用激光共聚焦显微术在小鼠卵母细胞中检测蛋白激酶C 被引量：13

1

作者 范衡宇 佟超 +1 位作者 李满玉 孙青原 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第6期900-903,共4页

用免疫荧光化学与激光共聚焦显微术结合的方法研究了小鼠卵母细胞中蛋白激酶C (PKC)α和 βⅠ的表达和定位 ,以及蛋白激酶C (PKC)和皮质颗粒的双标记 ,探讨了以哺乳动物卵母细胞为实验对象进行免疫荧光共聚焦显微研究的简便方法 .结果发... 用免疫荧光化学与激光共聚焦显微术结合的方法研究了小鼠卵母细胞中蛋白激酶C (PKC)α和 βⅠ的表达和定位 ,以及蛋白激酶C (PKC)和皮质颗粒的双标记 ,探讨了以哺乳动物卵母细胞为实验对象进行免疫荧光共聚焦显微研究的简便方法 .结果发现 ,PKCα和 βⅠ在小鼠生发泡期和MⅡ期卵母细胞中都有表达 ,但表达部位存在差异 .说明采用改进的激光共聚焦显微术 ,可以方便、灵敏地检测特异蛋白质在卵母细胞中的表达部位 ,从而为生殖。 展开更多

关键词 激光共聚焦显微术 卵母细胞 蛋白激酶C 小鼠 检测

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用激光共聚焦显微术检测哺乳动物卵母细胞中纺锤体相关蛋白的方法(英文) 被引量：2

2

作者 范衡宇 孟小倩 +3 位作者 霍立军 佟超 陈大元 孙青原 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第1期54-58,共5页

哺乳动物卵母细胞是发育生物学和细胞生物学的重要研究对象 .激光共聚焦显微术是检测卵母细胞中纺锤体相关蛋白的有用技术 ,但是针对哺乳动物卵母细胞的特点需要做许多调整以得到理想结果 .其中 ,卵母细胞的准备、固定、透膜、脂类抽提... 哺乳动物卵母细胞是发育生物学和细胞生物学的重要研究对象 .激光共聚焦显微术是检测卵母细胞中纺锤体相关蛋白的有用技术 ,但是针对哺乳动物卵母细胞的特点需要做许多调整以得到理想结果 .其中 ,卵母细胞的准备、固定、透膜、脂类抽提、抗体孵育步骤十分关键 .另外 ,不同物种的卵母细胞也有差异 。 展开更多

关键词 卵母细胞 哺乳动物 激光共聚焦显微术 纺锤体

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激光共聚焦显微术在检测脑胶质瘤蛋白共表达中的应用 被引量：2

3

作者 李增鹏 肖华亮 +1 位作者 张沁宏 王东 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 2004年第4期460-463,共4页

目的　了解ephrinB2及其受体EphB4蛋白在脑胶质瘤中的表达规律 ,并评价激光共聚焦显微术在检测脑胶质瘤组织和细胞蛋白共表达中的应用性。方法　利用双标免疫荧光分别检测EphB4 /ephrinB2蛋白与GFAP或CD34蛋白在 35例脑胶质瘤新鲜标本... 目的　了解ephrinB2及其受体EphB4蛋白在脑胶质瘤中的表达规律 ,并评价激光共聚焦显微术在检测脑胶质瘤组织和细胞蛋白共表达中的应用性。方法　利用双标免疫荧光分别检测EphB4 /ephrinB2蛋白与GFAP或CD34蛋白在 35例脑胶质瘤新鲜标本及人脑胶质瘤细胞系CHG 5、SHG 4 4中的共表达状况 ,以LeicaSP2激光共聚焦显微镜观察、摄像并分析。结果　EphB4或ephrinB2蛋白与CD34蛋白可共表达于部分间质血管 ,EphB4和ephrinB2在肿瘤血管的表达主要定位于血管内皮细胞。在瘤组织内肿瘤细胞及两种细胞系 ,亦可见EphB4或ephrinB2蛋白与GFAP的共表达。SHG 4 4细胞中EphB4或ephrinB2红色荧光强度强于CHG 5细胞 ,而CHG 5细胞GFAP绿色荧光强度较之SHG 4 4细胞则明显增强。结论　 (1)脑胶质瘤间质可能存在不同免疫表型的血管内皮 ,提示肿瘤血管的不同属性 ;(2 )EphB4 /ephrinB2蛋白表达可能与肿瘤细胞的分化程度有关 ;(3)双标免疫组化结合激光共聚焦显微术是一种可用于观测肿瘤蛋白共表达的良好方法。 展开更多

