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JS018菌有机磷农药降解酶的纯化 被引量:4
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作者 江玉姬 邓优锦 +4 位作者 刘新锐 胡方平 谢宝贵 刘福阳 黎志银 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期462-466,共5页
实验对一株能高效降解几种有机磷农药菌株JSO18的降解酶进行分离和纯化。经分析该降解酶主要位于细胞间质,最适盐析硫酸铵饱和度为60%~70%,粗酶液经硫酸铵沉淀、Sephade。G-100凝胶过滤和DEAE-52柱层析得到较高纯度的酶液。通过PAG... 实验对一株能高效降解几种有机磷农药菌株JSO18的降解酶进行分离和纯化。经分析该降解酶主要位于细胞间质,最适盐析硫酸铵饱和度为60%~70%,粗酶液经硫酸铵沉淀、Sephade。G-100凝胶过滤和DEAE-52柱层析得到较高纯度的酶液。通过PAGE和SDS—PAGE电泳测定该酶分子量约为37KDa.N末端16个氨基酸残基测序的结果为:GAPFQNDVPPACYRFR。 展开更多
关键词 有机磷农药降解酶 电泳 层析 纯化 测序
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聚丙烯二氧化钛负载膜固定化农药降解酶的研究 被引量:6
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作者 张庆庆 汤斌 +1 位作者 方磊 张春乐 《农业工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第3期19-21,共3页
利用聚丙烯负载二氧化钛膜固定农药降解酶(EC3.1.8.2),研究了酶固定化的条件,选择农药甲基对硫磷进行了降解试验。结果表明,酶固定化最佳时间为1.5h,最适固定温度为20℃,最佳固定化酶液浓度为1.6mg/mL。吸附农药降解酶的聚丙烯负载二氧... 利用聚丙烯负载二氧化钛膜固定农药降解酶(EC3.1.8.2),研究了酶固定化的条件,选择农药甲基对硫磷进行了降解试验。结果表明,酶固定化最佳时间为1.5h,最适固定温度为20℃,最佳固定化酶液浓度为1.6mg/mL。吸附农药降解酶的聚丙烯负载二氧化钛酶膜,通过与游离酶的比较,固定化酶最适反应温度有所偏移,提高了5℃,酶降解农药的最适pH值为8.5,对农药甲基对硫磷的降解率30min内达到70%以上,并且固定后的二氧化钛酶膜具有良好的稳定性。 展开更多
关键词 农药降解酶 二氧化钛 聚丙烯膜 固定化
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Roseomonas JS018有机磷农药降解酶的纯化 被引量:5
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作者 江玉姬 邓优锦 +4 位作者 刘新锐 胡方平 谢宝贵 刘福阳 黎志银 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2006年第4期421-425,共5页
本试验对能高效降解几种有机磷农药菌株JS018的降解酶进行分离和纯化.经分析该降解酶主要位于细胞间质,最适盐析硫酸铵饱和度为60%-70%,粗酶液经硫酸铵沉淀、Sephadex G-100凝胶过滤和DEAE-52柱层析得到较高纯度的酶液.通过SDS-PAGE电... 本试验对能高效降解几种有机磷农药菌株JS018的降解酶进行分离和纯化.经分析该降解酶主要位于细胞间质,最适盐析硫酸铵饱和度为60%-70%,粗酶液经硫酸铵沉淀、Sephadex G-100凝胶过滤和DEAE-52柱层析得到较高纯度的酶液.通过SDS-PAGE电泳测定该酶相对分子质量约为37 ku,N末端16个氨基酸残基测序结果为:GAPFQNDVPPACYRFR. 展开更多
关键词 有机磷农药降解酶 电泳 层析 纯化 测序
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黑曲霉有机磷农药降解酶的纯化及其性质 被引量:3
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作者 王继雯 甄静 +4 位作者 谢宝恩 刘莹莹 李冠杰 周伏忠 陈国参 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2012年第3期549-554,共6页
