蛋白质酪氨酸磷酸化-免疫沉淀及Western印迹两种方法的比较 被引量：2

1

作者 陈沙力 刘树铮 《白求恩医科大学学报》 CSCD 1997年第6期678-680,共3页

为了深入了解在细胞信息传递中蛋白质酪氨酸磷酸化研究的较佳方法，采用免疫沉淀法及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法对电离辐射诱导的小鼠胸腺细胞蛋白质磷酸化进行了比较分析。免疫沉淀结果表明，照射后１７５００、２２０００、２８０００、３... 为了深入了解在细胞信息传递中蛋白质酪氨酸磷酸化研究的较佳方法，采用免疫沉淀法及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法对电离辐射诱导的小鼠胸腺细胞蛋白质磷酸化进行了比较分析。免疫沉淀结果表明，照射后１７５００、２２０００、２８０００、３２０００、４００００、４３０００及５３０００蛋白分子发生酪氨酸磷酸化。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹结果表明，照射后２８０００、３２０００蛋白分子发生酪氨酸磷酸化。提示在蛋白质酪氨酸磷酸化的研究中，免疫沉淀法优于Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法。 展开更多

关键词 蛋白质 磷酸化 免疫沉淀 免疫印迹 western印迹

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Western印迹法和免疫组化对肺癌神经内分泌分化标记物检测的比较

2

作者 欧阳能太 陈国勤 +1 位作者 丁静 钟南山 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期222-223,共2页

关键词 肺癌 神经内分泌分化标记物 western印迹法 免疫组织化学 比较

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抗虫转基因欧洲黑杨的Western印迹法分析 被引量：21

3

作者 陈颖 李强 +2 位作者 李玲 韩一凡 田颖川 《林业科学》 CAS CSCD 北大核心 1996年第3期274-276,共3页

抗虫转基因欧洲黑杨的Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法分析陈颖，李强，李玲，韩一凡，田颖川（中国林业科学研究院林业研究所北京１０００９１）（中国科学院微生物研究所北京１０００８０）关键词Ｂｔ．基因，转基因欧洲黑杨，Ｗｅｓｔｅｒｎ印... 抗虫转基因欧洲黑杨的Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法分析陈颖，李强，李玲，韩一凡，田颖川（中国林业科学研究院林业研究所北京１０００９１）（中国科学院微生物研究所北京１０００８０）关键词Ｂｔ．基因，转基因欧洲黑杨，Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法ＷＥＳＴＥＲＮＢＬＯＴＡＮＡＬ... 展开更多

关键词 转基因 黑杨 western 印迹法 抗虫性

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快慢转法及不同滤膜和显色检测法在Western blotting中的应用分析 被引量：4

4

作者 孔令泉 蒲莹晖 +2 位作者 马仕坤 涂刚 任国胜 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期26-29,共4页

目的探讨快、慢转法及不同滤膜和显色检测法在Western blotting中的应用及各实验环节分析。方法采用MDA-MB-231细胞制备细胞蛋白,应用不同印迹膜[硝酸纤维素膜、聚偏乙烯二氟(PVDF)膜和阳离子尼龙膜]分别采用快转法和慢转法进行增强化... 目的探讨快、慢转法及不同滤膜和显色检测法在Western blotting中的应用及各实验环节分析。方法采用MDA-MB-231细胞制备细胞蛋白,应用不同印迹膜[硝酸纤维素膜、聚偏乙烯二氟(PVDF)膜和阳离子尼龙膜]分别采用快转法和慢转法进行增强化学发光法(ECL)和DAB化学显色法检测,并对Western blotting的各实验环节进行了分析。结果(1)在快、慢转法中硝纤膜的蛋白预染marker条带略强于尼龙膜,而尼龙膜又略强于PVDF膜;PVDF膜和尼龙膜的正反面易于混淆,而硝纤膜的正反面不易混淆。(2)在快、慢转法中,PVDF膜的DAB化学显色法图像略强于尼龙膜和硝纤膜,而尼龙膜和硝纤膜无明显差异;与慢转法相比,快转的硝纤膜和尼龙膜中的蛋白条带略呈波浪状。(3)在慢转法中三种膜化学发光法的图像无明显背景,但在快转法中尼龙膜的背景较明显,而硝纤膜和PVDF膜亦无明显背景。结论应根据实验需要选用不同的印迹膜;慢转法通常优于快转法,增强化学发光法优于DAB化学显色法;增强化学发光法特异胜强、灵敏度高,是分析蛋白质表达较为理想的方法。 展开更多