关键词 激光共聚焦显微术 检测 脑胶质瘤 EPHRINB2 EPHB4 蛋白共表达

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双光子及共聚焦激光扫描显微术研究天花粉蛋白对人绒癌细胞的作用机制 被引量：7

4

作者 张春阳 贡宜萱 +2 位作者 马辉 安成才 陈瓞延 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第5期717-721,共5页

天花粉蛋白 (trichosanthin ,TCS)是从中草药栝楼根中提取的一种核糖体失活蛋白 ,具有抗肿瘤和抗HIV功能 .应用双光子及共聚焦激光扫描显微术结合特异性荧光探针Hoechst 3334 2、 2′,7′ 二氯荧光黄双乙酸酯(DCFH DA)、Indo 1和Fluo 3 ... 天花粉蛋白 (trichosanthin ,TCS)是从中草药栝楼根中提取的一种核糖体失活蛋白 ,具有抗肿瘤和抗HIV功能 .应用双光子及共聚焦激光扫描显微术结合特异性荧光探针Hoechst 3334 2、 2′,7′ 二氯荧光黄双乙酸酯(DCFH DA)、Indo 1和Fluo 3 AM ,首次同时观察了TCS诱导人绒癌细胞 (JAR细胞 )凋亡过程中活性氧自由基 (ROS)和细胞内钙离子浓度 ([Ca2 + ]i)的变化 ,实验结果表明TCS引起的 [Ca2 + ]i 升高和ROS形成参与了TCS诱导的JAR细胞凋亡 ,并且ROS形成和 [Ca2 + ]i 升高有关 .共聚焦激光扫描显微术的研究结果表明 ,[Ca2 + ]i 升高不是导致ROS形成的主要原因 。 展开更多

关键词 双光子激光扫描显微术 共聚焦激光扫描显微术 天花粉蛋白 人绒癌细胞 活性氧自由基 钙 作用机制

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共聚焦激光扫描显微术研究天花粉蛋白对小鼠胚胎细胞的作用机制 被引量：3

5

作者 徐慧 张春阳 +1 位作者 马辉 陈瓞延 《分析科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期460-463,共4页

天花粉蛋白是从中草药禾古楼根中提取的一种核糖体失活蛋白 ,具有致流产、抗肿瘤和抗 HIV功能。本文应用共聚焦激光扫描显微术结合特异性荧光探针 2′,7′-二氯荧光黄双乙酸酯和 Fluo3- AM,观察了天花粉蛋白作用于小鼠胚胎细胞过程中活... 天花粉蛋白是从中草药禾古楼根中提取的一种核糖体失活蛋白 ,具有致流产、抗肿瘤和抗 HIV功能。本文应用共聚焦激光扫描显微术结合特异性荧光探针 2′,7′-二氯荧光黄双乙酸酯和 Fluo3- AM,观察了天花粉蛋白作用于小鼠胚胎细胞过程中活性氧自由基和细胞内钙离子浓度的变化。实验结果表明 ,天花粉蛋白能诱导小鼠胚胎细胞钙浓度升高和产生活性氧自由基 ,并且天花粉蛋白能有效抑制小鼠胚胎细胞的分裂 。 展开更多

关键词 共聚焦激光扫描显微术 天花粉蛋白 小鼠 胚胎细胞 作用机制 活性氧自由基 中药 流产药物 分裂

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激光扫描共聚焦显微镜显示土壤原生动物细胞结构的研究 被引量：1