采用细胞破碎、硫酸铵分级沉淀和Sephadex G-75凝胶过滤的方法,对黑曲霉(Aspergillus niger)J6产生的有机磷农药降解酶进行分离和纯化,并对其酶学性质进行研究。结果显示:黑曲霉J6有机磷农药降解酶定位在细胞膜上,其分子量为66 000。该... 采用细胞破碎、硫酸铵分级沉淀和Sephadex G-75凝胶过滤的方法,对黑曲霉(Aspergillus niger)J6产生的有机磷农药降解酶进行分离和纯化,并对其酶学性质进行研究。结果显示:黑曲霉J6有机磷农药降解酶定位在细胞膜上,其分子量为66 000。该降解酶最适pH值为7.0,最适反应温度为70℃,Fe3+、Cu2+、Li+、Zn2+、Mg2+、NaN3、EDTA、SDS、PSMF对该降解酶有不同程度的激活作用,而Mn2+对其有轻微的抑制作用,Ca2+和Triton对其有强烈的抑制作用。 展开更多
关键词 黑曲霉 有机磷农药降解酶 学性质
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菊酯类农药降解酶Est825的降解效果及安全性评价初报 被引量:3
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作者 梁卫驱 黄皓 +4 位作者 李艳芳 胡珊 罗华建 陈仕丽 徐匆 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期130-133,共4页
通过试验表明高密度发酵制备的菊酯类农药降解酶Est825对菊酯类农药的降解率达70%以上,其降解农药的最适活力浓度为120 U/mL,最适反应温度范围为32~37℃;测定了菊酯类农药降解酶对SD大鼠急性经口毒性,LD50>6 g/kg体重,属实际无毒;皮... 通过试验表明高密度发酵制备的菊酯类农药降解酶Est825对菊酯类农药的降解率达70%以上,其降解农药的最适活力浓度为120 U/mL,最适反应温度范围为32~37℃;测定了菊酯类农药降解酶对SD大鼠急性经口毒性,LD50>6 g/kg体重,属实际无毒;皮肤变态试验结果表明该酶制剂不引起皮肤变态反应。 展开更多
关键词 菊酯类农药降解酶 降解效果 安全性评价
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重组大肠杆菌发酵表达菊酯类农药降解酶培养基优化 被引量:1
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作者 黄皓 梁卫驱 +4 位作者 罗华建 胡珊 李艳芳 陈仕丽 徐匆 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期134-137,共4页
通过单因素及正交试验,研究了碳源、有机氮源、无机氮源对重组大肠杆菌Eschericha.coli BL21(DE3)/pET-28a-est825菌体生长及产酶的影响,进而优化了产酶培养基,确定最佳培养基组成为:甘油20 g/L,酵母粉20g/L,硫酸铵5 g/L,NaCl 5 g/L,Na2... 通过单因素及正交试验,研究了碳源、有机氮源、无机氮源对重组大肠杆菌Eschericha.coli BL21(DE3)/pET-28a-est825菌体生长及产酶的影响,进而优化了产酶培养基,确定最佳培养基组成为:甘油20 g/L,酵母粉20g/L,硫酸铵5 g/L,NaCl 5 g/L,Na2HPO4·12H2O 10.7 g/L,KH2PO42.7 g/L,硫酸卡那霉素50μg/L,pH 7.0。采用此培养基发酵所得发酵液酶活力较优化前提高了86%。 展开更多
关键词 菊酯类农药降解酶 重组大肠杆菌 培养基 优化
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菊酯类农药降解酶基因原核表达条件的优化 被引量:1
7
作者 黄皓 梁卫驱 +4 位作者 李艳芳 胡珊 罗华建 陈仕丽 徐匆 《广东农业科学》 CAS 2015年第10期76-79,共4页
绘制了菊酯类农药降解酶基因工程菌E.coliBL21(DE3)/pET-28a-est825的生长曲线,优化了诱导起始菌液浓度、诱导剂浓度、诱导温度及诱导时间等条件,得到该基因工程菌诱导表达的最适条件:发酵培养至菌液OD600值为4时,添加终浓度为6g/L的乳... 绘制了菊酯类农药降解酶基因工程菌E.coliBL21(DE3)/pET-28a-est825的生长曲线,优化了诱导起始菌液浓度、诱导剂浓度、诱导温度及诱导时间等条件,得到该基因工程菌诱导表达的最适条件:发酵培养至菌液OD600值为4时,添加终浓度为6g/L的乳糖,37℃诱导8h,酶的表达量最高,酶活为95U/mL,纯化后的重组酶分子量为30.1ku。 展开更多
关键词 菊酯类农药降解酶 重组大肠杆菌 表达 优化