关键词 western印迹 增强化学发光法 DAB化学显色法 印迹膜 快转法 慢转法

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加强免疫扩散法鉴定生物工程抗体

5

作者 韩焕兴 毛庆民 +4 位作者 刘保海 黄宗文 陆慧琦 叶伟民 孔宪涛 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第12期929-930,共2页

关键词 生物工程抗体 免疫沉淀反应 免疫印迹 免疫扩散法

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Tenuigenin对转染APP695cDNA的SH-SY5Y细胞β-淀粉样蛋白生成的抑制作用及机制 被引量：1

6

作者 贾竑晓 马辛 +4 位作者 姜勇 阮燕 张继志 涂鹏飞 张岱 《首都医科大学学报》 CAS 2005年第4期428-431,共4页

目的用转染APP695cDNA的SH-SY5Y细胞模型,研究tenuigenin对β-淀粉样蛋白(Aβ)生成的抑制作用及其作用机制。方法应用免疫沉淀和蛋白印迹法(Westernblot)检测Aβ含量,应用MTT和LDH法测定tenuigenin的细胞毒性。结果Tenuigenin降低SH-SY5... 目的用转染APP695cDNA的SH-SY5Y细胞模型,研究tenuigenin对β-淀粉样蛋白(Aβ)生成的抑制作用及其作用机制。方法应用免疫沉淀和蛋白印迹法(Westernblot)检测Aβ含量,应用MTT和LDH法测定tenuigenin的细胞毒性。结果Tenuigenin降低SH-SY5YAPP695细胞Aβ分泌水平;无细胞增生和毒性作用;能抑制SH-SY5YAPP695细胞APPC99的生成,但对SH-SY5YSPA4CT细胞APPC99生成无抑制作用,亦不影响该细胞株Aβ的分泌。结论Tenuigenin可能通过抑制β-分泌酶对APP的水解,降低SH-SY5YAPP695细胞Aβ水平。Tenuigenin这一针对阿尔茨海默病(Alzheimerdisease,AD)上游病理环节的药效,显示了其在AD治疗方面重要的开发和临床应用的价值,值得进一步研究。 展开更多

关键词 阿尔茨海默病 Β-淀粉样蛋白 C99 免疫沉淀western印迹法

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氯化甲基汞中毒大鼠周围神经损伤的病理演变 被引量：14

7

作者 曹秉振 常高峰 +4 位作者 曹霞 冯树行 苏净 喻学红 长岛和郎 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期1190-1194,共5页

目的 :探讨氯化甲基汞中毒大鼠周围神经损伤的病理改变及病理机制。 方法 :在 WKAH大鼠服用氯化甲基汞 4mg/ d所致的亚急性汞中毒模型上 ,采用组织病理、免疫组化、蛋白印迹等方法动态观察坐骨神经和后根神经节的病理演变 ,TU NEL 染色... 目的 :探讨氯化甲基汞中毒大鼠周围神经损伤的病理改变及病理机制。 方法 :在 WKAH大鼠服用氯化甲基汞 4mg/ d所致的亚急性汞中毒模型上 ,采用组织病理、免疫组化、蛋白印迹等方法动态观察坐骨神经和后根神经节的病理演变 ,TU NEL 染色观察细胞凋亡。 结果 :中毒后第 11天后根神经节内可见散在大型神经元 A被吞噬细胞浸润 ,电镜下 A型神经元胞质内线粒体变性 ;坐骨神经远端轻微轴索变性 ,病变逐渐加重并向心性发展。第 15天开始出现髓鞘崩解 ,MRF- 1染色显示有少量的吞噬细胞反应。第 18天出现明显轴索变性及髓鞘崩解 ,可见大量浸润的吞噬细胞 ;后根神经节内 A型神经元近于消失 ,但 B型神经元保留良好 ,B型神经元的上行终末胶状质下区亦出现明显变性。TUNEL 染色未观察到节细胞凋亡。采用Western印迹法观察到坐骨神经及后根神经节神经原纤维及髓鞘蛋白 O随中毒时间延长逐渐降低 ,在第 15天后尤为明显 ,与免疫组化结果相符合。结论 :亚急性汞中毒模型中 ,A型神经元变性可能与汞中毒损伤线粒体膜继发的能量代谢障碍有关 ;而B型神经元变性则符合逆行性死亡的过程。 展开更多

