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燕麦非淀粉多糖发酵富集法工艺优化及其免疫刺激活性分析
1
作者 高若涵 马楠 +3 位作者 杨明哲 曹家宝 王霞 鹿保鑫 《食品工业科技》 北大核心 2025年第10期21-32,共12页
为提高燕麦非淀粉多糖(ONSP)的产率,优化ONSP的提取工艺并探究其免疫活性。本研究采用微生物发酵辅助提取,并利用单因素实验、响应面试验优化了微生物发酵辅助提取燕麦非淀粉多糖(ONSP1)的提取工艺。利用傅里叶变换红外光谱(FTIR)、气... 为提高燕麦非淀粉多糖(ONSP)的产率,优化ONSP的提取工艺并探究其免疫活性。本研究采用微生物发酵辅助提取,并利用单因素实验、响应面试验优化了微生物发酵辅助提取燕麦非淀粉多糖(ONSP1)的提取工艺。利用傅里叶变换红外光谱(FTIR)、气相色谱-质谱联用(GC-MS)测定ONSP的结构,同时对ONSP的免疫活性进行探究,并与传统热水浸提法提取出的燕麦非淀粉多糖(ONSP2)进行比较。结果表明:ONSP1的最佳提取工艺为接菌量5%,发酵温度34℃,发酵时间26 h,此时ONSP1的产率为8.60%±0.04%。ONSP1和ONSP2均由葡萄糖、阿拉伯糖和木糖组成,而ONSP1的阿拉伯糖和木糖含量显著高于ONSP2(P<0.05)。检测发现,虽然ONSP1的分子量(47.2 kDa)显著低于ONSP2的分子量(53.2 kDa),但是ONSP1的β-葡聚糖含量显著高于ONSP2(P<0.05)。并且ONSP1和ONSP2均能促进RAW264.7细胞增殖,ONSP1表现出更强的免疫刺激活性。综上所述,微生物发酵富集法得到的燕麦非淀粉多糖中β-葡聚糖含量更高,免疫刺激活性更强。本研究为进一步探究燕麦非淀粉多糖的结构特征、免疫刺激活性及其构效关系提供新的见解。 展开更多
关键词 燕麦非淀粉多糖 微生物发酵 工艺优化 结构表征 免疫刺激活性
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罗非鱼头硫酸软骨素对RAW 264.7细胞和小鼠免疫刺激活性研究
2
作者 黄后培 袁媛 +3 位作者 汪卓 陈菁 宋兵兵 钟赛意 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2024年第23期381-387,共7页
本文采用了RAW 264.7细胞和免疫抑制模型,通过体外、体内实验研究罗非鱼头硫酸软骨素(CS)的免疫刺激活性。结果表明,罗非鱼头硫酸软骨素(CS)可以诱导RAW 264.7细胞产生NO、IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α;环磷酰胺(CTX)诱导小鼠的胸腺萎缩... 本文采用了RAW 264.7细胞和免疫抑制模型,通过体外、体内实验研究罗非鱼头硫酸软骨素(CS)的免疫刺激活性。结果表明,罗非鱼头硫酸软骨素(CS)可以诱导RAW 264.7细胞产生NO、IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α;环磷酰胺(CTX)诱导小鼠的胸腺萎缩(胸腺指数0.11%±0.01%),低剂量CS(胸腺指数(0.17%±0.03%))、高剂量CS(胸腺指数(0.18%±0.02%))干预后,显著上调了小鼠胸腺指数(P<0.05);同时,CS干预显著上调CTX诱导小鼠脾脏指数(P<0.05),上调绒毛长度和V/C值并且高剂量CS显著上调了绒毛长度(330.92±21.55)μm(P<0.05);另外,CS对CTX诱导小鼠血清sIgA的分泌有促进作用。这些结果表明CS可以改善免疫抑制小鼠肠道屏障损伤及免疫功能。因此,本研究可为罗非鱼硫酸软骨素的肠道黏膜免疫调节作用提供理论基础,并表明罗非鱼头硫酸软骨素(CS)是一种潜在的可替代鲨鱼硫酸软骨素的免疫调节多糖,并可能成为干预免疫疾病相关功能食品的潜在材料。 展开更多
关键词 罗非鱼 硫酸软骨素 免疫刺激活性 免疫抑制 肠道屏障 RAW 264.7
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白细胞介素18基因修饰的树突状细胞的表型分析及其免疫刺激活性 被引量：9
3
作者 陈吉泉 修清玉 +6 位作者 罗文侗 何龙 章卫平 于益芝 张明徽 顾申 曹雪涛 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1999年第2期111-116,共6页
