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鼠抗人纤维蛋白单链抗体-低相对分子质量单链尿激酶融合基因真核分泌表达载体的构建
1
作者
舒东
徐兵
+1 位作者
俞炜源
罗深秋
《第一军医大学学报》
CSCD
北大核心
2001年第4期261-262,281,共3页
目的 构建鼠抗人纤维蛋白单链抗体－低相对单链尿激酶融合基因真核分泌表达载体。方法 应用重组ＤＮＡ技 术，将人工合成的尿激酶原信号肽基因与鼠抗人纤维蛋白单链抗体－低相对分子质量单链尿激酶融合基因连接，并保 证在同一阅读框架...
目的 构建鼠抗人纤维蛋白单链抗体－低相对单链尿激酶融合基因真核分泌表达载体。方法 应用重组ＤＮＡ技 术，将人工合成的尿激酶原信号肽基因与鼠抗人纤维蛋白单链抗体－低相对分子质量单链尿激酶融合基因连接，并保 证在同一阅读框架，然后分别插科到pcＤＮＡ３和ＰＭＪＫ３两种真核表达载体中。结果构建成可以在真核细胞中分泌表 达鼠抗人纤维蛋白单链抗体－低相对分子质量单链尿激酶融合蛋白的重组质粒pcＤＮＡ３－Ｄ１和ｐＭＪＫ３－Ｄ１。结论为建 立稳定分泌表达鼠抗人纤维蛋白单链抗体－低相对分子质量单链尿激酶融合蛋白的细胞工程株奠定了基础。
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关键词
单链
抗体
低相对分子质量单链尿激酶
基因融合
纤维蛋白
急性心肌梗死
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职称材料
膜联蛋白32与低分子质量单链尿激酶融合基因的构建及高效表达
被引量：
6
2
作者
颜宏利
孙树汉
+1 位作者
陈蕊雯
杨湘越
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第4期378-380,共3页
目的：构建膜联蛋白32（annexin32，Anx32）和低相对分子质量单链尿激酶（ScuPA32k）的融合基因，并在大肠杆菌系统内作表达。方法：利用重叠区扩增法进行基因拼接，然后在谷胱甘肽S转移酶原核表达系统内表达，Western印迹验证表达产物...
目的：构建膜联蛋白32（annexin32，Anx32）和低相对分子质量单链尿激酶（ScuPA32k）的融合基因，并在大肠杆菌系统内作表达。方法：利用重叠区扩增法进行基因拼接，然后在谷胱甘肽S转移酶原核表达系统内表达，Western印迹验证表达产物。结果：重叠区扩增得到 1．8 kb融合基因，该基因在原核表达系统内得到高效表达，表达量占菌体总蛋白的 26％，Western印迹证明表达产物正确。结论：用重叠区扩增法进行基因拼接快速、简便。
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关键词
膜联蛋白32
低相对分子质量单链尿激酶
基因拼接
基因表达
重叠区扩增法
大肠杆菌
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职称材料
纤维蛋白肽与低分子量尿激酶原融合蛋白的构建及性质
被引量：
1
3
作者
焦建伟
刘宁
+1 位作者
俞梅敏
茹炳根
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2001年第6期862-865,共4页
将人工合成的寡核苷酸片段进行定向连接后 ,得到编码纤维蛋白 β链N端 (β 15～ 42 )多肽的基因片段及连接区片段 (linker) ,再与低分子量尿激酶原 (scuPA 32k)cDNA分子进一步连接后 ,得到了Fβ (15～ 42 ) /scuPA 32k的融合基因 .在大...