关键词 氯化甲基汞 周围神经 后根神经节 免疫组织化学 western印迹法

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γ射线诱发的白血病小鼠胸腺细胞蛋白质酪氨酸磷酸化水平的变化 被引量：5

8

作者 黄定德 陈杞 +5 位作者 韩玲 蔡建明 傅志超 李百龙 黄越承 林亚华 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第7期742-744,共3页

目的 :探讨γ射线体外诱发的白血病小鼠胸腺细胞总蛋白质酪氨酸磷酸化水平的变化。方法 :35 3只 BAL B/ c小鼠分为照射组及对照组 ,照射组经 6 0 Coγ射线全身照射后 ,病理证实出现白血病者为癌变组 ,未出现任何肿瘤者为未癌变组 ;对照... 目的 :探讨γ射线体外诱发的白血病小鼠胸腺细胞总蛋白质酪氨酸磷酸化水平的变化。方法 :35 3只 BAL B/ c小鼠分为照射组及对照组 ,照射组经 6 0 Coγ射线全身照射后 ,病理证实出现白血病者为癌变组 ,未出现任何肿瘤者为未癌变组 ;对照组为正常 BAL B/ c小鼠 ,未经γ射线照射 ,与照射组同步喂养。分离胸腺细胞 ,应用免疫沉淀法及 Western印迹分析检测蛋白质酪氨酸磷酸化水平。 结果 :癌变组胸腺细胞中蛋白质酪氨酸磷酸化水平总体上明显高于对照组及未癌变组 ,尤以相对分子质量 (4 7.5～ 83)× 10 3及 32 .5× 10 3附近蛋白变化最为明显 ;相对分子质量为 35× 10 3的蛋白在癌变组中酪氨酸磷酸化明显 ,而在对照组及未癌变组中未检测到磷酸化的发生。 结论 展开更多

关键词 白血病 Γ射线诱发 小鼠 胸腺细胞 蛋白质酪氨酸磷酸 免疫沉淀法 蛋白质印迹法

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运动训练对出血性脑损伤细胞凋亡基因caspase-3及其蛋白表达的影响 被引量：4

9

作者 李红玲 王金星 +2 位作者 赵然 雷景爱 李春岩 《中国康复医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期601-604,I0001,共5页

目的:观察运动训练对脑出血大鼠神经细胞凋亡基因caspase-3及其蛋白表达的影响。方法:实验动物用健康雄性SD大鼠120只。随机分为3组,实验组(出血后运动,40只)、对照组(出血后不运动,40只)、假手术组(无出血不运动,40只)。各组又分为术后... 目的:观察运动训练对脑出血大鼠神经细胞凋亡基因caspase-3及其蛋白表达的影响。方法:实验动物用健康雄性SD大鼠120只。随机分为3组,实验组(出血后运动,40只)、对照组(出血后不运动,40只)、假手术组(无出血不运动,40只)。各组又分为术后7d,14d,21d,28d共4个时相点,每个时相点5只用于免疫组化检测,5只用于RT-PCR和Western印迹法检测。实验组于术后24h开始跑笼训练,其余大鼠在标准笼内自由活动。结果:①免疫组化结果:caspase-3阳性细胞表达为细胞胞浆着棕黄色,阳性细胞主要分布于血肿周围和大脑皮质的神经元。实验组随运动训练时间延长似乎有表达上调趋势,28d时表达虽有下降迹象,但仍处于较高水平。对照组表达水平较实验组更明显,但两组差异无显著性意义(P>0.05),实验组和对照组与假手术组相比差异有非常显著性意义(P<0.01)。②Western blotting和RT-PCR结果与免疫组化一致。结论:caspase-3参与了脑出血后细胞凋亡的发生,但运动训练对caspase-3基因及其蛋白表达的抑制作用不明显。 展开更多