6

作者 运迷霞 郭键 +3 位作者 倪兵 生欣 陈季武 顾福康 《湖北农业科学》 北大核心 2011年第9期1888-1889,共2页

介绍了一种运用激光扫描共聚焦显微术显示土壤原生动物细胞结构的方法,试验结果较清晰地显示出该纤毛虫细胞表面纤毛器及纤毛器基部附属微管结构,并总结了试验操作过程中的注意点。

关键词 激光扫描共聚焦显微术 土壤原生动物 细胞结构

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激光共聚焦显微镜观察磷酸肌酸促缺氧心肌细胞钙离子通道恢复的作用

7

作者 姚亚其 许欧 毛履琰 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 1999年第S1期6-8,共3页

目的用激光共聚焦显微术探讨缺氧过程中心肌细胞损伤的离子机制。方法取大鼠心脏分离心肌细胞，实验组和对照组各２０份，分别在含磷酸肌酸和无磷酸肌酸的培养基中孵育２４～７２ｈ，ｆｌｕｏ３ＡＭ染色，４８８ｎｍ激光激发，选择固... 目的用激光共聚焦显微术探讨缺氧过程中心肌细胞损伤的离子机制。方法取大鼠心脏分离心肌细胞，实验组和对照组各２０份，分别在含磷酸肌酸和无磷酸肌酸的培养基中孵育２４～７２ｈ，ｆｌｕｏ３ＡＭ染色，４８８ｎｍ激光激发，选择固定视野以３３ｍｓ间隔记录３ｍｉｎ，分析荧光强度变化规律。结果标本荧光呈周期性变化，对照组周期长，且不稳定，实验组明显缩短，周期稳定。结论磷酸肌酸具有对缺氧心肌的保护作用。 展开更多

关键词 磷酸肌酸 心肌保护 激光共聚焦显微术

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纤毛虫施氏腹柱虫细胞纤毛器微管的激光共聚焦显微观察 被引量：5

8

作者 翟羽佳 范鑫鹏 +2 位作者 杨林颖 倪兵 顾福康 《电子显微学报》 CAS CSCD 2013年第2期156-162,共7页

应用荧光紫杉醇荧光标记结合激光共聚焦显微术显示,土壤纤毛虫施氏腹柱虫(Gastrostyla steinii)细胞纤毛器微管胞器中,口围带和波动膜后端汇合处含口底托架及口后微管束;额腹横棘毛基部含前纵微管束、后纵微管束和横微管束;左、右缘棘... 应用荧光紫杉醇荧光标记结合激光共聚焦显微术显示,土壤纤毛虫施氏腹柱虫(Gastrostyla steinii)细胞纤毛器微管胞器中,口围带和波动膜后端汇合处含口底托架及口后微管束;额腹横棘毛基部含前纵微管束、后纵微管束和横微管束;左、右缘棘毛基部含前纵微管束、后纵微管束、横微管束和基部微管芽。与目前了解的纤毛虫同类微管结构相比较,施氏腹柱虫显示出其适应于土壤环境而与水生纤毛虫有所区别的一些基本特征,其棘毛基部微管的组成及定位具有该种土壤纤毛虫细胞的特异性。形态发生中,老口围带全部保留,老的或先存的微管结构对新结构的发生和形成具有定位和物质贡献的作用,且老结构在新结构分化和成熟期间也经历着行使相应的生理功能及逐渐退化的过程。 展开更多

