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真核低分子量尿激酶原突变体基因在大肠杆菌中的高效表达
被引量：
1
1
作者
焦建伟
俞梅敏
茹炳根
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第3期340-343,共4页
通过一种融合抗栓肽的低分子量尿激酶原的突变体 (DscuPA 32K)在大肠杆菌中表达的研究 ,进行了一系列不同条件下的实验 .DscuPA 32K在菌株BL2 1中的表达很低 ,表达量仅为 3% ;为提高其表达量 ,引进一种整合稀有tRNA基因的菌株BL2 1 Cod...
通过一种融合抗栓肽的低分子量尿激酶原的突变体 (DscuPA 32K)在大肠杆菌中表达的研究 ,进行了一系列不同条件下的实验 .DscuPA 32K在菌株BL2 1中的表达很低 ,表达量仅为 3% ;为提高其表达量 ,引进一种整合稀有tRNA基因的菌株BL2 1 CodonPlusTM RIL ,增加大肠杆菌中识别稀有密码子的tRNA的数量 ,DscuPA 32K的表达水平确实有了很大提高 ,最大表达量约占 2 0 % .结果表明 ,富含稀有密码子的DscuPA 32K在大肠杆菌中表达受限制的因素 ,完全可以由增加稀有tRNA的数量来克服 .免疫印迹分析DscuPA 32K具有良好的抗原性 .此表达菌株可能有利于含大肠杆菌稀有密码子的真核基因在大肠杆菌中的表达 .
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关键词
低分子量尿激酶原
突变体
表达
稀有密码子
大肠杆菌
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职称材料
纤维蛋白肽与低分子量尿激酶原融合蛋白的构建及性质
被引量：
1
2
作者
焦建伟
刘宁
+1 位作者
俞梅敏
茹炳根
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2001年第6期862-865,共4页
将人工合成的寡核苷酸片段进行定向连接后 ,得到编码纤维蛋白 β链N端 (β 15～ 42 )多肽的基因片段及连接区片段 (linker) ,再与低分子量尿激酶原 (scuPA 32k)cDNA分子进一步连接后 ,得到了Fβ (15～ 42 ) /scuPA 32k的融合基因 .在大...
将人工合成的寡核苷酸片段进行定向连接后 ,得到编码纤维蛋白 β链N端 (β 15～ 42 )多肽的基因片段及连接区片段 (linker) ,再与低分子量尿激酶原 (scuPA 32k)cDNA分子进一步连接后 ,得到了Fβ (15～ 42 ) /scuPA 32k的融合基因 .在大肠杆菌中经过IPTG诱导表达 ,经过变性及复性 ,Zn2 + 螯合层析及SephacrylS2 0 0凝胶层析后 ,目的蛋白被纯化 .SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)显示为一条蛋白质纯化条带 ,分子质量为35ku .经纤维蛋白平板法测定比活为 870 0 0U/mg.经纤溶酶活化后的融合蛋白与低分子量尿激酶相比 ,对显色底物S2 44 4酶促动力学性质相似 .同时Fβ (15～ 42 ) /scuPA
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关键词
低
分子量
单链
尿激酶原
纤维蛋白肽
融合蛋白
表达
性质
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职称材料
溶栓与抗栓双功能尿激酶原突变体的模拟、构建与表达
被引量：
3
3
作者
张磊亮
焦建伟
+2 位作者
邵开峰
俞梅敏
茹炳根
《高等学校化学学报》
SCIE
EI
CAS
CSCD
北大核心
2004年第6期1046-1050,共5页
将抗栓肽 ( Decorsin)嫁接到低分子量尿激酶原 ( scu PA-3 2 k)上 ,可以期望获得既具有抗血小板聚集活性 ,又具有溶栓活性的新型基因工程蛋白质分子 .利用计算机辅助分子设计手段模拟了该融合蛋白的分子结构 ,证明其活性区可以正常发挥...
将抗栓肽 ( Decorsin)嫁接到低分子量尿激酶原 ( scu PA-3 2 k)上 ,可以期望获得既具有抗血小板聚集活性 ,又具有溶栓活性的新型基因工程蛋白质分子 .利用计算机辅助分子设计手段模拟了该融合蛋白的分子结构 ,证明其活性区可以正常发挥功能 .根据大肠杆菌偏好密码子合成 Decorsin的基因 ,与 scu PA-3 2 k基因融合在一起 ,构建新的嵌合体基因 dscu PA,并在大肠杆菌中通过 IPTG进行诱导表达 ,该重组蛋白在大肠杆菌中以包涵体的形式存在 .对包涵体进行变性和复性并通过层析纯化得到目的蛋白质 .用纤维蛋白平板法测得重组蛋白的比活为 92 0 0 0 IU/mg.激活纤溶酶原的酶促动力学性质与天然低分子量尿激酶相似 ,且有较强的抑制血小板聚集的功能 .重组蛋白 dscu PA不但具有较强的溶栓功能 ,而且具有抗栓功能 .