关键词 运动训练 脑出血 大鼠 CASPASE-3 western印迹法 RT-PCR

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人生长激素同型异构体比例变化与特发性矮小症的相关性 被引量：4

10

作者 董治亚 王伟 +3 位作者 杜晓飞 崔贻芬 奚容平 王德芬 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期974-976,共3页

关键词 人生长激素同型异构体 特发性矮小症 免疫沉淀结合western印迹

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白细胞介素18上调大肠癌细胞Fas配体表达 被引量：2

11

作者 张伟 丁尔迅 +2 位作者 王强 陈学云 付志仁 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期485-485,500,共2页

关键词 FAS配体 白细胞介素18 大肠癌 western印迹法

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stathmin基因的表达与长春瑞滨治疗非小细胞肺癌疗效关系 被引量：2

12

作者 蒲骁麟 王峻 +6 位作者 俞明峰 马俊青 王子露 刘福银 樊卫飞 杨明 孟丽娟 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2008年第10期755-759,共5页

背景与目的:化疗是晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的主要治疗手段,但是NSCLC常对化疗耐药,导致治疗失败。因此,针对不同分子生物学特点的NSCLC进行化疗疗效预测,成为提高疗效的重要方法。本研究通过研究晚期NSCLC患者肿瘤组织中Stathmin基因... 背景与目的:化疗是晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的主要治疗手段,但是NSCLC常对化疗耐药,导致治疗失败。因此,针对不同分子生物学特点的NSCLC进行化疗疗效预测,成为提高疗效的重要方法。本研究通过研究晚期NSCLC患者肿瘤组织中Stathmin基因的表达与患者对长春碱类药物的化疗敏感性的关系,为患者选择适当的药物治疗提供依据。方法:2005年5月—2007年12月,共78例晚期NSCLC患者入组,随机分入NP方案[长春瑞滨(NVB)联合顺铂(DDP)或卡铂(CBP)]化疗组或GP方案[吉西他滨(GEM)联合DDP或CBP]化疗组,观察两组对化疗的反应;同时以RT-PCR法检测患者病理组织中StathminmRNA的表达,以Western印迹法检测Stathmin的蛋白含量。结果:NP组41例,GP组37例,两组患者的性别、年龄、病理类型及肿瘤分期等临床特点无显著性差异(P>0.05),对化疗总的有效率分别为46.3%(19/41)和48.6%(18/37),两者之间亦未见显著差异(P>0.05);在NP组内,有效19例,无效22例,有效患者的肿瘤组织中stathminmRNA测量值为1.9±1.1,而无效患者为7.5±2.8,两者之间差异有显著性(P=0.003)。有效患者的Stathmin蛋白测量值为1.5±0.7,无效组为4.3±1.6,两者之间差异有显著性(P=0.002)。GP组18例有效,19例无效,有效与无效患者肿瘤组织中stathminmRNA及Stathmin蛋白无明显差异(P>0.05)。结论:NSCLC患者肿瘤组织中stathmin基因的表达与患者对长春碱药物的敏感性有关,stathmin基因高表达,对长春碱药物的敏感性低,宜换用其他药物治疗。 展开更多

关键词 STATHMIN 非小细胞肺癌 化疗 western印迹法 MRNA

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豚鼠早期实验性近视眼巩膜成纤维细胞前部及后极部MMP-2 mRNA及蛋白表达变化的研究 被引量：3