关键词 土壤纤毛虫 施氏腹柱虫 荧光紫杉醇荧光标记 激光共聚焦显微术 纤毛器基部微管

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剪切力对耳蜗微血管内皮细胞细胞骨架的影响 被引量：1

9

作者 袁伟 张学渊 +3 位作者 魏运军 李琪 姜振 东钟诚 《中华耳科学杂志》 CSCD 2007年第3期302-304,共3页

目的观察不同剪切力对体外培养的豚鼠耳蜗微血管内皮细胞形态学及细胞骨架的影响。方法用自制的流体力学装置在不同时相点、以不同剪切力对豚鼠耳蜗微血管内皮细胞行力学作用,获得形态学图象,同时对其细胞骨架在激光扫描共聚焦显微镜下... 目的观察不同剪切力对体外培养的豚鼠耳蜗微血管内皮细胞形态学及细胞骨架的影响。方法用自制的流体力学装置在不同时相点、以不同剪切力对豚鼠耳蜗微血管内皮细胞行力学作用,获得形态学图象,同时对其细胞骨架在激光扫描共聚焦显微镜下行F-actin荧光染色测定分析。结果不同大小的剪切力作用会导致细胞形态发生变化;细胞形态变化后会出现应力纤维改变,应力纤维的变化早于形态学改变,这种改变随剪切的时间、力量变化而变化。结论豚鼠耳蜗微血管内皮细胞在受到剪切力作用后之所以会产生形态学改变,可能与细胞骨架变化有关。 展开更多

关键词 耳蜗 内皮 血管 血液动力学 细胞骨架 激光扫描共聚焦显微术

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同源四倍体水稻胚乳发育:极核融合和胚乳细胞化 被引量：22

10

作者 王兰 刘向东 +3 位作者 卢永根 冯九焕 徐雪宾 徐是雄 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期281-289,共9页

利用激光扫描共聚焦显微术和塑料包埋半薄切片技术观察同源四倍体水稻极核融合及游离核进一步发育的过程 ,发现同源四倍体水稻约有 1 /3子房极核融合过程和游离核进一步发育与其二倍体原种的基本一致 ;2 /3子房出现各种异常现象 ,如极... 利用激光扫描共聚焦显微术和塑料包埋半薄切片技术观察同源四倍体水稻极核融合及游离核进一步发育的过程 ,发现同源四倍体水稻约有 1 /3子房极核融合过程和游离核进一步发育与其二倍体原种的基本一致 ;2 /3子房出现各种异常现象 ,如极核未受精、受精异常和胚乳游离核发育滞后等。应用荧光增白剂染色对胚乳细胞化过程进行观察 ,直接观察到胚乳初生壁的出现和形成过程以及不同部位的胚乳细胞壁的形成机理。表明同源四倍体水稻与二倍体水稻胚乳的细胞化过程基本一致 ,胚乳细胞初始垂周壁来源于珠孔端胚囊壁内突向心游离生长 ,初始平周壁来源于游离核有丝分裂产生的成膜体 ,而中间胚乳细胞壁则有些来源于游离核有丝分裂产生的成膜体 ,有些是自由生长而来。同源四倍体水稻胚乳细胞化过程也出现相当比例的异常现象 ,如无细胞壁形成、细胞化不同步和产生分枝状的细胞壁等。同源四倍体水稻胚乳发育过程中出现的极核融合。 展开更多

关键词 同源四倍体 水稻 胚乳发育 极核融合 胚乳细胞化 激光扫描共聚焦显微术 荧光显微术

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同源四倍体水稻亚种间杂种胚囊的结构及受精特点 被引量：16

11

作者 肖波 刘向东 +2 位作者 卢永根 李金泉 赵杏娟 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期1150-1156,i0002-i0004,共10页

利用激光扫描共聚焦显微术对11份同源四倍体水稻亚种间杂种的胚囊结构和双受精特点进行研究，结果表明，所有四倍体杂种均存在一定频率的败育胚囊，败育频率因组合而异，最高的败育率为23．8％，最低为5．5％，平均14．3％。败育胚囊主... 利用激光扫描共聚焦显微术对11份同源四倍体水稻亚种间杂种的胚囊结构和双受精特点进行研究，结果表明，所有四倍体杂种均存在一定频率的败育胚囊，败育频率因组合而异，最高的败育率为23．8％，最低为5．5％，平均14．3％。败育胚囊主要有胚囊退化、异常小胚囊、无卵器、无雌性生殖单位和极核位置异常等5种类型。杂种在双受精过程中也存在一定频率的异常，包括胚囊结构正常但未能受精和受精停滞等，其中未能受精的频率为3．5％～11．9％。平均7．9％，受精停滞的频率为1．1％～6．2％，平均3．7％。另外，还存在低频率（平均4．7％）的胚乳发育受阻。认为部分胚囊败育和受精异常（包括未能受精和受精停滞）是导致同源四倍体水稻亚种间杂种结实率降低的主要原因。 展开更多

