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tPA和VEGF165基因共表达质粒对人血管细胞增殖的影响和纤溶作用 被引量:1
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作者 吴忠均 时德 +1 位作者 骆旭东 郑树森 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期379-383,共5页
目的:观察组织纤溶酶原激活物(tPA)和血管内皮细胞生长因子165(VEGF165)基因共表达质粒在血管平滑肌细胞(VSMC)中的表达,并研究表达产物对血管内皮细胞(VEC)和VSMC增殖的影响和纤溶作用。方法:用脂质体转染法将tPA和VEGF165的共表达质粒... 目的:观察组织纤溶酶原激活物(tPA)和血管内皮细胞生长因子165(VEGF165)基因共表达质粒在血管平滑肌细胞(VSMC)中的表达,并研究表达产物对血管内皮细胞(VEC)和VSMC增殖的影响和纤溶作用。方法:用脂质体转染法将tPA和VEGF165的共表达质粒pBudCE4.1/tPA-VEGF165转染VSMC,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附实验(ELISA)分别从mRNA水平和蛋白质水平检测tPA和VEGF165的表达;纤溶蛋白板法检测转染基因的VSMC培养基中tPA的纤溶活性;取转染pBudCE4.1/tPA-VEGF165质粒的VSMC培养基培养VEC和VSMC,用四甲基偶氮唑盐(MTT法)和流式细胞技术检测转基因VSMC的细胞培养基对VEC和VSMC增殖的影响。结果:pBudCE4.1/tPA-VEGF165转染VSMC后,RT-PCR和ELISA检测发现,tPA和VEGF165在mRNA和蛋白质水平均有表达;转基因培养基有明显促进纤溶和促VEC增殖作用,而对VSMC增殖无作用。结论:tPA和VEGF165基因共表达质粒pBudCE4.1/tPA-VEGF165能在VSMC表达有生物学活性的tPA和VEGF165,为tPA和VEGF165基因转染防治移植心脏内血管狭窄奠定了基础。 展开更多
关键词 组织纤溶酶原激活物 血管内皮生长因子 共表达质粒 血管内皮细胞 血管平滑肌细胞
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中国流行株HIV及其与细胞因子基因共表达核酸疫苗质粒的构建及表达
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作者 郭焱 郭巍 +4 位作者 顾红缨 李璐 于伟光 刘斌 罗晶 《动物医学进展》 CSCD 2003年第1期78-80,共3页
以表达中国流行株HIV-1gp120基因的核酸疫苗质粒pGP及共表达中国流行株HIV-1gp120基因与IFN基因的核酸疫苗质粒pG-PIFN转染BHK-21细胞,以间接免疫荧光鉴定其表达产物。将上述两种质粒经胫前肌注射BALB/c鼠,检测gp120抗体的产生情况及Con... 以表达中国流行株HIV-1gp120基因的核酸疫苗质粒pGP及共表达中国流行株HIV-1gp120基因与IFN基因的核酸疫苗质粒pG-PIFN转染BHK-21细胞,以间接免疫荧光鉴定其表达产物。将上述两种质粒经胫前肌注射BALB/c鼠,检测gp120抗体的产生情况及ConA和Lps诱导的T细胞增殖能力。结果显示,荧光显微镜下pGPIFN转染细胞可见绿色荧光而pGP转染细胞未见绿色荧光。pGPIFN与pGP均可刺激小鼠产生抗gp120抗体,协同注射gp120和IFN基因的小鼠产生的抗体滴度明显高于单独注射gp120的小鼠。pGPIFN免疫鼠对ConA和Lps诱导的T细胞增殖能力明显高于单独注射gp120的小鼠。实验结果表明,协同应用IFN基因可明显加强HIV-1gp120基收稿日期:2002-07-19基金项目:国家自然科学基金项目(3977066);国家杰出青年基金项目(39825119)作者简介:郭 焱(1963-),女,吉林省长春市人,长春中医学院基础医学部副教授,硕士,主要从事分子病毒学研究工作。因的免疫反应,为中国流行株HIV-1核酸疫苗的可行性提供了重要实验依据。 展开更多
关键词 中国流行株HIV 细胞因子 基因共表达核酸疫苗质粒 人类免疫缺陷病毒 基因表达
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癌胚抗原与IL-2真核双表达质粒的构建及体外表达 被引量:4
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作者 王中川 傅传刚 +2 位作者 王庆敏 车文良 戴建新 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2002年第3期193-196,共4页
目的 :构建癌胚抗原 (CEA)与白细胞介素 2 (IL 2 )的真核双表达质粒 ,并检测其在体外的表达。方法 :利用分子生物学技术 ,将CEA基因片段和IL 2基因片段连接于真核双表达质粒 pIRES中 ,测定序列后 ,用脂质体包裹转染细胞 ,采用ELISA双抗... 目的 :构建癌胚抗原 (CEA)与白细胞介素 2 (IL 2 )的真核双表达质粒 ,并检测其在体外的表达。方法 :利用分子生物学技术 ,将CEA基因片段和IL 2基因片段连接于真核双表达质粒 pIRES中 ,测定序列后 ,用脂质体包裹转染细胞 ,采用ELISA双抗体夹心法检测CEA和IL 2的表达。结果 :核酸序列测定证实本实验所构建的质粒正确 ,质粒上所接入的CEA和IL 2的碱基序列与标准序列的同源性分别为 99.8%和 99.9%。该双表达质粒在体外转染细胞内后可表达CEA和IL 2分子。结论 :实验所构建的 pIRES CEA IL 2双表达质粒能在体外同时表达CEA和IL 2分子 ,说明本质粒具有在细胞水平同时表达两种生物大分子的活性 。 展开更多
关键词 DNA疫苗 癌胚抗原 共表达质粒 白细胞介素2 CEA IL-2
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重组共表达载体pSLC-IRES-IL-2的构建及在COS-7细胞中的表达 被引量:1
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作者 侯丽 赵跃然 +4 位作者 王来城 焦玉莲 张捷 马春燕 崔彬 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期561-564,共4页
目的:构建共表达质粒pSLC-IRES-IL-2,并在COS-7细胞中表达。方法:根据人SLC和IL-2cDNA的序列分别设计、合成引物,构建以内部核糖体进入位点(IRES)相连的SLC和IL-2基因的真核表达质粒pSLC-IRES-IL-2,用电穿孔法以共表达质粒转染COS-7细... 目的:构建共表达质粒pSLC-IRES-IL-2,并在COS-7细胞中表达。方法:根据人SLC和IL-2cDNA的序列分别设计、合成引物,构建以内部核糖体进入位点(IRES)相连的SLC和IL-2基因的真核表达质粒pSLC-IRES-IL-2,用电穿孔法以共表达质粒转染COS-7细胞。用Westernblot检测SLC和IL-2的表达。结果:Westernblot检测表明,以重组共表达质粒pSLC-IRES-IL-2转染的COS-7细胞能表达SLC和IL-2,表达产物的Mr同预期的结果相一致。结论:成功地构建SLC和IL-2基因的共表达质粒,以其转染COS-7细胞后,能分泌性表达SLC和IL-2,为肿瘤基因治疗的研究提供一定途径。 展开更多
关键词 SLC 白细胞介素-2 共表达质粒 内部核糖体进入位点 COS-7
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