13

作者 陈博宇 王超英 +5 位作者 安慧琴 马景学 陈维毅 郝岚 刘迎庆 仝春梅 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2011年第9期807-811,共5页

目的研究豚鼠早期实验性近视眼巩膜成纤维细胞(guineapig scleral fibroblast,GSF)前部及后极部基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)的改变,探索近视的发病机制。方法 2周龄豚鼠30只作为实验组,另外再随机选取5只(10眼)... 目的研究豚鼠早期实验性近视眼巩膜成纤维细胞(guineapig scleral fibroblast,GSF)前部及后极部基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)的改变,探索近视的发病机制。方法 2周龄豚鼠30只作为实验组,另外再随机选取5只(10眼)正常2周龄豚鼠不作任何干预,作为正常对照眼。选取任意眼戴-10.00DS凹透镜,分别饲养6d、15d、30d后除去镜片,验光及测眼轴长度确定近视形成后,采用组织块培养法培养豚鼠的前部及后极部GSF,利用免疫细胞化学、实时荧光定量PCR、Western blot蛋白印迹法检测前部及后极部GSF中MMP-2表达变化。结果 MMP-2的表达定位于细胞浆和细胞核。实验组中前部GSF饲养15d阳性表达率较高,30d阳性表达率最高;后极部GSF饲养6d表达率开始较高,至15d阳性表达率最高,以后保持较高的阳性表达率,各诱导时间点之间两两比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05);自身对照组各组自身前部及后极部比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论体外培养的豚鼠GSF稳定表达MMP-2 mRNA及其蛋白,且前部GSF于诱导15d开始阳性表达率较高,后极部GSF于诱导6d开始阳性表达率较高,后极部GSF较前部表达明显增多。 展开更多

关键词 豚鼠 巩膜成纤维细胞 基质金属蛋白酶 2 免疫细胞化学 实时荧光定量PCR western blot蛋白印迹法

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新生隐球菌热休克反应对两性霉素B敏感性的影响 被引量：1

14

作者 陈裕充 温海 +3 位作者 李志刚 徐红 钟江 尹隽 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期254-256,共3页

目的:探讨新生隐球菌热休克反应在体外药物敏感性实验中对两性霉素B敏感性的影响,以及热休克蛋白70(Hsp70)在新生隐球菌致病中的作用。方法:根据NCCLS的M-27-p方案,测定新生隐球菌在热休克(42℃×30min)前后两性霉素B对新生隐球菌... 目的:探讨新生隐球菌热休克反应在体外药物敏感性实验中对两性霉素B敏感性的影响,以及热休克蛋白70(Hsp70)在新生隐球菌致病中的作用。方法:根据NCCLS的M-27-p方案,测定新生隐球菌在热休克(42℃×30min)前后两性霉素B对新生隐球菌的最小抑菌浓度(MIC)。随机抽取其中7株新生隐球菌,采用鼠抗人、猪、狗等的Hsp70抗体,通过Western印迹法来检测其Hsp70,根据实验信号强弱定性判断在不同刺激条件下的Hsp70产量。结果:①在热休克后两性霉素B对新生隐球菌的MIC较热休克前有明显提高(P=0.002)。②在42℃×30min热应激下新生隐球菌Hsp70产量较在30℃培养下增加。结论:新生隐球菌对两性霉素B的敏感性下降受其热休克反应的影响。结合临床,在较难治愈的病例中Hsp70表达量增加,热休克反应增强;并可能产生与人体Hsp70的交叉免疫反应,推测其对新生隐球菌的致病性可能有一定的作用。 展开更多

关键词 新生隐球菌 热休克蛋白70 两性霉素B 最小抑菌浓度 western印迹法

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缺氧预适应小鼠脑组织中缺氧诱导因子-1的表达 被引量：4