关键词 同源四倍体水稻亚种间杂种 胚囊 受精 激光扫描共聚焦显微术

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TSA处理供体细胞对组蛋白乙酰化和核重编程效果的影响 被引量：6

12

作者 张东 杨鹭 +4 位作者 王勇胜 刘根胜 刘利杰 万敏 张涌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期1007-1012,共6页

克隆胚胎基因组的不完全重编程是克隆动物成功率低的主要原因。试验中以第5代牛胎儿成纤维细胞作为供体核,以牛卵母细胞作为受体胞质进行体细胞核移植,用75 nmol.L-1曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)分别处理供体细胞6、12和24 h,通过... 克隆胚胎基因组的不完全重编程是克隆动物成功率低的主要原因。试验中以第5代牛胎儿成纤维细胞作为供体核,以牛卵母细胞作为受体胞质进行体细胞核移植,用75 nmol.L-1曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)分别处理供体细胞6、12和24 h,通过核移植检测克隆胚胎发育率,并应用激光共聚焦显微镜技术和流式细胞术检测处理细胞和克隆囊胚组蛋白H3K18乙酰化水平和细胞周期。结果显示:随着TSA处理时间的延长,供体细胞组蛋白H3K18乙酰化水平不断提高;以75 nmol.L-1TSA处理供体细胞12 h的克隆胚的囊胚发育率显著高于未处理组(23.5%vs 15.7%,P<0.05);供体细胞经TSA处理的克隆囊胚组蛋白H3K18乙酰化水平与未处理组相比差异不显著(P>0.5);处理组和对照组细胞G0/G1期和S期比例间存在显著差异(P<0.05)。结论:TSA对核供体细胞的处理存在时间效应,75 nmol.L-1TSA处理12 h的牛胎儿成纤维细胞更易被卵母细胞重编程,显著提高了克隆胚的体外发育能力,初步证实TSA是通过提高供体细胞组蛋白乙酰化水平来促进供体细胞重编程的。 展开更多

关键词 核移植 曲古抑菌素A 重编程 激光共聚焦显微术

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广东高州普通野生稻与粳稻杂交F1胚囊育性及发育特点 被引量：5

13

作者 练子贤 魏常敏 +5 位作者 卢永根 赵杏娟 傅雪琳 李金泉 杨秉耀 刘向东 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期266-272,共7页

利用整体染色激光扫描共聚焦显微术(WE-CLSM),对广东高州普通野生稻与粳稻台中65杂交F1的成熟胚囊育性、胚囊形成发育及受精特点进行研究。杂种F1成熟胚囊平均育性为64.61%。不同杂种的成熟胚囊均存在不同程度的异常现象,异常的主要类型... 利用整体染色激光扫描共聚焦显微术(WE-CLSM),对广东高州普通野生稻与粳稻台中65杂交F1的成熟胚囊育性、胚囊形成发育及受精特点进行研究。杂种F1成熟胚囊平均育性为64.61%。不同杂种的成熟胚囊均存在不同程度的异常现象,异常的主要类型有:胚囊退化、小胚囊、雌性生殖单位退化、卵器退化、极核数目或位置异常及其他异常等类型。其中频率最高的异常类型为雌性生殖单位退化(10.49%),其次是胚囊退化(9.80%)。杂种F1的胚囊发育过程与高州野生稻原种基本一致,育性低的杂种F1胚囊发育过程出现多种异常现象。对3个杂种F1受粉后1 d的胚囊进行观察发现,除正常受精膨大的胚囊外,还存在结构正常未受精和结构异常未受精等异常现象。受粉后7 d的胚囊基本上与受粉后1 d的相似。研究结果表明,广东高州普通野生稻可能具有决定杂种F1胚囊育性的不同基因,包括中性基因等。 展开更多

