照组、沉默C3G组、沉默C3G+空质粒组和沉默C3G+过表达人C3G组。转染质粒72h后,采用RTPCR法检测目的基因C3G m RNA的表达,流式细胞术检测H9C2心肌细胞的凋亡情况,MTT比色法测定细胞增殖率,Western blotting检测细胞C3G、p-ERK1/2、Bax及Flag的蛋白表达水平。结果阴性对照组和沉默C3G组经嘌呤霉素筛选,85%以上细胞被绿色荧光蛋白标记,提示细胞被慢病毒感染。与空白对照组和阴性对照组比较,沉默C3G组和沉默C3G+空质粒组的细胞中Bax蛋白表达水平和细胞凋亡率均明显增加(P<0.01,P<0.05),且这两组细胞C3G m RNA、C3G蛋白、p-ERK1/2蛋白的表达水平和细胞增殖率均明显降低(P<0.01,P<0.05);与沉默C3G组和沉默C3G+空质粒组比较,沉默C3G+过表达人C3G组的细胞中Bax蛋白表达水平和细胞凋亡率明显降低(P<0.01,P<0.05),且细胞中C3G m RNA、C3G蛋白、p-ERK1/2蛋白的表达水平和细胞增殖率则明显增加(P<0.01,P<0.05)。结论沉默C3G基因能有效抑制细胞的增殖,促进H9C2心肌细胞凋亡;过表达C3G基因能逆转沉默C3G基因对H9C2心肌细胞的影响,表现为细胞凋亡减少,增殖明显,其机制可能与C3G基因对p-ERK1/2蛋白和促凋亡分子Bax的调控有关。