15

作者 梁元晶 吕国蔚 《首都医科大学学报》 CAS 2001年第4期285-287,共3页

为探讨缺氧诱导因子 1 (HIF 1 )在缺氧预适应小鼠脑组织中的表达 ,用Western印迹法检测慢性缺氧 (H)和不缺氧 (C)HeLa细胞、急性重复性缺氧 0次 (H0 )、1次 (H1)、4次 (H4 )小鼠脑组织中的HIF 1α。结果 :慢性缺氧HeLa细胞中可检测到较... 为探讨缺氧诱导因子 1 (HIF 1 )在缺氧预适应小鼠脑组织中的表达 ,用Western印迹法检测慢性缺氧 (H)和不缺氧 (C)HeLa细胞、急性重复性缺氧 0次 (H0 )、1次 (H1)、4次 (H4 )小鼠脑组织中的HIF 1α。结果 :慢性缺氧HeLa细胞中可检测到较多的HIF 1α,H0 组脑组织中检测不到HIF 1α ,H1组检测到微量HIF 1α,H4 组检测到较多HIF 1α。结果显示 :脑组织中HIF 1α的含量随缺氧预适应的产生而逐步增加 ,提示HIF 1可能参与缺氧预适应的形成。 展开更多

关键词 缺氧诱导因子-1 缺氧预适应 western印迹法 脑组织 动物实验

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NFκB家族蛋白对人卵巢癌细胞系生长及耐药性的影响 被引量：3

16

作者 孔祥 胡群 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2002年第3期234-236,共3页

目的 :研究NFκB家族蛋白在卵巢癌细胞的表达及与卵巢癌细胞化疗耐药性关系。方法 :培养 13株卵巢癌细胞系 ,对其进行胞质、胞核蛋白质提取 ,Western印迹法观察NFκB家族蛋白及其抑制物的表达 ,并用MTT检测药敏、观察NFκB家族蛋白与卵... 目的 :研究NFκB家族蛋白在卵巢癌细胞的表达及与卵巢癌细胞化疗耐药性关系。方法 :培养 13株卵巢癌细胞系 ,对其进行胞质、胞核蛋白质提取 ,Western印迹法观察NFκB家族蛋白及其抑制物的表达 ,并用MTT检测药敏、观察NFκB家族蛋白与卵巢癌细胞化疗耐药性关系。结果 :①P6 5、P5 0及IKB在胞质内表达阳性率分别为 76 .9%、81.8%、84 .6 % ,P6 5、P5 0同时在胞核内表达 ,P5 0尤为明显 ,阳性率分别为 15 .3%、4 5 .5 %。②OV MZ 5和OV MZ 2 774两个卵巢癌细胞系P6 5表达阳性 ,MTT检测IC50 表现明显高值 ,显示耐药。结论 :P6 5、P5 0在卵巢癌细胞的发生、发展中发挥作用 ,P5 0更为明显 ;P6 5与卵巢癌细胞的耐药关系密切 。 展开更多

关键词 NFкB家族蛋白 卵巢癌细胞系 蛋白质提取 western印迹法 MTT检测 卵巢肿瘤

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力竭运动后大鼠脑皮质运动区谷氨酸受体NR2A蛋白含量及酪氨酸磷酸化水平的变化 被引量：5

17

作者 白宝丰 张蕴琨 《中国运动医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期400-403,433,共5页