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有机磷农药降解酶opdA的提取和酶学性质
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作者 郑佩华 苏胜艳 《黑龙江粮食》 2022年第3期65-67,共3页
采用硫酸铵进行分级沉淀,使有机磷农药降解酶opdA得到了纯化,提纯倍数为2.29,回收率为55.1%,用SDS-PAGE聚丙烯酰胺进行电泳,确定opdA的分子量为35KDa。该酶在温度为25~40℃区间时稳定性良好,35℃时酶活最佳。在pH6~10区间稳定,最适反应... 采用硫酸铵进行分级沉淀,使有机磷农药降解酶opdA得到了纯化,提纯倍数为2.29,回收率为55.1%,用SDS-PAGE聚丙烯酰胺进行电泳,确定opdA的分子量为35KDa。该酶在温度为25~40℃区间时稳定性良好,35℃时酶活最佳。在pH6~10区间稳定,最适反应pH9。重金属Mg^(2+)、Mn^(2+)对酶活呈现促进作用,而Fe^(2+)、Al^(3+)对酶活抑制作用明显。本文选择5种有机磷农药进行降解试验,降解酶opdA均呈现很好的降解作用。 展开更多
关键词 有机磷农药降解酶 opdA 学性质
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新型拟除虫菊酯降解酶的分子改造及降解特性 被引量:2
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作者 刘孝龙 刘玉焕 范新炯 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期111-117,共7页
为了获得稳定性和酶活性提高的拟除虫菊酯类降解酶,利用易错PCR技术对来源于海底泥宏基因组文库的新型酯酶基因(est825)进行体外定向进化,获得了一个酶活性和热稳定性均提高的突变酶(Est M46)。与野生型相比其酶活力提高1.5倍;最适反应... 为了获得稳定性和酶活性提高的拟除虫菊酯类降解酶,利用易错PCR技术对来源于海底泥宏基因组文库的新型酯酶基因(est825)进行体外定向进化,获得了一个酶活性和热稳定性均提高的突变酶(Est M46)。与野生型相比其酶活力提高1.5倍;最适反应温度提高了5℃,同时热稳定性明显增强。此外,Est M46对氯氟氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯和溴氰菊酯的降解率分别提升至92.21%、99.75%、93.21%和89.48%。这对降低酶的生产成本、促进工业化发展和环境保护有重要意义。 展开更多
关键词 拟除虫菊酯 农药降解酶 定向进化 生物降解
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产菊酯降解酶重组菌的高密度发酵工艺优化 被引量:2
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作者 范新炯 莫忠兴 +3 位作者 张曼曼 裴生斌 刘玉焕 刘孝龙 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期108-119,共12页
为提高菊酯降解酶的产量,利用单因素和正交实验法对重组菌Escherichia coli BL21(DE3)/p ET-28a(+)-sys410的发酵培养基组成和发酵条件进行优化。结果显示最优培养基含有20.0 g·L-1甘油、20.0 g·L-1酵母粉、8.0 g·L-1硫... 为提高菊酯降解酶的产量,利用单因素和正交实验法对重组菌Escherichia coli BL21(DE3)/p ET-28a(+)-sys410的发酵培养基组成和发酵条件进行优化。结果显示最优培养基含有20.0 g·L-1甘油、20.0 g·L-1酵母粉、8.0 g·L-1硫酸铵、100.0 mmol·L-1磷酸盐、5.0 mmol·L-1硫酸镁,以及1.5 m L·L-1的微量元素;发酵条件为装液量50 m L/250 m L、初始培养基pH 7.0、接种量2%,接种培养8 h后乳糖诱导6 h。在7.5 L发酵罐上,使用低浓度碳氮源进行培养,前期恒速补料,对数中后期进行乳糖诱导,后期恒溶氧补料,最终菌体密度和酶活力分别为142.6和3 105.1 U·m L-1,较摇瓶发酵分别提高13.7倍和31.9倍。发酵液经破碎和冷冻干燥后酶活力达到119 426.9 U·g-1,且该酶对菊酯的降解率高于95%。 展开更多
关键词 农药降解酶 高密度发酵 拟除虫菊酯 生物降解
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