关键词 栽培稻 普通野生稻 种间杂种 胚囊 育性 发育 整体染色激光扫描共聚焦显微术

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不同运动负荷小鼠心肌活细胞游离钙动态变化的LSCM研究 被引量：9

14

作者 张志琪 田振军 张小玲 《中国运动医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期82-84,共3页

目的 :探讨运动与心脏重塑的生物学机制中心肌细胞内游离钙的动态变化。方法 :采用激光扫描共聚焦显微技术 ,对不同运动负荷条件下小鼠心肌活细胞内游离钙浓度的变化进行观察、记录和分析 ,采用多道生理记录仪经颈动脉插管 ,对不同运动... 目的 :探讨运动与心脏重塑的生物学机制中心肌细胞内游离钙的动态变化。方法 :采用激光扫描共聚焦显微技术 ,对不同运动负荷条件下小鼠心肌活细胞内游离钙浓度的变化进行观察、记录和分析 ,采用多道生理记录仪经颈动脉插管 ,对不同运动负荷条件下小鼠心肌收缩功能进行记录与分析。结果 :与对照组比较 ,有氧运动组心脏发生肥大 ,左室内压力二阶导数增加了 47 1 7%(P <0 0 0 1 ) ,表明心肌收缩功能增强 ,静息期心肌细胞内游离 [Ca2 + ]i 基值无显著性变化 ,峰值显著性增加了 1 5 7 2 % (P <0 0 0 1 ) ,达峰时间延长了 3 8 5 % (P <0 0 0 1 ) ;大强度疲劳组心肌肥大 ,但心肌收缩功能降低 (-3 5 2 4% ,P <0 0 0 1 ) ,静息期心肌细胞内游离 [Ca2 + ]i 基值和峰值分别显著增加了 41 9% (P <0 0 0 1 )和 2 0 6 3 % (P <0 0 0 1 ) ,达峰时间延长了 74 8% (P <0 0 0 1 )。有氧运动组与大强度疲劳组比较 ,心肌细胞内游离 [Ca2 + ]i 峰值和达峰时间均有显著性差异 (P <0 0 0 1 )。结论 :不同运动负荷影响心肌细胞内游离 [Ca2 + ]i 的变化 ,大强度疲劳训练可导致心肌细胞内游离[Ca2 + ]i 和静息态基值大幅度升高 。 展开更多

关键词 运动负荷 小鼠 心肌活细胞 游离钙 动态变化 LSCM 激光扫描共聚焦显微术

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人恶性胶质瘤细胞系CHG-5和SHG-44细胞骨架的比较研究 被引量：3

15

作者 赵雯 卞修武 +2 位作者 史景泉 卢佳友 陈自强 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期264-267,共4页

目的　比较人恶性胶质瘤细胞系CHG 5和SHG 44的细胞骨架系统成分 ,以进一步了解胶质瘤细胞骨架特征与其分化程度的关系。方法　利用免疫荧光细胞化学染色结合激光共聚焦显微镜观察两种细胞系微管、微丝、中间丝的含量及分布 ,并比较几... 目的　比较人恶性胶质瘤细胞系CHG 5和SHG 44的细胞骨架系统成分 ,以进一步了解胶质瘤细胞骨架特征与其分化程度的关系。方法　利用免疫荧光细胞化学染色结合激光共聚焦显微镜观察两种细胞系微管、微丝、中间丝的含量及分布 ,并比较几种常用固定剂和缓冲液对各骨架成分检测的影响。结果　除微管和微丝均被染色外 ,所有细胞均表达Vimentin(波形蛋白 ) ,而只有部分细胞呈胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)阳性。微管及中间丝在两种细胞胞质中的分布特征基本相似 ,但两种细胞微丝的定位、分布及荧光强度有一定差异。Vimentin型中间丝在SHG 44细胞中表达较强 ,而GFAP在CHG 5细胞中表达较强。丙酮、75 %酒精和4%多聚甲醛对微管的固定效果较好 ;用醛类固定后中间丝 (尤其是Vimentin)染色极弱。结论　CHG 5分化程度较SHG 44高 。 展开更多