将人工合成的寡核苷酸片段进行定向连接后 ,得到编码纤维蛋白 β链N端 (β 15～ 42 )多肽的基因片段及连接区片段 (linker) ,再与低分子量尿激酶原 (scuPA 32k)cDNA分子进一步连接后 ,得到了Fβ (15～ 42 ) /scuPA 32k的融合基因 .在大肠杆菌中经过IPTG诱导表达 ,经过变性及复性 ,Zn2 + 螯合层析及SephacrylS2 0 0凝胶层析后 ,目的蛋白被纯化 .SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)显示为一条蛋白质纯化条带 ,分子质量为35ku .经纤维蛋白平板法测定比活为 870 0 0U/mg.经纤溶酶活化后的融合蛋白与低分子量尿激酶相比 ,对显色底物S2 44 4酶促动力学性质相似 .同时Fβ (15～ 42 ) /scuPA
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关键词
低
分子
量
单链
尿激酶
原
纤维蛋白肽
融合蛋白
表达
性质
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职称材料
题名
鼠抗人纤维蛋白单链抗体-低相对分子质量单链尿激酶融合基因真核分泌表达载体的构建
1
作者
舒东
徐兵
俞炜源
罗深秋
机构
第一军医大学细胞与遗传学教研室
出处
《第一军医大学学报》
CSCD
北大核心
2001年第4期261-262,281,共3页
基金
国家"863"计划资助课题!(102-09-03-01)
文摘
目的 构建鼠抗人纤维蛋白单链抗体－低相对单链尿激酶融合基因真核分泌表达载体。方法 应用重组ＤＮＡ技 术，将人工合成的尿激酶原信号肽基因与鼠抗人纤维蛋白单链抗体－低相对分子质量单链尿激酶融合基因连接，并保 证在同一阅读框架，然后分别插科到pcＤＮＡ３和ＰＭＪＫ３两种真核表达载体中。结果构建成可以在真核细胞中分泌表 达鼠抗人纤维蛋白单链抗体－低相对分子质量单链尿激酶融合蛋白的重组质粒pcＤＮＡ３－Ｄ１和ｐＭＪＫ３－Ｄ１。结论为建 立稳定分泌表达鼠抗人纤维蛋白单链抗体－低相对分子质量单链尿激酶融合蛋白的细胞工程株奠定了基础。
关键词
单链
抗体
低相对分子质量单链尿激酶
基因融合
纤维蛋白
急性心肌梗死
Keywords
single-chain fragment variable antibody
low-molecular weight single-chain urokinase
gene fusion
分类号
R542.22 [医药卫生—心血管疾病]
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职称材料
题名
膜联蛋白32与低分子质量单链尿激酶融合基因的构建及高效表达
被引量：
6
2
作者
颜宏利
孙树汉
陈蕊雯
杨湘越
机构
第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室
出处
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第4期378-380,共3页
基金
国家"863"计划资助项目(2001AA213111).
文摘
目的：构建膜联蛋白32（annexin32，Anx32）和低相对分子质量单链尿激酶（ScuPA32k）的融合基因，并在大肠杆菌系统内作表达。方法：利用重叠区扩增法进行基因拼接，然后在谷胱甘肽S转移酶原核表达系统内表达，Western印迹验证表达产物。结果：重叠区扩增得到 1．8 kb融合基因，该基因在原核表达系统内得到高效表达，表达量占菌体总蛋白的 26％，Western印迹证明表达产物正确。结论：用重叠区扩增法进行基因拼接快速、简便。
关键词
膜联蛋白32
低相对分子质量单链尿激酶
基因拼接
基因表达
重叠区扩增法
大肠杆菌
Keywords
annexin32
low relative molecular mass of single-chain uPA
gene splice
分类号
R973.2 [医药卫生—药品]
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职称材料
题名
纤维蛋白肽与低分子量尿激酶原融合蛋白的构建及性质
被引量：
1
3
作者
焦建伟
刘宁
俞梅敏
茹炳根
机构
北京大学生命科学学院
出处
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2001年第6期862-865,共4页
文摘
将人工合成的寡核苷酸片段进行定向连接后 ,得到编码纤维蛋白 β链N端 (β 15～ 42 )多肽的基因片段及连接区片段 (linker) ,再与低分子量尿激酶原 (scuPA 32k)cDNA分子进一步连接后 ,得到了Fβ (15～ 42 ) /scuPA 32k的融合基因 .在大肠杆菌中经过IPTG诱导表达 ,经过变性及复性 ,Zn2 + 螯合层析及SephacrylS2 0 0凝胶层析后 ,目的蛋白被纯化 .SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)显示为一条蛋白质纯化条带 ,分子质量为35ku .经纤维蛋白平板法测定比活为 870 0 0U/mg.经纤溶酶活化后的融合蛋白与低分子量尿激酶相比 ,对显色底物S2 44 4酶促动力学性质相似 .同时Fβ (15～ 42 ) /scuPA
关键词
低
分子
量
单链
尿激酶
原
纤维蛋白肽
融合蛋白
表达
性质
Keywords
low molecular single chain urokinase, fibrin peptide, fusion
分类号
R394.8 [医药卫生—医学遗传学]
R973.2 [医药卫生—药品]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
鼠抗人纤维蛋白单链抗体-低相对分子质量单链尿激酶融合基因真核分泌表达载体的构建
舒东
徐兵
俞炜源
罗深秋
《第一军医大学学报》
CSCD
北大核心
2001
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
膜联蛋白32与低分子质量单链尿激酶融合基因的构建及高效表达
颜宏利
孙树汉
陈蕊雯
杨湘越
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002
6
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
纤维蛋白肽与低分子量尿激酶原融合蛋白的构建及性质
焦建伟
刘宁
俞梅敏
茹炳根
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2001
1
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职称材料
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