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关键词
低分子量尿激酶原
抗栓肽
血小板聚集
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职称材料
题名
真核低分子量尿激酶原突变体基因在大肠杆菌中的高效表达
被引量：
1
1
作者
焦建伟
俞梅敏
茹炳根
机构
北京大学生命科学学院
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第3期340-343,共4页
基金
国家 8 63高技术发展计划 (No .863 10 2 0 9)资助项目&&
文摘
通过一种融合抗栓肽的低分子量尿激酶原的突变体 (DscuPA 32K)在大肠杆菌中表达的研究 ,进行了一系列不同条件下的实验 .DscuPA 32K在菌株BL2 1中的表达很低 ,表达量仅为 3% ;为提高其表达量 ,引进一种整合稀有tRNA基因的菌株BL2 1 CodonPlusTM RIL ,增加大肠杆菌中识别稀有密码子的tRNA的数量 ,DscuPA 32K的表达水平确实有了很大提高 ,最大表达量约占 2 0 % .结果表明 ,富含稀有密码子的DscuPA 32K在大肠杆菌中表达受限制的因素 ,完全可以由增加稀有tRNA的数量来克服 .免疫印迹分析DscuPA 32K具有良好的抗原性 .此表达菌株可能有利于含大肠杆菌稀有密码子的真核基因在大肠杆菌中的表达 .
关键词
低分子量尿激酶原
突变体
表达
稀有密码子
大肠杆菌
Keywords
low molecular scuPA,mutant,expression,rare codon
分类号
R394.6 [医药卫生—医学遗传学]
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
纤维蛋白肽与低分子量尿激酶原融合蛋白的构建及性质
被引量：
1
2
作者
焦建伟
刘宁
俞梅敏
茹炳根
机构
北京大学生命科学学院
出处
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2001年第6期862-865,共4页
文摘
将人工合成的寡核苷酸片段进行定向连接后 ,得到编码纤维蛋白 β链N端 (β 15～ 42 )多肽的基因片段及连接区片段 (linker) ,再与低分子量尿激酶原 (scuPA 32k)cDNA分子进一步连接后 ,得到了Fβ (15～ 42 ) /scuPA 32k的融合基因 .在大肠杆菌中经过IPTG诱导表达 ,经过变性及复性 ,Zn2 + 螯合层析及SephacrylS2 0 0凝胶层析后 ,目的蛋白被纯化 .SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)显示为一条蛋白质纯化条带 ,分子质量为35ku .经纤维蛋白平板法测定比活为 870 0 0U/mg.经纤溶酶活化后的融合蛋白与低分子量尿激酶相比 ,对显色底物S2 44 4酶促动力学性质相似 .同时Fβ (15～ 42 ) /scuPA
关键词
低
分子量
单链
尿激酶原
纤维蛋白肽
融合蛋白
表达
性质
Keywords
low molecular single chain urokinase, fibrin peptide, fusion
分类号
R394.8 [医药卫生—医学遗传学]
R973.2 [医药卫生—药品]
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职称材料
题名
溶栓与抗栓双功能尿激酶原突变体的模拟、构建与表达
被引量：
3
3
作者
张磊亮
焦建伟
邵开峰
俞梅敏
茹炳根
机构
北京大学生命科学学院
出处
《高等学校化学学报》
SCIE
EI
CAS
CSCD
北大核心
2004年第6期1046-1050,共5页
基金
国家自然科学基金 (批准号 :3 0 2 0 0 0 5 7)资助
文摘
将抗栓肽 ( Decorsin)嫁接到低分子量尿激酶原 ( scu PA-3 2 k)上 ,可以期望获得既具有抗血小板聚集活性 ,又具有溶栓活性的新型基因工程蛋白质分子 .利用计算机辅助分子设计手段模拟了该融合蛋白的分子结构 ,证明其活性区可以正常发挥功能 .根据大肠杆菌偏好密码子合成 Decorsin的基因 ,与 scu PA-3 2 k基因融合在一起 ,构建新的嵌合体基因 dscu PA,并在大肠杆菌中通过 IPTG进行诱导表达 ,该重组蛋白在大肠杆菌中以包涵体的形式存在 .对包涵体进行变性和复性并通过层析纯化得到目的蛋白质 .用纤维蛋白平板法测得重组蛋白的比活为 92 0 0 0 IU/mg.激活纤溶酶原的酶促动力学性质与天然低分子量尿激酶相似 ,且有较强的抑制血小板聚集的功能 .重组蛋白 dscu PA不但具有较强的溶栓功能 ,而且具有抗栓功能 .
关键词
低分子量尿激酶原
抗栓肽
血小板聚集
Keywords
ScuPA-32k
Decorsin
Platelet aggregation
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
真核低分子量尿激酶原突变体基因在大肠杆菌中的高效表达
焦建伟
俞梅敏
茹炳根
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2001
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
纤维蛋白肽与低分子量尿激酶原融合蛋白的构建及性质
焦建伟
刘宁
俞梅敏
茹炳根
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2001
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
溶栓与抗栓双功能尿激酶原突变体的模拟、构建与表达
张磊亮
焦建伟
邵开峰
俞梅敏
茹炳根
《高等学校化学学报》
SCIE
EI
CAS
CSCD
北大核心
2004
3
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