目的:研究IL-18基因修饰后的树突状细胞(DC)的表型和功能的变化.方法:以含IL-18基因的重组腺病毒体外转染小鼠骨髓来源的DC,RLIDS检测IL-18分泌水平,以RT-PCR检测IL-18mRNA表达,以FACS法分析其DC表型变化,采用TdR检测其MLR的变化.结果:I... 目的:研究IL-18基因修饰后的树突状细胞(DC)的表型和功能的变化.方法:以含IL-18基因的重组腺病毒体外转染小鼠骨髓来源的DC,RLIDS检测IL-18分泌水平,以RT-PCR检测IL-18mRNA表达,以FACS法分析其DC表型变化,采用TdR检测其MLR的变化.结果:IL-18基因修饰的DC有效分泌IL-18,可检测到IL-18mnRNA的表达,分泌上清具有诱导T细胞产生IFN-γ的作用,IL-18基因修饰的DC同种异体MLR明显增强,且仅能被IL-18抗体部分阻断,表型分析表明,IL-18基因修饰后的Ia,B7.2,ICAM-1太阳性的DC的比例明显增加.结论:IL-18基因修饰的DC可有效表达有功能的IL-18,部分表面分子表达上调,刺激同种异体T淋巴细胞增殖能力的提高,提示其抗原提星功能增强. 展开更多
关键词 树突状细胞 IL-18 基因修饰 表型 免疫刺激活性
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体外筛选对鸡具有免疫刺激活性的CpG寡脱氧核苷酸 被引量：8
4
作者 朱鸿飞 朱建中 +4 位作者 李光富 卢春 邵国青 范红结 陈溥言 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期83-86,共4页
分别用有丝分裂原和CpG寡脱氧核苷酸 (CpGODN)对SPF鸡全血 ,经低速离心分离的外周血单个核细胞(PBMC)和脾脏细胞 ,用淋巴细胞分离液分离的PBMC和脾脏细胞进行刺激 ,用3 H TdR掺入法测定并比较上述鸡免疫细胞在不同培养温度和细胞浓度下... 分别用有丝分裂原和CpG寡脱氧核苷酸 (CpGODN)对SPF鸡全血 ,经低速离心分离的外周血单个核细胞(PBMC)和脾脏细胞 ,用淋巴细胞分离液分离的PBMC和脾脏细胞进行刺激 ,用3 H TdR掺入法测定并比较上述鸡免疫细胞在不同培养温度和细胞浓度下的转化效果 ,从而建立了适用于大批量筛选对鸡具有免疫刺激活性CpGODN的淋巴细胞转化方法。进一步用该方法筛选自行设计合成的 38条ODN。结果表明 ,用低速离心法分离的鸡PBMC ,在细胞含量为10 7mL-1、 37℃、 5 %CO2 条件下 ,经CpGODN刺激 6 4～ 6 6h后 ,可以得到稳定的高效转化 ;不含CpG模体的ODN不具有免疫刺激活性 ;CpGODN 10、 11和 14具有最佳的免疫刺激活性 ,刺激指数大于 10。 展开更多
关键词 鸡 CPG寡脱氧核苷酸 CpG模体 淋巴细胞转化 免疫刺激活性
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重组卡介苗rBCG-Ag85A-ESAT-6对人巨噬细胞免疫刺激活性的影响 被引量：1
5
作者 邓仪昊 何红云 张本斯 《中国感染控制杂志》 CAS 2013年第3期164-168,共5页
目的探究重组卡介苗(rBCG-Ag85A-ESAT-6,rBCG-AE)对人巨噬细胞免疫刺激活性的影响,为该疫苗的应用提供重要的理论依据和实验基础。方法将rBCG-AE(rBCG-AE感染组)及卡介苗(BCG感染组)分别感染体外培养的受PMA诱导分化的人单核细胞系(THP-... 目的探究重组卡介苗(rBCG-Ag85A-ESAT-6,rBCG-AE)对人巨噬细胞免疫刺激活性的影响,为该疫苗的应用提供重要的理论依据和实验基础。方法将rBCG-AE(rBCG-AE感染组)及卡介苗(BCG感染组)分别感染体外培养的受PMA诱导分化的人单核细胞系(THP-1细胞株),分别于感染后24、48及72h,观察细胞表面分子CD80和CD86的表达及细胞培养基中干扰素(IFN)-γ及肿瘤坏死因子(TNF)-a的诱生量。结果 THP-1细胞(未受PMA诱导分化的细胞)和PMA分化的THP-1细胞培养4h后,细菌吞噬率分别为(8.45±1.54)%、(91.26±2.13)%,后者显著高于前者(P=0.01);感染后24、48及72h,rBCG-AE组CD86阳性细胞比率分别为(32.84±7.13)%、(48.42±5.46)%、(39.48±5.67)%,CD80阳性细胞比率分别为(20.28±1.13)%、(23.67±1.23)%、(23.19±1.58)%,均显著高于BCG感染组的CD86[分别为(28.17±5.26)%、(40.09±7.21)%、(31.26±6.85)%]和CD80阳性细胞比率[分别为(22.15±1.82)%、(23.27±1.91)%、(22.68±0.87)%],差异均有统计学意义(均P<0.01)。