关键词 胶质瘤 细胞培养 细胞骨架 激光共聚焦显微术 CHG-5 SHG-44

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CTLA4-EGFP融合蛋白在K562细胞中的表达及其亚细胞定位研究 被引量：1

16

作者 何贤辉 徐丽慧 +2 位作者 刘毅 蔡小嫦 曾耀英 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期135-139,共5页

目的 :构建增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)与CTLA4融合蛋白真核表达载体 ,分析其在K562细胞中的表达和亚细胞定位。方法 :以RT PCR方法克隆人CTLA4基因 ,构建CTLA4 EGFP融合蛋白的表达载体。以其转染K562细胞后 ,以流式细胞仪和激光共聚焦... 目的 :构建增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)与CTLA4融合蛋白真核表达载体 ,分析其在K562细胞中的表达和亚细胞定位。方法 :以RT PCR方法克隆人CTLA4基因 ,构建CTLA4 EGFP融合蛋白的表达载体。以其转染K562细胞后 ,以流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位。结果 :从人外周血细胞中克隆到CTLA4基因的cDNA。通过PCR方法在起始位点前加入Kozak序列并删除终止密码 ,成功地构建CTLA4 EGFP融合蛋白表达载体。以该质粒转染K562细胞 2 4h后 ,CTLA4和EGFP双阳性细胞的百分率为 16%。表达的融合蛋白主要分布于胞内 ,细胞膜上分布较少。相反 ,转染空载体的细胞仅表达EGFP ,且其在细胞内呈弥散样分布。以佛波醇酯加离子霉素刺激后 ,CTLA4 EGFP融合蛋白在细胞表面表达水平升高到 2 9% ,且分布于胞内的融合蛋白向细胞膜靠近并与质膜融合 ;而转染空载体的细胞内EGFP的分布无明显改变。结论 :成功地构建CTLA4 EGFP融合蛋白表达载体 ,并在K562细胞中得到表达。 展开更多

关键词 CTLA4 绿色荧光蛋白 融合蛋白 共聚焦显微术

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同源四倍体多胚苗水稻双受精过程及胚胎早期发育的观察 被引量：1

17

作者 代西梅 黄群策 +1 位作者 梁秋霞 秦广雍 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期493-498,共6页

以同源四倍体多胚苗突变水稻IR36-双为材料,利用激光扫描共聚焦显微镜技术对其双受精过程及胚、胚乳的早期发育特征进行了观察。在"IR36-双"双受精及胚胎发育过程中,观察到一些异常受精现象和胚囊发生败育的异常类型。统计结... 以同源四倍体多胚苗突变水稻IR36-双为材料,利用激光扫描共聚焦显微镜技术对其双受精过程及胚、胚乳的早期发育特征进行了观察。在"IR36-双"双受精及胚胎发育过程中,观察到一些异常受精现象和胚囊发生败育的异常类型。统计结果表明,异常受精作用或败育胚囊的发生频率高达46.67%,远高于其野生型品种IR36-4x(33.00%)。主要有子房退化、胚囊退化、单受精、双胚珠、双胚等几种异常类型。这些异常类型是导致结实率降低及形成双胚苗的细胞学基础。 展开更多