目的:观察力竭运动前后大鼠脑皮质运动区NR2A蛋白含量及其自身酪氨酸磷酸化水平变化,分析二者之间的相关关系,为探讨中枢兴奋信号在运动中的传递机理以及运动性疲劳的中枢机制提供实验依据。方法:SD大鼠进行一次性力竭跑台运动。采用抗N... 目的:观察力竭运动前后大鼠脑皮质运动区NR2A蛋白含量及其自身酪氨酸磷酸化水平变化,分析二者之间的相关关系,为探讨中枢兴奋信号在运动中的传递机理以及运动性疲劳的中枢机制提供实验依据。方法:SD大鼠进行一次性力竭跑台运动。采用抗NR2A抗体和抗磷酸酪氨酸单抗以免疫沉淀法和免疫印迹法检测皮质运动区NR2A蛋白含量及酪氨酸磷酸化水平。结果:力竭运动后即刻,大鼠脑皮质运动区NR2A蛋白含量与安静组相比无显著性变化,运动后1小时与安静组和运动后即刻比较显著升高(P<0.05,P<0.01),运动后3小时NR2A蛋白含量下降,运动后恢复24小时大鼠脑皮质中NR2A蛋白含量显著低于安静组和运动后即刻组(P<0.01,P<0.05)。NR2A酪氨酸磷酸化水平力竭运动后与对照组相比呈升高趋势但无显著性差异,NR2A酪氨酸磷酸化水平与NR2A蛋白含量变化无显著相关。结论:(1)大鼠在力竭运动后即刻及恢复期过程中,大脑皮质运动区NR2A蛋白含量变化表现为下降,上升,再下降,表明运动过程中NR2A蛋白含量变化具有较敏感的可调控性,力竭运动后即刻NR2A蛋白含量的下降可能是导致中枢抑制的一个因素。(2)NR2A酪氨酸磷酸化水平在力竭运动后呈升高趋势,可能有利于维持中枢的兴奋性,提示运动过程中NR蛋白含量的变化可能是多方面原因造成的,受体蛋白含量与受体活性之间可能存在较为复杂的关系。 展开更多

关键词 酪氨酸磷酸化水平 NR2A 蛋白含量 谷氨酸受体 力竭 大脑皮质运动区 含量变化 运动过程 运动性疲劳 免疫印迹法 免疫沉淀法 磷酸酪氨酸 运动后恢复 显著性差异 A蛋白 水平变化 运动前后 相关关系 中枢机制 兴奋信号 跑台运动

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反义GATA-3治疗哮喘气道炎症的实验研究 被引量：1

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作者 邓群益 张珍祥 徐永健 《实用医学杂志》 CAS 2005年第21期2355-2357,共3页

目的:观察反义GATA-3治疗大鼠哮喘模型气道炎症的作用。方法:按常用方法制作大鼠哮喘模型并分为哮喘组(A组),地塞米松治疗组(D组),GATA-3反义寡核苷酸治疗组(AS组),GATA-3无意义寡核苷酸治疗组(NS组)和正常对照组(N组)5组,每组10只。反... 目的:观察反义GATA-3治疗大鼠哮喘模型气道炎症的作用。方法:按常用方法制作大鼠哮喘模型并分为哮喘组(A组),地塞米松治疗组(D组),GATA-3反义寡核苷酸治疗组(AS组),GATA-3无意义寡核苷酸治疗组(NS组)和正常对照组(N组)5组,每组10只。反义寡核苷酸和无意义寡核苷酸经鼻气管内给药,地塞米松腹腔注射给药。用HE染色的方法观察气道炎症变化。免疫组化方法观察GATA-3阳性细胞数。用RT-PCR方法观察大鼠肺组织GATA-3mRNA表达。用Western蛋白印迹法检测肺组织中GATA-3蛋白质表达。结果:与N组相比,A组GATA-3mRNA和蛋白质的表达量及气道炎性细胞浸润数量明显增加(P<0.01)。AS组和D组GATA-3mRNA和蛋白质表达量及气道炎性细胞浸润数量与A组相比均明显降低(P<0.01)。NS组GATA-3mRNA和蛋白质表达量和炎性细胞浸润数量与A组相比差异无显著性(P>0.05)。GATA-3的表达与大鼠支气管肺组织中嗜酸性粒细胞浸润数量呈正相关,相关系数为0.995(P<0.01)。结论:GATA-3反义寡核苷酸能特异性地抑制GATA-3基因的表达,减轻气道炎症反应。GATA-3在Wistar大鼠哮喘模型效应阶段气道炎症中具有重要作用。 展开更多