感染后24、48及72h,rBCG-AE组IFN-γ诱生量分别为(1 986±156)pg/mL、(4 687±168)pg/mL、(3 238±97)pg/mL,TNF-а诱生量分别为(1 153±48)pg/mL、(5 864±97)pg/mL、(4 129±68)pg/mL,各时间点均显著高于BCG感染组的IFN-γ[分别为(1 245±32)pg/mL、(3 067±143)pg/mL、(2 879±186)pg/mL]和TNF-а诱生量[分别为(486±18)pg/mL、(3 237±86)pg/mL、(1 068±74)pg/mL],差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论 rBCG-AE可显著增强人巨噬细胞免疫刺激活性,该疫苗可作为替代BCG的候选疫苗,具有进一步开发研究的价值。 展开更多
关键词 重组卡介苗 rBCG-Ag85A-ESAT-6 THP-1细胞 人巨噬细胞 免疫刺激活性 疫苗 结核
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CpG-DNA免疫刺激活性研究进展 被引量：2
6
作者 景志忠 才学鹏 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2004年第9期43-46,共4页
关键词 CpG—DNA 免疫刺激活性 先天性免疫保护机制 抗病毒作用 抗细菌作用 抗寄生虫作用 免疫佐剂
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具有免疫刺激活性的非甲基化寡核苷酸链的研究进展 被引量：1
7
作者 郑梅珍 蒋建伟 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第2期190-193,共4页
富含非甲基化碱基CG的寡核苷酸链 (CpG oligodeoxynucleotides,CpG ODN) ,具有免疫刺激活性 .其骨架及侧翼核苷酸序列决定CpG ODN免疫效应的强度及特异性 .最近研究发现 ,通过对CpG ODN中核苷酸上的基团进行化学修饰 ,或改变侧翼核苷酸... 富含非甲基化碱基CG的寡核苷酸链 (CpG oligodeoxynucleotides,CpG ODN) ,具有免疫刺激活性 .其骨架及侧翼核苷酸序列决定CpG ODN免疫效应的强度及特异性 .最近研究发现 ,通过对CpG ODN中核苷酸上的基团进行化学修饰 ,或改变侧翼核苷酸序列均能影响CpG ODN的免疫活性、种属及细胞特异性 .这对CpG 展开更多
关键词 免疫刺激活性 非甲基化寡核苷酸链 化学修饰 CPG-ODN 免疫刺激效应
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CpG ODN对鸡新城疫LaSota活疫苗的免疫增强效应 被引量：13
8
作者 李杰 杨汉春 +2 位作者 郭鑫 陈艳红 查振林 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期44-49,共6页
将3种不同的未甲基化CpG ODN分别与新城疫LaSota活疫苗混合后,经滴鼻和点眼免疫鸡,通过检测鸡血清中HI抗体、外周血T淋巴细胞增殖活性、诱导巨噬细胞分泌NO含量,以及刺激外周血淋巴细胞表达IFN-γ、IL-6与IL-1βmRNA量,分析各CpG ODN对... 将3种不同的未甲基化CpG ODN分别与新城疫LaSota活疫苗混合后,经滴鼻和点眼免疫鸡,通过检测鸡血清中HI抗体、外周血T淋巴细胞增殖活性、诱导巨噬细胞分泌NO含量,以及刺激外周血淋巴细胞表达IFN-γ、IL-6与IL-1βmRNA量,分析各CpG ODN对新城疫LaSota活疫苗免疫效果的影响。结果表明,经2次免疫后,含GTCGTT核心基序的CpG ODN1组,鸡血清平均HI抗体效价最高达8.2log2、淋巴细胞刺激指数达9.836、NO分泌量达35.833μmol/L,分别比疫苗单独免疫组高出2个滴度(P<0.05)、4.4(P<0.01)、27.6μmol/L(P<0.01);含GACGTT核心基序的CpG ODN2组增强作用不明显,与疫苗单独免疫组无差异;而CpG ODN3的免疫刺激活性由于受其侧翼序列的影响,作用明显减弱甚至丧失。对细胞因子的影响,CpG ODN3组IFN-γmRNA表达量稍高于CpG ODN1组,而其余细胞因子均以CpG ODN1组表达水平最高(P<0.05)。由此证明CpG ODN1能显著增强鸡对新城疫LaSota活疫苗的体液和细胞免疫反应,可以作为高效的免疫增强剂。 展开更多