关键词 同源四倍体多胚苗水稻 双受精 生殖发育特征 发育生物草 激光扫描共聚焦显微术

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甲型肝炎病毒在3株细胞中的增殖和连续传代 被引量：1

18

作者 郑纪山 何亮 +3 位作者 王宏 周宗安 邓小昭 乔仁良 《医学研究生学报》 CAS 2001年第4期294-296,299,共4页

目的 :观察甲型肝炎病毒 (HAV )在 3个不同的细胞株中连续传代时的增殖特点。　方法 :将 HAV NJ- 3株先以常规传代方式适应不同的细胞株 :FRh K4细胞、PL C/ PRF/ 5细胞、2 BS,然后将适应病毒接种于细胞 ,并随细胞传代。用 EIA、IFA和... 目的 :观察甲型肝炎病毒 (HAV )在 3个不同的细胞株中连续传代时的增殖特点。　方法 :将 HAV NJ- 3株先以常规传代方式适应不同的细胞株 :FRh K4细胞、PL C/ PRF/ 5细胞、2 BS,然后将适应病毒接种于细胞 ,并随细胞传代。用 EIA、IFA和激光扫描共聚焦显微镜观察带毒细胞连续传代中的病毒增殖。　结果 :1NJ- 3株 / K4细胞于第 5代 HAAg出现阳性 ,第 17、18代时达到高峰 ,2 4代直至 35代均为阴性。 2 NJ- 3株 / 2 BS细胞仅在第 6代出现一次弱阳性 ,传至 35代均呈阴性。 3NJ- 3株 / PL C则在第 3代即可测得 HAAg,第 7代 A值达 0 .80 2 ,P/ N值13.9,并保持此水平至少 70代以上。病毒产量稳定 ,细胞形态良好。冻存 10年的 HAV/ PL C株复苏后 ,仍保持良好的产毒性能。HAV/ PL C传代或收获的最佳周期为 5天。　结论 :HAV NJ- 3株能适应三种不同的传代细胞株 ,但只能在 PL C/ PRF/ 5细胞中长期随细胞传代 。 展开更多

关键词 甲型肝炎病毒 细胞培养 连续传代 激光扫描共聚焦显微术

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红叶石楠叶片色素含量测定方法比较

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作者 黄婧 徐华东 +1 位作者 周鹏 张敏 《江苏林业科技》 2019年第3期39-41,共3页

采用分光光度法和激光共聚焦显微术测定不同发育时期的红叶石楠叶片色素含量,并对2种方法进行比较,以期为植物色素测定提供一定参考。

关键词 色素含量测定 分光光度法 激光共聚焦显微术 红叶石楠 叶片

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IL-13及其变异体真核表达载体的构建表达与亚细胞定位

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作者 王育文 许勇臣 姜晓峰 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期207-211,共5页

目的:体外构建野生型人白细胞介素-13(whIL-13)及变异型人白细胞介素-13(mhIL-13)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融和蛋白真核表达载体,分析其在COS-7细胞中的表达和亚细胞定位。方法:以RT-PCR方法扩增whIL-13、mhIL-13全长编码基因,构建EG... 目的:体外构建野生型人白细胞介素-13(whIL-13)及变异型人白细胞介素-13(mhIL-13)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融和蛋白真核表达载体,分析其在COS-7细胞中的表达和亚细胞定位。方法:以RT-PCR方法扩增whIL-13、mhIL-13全长编码基因,构建EGFP-whIL-13、EGFP-mhIL-13融和蛋白真核表达载体,转染C0S-7细胞,以激光扫描共聚焦显微镜观察融合蛋白的表达及其在细胞内的分布情况。结果:两种融和蛋白表达载体均构建正确,将其转染COS-7细胞后,在阳性克隆胞浆内均可见明亮的绿色荧光,胞核空虚。结论:成功构建EGFP-whIL-13、EGFP-mhIL-13融和蛋白表达载体,并在COS-7细胞中得到表达,表达的两种融和蛋白细胞内分布特征没有区别,均位于胞浆内。 展开更多

关键词 白细胞介素-13 变异体 绿色荧光蛋白 融合蛋白 共聚焦显微术

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