关键词 哮喘 基因治疗 GATA-3基因 哮喘气道炎症 反义寡核苷酸 治疗组 western蛋白印迹法 实验研 炎性细胞浸润 大鼠肺组织

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PC12-Mint2基因工程细胞株的构建

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作者 张骐 张勇 +3 位作者 曹莉 刘翾 矫力 何成 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期214-216,共3页

目的:构建稳定表达Mint2蛋白的PC12-Mint2基因工程细胞株。方法:用PCR方法将Mint2基因亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1A,构建真核表达质粒peDNA3.1A-Mint2;采用脂质体Lipofectamine2000介导,将重组载体转染入PC12细胞,G418筛选抗性克隆,... 目的:构建稳定表达Mint2蛋白的PC12-Mint2基因工程细胞株。方法:用PCR方法将Mint2基因亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1A,构建真核表达质粒peDNA3.1A-Mint2;采用脂质体Lipofectamine2000介导,将重组载体转染入PC12细胞,G418筛选抗性克隆,有血清培养并传代具有G418抗性的细胞,数代培养后获得工程细胞株;分别提取野生型PC12细胞和PC12-Mint2工程细胞的mRNA及细胞裂解液,RT-PCR方法检测Mint2基因是否整合入PC12细胞基因组,并用West-ern印迹法检测外源基因Mint2在PC12-Mint2工程细胞中是否正常表达。结果:扩增出的基因片段大小为2 253 bp;pcDNA3.1A-Mint2重组质粒酶切结果表明Mint2基因正确地插入到pcDNA3.1A载体中,测序结果正确;将peDNA3.1A-Mint2转染PC12细胞,经G418筛选获得PC12-Mint2工程细胞株;RT-PCR结果表明Mint2基因已整合入PC12细胞,Western印迹结果显示在120 000处有特异条带,大小与Mint2蛋白理论计算值一致,表明在PC12-Mint2基因工程细胞中确实有Mint2蛋白表达。结论:本试验成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1-Mint2,并获得了稳定表达Mint2蛋白的PC12-Mint2基因工程细胞株,为进一步研究Mint2生物学功能及其作用机制奠定了基础。 展开更多

关键词 基因亚克隆 Mint2 PC12细胞 转染 western印迹法

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蛋白激酶C亚型在小鼠胚胎干细胞中的表达研究

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作者 高前应 葛坚 +5 位作者 王智崇 杨智宽 黄丹平 袁钊辉 陈慧怡 陶靖 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期312-315,F002,共5页

[目的]研究5种蛋白激酶C(PKC)亚型PKC_α、PKC_β、PKC_γ、PKC_δ和PKC_ε在小鼠胚胎干细胞(ES细胞)株ES-BALB/c的表达情况。[方法]ES-BALB/c细胞株用普通ES细胞培养液培养,分别种植于预置有盖玻片的6孔板和直径100mm的培养皿,培养2d... [目的]研究5种蛋白激酶C(PKC)亚型PKC_α、PKC_β、PKC_γ、PKC_δ和PKC_ε在小鼠胚胎干细胞(ES细胞)株ES-BALB/c的表达情况。[方法]ES-BALB/c细胞株用普通ES细胞培养液培养,分别种植于预置有盖玻片的6孔板和直径100mm的培养皿,培养2d和4d后分别进行PKC亚型免疫组织化学和Western印迹检测。[结果]免疫组化发现PKC_α在ES-BALB/c细胞有广泛的棕黄色的阳性表达,以细胞浆和细胞核最甚,而PKC_β、PKC_γ、PKC_δ和PKC_ε4种亚型无明显表达;Western印迹发现PKC_α出现一条蛋白印迹条带,分子质量约为84ku,而PKC_β、PKC_γ、PKC_δ和PKC_ε4种亚型无蛋白印迹条带。[结论]PKC_α在ES细胞阶段即有表达,在将来的细胞分化阶段可能有非常重要的作用,而PKC_β、PKC_γ、PKC_δ和PKC_ε4种亚型在ES细胞阶段没有表达。 展开更多

关键词 胚胎干细胞 蛋白激酶C 亚型 蛋白表达 免疫组织化学 western印迹法

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