关键词 CPG ODN 新城疫LaSota活疫苗 免疫刺激活性 鸡
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免疫佐剂CpG-DNA的研究进展 被引量：2
9
作者 范媛 谢光武 黎晓敏 《中国动物保健》 2009年第10期44-49,共6页
特异性免疫即是含有PAMP的反应物与天然免疫细胞上的PRR相结合,激活天然免疫应答,从而活化抗感染途径,并最终发挥获得性免疫应答的一系列反应过程。CpG-DNA作为一种在进化中高度保守的PAMP,它可以模拟感染过程,克服新型疫苗PAMP不足的缺... 特异性免疫即是含有PAMP的反应物与天然免疫细胞上的PRR相结合,激活天然免疫应答,从而活化抗感染途径,并最终发挥获得性免疫应答的一系列反应过程。CpG-DNA作为一种在进化中高度保守的PAMP,它可以模拟感染过程,克服新型疫苗PAMP不足的缺陷,从而诱导强烈的免疫应答。CpG-DNA可以直接激活B淋巴细胞、单核/巨噬细胞和树突状细胞,上调免疫刺激分子的表达,调节免疫反应,诱导IL-12、IL-1和TNF-等多种细胞因子的分泌,此外,它还能间接刺激NK细胞、T淋巴细胞。由于其独特的优点,CpG-DNA在畜牧兽医临床中显示其极强的使用价值和广阔的应用前景。 展开更多
关键词 CpG—DNA 佐剂 免疫刺激活性
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不同类型CpG基序对细粒棘球蚴Eg95抗原的免疫增强作用研究
10
作者 董瑞凯 郭晓宇 +4 位作者 袁维峰 贾红 鑫婷 侯绍华 朱鸿飞 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第10期2716-2723,共8页
为探究不同类型CpG基序对细粒棘球蚴(Echinococus granulosus)Eg95抗原的免疫增强作用,将pET-32a-3Eg95重组大肠杆菌,经IPTG诱导表达,亲和层析纯化重组蛋白pET-32a-3Eg95。将重组蛋白分别与常规佐剂Quli-A、pUC18-CpG和CpG ODN混合制备... 为探究不同类型CpG基序对细粒棘球蚴(Echinococus granulosus)Eg95抗原的免疫增强作用,将pET-32a-3Eg95重组大肠杆菌,经IPTG诱导表达,亲和层析纯化重组蛋白pET-32a-3Eg95。将重组蛋白分别与常规佐剂Quli-A、pUC18-CpG和CpG ODN混合制备基因工程亚单位疫苗样品,免疫小鼠。通过间接ELISA方法检测抗体水平,通过实时荧光定量PCR方法测定体外刺激试验后细胞因子的相对表达量,检测不同佐剂在体液免疫和细胞免疫方面对Eg95抗原免疫效果的增强作用。结果显示,诱导表达重组蛋白的大小约为56ku,与理论值相符,用羊细粒棘球蚴阳性血清检测有特异性条带;pUC18-CpG组和CpG ODN组小鼠免疫后14、28、42d的抗体平均水平(D450nm)分别为3.10、3.03、3.22和2.98、3.12、3.27,与Quli-A组抗体平均水平相比均差异显著(P<0.05);CpG ODN组血清中抗体平均水平略高于pUC18-CpG组,但差异不显著(P>0.05)。重组蛋白刺激后pUC18-CpG组与CpG ODN组IFN-β、IFN-γ和TNF-α的相对表达量分别为6.88、2.35、6.28和5.03、2.85、7.07,与Quli-A组相比差异均显著(P<0.05)。因此相对于常规佐剂Quli-A,pUC18-CpG和CpG ODN在体液免疫和细胞免疫方面对Eg95抗原都有显著的免疫增强作用,CpG ODN的免疫增强作用略优于pUC18-CpG,二者均可作为免疫佐剂,增强现有包虫病基因工程疫苗抗原的免疫效果。 展开更多
关键词 细粒棘球蚴 pUC18-CpG CPG ODN 免疫刺激活性
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